方劑藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究進(jìn)展

1、方劑藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究進(jìn)展摘要：方劑研究是中醫(yī)藥研究的主要方向，而方劑的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究則是方劑研究的核心。可是方劑藥效物質(zhì)的復(fù)雜性給方劑研究者造成了極大的障礙，使得方劑研究止步不前。方劑藥效物質(zhì)研究的復(fù)雜性不僅在于方劑組成成分的多樣性，還在于其各組成成分之間相互作用的復(fù)雜性、物質(zhì)與人體之間相互作用的復(fù)雜性等等。為了解決“無法準(zhǔn)確判斷方劑藥效物質(zhì)”的問題，近幾十年以來方劑研究者不斷探索，結(jié)合新技術(shù)，研究出入代謝組學(xué)、譜效學(xué)研究、有效部位及有效成分研究、中藥血清藥理學(xué)及血清藥物化學(xué)研究、拆方研究等方法。因此本文旨在梳理近幾十年來方劑藥效物質(zhì)研究進(jìn)展，希望能夠?qū)ο嚓P(guān)研究者有所幫助。關(guān)鍵詞：方劑、藥效

2、物質(zhì)基礎(chǔ)、研究進(jìn)展方劑是中藥臨床用藥的基本形式，配伍是方劑的核心?！熬甲羰?，七情合和”等是方劑的傳統(tǒng)中醫(yī)理論基礎(chǔ)里，方劑的有效物質(zhì)成分作用于機(jī)體，產(chǎn)生療效，如何測(cè)定方劑中的有效物質(zhì)成分則成了方劑研究者的重點(diǎn)攻克方向，筆者通過中國(guó)知網(wǎng)、維普、萬方、pubme懵,以“方劑藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究進(jìn)展”為題，搜索了大量文獻(xiàn)，因此做如下綜述。1 .中藥血清藥理學(xué)及血清藥物化學(xué)上世紀(jì)80年代初，著名的日本藥理學(xué)家田代真一旦首次提出了血清藥理學(xué)這一創(chuàng)新思路。他認(rèn)為中藥制劑口服吸收后，在體內(nèi)經(jīng)過胃腸道菌群代謝和排泄過程而發(fā)揮治療作用，因而中藥及其復(fù)方中具有生物活性的成分一一一藥效物質(zhì)基礎(chǔ)是中藥經(jīng)過人體生物轉(zhuǎn)化之后

3、的產(chǎn)物，這些產(chǎn)物吸收入血后與血漿蛋白結(jié)合并通過血液的流動(dòng)到達(dá)靶標(biāo)器官及組織。上世紀(jì)90年代國(guó)內(nèi)學(xué)者王喜軍里提出“中藥血清藥理學(xué)”，按照“中藥復(fù)雜化學(xué)成分-學(xué)中移行成分-體內(nèi)直接作用物質(zhì)-藥效物質(zhì)基礎(chǔ)”的研究思路，避免了中藥復(fù)方煎煮及丸散等粗制劑型直接進(jìn)行體外藥物研究結(jié)果所產(chǎn)生的影響；而且經(jīng)過動(dòng)物的吸收代謝等過程，其血清成分可更直接地反映中藥復(fù)方制劑的藥理作用，其對(duì)中藥復(fù)方療效和機(jī)制的闡述也更具科學(xué)性，至此這一方法在中醫(yī)藥藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究中被廣泛重視及應(yīng)用。但血清藥理學(xué)也存在著許多不足，如實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的選擇、給藥劑量、時(shí)間、血清添加量等方面也對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生或多或少的影響。2 .證治藥動(dòng)學(xué)證治藥動(dòng)學(xué)是

4、黃熙應(yīng)教授于2002首先提出的，他主張拆方圍繞君臣佐使進(jìn)行PK研究，從方劑化學(xué)物質(zhì)基礎(chǔ)、方劑體內(nèi)活性物質(zhì)分析及其藥動(dòng)學(xué)等角度，闡明君臣佐使組成原理與可惜內(nèi)涵，同時(shí)為方劑藥效物質(zhì)成分的研究提供了重要思路。在此基礎(chǔ)上，黃熙提出了生物方劑分析藥理（BAP。例如以藥效血清差示色譜法研究丹紅注射液治療大鼠心肌缺血/再灌注損傷的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)迎。在對(duì)患病大鼠進(jìn)行給藥之后，研究DHI在改善患病大鼠病癥的作用，確定最大和最小藥效時(shí)間點(diǎn)并建立全成分的指紋圖譜集。通過比對(duì)DHI在對(duì)癥機(jī)體產(chǎn)生最大和最小藥效時(shí)血清中物質(zhì)譜的變化差，以HPLC-M盅法結(jié)合對(duì)照品鑒定DHI的藥效物質(zhì)，并對(duì)藥效物質(zhì)進(jìn)行藥效學(xué)反饋驗(yàn)證。但此方

