機能實驗課-比色分析法

1、比色分析法比色分析法Colorimetry Analysis 1 比色分析法基本原理比色分析法基本原理2 比色分析測定方法比色分析測定方法3 常用儀器的使用方法常用儀器的使用方法4 機能實驗課指標(biāo)檢測機能實驗課指標(biāo)檢測原理：原理：有色物質(zhì)溶液顏色的深度與其濃度和有色物質(zhì)溶液顏色的深度與其濃度和液層厚度有關(guān)。通過比較溶液顏色的深淺，液層厚度有關(guān)。通過比較溶液顏色的深淺，測定溶液的濃度。測定溶液的濃度。特點：特點：簡單、快速、靈敏度高；相對誤差較大簡單、快速、靈敏度高；相對誤差較大。1 比色分析法基本原理比色分析法基本原理如果溶液吸收了一部分波長的光，則溶液呈現(xiàn)透過如果溶液吸收了一部分波長的光，則

2、溶液呈現(xiàn)透過溶液后剩余部分光的顏色溶液后剩余部分光的顏色（吸收光顏色的補色）（吸收光顏色的補色）。青（青（490500nm）白光白光（580600nm）黃）黃藍（藍（450480nm）紫紫（400450nm）青藍（青藍（480490nm）（560580nm）綠綠（600650nm）橙）橙（650760nm）紅）紅光的互補色示意圖光的互補色示意圖物質(zhì)的顏色與光的關(guān)系物質(zhì)的顏色與光的關(guān)系( (可自行擴展查閱相關(guān)內(nèi)容可自行擴展查閱相關(guān)內(nèi)容) )物質(zhì)顯色原理物質(zhì)顯色原理: :對光的選擇性吸收。對光的選擇性吸收。吸收曲線吸收曲線(思考一下思考一下!) KMnO4溶液的吸收光譜曲線溶液的吸收光譜曲線 A曲

3、線曲線 不同物質(zhì)有不同吸收曲線，可定性鑒別。不同物質(zhì)有不同吸收曲線，可定性鑒別。同種溶液，吸收曲線相似，但吸光度隨濃度而改變。同種溶液，吸收曲線相似，但吸光度隨濃度而改變?？啥繙y定?？啥繙y定。定量測定時一般選擇定量測定時一般選擇最大吸收波長最大吸收波長max的單色光作的單色光作為入射光。為入射光。朗伯比爾（朗伯比爾（Lambert-Beer）定律）定律( (定量依據(jù)原理定量依據(jù)原理) ) KbcTAII lglg0（單色光）（單色光）I/I0-透光率透光率TlgI0/I-吸光度吸光度AK-吸光系數(shù)，吸光系數(shù)， 與吸光物質(zhì)的種類和入射光的波長與吸光物質(zhì)的種類和入射光的波長有關(guān)。有關(guān)。 c以以

4、gL-1為單位時的吸光系數(shù)稱為質(zhì)量吸光系數(shù)為單位時的吸光系數(shù)稱為質(zhì)量吸光系數(shù)a c以以molL-1為單位時的吸光系數(shù)稱為摩爾吸光系數(shù)為單位時的吸光系數(shù)稱為摩爾吸光系數(shù)吸光系數(shù)越大，表示溶液對入射光越容易吸收。吸光系數(shù)越大，表示溶液對入射光越容易吸收。 定律應(yīng)用定律應(yīng)用1某待測液用某待測液用1.0cm吸收池測量時，其透射光強吸收池測量時，其透射光強度為入射光強度的度為入射光強度的1/2，在同樣波長下，若用，在同樣波長下，若用2.0cm吸收池測量該溶液，其透光率和吸光度吸收池測量該溶液，其透光率和吸光度各為多少？各為多少？解：解：KbcA 50%01 IIT0.30lg0.50lg11 TA221

5、1bAbA 0.602.01.00.302112 bbAA25%10100.6022 AT已知在已知在525nm處處KMnO4溶液的溶液的2235Lmol-1cm-1，若用，若用2cm比色皿，為使比色皿，為使所測得的透光率介于所測得的透光率介于20%65%之間，溶之間，溶液的濃度范圍應(yīng)為多少？液的濃度范圍應(yīng)為多少？ 若若T20% )L(mol1056.1lg14 bTbAc 若若T65% c = 4.1910-5(molL-1) 溶液的濃度范圍溶液的濃度范圍: :1.5610-4 4.1910-5molL-1。 解：解：定律應(yīng)用定律應(yīng)用22 比色分析測定方法比色分析測定方法一、目視比色法一、目

