網(wǎng)織紅細胞計數(shù)（課堂PPT）

1、1 實驗三實驗三網(wǎng)織紅細胞計數(shù)網(wǎng)織紅細胞計數(shù)一、實驗原理一、實驗原理 網(wǎng)織紅細胞胞漿內(nèi)殘存有嗜堿性的網(wǎng)織紅細胞胞漿內(nèi)殘存有嗜堿性的RNA物質(zhì)，經(jīng)煌焦油藍或新亞甲藍活體染色后物質(zhì)，經(jīng)煌焦油藍或新亞甲藍活體染色后RNA中負電荷基團與帶正電荷的有色基團結中負電荷基團與帶正電荷的有色基團結合，凝聚成顆粒呈淺藍或藍黑色的點狀、絲狀合，凝聚成顆粒呈淺藍或藍黑色的點狀、絲狀或網(wǎng)狀結構，可在顯微鏡下識別。計數(shù)或網(wǎng)狀結構，可在顯微鏡下識別。計數(shù)1000個紅細胞中所有的網(wǎng)織紅細胞數(shù)直接報告其百個紅細胞中所有的網(wǎng)織紅細胞數(shù)直接報告其百分比，或分比，或紅細胞計數(shù)結果報告其絕對值。紅細胞計數(shù)結果報告其絕對值。2 網(wǎng)織紅

2、細胞（網(wǎng)織紅細胞（Ret） 是晚幼紅細胞脫核后到成熟紅細胞間是晚幼紅細胞脫核后到成熟紅細胞間的過渡細胞，是尚未完全成熟的紅細胞，的過渡細胞，是尚未完全成熟的紅細胞，其胞漿內(nèi)殘存有嗜堿性的其胞漿內(nèi)殘存有嗜堿性的RNA物質(zhì)。嗜物質(zhì)。嗜堿性物質(zhì)與染料凝聚成藍色顆粒，顆粒與堿性物質(zhì)與染料凝聚成藍色顆粒，顆粒與顆粒連綴成線，線連接成網(wǎng)，故而得名。顆粒連綴成線，線連接成網(wǎng)，故而得名。分型：絲球型、網(wǎng)型、破網(wǎng)型、點粒型。分型：絲球型、網(wǎng)型、破網(wǎng)型、點粒型。（、型）型）3網(wǎng)織紅細胞4計數(shù)方法n1、普通光學顯微鏡法：活體染色后推片鏡檢n2、網(wǎng)織細胞計數(shù)儀法：熒光染色后用流式細胞術計數(shù)5二、試劑器材1、試劑 10

3、g/L煌焦油藍酒精（水）溶液 2、器材 毛細血管采血用具、小試管、載玻片、推片、顯微鏡、香柏油、二甲苯及擦鏡紙、Miller窺盤或直徑約20 mm（較目鏡內(nèi)徑稍?。┑膱A形硬紙片（正中央開一邊長為3mm的菱形或正方形小孔，置目鏡光闌處，用于縮視野法計數(shù)）6三、操作步驟1. 染色：于載玻片的一端加煌焦油藍酒精溶液染色：于載玻片的一端加煌焦油藍酒精溶液1滴，滴，任其自然涼干后備用，取末梢血或抗凝血一滴，于任其自然涼干后備用，取末梢血或抗凝血一滴，于已干燥的染料上，用推片角混勻后，將兩玻片蓋合已干燥的染料上，用推片角混勻后，將兩玻片蓋合（玻片法）；試管法取染液（玻片法）；試管法取染液2滴入試管，加血滴

4、入試管，加血2滴滴混勻，封閉好，待混勻，封閉好，待15分鐘以上時間，分鐘以上時間，2. 推片：取混合液推片：取混合液1小滴于載玻片的一端，推制成薄小滴于載玻片的一端，推制成薄而均勻的血膜，而均勻的血膜，3. 低倍鏡瀏覽，選取紅細胞分布均勻網(wǎng)織紅細胞染低倍鏡瀏覽，選取紅細胞分布均勻網(wǎng)織紅細胞染色較好的部分（體尾交界處），滴香柏油轉換至油色較好的部分（體尾交界處），滴香柏油轉換至油鏡，在鏡，在Miller窺盤下計數(shù)小方格中的窺盤下計數(shù)小方格中的RBC數(shù)和大方數(shù)和大方格中的網(wǎng)織紅細胞數(shù)（或數(shù)出整個視野中的格中的網(wǎng)織紅細胞數(shù)（或數(shù)出整個視野中的RBC總數(shù)和其中的網(wǎng)織紅細胞數(shù)，換一視野同法計數(shù)至總數(shù)和其

