網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)（課堂PPT）

1、1 實(shí)驗(yàn)三實(shí)驗(yàn)三網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)一、實(shí)驗(yàn)原理一、實(shí)驗(yàn)原理 網(wǎng)織紅細(xì)胞胞漿內(nèi)殘存有嗜堿性的網(wǎng)織紅細(xì)胞胞漿內(nèi)殘存有嗜堿性的RNA物質(zhì)，經(jīng)煌焦油藍(lán)或新亞甲藍(lán)活體染色后物質(zhì)，經(jīng)煌焦油藍(lán)或新亞甲藍(lán)活體染色后RNA中負(fù)電荷基團(tuán)與帶正電荷的有色基團(tuán)結(jié)中負(fù)電荷基團(tuán)與帶正電荷的有色基團(tuán)結(jié)合，凝聚成顆粒呈淺藍(lán)或藍(lán)黑色的點(diǎn)狀、絲狀合，凝聚成顆粒呈淺藍(lán)或藍(lán)黑色的點(diǎn)狀、絲狀或網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，可在顯微鏡下識別。計(jì)數(shù)或網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，可在顯微鏡下識別。計(jì)數(shù)1000個(gè)紅細(xì)胞中所有的網(wǎng)織紅細(xì)胞數(shù)直接報(bào)告其百個(gè)紅細(xì)胞中所有的網(wǎng)織紅細(xì)胞數(shù)直接報(bào)告其百分比，或分比，或紅細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果報(bào)告其絕對值。紅細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果報(bào)告其絕對值。2 網(wǎng)織紅

2、細(xì)胞（網(wǎng)織紅細(xì)胞（Ret） 是晚幼紅細(xì)胞脫核后到成熟紅細(xì)胞間是晚幼紅細(xì)胞脫核后到成熟紅細(xì)胞間的過渡細(xì)胞，是尚未完全成熟的紅細(xì)胞，的過渡細(xì)胞，是尚未完全成熟的紅細(xì)胞，其胞漿內(nèi)殘存有嗜堿性的其胞漿內(nèi)殘存有嗜堿性的RNA物質(zhì)。嗜物質(zhì)。嗜堿性物質(zhì)與染料凝聚成藍(lán)色顆粒，顆粒與堿性物質(zhì)與染料凝聚成藍(lán)色顆粒，顆粒與顆粒連綴成線，線連接成網(wǎng)，故而得名。顆粒連綴成線，線連接成網(wǎng)，故而得名。分型：絲球型、網(wǎng)型、破網(wǎng)型、點(diǎn)粒型。分型：絲球型、網(wǎng)型、破網(wǎng)型、點(diǎn)粒型。（、型）型）3網(wǎng)織紅細(xì)胞4計(jì)數(shù)方法n1、普通光學(xué)顯微鏡法：活體染色后推片鏡檢n2、網(wǎng)織細(xì)胞計(jì)數(shù)儀法：熒光染色后用流式細(xì)胞術(shù)計(jì)數(shù)5二、試劑器材1、試劑 10

3、g/L煌焦油藍(lán)酒精（水）溶液 2、器材 毛細(xì)血管采血用具、小試管、載玻片、推片、顯微鏡、香柏油、二甲苯及擦鏡紙、Miller窺盤或直徑約20 mm（較目鏡內(nèi)徑稍?。┑膱A形硬紙片（正中央開一邊長為3mm的菱形或正方形小孔，置目鏡光闌處，用于縮視野法計(jì)數(shù)）6三、操作步驟1. 染色：于載玻片的一端加煌焦油藍(lán)酒精溶液染色：于載玻片的一端加煌焦油藍(lán)酒精溶液1滴，滴，任其自然涼干后備用，取末梢血或抗凝血一滴，于任其自然涼干后備用，取末梢血或抗凝血一滴，于已干燥的染料上，用推片角混勻后，將兩玻片蓋合已干燥的染料上，用推片角混勻后，將兩玻片蓋合（玻片法）；試管法取染液（玻片法）；試管法取染液2滴入試管，加血滴

4、入試管，加血2滴滴混勻，封閉好，待混勻，封閉好，待15分鐘以上時(shí)間，分鐘以上時(shí)間，2. 推片：取混合液推片：取混合液1小滴于載玻片的一端，推制成薄小滴于載玻片的一端，推制成薄而均勻的血膜，而均勻的血膜，3. 低倍鏡瀏覽，選取紅細(xì)胞分布均勻網(wǎng)織紅細(xì)胞染低倍鏡瀏覽，選取紅細(xì)胞分布均勻網(wǎng)織紅細(xì)胞染色較好的部分（體尾交界處），滴香柏油轉(zhuǎn)換至油色較好的部分（體尾交界處），滴香柏油轉(zhuǎn)換至油鏡，在鏡，在Miller窺盤下計(jì)數(shù)小方格中的窺盤下計(jì)數(shù)小方格中的RBC數(shù)和大方數(shù)和大方格中的網(wǎng)織紅細(xì)胞數(shù)（或數(shù)出整個(gè)視野中的格中的網(wǎng)織紅細(xì)胞數(shù)（或數(shù)出整個(gè)視野中的RBC總數(shù)和其中的網(wǎng)織紅細(xì)胞數(shù)，換一視野同法計(jì)數(shù)至總數(shù)和其