6、視比色法 用視力比較樣品溶液與標(biāo)準(zhǔn)品溶液的顏色深用視力比較樣品溶液與標(biāo)準(zhǔn)品溶液的顏色深淺以確定物質(zhì)含量。淺以確定物質(zhì)含量。A標(biāo)標(biāo)A樣樣（顏色深度相同）（顏色深度相同）c標(biāo)標(biāo)L標(biāo)標(biāo)c樣樣L樣樣當(dāng)當(dāng)L標(biāo)標(biāo)L樣樣時，時，c標(biāo)標(biāo)c樣樣二、分光光度法二、分光光度法 以鎢燈或氫燈光作光源，經(jīng)單色光以鎢燈或氫燈光作光源，經(jīng)單色光器分光后，以所需波長的單色光作入射器分光后，以所需波長的單色光作入射光，通過測定溶液吸光度來求算溶液中光，通過測定溶液吸光度來求算溶液中被測物質(zhì)含量的一種分析方法。被測物質(zhì)含量的一種分析方法。 、分光光度計、分光光度計光源單色器吸收池檢測器放大器指示器 光源光源 可見區(qū)：鎢燈（可見區(qū)

7、：鎢燈（3601000nm ） 紫外區(qū)：氫燈（紫外區(qū)：氫燈（200400nm） 單色器單色器（控制入射光波長）（控制入射光波長） 棱鏡或光柵、準(zhǔn)直鏡、狹縫等組成。棱鏡或光柵、準(zhǔn)直鏡、狹縫等組成。 吸收池或比色皿吸收池或比色皿（盛放待測溶液）。（盛放待測溶液）。 材質(zhì)：光學(xué)玻璃（可見區(qū)）或石英玻璃（紫外區(qū)）材質(zhì)：光學(xué)玻璃（可見區(qū)）或石英玻璃（紫外區(qū)） 規(guī)格：規(guī)格： 0.5、1.0、2.0、3.0cm等等 注意事項：注意事項：透光面要注意保護透光面要注意保護(?)，比色皿的配套，比色皿的配套(?)。、分光光度法的測定方法、分光光度法的測定方法 （）（）標(biāo)準(zhǔn)曲線法標(biāo)準(zhǔn)曲線法 (應(yīng)用示例有哪些應(yīng)用示例

8、有哪些?)配制一系列不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液，用選定配制一系列不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液，用選定的顯色劑顯色。作吸收曲線選擇測定波長。的顯色劑顯色。作吸收曲線選擇測定波長。 用選定波長的入射光用選定波長的入射光, ,測定標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸光測定標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸光度；以吸光度為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)度；以吸光度為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。準(zhǔn)曲線。 在相同條件下，測量待測溶液吸光度，并在在相同條件下，測量待測溶液吸光度，并在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出其相應(yīng)的含量。標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出其相應(yīng)的含量。 空白溶液（參比溶液）空白溶液（參比溶液）( (有何作用有何作用?)?) 溶劑空白溶劑空白當(dāng)顯色劑及制備試液的其它試劑均無色，試樣溶

9、液當(dāng)顯色劑及制備試液的其它試劑均無色，試樣溶液中無其它有色物質(zhì)干擾時，可用溶劑作空白溶液。中無其它有色物質(zhì)干擾時，可用溶劑作空白溶液。 試劑空白試劑空白 若顯色試劑有色，試樣溶液中無其它有色物質(zhì)干擾時，若顯色試劑有色，試樣溶液中無其它有色物質(zhì)干擾時，用試劑空白進行校正。試劑空白：按顯色反應(yīng)相同的用試劑空白進行校正。試劑空白：按顯色反應(yīng)相同的條件加入各種試劑和溶劑條件加入各種試劑和溶劑( (不加試樣溶液不加試樣溶液) )后所得溶液。后所得溶液。試樣空白試樣空白當(dāng)試樣基體有色當(dāng)試樣基體有色( (如試樣中混有其它有色離子如試樣中混有其它有色離子) )，但，但顯色劑無色，且不與試樣中被測成分以外的其它