5、中的網(wǎng)織紅細胞數(shù)，換一視野同法計數(shù)至幾個視野幾個視野RBC總數(shù)總數(shù)1000為止）。為止）。7Miller窺盤 A31B將將MillerMiller窺盤放在顯窺盤放在顯微鏡目鏡中微鏡目鏡中, ,通過窺盤通過窺盤中大小方格間的中大小方格間的9 9比比1 1比例關系計算比例關系計算RBCRBC數(shù)和數(shù)和RetRet數(shù)。數(shù)。89四、計算 1.Miller窺盤法：網(wǎng)織紅細胞（窺盤法：網(wǎng)織紅細胞（Retic）百分率百分率(%)= （大方格內(nèi)（大方格內(nèi)Retic總數(shù)）總數(shù)）/（小方格內(nèi)（小方格內(nèi)RBC總數(shù)總數(shù)9）100% 2.直接計數(shù)法：網(wǎng)織紅細胞（直接計數(shù)法：網(wǎng)織紅細胞（Retic）百百分率分率(%)= 多

6、個視野內(nèi)多個視野內(nèi)Retic總數(shù)總數(shù)/多多個視野內(nèi)個視野內(nèi)RBC總數(shù)總數(shù)100%10五、注意事項1.用酒精染液時，應待玻璃片上的酒精揮發(fā)干燥用酒精染液時，應待玻璃片上的酒精揮發(fā)干燥后，才能加血液，染色時應用推片角不停攪動，后，才能加血液，染色時應用推片角不停攪動，使染料和血液混合，防止凝固。使染料和血液混合，防止凝固。2.染色時間一定要充足，混合后不能立即推片，染色時間一定要充足，混合后不能立即推片，室溫低時染色時間應適當延長，應覆以另一玻室溫低時染色時間應適當延長，應覆以另一玻片防止蒸發(fā)。片防止蒸發(fā)。3.染液與血液比例以染液與血液比例以1：1為宜，貧血適當加血量。為宜，貧血適當加血量。4.涂

7、片厚薄均勻適宜，弓形移動，多個區(qū)域計數(shù)涂片厚薄均勻適宜，弓形移動，多個區(qū)域計數(shù)5.試劑應定期重配，以免變質(zhì)沉淀。試劑應定期重配，以免變質(zhì)沉淀。6.與變性珠蛋白小體鑒別與變性珠蛋白小體鑒別11六、參考值成人：成人：0.005-0.015（0.5%-1.5%）新生兒：新生兒：0.02-0.06（2%-6%）兒童：兒童：0.005-0.075（0.5%-7.5%）成人絕對值成人絕對值（24-84） 109/L 12七、臨床意義七、臨床意義（1）評價骨髓增生能力，判斷貧血類型）評價骨髓增生能力，判斷貧血類型 n再障再障時，明顯降低。絕對值低于時，明顯降低。絕對值低于5109/L可可做為急性再障的輔助診

8、斷指標。做為急性再障的輔助診斷指標。n失血、多數(shù)失血、多數(shù)溶血性貧血溶血性貧血患者網(wǎng)織紅細胞可明患者網(wǎng)織紅細胞可明顯高于正常。顯高于正常。營養(yǎng)不良性貧血營養(yǎng)不良性貧血在治療前網(wǎng)織紅細胞可保持在治療前網(wǎng)織紅細胞可保持正常、輕度升高或降低。正常、輕度升高或降低。13（2 2）評價療效）評價療效網(wǎng)織紅細胞反應：網(wǎng)織紅細胞反應：IDA或巨幼細胞貧血分別或巨幼細胞貧血分別給予鐵劑、維生素給予鐵劑、維生素B12或葉酸治療或葉酸治療23d后，網(wǎng)織后，網(wǎng)織紅細胞計數(shù)值開始上升，紅細胞計數(shù)值開始上升，710d達到最高達到最高(10%左右左右)；兩周以后逐漸降至正常水平，紅細胞、；兩周以后逐漸降至正常水平，紅細胞

9、、血紅蛋白開始升高。血紅蛋白開始升高。骨髓移植、骨髓移植、EPO治療后：治療后：若骨髓開始恢復造若骨髓開始恢復造血功能，血功能，RMI升高，網(wǎng)織紅細胞計數(shù)值上升。升高，網(wǎng)織紅細胞計數(shù)值上升。14（3 3）放、化療監(jiān)測）放、化療監(jiān)測 機體接受放、化療后，如出現(xiàn)骨髓抑制，機體接受放、化療后，如出現(xiàn)骨髓抑制，早期早期HFR和和MFR降低，然后才檢測到網(wǎng)織降低，然后才檢測到網(wǎng)織紅細胞的降低。而停止放、化療，骨髓功紅細胞的降低。而停止放、化療，骨髓功能恢復后，又見上述指標依次上升?？芍改芑謴秃?，又見上述指標依次上升?？芍笇R床醫(yī)師適時調(diào)整治療方案，避免造成導臨床醫(yī)師適時調(diào)整治療方案，避免造成嚴重的骨髓抑制。嚴重的骨髓抑制。15 RPI=RPI=病人網(wǎng)織紅細胞（病人網(wǎng)織紅細胞（% %）/2 /2 * * 病人病人HCT/HCT/正常正常人人HCTHCT（男（男0.450.45，女，女0.400.40） 臨床應用：臨床應用： 3 3提示溶血性