5、法的弊端在于只對(duì)入血的藥效物質(zhì)進(jìn)行研究，而方劑藥效作用的一定復(fù)雜性就在于它可能作用于多個(gè)靶點(diǎn)，即并不一定全部入血。3 .方劑代謝物組學(xué)代謝物組學(xué)9-10(metabonomics)是繼基因組(genome)、轉(zhuǎn)錄物組(transcriptome)和蛋白質(zhì)組(proteome)、組學(xué)(omics)等之后于1999年提出的一門后基因組時(shí)代的新學(xué)科和系統(tǒng)研究方法主要研究細(xì)胞或生物樣品所有代謝物的綜合表現(xiàn)。與血藥濃度法、組織濃度法、尿液濃度法、生物效應(yīng)法，主要選擇一些藥效指標(biāo)，或進(jìn)行含藥血清的體外藥理實(shí)驗(yàn)等不同，代謝物組學(xué)更傾向與整體觀念，且沒有脫離中醫(yī)理論指導(dǎo)。劉昌孝院士等人應(yīng)用代謝物組學(xué)方法研究由

6、鉤藤等多味中藥組成的多動(dòng)合劑的生物化學(xué)機(jī)制和作用靶點(diǎn)時(shí),采用LC-MS-MS法測(cè)定給藥動(dòng)物血清中多種內(nèi)源性神經(jīng)遞質(zhì)(Ach、DA5-HT等)的動(dòng)態(tài)變化。從代謝物組成分和量的經(jīng)時(shí)變化發(fā)現(xiàn)有療效的生物標(biāo)記物，認(rèn)為藥物的整體作用所產(chǎn)生的生物化學(xué)物質(zhì)(神經(jīng)遞質(zhì))是其藥效的物質(zhì)基礎(chǔ)，證明多動(dòng)合劑的作用機(jī)制可能與DA受體變化有關(guān)，示范性地進(jìn)行了中藥方劑作用靶點(diǎn)問題的探索。同時(shí)在方劑代謝物組學(xué)的指導(dǎo)下，通過對(duì)體液和胰腺組織代謝物組成分和量變化的分析，觀測(cè)大承氣湯引起的所有生化變化，這一優(yōu)點(diǎn)也解決了先前單純檢測(cè)血液中的有效物質(zhì)成分的局限性。4 .中醫(yī)方證代謝組學(xué)中醫(yī)方證代謝組學(xué)(Chinamedomics)&

7、quot;由王喜軍在中醫(yī)血清藥理學(xué)和血清藥物化學(xué)的研究的基礎(chǔ)上提出。它整合了系統(tǒng)生物學(xué)與中藥血清藥物化學(xué)的理論及技術(shù)，形成了鑒定證候生物標(biāo)記物，建立方劑有效性評(píng)價(jià)體系，并發(fā)現(xiàn)藥效物質(zhì)基礎(chǔ)的應(yīng)用科學(xué)。中醫(yī)方證代謝組學(xué)是以證候?yàn)榍腥朦c(diǎn)，以方劑為研究對(duì)象，利用代謝組學(xué)技術(shù)發(fā)現(xiàn)并鑒定證候的生物標(biāo)記物，以證候生物標(biāo)記物為參數(shù)評(píng)價(jià)方劑的整體療效；在有效的狀態(tài)下，利用中藥血清藥物化學(xué)分析鑒定有效狀態(tài)下方劑體內(nèi)直接作用物質(zhì)的顯效形式；進(jìn)而將證候生物標(biāo)記物與方劑體內(nèi)顯效成分相關(guān)聯(lián)，發(fā)現(xiàn)與生物標(biāo)記物軌跡變化高度關(guān)聯(lián)的體內(nèi)成分，從而鑒定表達(dá)方劑臨床療效的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)，進(jìn)而闡明中藥有效性及其作用機(jī)制等科學(xué)問題。以茵陳

