MDA含量的測(cè)定SOP

1、WORD格式主要目的：為了測(cè)定樣品中的MDA 含量，作為機(jī)體內(nèi)脂質(zhì)過(guò)氧化的程度的一個(gè)指標(biāo)。主要原理：測(cè)定原理為過(guò)氧化脂質(zhì)降解產(chǎn)物中的丙二醛可與硫代巴比妥酸 （ TBA ）縮合，形成紅色產(chǎn)物，在 532 nm 波長(zhǎng)下有最大吸收峰 100 。用酶標(biāo)儀在 532 nm 處測(cè)定吸光度（ OD 值），計(jì)算樣品濃度。因底物為硫代巴比妥酸，所以此法稱為 TBA 法。專業(yè)資料整理實(shí)驗(yàn)室簽章一、試劑 無(wú)水乙醇（分析純） 硫代巴比妥酸 冰醋酸 雙蒸水丙二醛（ MDA ）測(cè)定試劑盒（南京建成生物研究所）二、儀器設(shè)備 96 孔酶標(biāo)板 UV-Vis 可見(jiàn)多功能酶標(biāo)儀旋渦混勻器水浴鍋移液槍及相應(yīng)量程槍頭三、實(shí)驗(yàn)方法根據(jù)試

2、劑盒說(shuō)明書具體操作步驟如下：1. 向標(biāo)準(zhǔn)管 0.1 mL 標(biāo)準(zhǔn)品，空白管加入 0.1 mL 無(wú)水乙醇，測(cè)試管和對(duì)照管加入稀釋后的血清或組織上清液0.1 mL，然后各管中再分別加入0.1 mL 試劑一，搖動(dòng)幾下試管架晃勻，向各管中分別加入3 mL 的試劑二和 1ml 的試劑三，同時(shí)只向?qū)φ展苤屑尤?0%冰醋酸 1 mL。2.旋渦混勻器混勻，試管口用保險(xiǎn)薄膜扎緊，用針頭刺一小孔，95水浴40 分鐘，取出后流水冷卻，然后4000 轉(zhuǎn)/分，1cm 光徑，雙蒸水調(diào)零，測(cè)定各管吸光度值。3. 血清中 MDA 含量計(jì)算公式測(cè)定 OD值 對(duì)照 OD值MDA 含量（ nmol/mL ）-標(biāo)品濃度 樣本前稀釋倍數(shù)標(biāo)準(zhǔn) OD值 空白 OD值-組織中 MDA 含量計(jì)算公式測(cè)定 OD值 對(duì)照 OD值MDA 含量（ nmol/mgprot）-標(biāo)品濃度 樣品蛋白濃度標(biāo)準(zhǔn) OD值 空白 OD值-（mgprot/mL）Lu T C, Ko Y Z, Huang H W, et al. Analgesic and anti-inflammatory activities of aqueous extract from Glycine tomentella root in miceJ. Journal