10、成顯色劑無色，且不與試樣中被測成分以外的其它成分顯色時，可用試樣空白校正。試樣空白：不加顯分顯色時，可用試樣空白校正。試樣空白：不加顯色劑但按顯色反應(yīng)相同條件進行操作的試樣溶液。色劑但按顯色反應(yīng)相同條件進行操作的試樣溶液。 （2） 標(biāo)準(zhǔn)對照法標(biāo)準(zhǔn)對照法 (有哪些應(yīng)用示例有哪些應(yīng)用示例)先配制一個與被測物質(zhì)溶液的濃度相近的先配制一個與被測物質(zhì)溶液的濃度相近的標(biāo)準(zhǔn)溶液，與被測溶液在相同條件下測定標(biāo)準(zhǔn)溶液，與被測溶液在相同條件下測定吸光度吸光度 ：A標(biāo)標(biāo) = K標(biāo)標(biāo)b標(biāo)標(biāo)c標(biāo)標(biāo) A樣樣 = K樣樣b樣樣c樣樣 K標(biāo)標(biāo) = K樣樣 b標(biāo)標(biāo)=b樣樣 樣樣標(biāo)標(biāo)樣樣標(biāo)標(biāo)ccAA 標(biāo)標(biāo)標(biāo)標(biāo)樣樣樣樣cAAc 7

11、22分光光度計使用方法分光光度計使用方法3 常用儀器的使用方法常用儀器的使用方法1 1、接通電源前，檢查儀器部件是否完好，工作電壓是否正常。、接通電源前，檢查儀器部件是否完好，工作電壓是否正常。2 2、接通電源打開暗箱蓋，進入光度測量界面。選擇、接通電源打開暗箱蓋，進入光度測量界面。選擇 測定的波測定的波長（長（520nm520nm）。（見圖）。（見圖1 1）3 3、將比色杯內(nèi)放好空白液（蒸餾水）、標(biāo)準(zhǔn)液、標(biāo)準(zhǔn)空白液、測定液、將比色杯內(nèi)放好空白液（蒸餾水）、標(biāo)準(zhǔn)液、標(biāo)準(zhǔn)空白液、測定液、測定空白液，置于比色池中（由下向上的順序放置）。（見圖測定空白液，置于比色池中（由下向上的順序放置）。（見圖2

12、 2）4 4、蓋上暗箱蓋，選擇、蓋上暗箱蓋，選擇 儀器自動校正空白液儀器自動校正空白液“A A”=0=0，并由下向上，并由下向上的順序讀取各管的順序讀取各管“A”A”（即（即A A標(biāo)準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)、A A標(biāo)空標(biāo)空、 A A測定測定、 A A測空測空）。（見圖）。（見圖3 3）startGOTO 圖圖1圖圖2圖圖3半自動生化儀使用方法（較為粗略）半自動生化儀使用方法（較為粗略）1、接通電源前，檢查儀器部件是否完好，工作電壓是否正常。2、編輯好程序（見圖4），進行樣品操作。3、樣品操作中按照可視面板中提示的內(nèi)容進行相應(yīng)樣品的檢測，將儀器上的一根吸液管伸入到裝有樣品的試管中，（吸液管口一定要伸入到液面下）按

13、動吸樣按鈕（見圖5）即可完成吸樣步驟，同時等待幾秒鐘讀取數(shù)值。4、完成一組操作之后，按動清洗按鈕進行比色池清洗（保證比色池干凈）（見圖6）。圖圖4可視窗口，可視窗口，編輯程序，編輯程序，讀取數(shù)值讀取數(shù)值等等圖圖5吸液管吸液管吸樣按鈕吸樣按鈕圖圖6清洗按鈕清洗按鈕一、血鉀檢測方法一、血鉀檢測方法四苯硼鈉法四苯硼鈉法4 機能實驗課指標(biāo)檢測機能實驗課指標(biāo)檢測反復(fù)倒置幾次，使沉淀顆粒完全消失，室溫放置反復(fù)倒置幾次，使沉淀顆粒完全消失，室溫放置5分鐘后，在分鐘后，在620nm波長下進波長下進行濁度測定。行濁度測定。反應(yīng)溫度：反應(yīng)溫度：1530以蒸餾調(diào)儀器吸光度為零。以蒸餾調(diào)儀器吸光度為零。公式計算：公式計算：鉀濃度鉀濃度=A樣品樣品/A標(biāo)準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)濃度（標(biāo)準(zhǔn)濃度（mmol/L 或或mg/dl） 標(biāo)準(zhǔn)液濃度：標(biāo)準(zhǔn)液濃度：5.0 m