8、蒿湯為例，本實(shí)驗(yàn)采用灌胃60溫醇的方法復(fù)制酒精性肝損傷模型，首先進(jìn)行生理生化指標(biāo)及組織病理學(xué)評(píng)價(jià)：利用基于超高效液相色譜-高分辨質(zhì)譜(UPLC-HDMS)代謝組學(xué)技術(shù)對(duì)酒精性肝損傷小鼠尿液、血液、肝組織、細(xì)胞樣品軌跡變化進(jìn)行研究，采用模式識(shí)別的方法找到與酒精性肝損傷相關(guān)的生物標(biāo)記物，進(jìn)而用MetPA方法找到與之相關(guān)的代謝通路，對(duì)酒精性肝損傷的發(fā)生機(jī)制進(jìn)行探討，在此基礎(chǔ)上研究茵陳蒿湯體內(nèi)成分組方對(duì)酒精性肝損傷小鼠的治療作用及機(jī)制。成功得到結(jié)論：酒精性肝損傷動(dòng)物模型的主要生物標(biāo)記物為苯乙胺、哌咤酸等，主要涉及苯丙氨酸等代謝通路，而茵陳蒿湯體內(nèi)成分組方藥物對(duì)酒精性肝損傷模型具有保護(hù)作用，不僅其能夠顯

9、著調(diào)節(jié)各項(xiàng)生化指標(biāo)，減輕脂肪變性及炎細(xì)胞浸潤(rùn)，而且通過回調(diào)小鼠代謝輪廓，逆轉(zhuǎn)酒精性肝損傷生物標(biāo)記物的異常表達(dá)水平并使之向正常狀態(tài)回歸，修復(fù)損傷導(dǎo)致的紊亂代謝通路，昭示6,7-二甲氨基香豆素、京尼平甘、大黃酸組方能夠表達(dá)茵陳蒿湯的肝保護(hù)作用總結(jié)：本文著重介紹了王喜軍提出的中醫(yī)藥血清藥理學(xué)和血清藥物化學(xué)、黃熙提出的證治藥動(dòng)學(xué)和血清色譜法、劉昌孝等人提出的方劑代謝組學(xué)、王喜軍提出的中醫(yī)方證代謝組學(xué)，并簡(jiǎn)要分析了各自的策略和所存在的問題。1周盼盼，王彥剛.基于中藥藥效-藥動(dòng)學(xué)的中醫(yī)藥方證相應(yīng)理論的研究進(jìn)展J.中草藥,2013,44(22):3236-3240.2張靈娜，林兵，宋洪濤.中藥血清藥理學(xué)、血

10、清藥物化學(xué)的研究概況及展望J.中草藥，2015,46(17):2662-2666.3王喜軍.中藥血清藥物化學(xué)的研究動(dòng)態(tài)及發(fā)展趨勢(shì)J.中國(guó)中藥雜志，2006,31(10):789-791.4張愛華，孫暉，閆廣利，韓瑩，王喜軍.血清藥物化學(xué)-藥代(效)動(dòng)力學(xué)-系統(tǒng)生物學(xué)”三維整合體系研究中藥復(fù)方的構(gòu)建及其在茵陳蒿湯分析中的應(yīng)用J.中國(guó)中藥雜志，2013,38(21):3786-3789.5黃熙，減益民，牛國(guó)保.“血瘀證治藥動(dòng)學(xué)”新假說.心功能雜志，1994,6(4):243-246.6黃熙，陳可冀.“證治藥動(dòng)學(xué)”新假說的理論與實(shí)踐J.中醫(yī)雜志，1997,38(12):745-747.7黃熙，任平.

11、后證治藥動(dòng)學(xué)的醫(yī)藥創(chuàng)新一一整體導(dǎo)向還原論研究J.中醫(yī)雜志,2013,54(5):365-368.8周丹.以藥效差示血清色譜法研究丹紅注射液治療大鼠心肌缺血/再灌注損傷的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)J.9劉昌孝，賈偉.代謝組學(xué)與中藥現(xiàn)代研究J.中草藥，2006,37:2-7.10唐文富，陳光遠(yuǎn)，黃熙.方劑代謝物組學(xué)新假說J.中草藥，2007,38(6):801-803.11WangXJ,ZhangAH,SunH,etal.FutureperspectivesofChinesemedicalformulae:chinmedomicsasaneffectorJ.OMICS,2012,16(7):414-421.12WangX,ZhangA,ZhouX,etal.AnintegratedchinmedomicsStrategyfordiscoveryofeffectiveconstituentsfromtraditionalherbalmedic