實(shí)驗(yàn)常用試劑緩沖液的配制方法

1、實(shí)驗(yàn)常用試劑、緩沖液的配制方法Ampicillin（氨卡青霉素）100mg/ml 組份濃度 100mg/ml Ampicillin配制量 50mL配置方法 1.稱量5g Ampicillin置于50mL離心管中。 2.加入40mL滅菌水，充分混合溶解后，定容至50mL。 3.用0.22m濾膜過濾除菌。 4.小份分裝（1mL/份）后，-20保存。Kan（卡那霉素）50mg/ml組分濃度 50mg/ml卡那霉素配制量 50mL配制方法 1.稱取2.5g卡那霉素置于50ml塑料離心管中。 2.加入40ml滅菌水，充分混合溶解之后定容至50mL。 3.用 0.22m 濾膜過濾除菌。 4.小份分裝（1m

2、L/份）后，-20保存。IPTG(異丙基-D-硫代半乳糖苷) 24 mg/ml 組份濃度 24mg/L IPTG配制量 50mL配置方法 1.稱量1.2gIPTG置于50mL離心管中。 2.加入 40mL 滅菌水，充分混合溶解后，定容至50mL。 3.用0.22m 濾膜過濾除菌。 4.小份分裝（1mL/份）后，-20保存。X- Gal 20mg/m 組份濃度 20mg/L X-Gal配制量 50mL配置方法 1.稱取1gX-Gal置于50mL離心管中。 2.加入40mL DMF（二甲基甲酰胺），充分混合溶解， 定容至50mL。 3.小份分裝（1mL/份）后，-20避光保存。LB培養(yǎng)基 組份濃度

3、1（W/V）Tryptone，0.5 （W/V）Yeast Extract，1（W/V）NaCl配制量 1L配置方法 1.稱量下列試劑，置于1L燒杯中 Tryptone（胰化蛋白胨） 10g Yeast Extract（酵母提取物） 5g NaCl（氯化鈉） 10g 2.加入約800mL 的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙狻?3.滴加5N NaOH（約0.2mL），調(diào)節(jié)pH值至7.2-7.3。 4.加去離子水定容至1L。 5.高溫高壓滅菌后，4保存。注：1. LB固體培養(yǎng)基每100ml LB培養(yǎng)基加入1.5g瓊脂粉。2. 5N NaOH新配后溶液加入需要重新測(cè)定。3.待培養(yǎng)基溫度降至50時(shí)，以手不燙為準(zhǔn)

4、，按比例加入抗生素，以免溫度過高導(dǎo)致抗生素失效，并充分搖勻。50×TAE Buffer (pH8.5)組份濃度 2 M Tris-醋酸，100 mM EDTA配制量 100m L配制方法 1.稱量下列試劑，置于200mL燒杯中。 Tris 24.2 g Na2EDTA·2H2O 3.72 g 2.向燒杯中加入約80 ml的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙狻?3.加入5.71 ml的冰乙酸，充分?jǐn)嚢琛?4.加去離子水將溶液定容至100mL后，室溫保存。注：1xTAE的稀釋（如500ml1xTAE即10mL 50xTAE稀釋于490mL的去離子水）。1瓊脂糖凝膠（核酸電泳用）組份濃度 1

5、瓊脂糖凝膠配制量 100m L配制方法 1.稱量1g瓊脂糖置于200mL錐形瓶中。 2.加入100ml1×TAE Buffer，搖動(dòng)混勻。 3.放入微波爐加熱2min至瓊脂糖完全溶化。 4.插入梳子，等溫度降下來，倒膠。1.M Tris-HCl 組份濃度 1 M Tris-HCl（pH6.8） 配制量 100mL配置方法 1.稱量 12.11gTris 置于 200mL 燒杯中。 2.加入約 80mL 的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙狻?3.加入11mL的濃鹽酸。 4.定容至100mL，室溫保存。1.5M Tris-HCl 組份濃度 1.5 M Tris-HCl（pH8.8） 配制量 100

6、L配置方法 1.稱取18.17gTris置于200mL燒杯中。 2. 加入約80mL的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙狻?3. 用濃鹽酸調(diào)pH值至8.8。 4. 將溶液定容至100mL。 5. 高溫高壓滅菌后，室溫保存。注意：應(yīng)使溶液冷卻至室溫后再調(diào)定 pH 值。5 N NaOH 組份濃度 5N NaOH配制量 100mL配置方法 1. 量取 80mL 去離子水置于 100200mL 塑料燒杯中 2. 稱取20g NaOH 逐漸加入到燒杯中，邊加邊攪拌以放熱。 3. 待NaOH完全溶解后，定容至100mL。 4. 將溶液轉(zhuǎn)移至塑料容器中后，室溫保存。注：NaOH溶解過程中大量放熱，有可能使玻璃燒杯炸裂。