5、中的網(wǎng)織紅細(xì)胞數(shù)，換一視野同法計(jì)數(shù)至幾個(gè)視野幾個(gè)視野RBC總數(shù)總數(shù)1000為止）。為止）。7Miller窺盤 A31B將將MillerMiller窺盤放在顯窺盤放在顯微鏡目鏡中微鏡目鏡中, ,通過窺盤通過窺盤中大小方格間的中大小方格間的9 9比比1 1比例關(guān)系計(jì)算比例關(guān)系計(jì)算RBCRBC數(shù)和數(shù)和RetRet數(shù)。數(shù)。89四、計(jì)算 1.Miller窺盤法：網(wǎng)織紅細(xì)胞（窺盤法：網(wǎng)織紅細(xì)胞（Retic）百分率百分率(%)= （大方格內(nèi)（大方格內(nèi)Retic總數(shù)）總數(shù)）/（小方格內(nèi)（小方格內(nèi)RBC總數(shù)總數(shù)9）100% 2.直接計(jì)數(shù)法：網(wǎng)織紅細(xì)胞（直接計(jì)數(shù)法：網(wǎng)織紅細(xì)胞（Retic）百百分率分率(%)= 多

6、個(gè)視野內(nèi)多個(gè)視野內(nèi)Retic總數(shù)總數(shù)/多多個(gè)視野內(nèi)個(gè)視野內(nèi)RBC總數(shù)總數(shù)100%10五、注意事項(xiàng)1.用酒精染液時(shí)，應(yīng)待玻璃片上的酒精揮發(fā)干燥用酒精染液時(shí)，應(yīng)待玻璃片上的酒精揮發(fā)干燥后，才能加血液，染色時(shí)應(yīng)用推片角不停攪動，后，才能加血液，染色時(shí)應(yīng)用推片角不停攪動，使染料和血液混合，防止凝固。使染料和血液混合，防止凝固。2.染色時(shí)間一定要充足，混合后不能立即推片，染色時(shí)間一定要充足，混合后不能立即推片，室溫低時(shí)染色時(shí)間應(yīng)適當(dāng)延長，應(yīng)覆以另一玻室溫低時(shí)染色時(shí)間應(yīng)適當(dāng)延長，應(yīng)覆以另一玻片防止蒸發(fā)。片防止蒸發(fā)。3.染液與血液比例以染液與血液比例以1：1為宜，貧血適當(dāng)加血量。為宜，貧血適當(dāng)加血量。4.涂

7、片厚薄均勻適宜，弓形移動，多個(gè)區(qū)域計(jì)數(shù)涂片厚薄均勻適宜，弓形移動，多個(gè)區(qū)域計(jì)數(shù)5.試劑應(yīng)定期重配，以免變質(zhì)沉淀。試劑應(yīng)定期重配，以免變質(zhì)沉淀。6.與變性珠蛋白小體鑒別與變性珠蛋白小體鑒別11六、參考值成人：成人：0.005-0.015（0.5%-1.5%）新生兒：新生兒：0.02-0.06（2%-6%）兒童：兒童：0.005-0.075（0.5%-7.5%）成人絕對值成人絕對值（24-84） 109/L 12七、臨床意義七、臨床意義（1）評價(jià)骨髓增生能力，判斷貧血類型）評價(jià)骨髓增生能力，判斷貧血類型 n再障再障時(shí)，明顯降低。絕對值低于時(shí)，明顯降低。絕對值低于5109/L可可做為急性再障的輔助診

8、斷指標(biāo)。做為急性再障的輔助診斷指標(biāo)。n失血、多數(shù)失血、多數(shù)溶血性貧血溶血性貧血患者網(wǎng)織紅細(xì)胞可明患者網(wǎng)織紅細(xì)胞可明顯高于正常。顯高于正常。營養(yǎng)不良性貧血營養(yǎng)不良性貧血在治療前網(wǎng)織紅細(xì)胞可保持在治療前網(wǎng)織紅細(xì)胞可保持正常、輕度升高或降低。正常、輕度升高或降低。13（2 2）評價(jià)療效）評價(jià)療效網(wǎng)織紅細(xì)胞反應(yīng)：網(wǎng)織紅細(xì)胞反應(yīng)：IDA或巨幼細(xì)胞貧血分別或巨幼細(xì)胞貧血分別給予鐵劑、維生素給予鐵劑、維生素B12或葉酸治療或葉酸治療23d后，網(wǎng)織后，網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)值開始上升，紅細(xì)胞計(jì)數(shù)值開始上升，710d達(dá)到最高達(dá)到最高(10%左右左右)；兩周以后逐漸降至正常水平，紅細(xì)胞、；兩周以后逐漸降至正常水平，紅細(xì)胞

9、、血紅蛋白開始升高。血紅蛋白開始升高。骨髓移植、骨髓移植、EPO治療后：治療后：若骨髓開始恢復(fù)造若骨髓開始恢復(fù)造血功能，血功能，RMI升高，網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)值上升。升高，網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)值上升。14（3 3）放、化療監(jiān)測）放、化療監(jiān)測 機(jī)體接受放、化療后，如出現(xiàn)骨髓抑制，機(jī)體接受放、化療后，如出現(xiàn)骨髓抑制，早期早期HFR和和MFR降低，然后才檢測到網(wǎng)織降低，然后才檢測到網(wǎng)織紅細(xì)胞的降低。而停止放、化療，骨髓功紅細(xì)胞的降低。而停止放、化療，骨髓功能恢復(fù)后，又見上述指標(biāo)依次上升?？芍改芑謴?fù)后，又見上述指標(biāo)依次上升?？芍笇?dǎo)臨床醫(yī)師適時(shí)調(diào)整治療方案，避免造成導(dǎo)臨床醫(yī)師適時(shí)調(diào)整治療方案，避免造成嚴(yán)重的骨髓抑制。嚴(yán)重的骨髓抑制。15 RPI=RPI=病人網(wǎng)織紅細(xì)胞（病人網(wǎng)織紅細(xì)胞（% %）/2 /2 * * 病人病人HCT/HCT/正常正常人人HCTHCT（男（男0.450.45，女，女0.400.40） 臨床應(yīng)用：臨床應(yīng)用： 3 3提示溶血性