7、2.5 N HCl 組份濃度 2.5 N HCl配制量 100mL配置方法 1.在 78.4mL的去離子水中加入21.6mL的濃鹽酸 （11.6N），均勻混合。 2.室溫保存。25xPB Buffer組份濃度 25xPB Buffer配制量 100mL配制方法 1. 稱量下列試劑，置于100 ML燒杯中。 Na2HPO4 (磷酸氫二鈉) 2.74g NaH2PO4（磷酸二氫鈉） 0.79g 2. 向燒杯中加入約80 ML去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙狻?3. 定容至100 ML。1xPBS Buffer 組份濃度 1xPBS Buffer配制量 100mL配制方法 1. 稱量8.5g Nacl置于10

8、0 ML燒杯中。 2. 向燒杯中加入40 ML 25xPB Buffer攪拌溶解。 3. 滴加5N NaoH調(diào)節(jié)PH值至7.2，將溶液定容至1L. 4. 高溫滅菌后，室溫保存。注：PBST的配制:1L 1xPBS加1ml吐溫-20。10%（W/V）過硫酸銨組分濃度 10%（W/V）過硫酸銨配制量 10mL配制方法 1.稱取1g過硫酸銨； 2.加入10ml的去離子水后攪拌溶解， 3.貯存于4。注：10%過硫酸銨最好現(xiàn)配現(xiàn)用，配好的溶液在4保存可使用2周左右，過期會(huì)失去催化效果。10%（W/V）SDS 組份濃度 10%（W/V）配制量 100mL配制方法   1.稱量10gSDS

9、0;置于100200mL 燒杯中，加入約80mL的去離子水， 68加熱溶解。 2.滴加數(shù)滴濃鹽酸調(diào)節(jié)pH值至7.2 。 3.將溶液定容至100mL后，室溫保存5X Tris-Glycine Buffer組分濃度 0.125M Tris，1.25M Glycine，0.5% (W/V)SDS配制量 1L配制方法 1.稱取下列試劑，置于1L的燒杯中 Tris 15.1g Glycine 94g SDS 5.0g 2.加入約800ml的去離子水，攪拌溶解。 3.加入去離子水定容至1L后，室溫保存。注：1X Tris-Glycine Buffer（500ml即量取100ml稀釋于400ml去

10、離子水中）?？捡R斯亮藍(lán) R-250染色液組份濃度 0.1（W/V）考馬斯亮藍(lán) R-250，25%（V/V）異丙醇，10（V/V） 冰醋酸配制量 1L配置方法 1.稱取1g考馬斯亮藍(lán) R-250,置于1L燒杯中。 2.量取250mL的異丙醇加入上述燒杯中，攪拌溶解。 3.加入100mL的冰乙醋酸，均勻攪拌。 4.加入650mL的去離子水，均勻攪拌。 5.用濾紙去除顆粒物質(zhì)后，室溫保存。考馬斯亮藍(lán)染色脫色液組份濃度 10（V/V）醋酸，5（V/V）乙醇配制量 1L配置方法 1.量取下列溶液，置于1L燒杯中。 醋酸 100mL 乙醇 50mL dH2O 850mL 2.充分混合后使用。膜轉(zhuǎn)移緩沖液（

11、Western雜交用）組份濃度   39 mM Glycine，48 mM Tris，0.037%(W/V)SDS，20%(V/V)甲醇 配制量     1 L 配制方法   1.稱量下列試劑，置于l L燒杯中。  Glycine  2.9 g  Tris  5.8 g  SDS  0.37 g    

12、60;         2.向燒杯中加入約600 ml的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙狻?3.加去離子水將溶液定溶至800 ml。 4.加入200 ml的甲醇，室溫保存。封閉緩沖液 （Western雜交用）組份濃度   5%(W/V)脫脂奶粉/PBST Buffer 配制量 100 mL 配制方法   1.稱0.5g脫脂奶粉加入到10ml PBST Buffer中，攪拌溶解。           2.4保存待用(本封閉液應(yīng)該現(xiàn)配現(xiàn)用)。10