三萜類及其苷類

1、1第八章第八章三萜類及其苷類三萜類及其苷類2v三萜三萜-以六分子異戊二烯為單位的聚合體。根據(jù)苷元的結(jié)構(gòu)可分為四環(huán)三萜和五環(huán)三萜兩大類。由于分子中常連有羧基，故多為酸性皂苷酸性皂苷（尤其是五環(huán)三萜，部分四環(huán)三萜為中性皂苷）。3v三萜類化合物在自然界的存在形式有游離或者與糖結(jié)合成苷的形式存在。游離三萜化合物不溶于水，易于有機(jī)溶劑。三萜苷類易于水，其水溶液劇烈振搖時能產(chǎn)生大量、持久的肥皂樣泡沫，故稱為三萜皂苷。4存在：存在： 三萜類化合物廣泛存在于植物界，尤其在五加科、桔梗科、遠(yuǎn)志科、豆科、石竹科、玄參科等植物中廣泛分布。 許多常見的中藥中含有該類成分，如甘草、黃芪、柴胡、桔梗、人參。少數(shù)的動物體和

2、海洋生物中也含有三萜類成分。5 游離態(tài)的三萜類化合物：主要來源于菊科、豆科、大戟科與楝科等雙子葉植物。 三萜苷類化合物：主要來源于豆科、五加科、葫蘆科與石竹科等雙子葉植物。 在高等真菌靈芝、茯苓中也可分離出許多三萜類成分； 從動物體，如羊毛脂、鯊魚的肝臟中可分離出羊毛脂醇、鯊烯等少數(shù)三萜類成分； 從海洋生物，如海參、軟珊瑚中也能分離出各種類型的三萜類成分。6甘草甘草黃芪黃芪7甘草甘草 根和根莖主含三萜皂苷。其中主要的一種俗稱甘草甜素，系甘草的甜味成份，是1分子的18-甘草次酸和2分子的葡萄醛酸結(jié)合生成的甘草酸的鉀鹽和鈣鹽。其他的三萜皂苷有：烏拉爾甘草皂苷A、B和甘草皂苷A3、B2、C2、D3、

3、E2、F3、G2、H2、J2、K2。 8柴胡柴胡人參人參9v 柴胡中含有柴胡皂苷，具有抗內(nèi)毒素作用；皮質(zhì)酮激素作用；抑制Na+、K+-ATP酶的活性 ；免疫調(diào)節(jié)功能；抗血小板活性因子的功效。 10v 從紅參、生曬參或白參中共分離出30余種人參皂苷(可以分為三組,即齊墩果酸組、原人參二醇組和原人參三醇組)，分別稱為人參皂苷-RX（注：X=0、a1、a2、a3、b1、b2、b3、c、d、e、f、g1、g2、g3、h1、h2、h3、s1、s2）。皂苷為人參生理活性的物質(zhì)基礎(chǔ)。 11軟珊瑚軟珊瑚海參海參12生物活性：生物活性： 1、抗炎活性：減輕組織的炎癥反應(yīng)。 2、抗腫瘤活性：如人參皂苷Rh2 3、

4、抗菌和抗病毒活性： 4、降血脂活性 5、抗生育作用13三萜皂苷分類：三萜皂苷分類： 1按存在形式、結(jié)構(gòu)、性質(zhì)分為：（1）三萜皂苷及苷元（2）其它三萜類（樹脂、苦味素、三萜醇、三萜生物堿）142按碳環(huán)的數(shù)目分類：（1）鏈狀三萜（較少）（2）單環(huán)三萜（較少）（3）雙環(huán)三萜（較少）（4）三環(huán)三萜（較少）15（5）四環(huán)三萜（較多）四環(huán)三萜（較多）v羊毛甾烷型羊毛甾烷型 茯苓酸v大戟烷型 大戟醇v達(dá)瑪烷型達(dá)瑪烷型 酸棗仁皂苷 人參皂苷 v葫蘆烷型葫蘆烷型 雪膽甲素及乙素v原萜烷型原萜烷型 澤瀉萜醇A、Bv楝烷型 川楝素v環(huán)菠蘿蜜烷型 環(huán)黃芪醇16（6）五環(huán)三萜（較多）五環(huán)三萜（較多） 齊墩果烷型 齊墩果

5、酸 烏蘇烷型 烏蘇酸羽扇豆醇型 白樺脂醇 白樺脂酸 木栓烷型 雷公藤酮羊齒烷型和異羊齒烷型 何伯烷型和異何伯烷型 其他類型17 結(jié)構(gòu)和分類結(jié)構(gòu)和分類一、四環(huán)三萜一、四環(huán)三萜（一）羊毛甾烷型1、結(jié)構(gòu)特點(diǎn) 從環(huán)氧鯊烯由椅-船-椅-船構(gòu)象式環(huán)合而成，其C10位有-角甲基、C13位有-CH3、C14位有-甲基、C17位有-側(cè)鏈、C20為R-構(gòu)型。且A/B、B/C、C/D環(huán)均為反式。2、羊毛脂醇是羊毛脂的主要成分。3、羊毛甾烷型化合物廣泛分布在植物界與海洋生物界，如茯苓酸、升麻醇、豬苓酸茯苓酸、升麻醇、豬苓酸A A等。1813101314172022242526302928272319185212025

6、2621183029282723195 羊毛脂甾烷型羊毛脂甾烷型羊毛脂甾烷型:從環(huán)氧鯊烯由椅-船-椅-船構(gòu)象式環(huán)合而成，其C10位有-甲基、C13位有-CH3、C14位有-甲基、C17位有-側(cè)鏈、C20為R-構(gòu)型。且A/B、B/C、C/D環(huán)均為反式。茯苓茯苓19茯苓酸茯苓酸升麻醇升麻醇升麻升麻20（二）、達(dá)瑪甾烷型（二）、達(dá)瑪甾烷型1、結(jié)構(gòu)特點(diǎn) 從環(huán)氧鯊烯由全椅式構(gòu)象形成，其C8位有-角甲基、C13位有-H、C10位有-甲基、C17位有-側(cè)鏈、C20構(gòu)型為R或S。2、實(shí)例：人參皂苷人參皂苷：系從五加科植物人參主根與側(cè)根及莖葉中分得，有40多種之多。 結(jié)構(gòu)特點(diǎn)：絕大多數(shù)屬于達(dá)瑪烷型四環(huán)三萜，在C

7、3位、C12位均有羥基取代，其C20為S-構(gòu)型。21131013141720222425263029282723191852120252621183029282723195 達(dá)瑪烷型結(jié)構(gòu)特點(diǎn)結(jié)構(gòu)特點(diǎn) 從環(huán)氧鯊烯由全椅式構(gòu)象形成，其從環(huán)氧鯊烯由全椅式構(gòu)象形成，其C8位有位有-角甲角甲基、基、C13位有位有-H、C10位有位有-甲基、甲基、C17位有位有-側(cè)鏈、側(cè)鏈、C20構(gòu)型為構(gòu)型為R或或S。8101722v人參皂苷Rd屬于（ ）型四環(huán)三萜。 A羊毛脂烷 B達(dá)瑪烷 C羽扇豆烷 D甘遂烷 E葫蘆烷23人參皂苷A型的真正苷元是（ ）A 20(S)-原人參二醇B 20(S)-原人參三醇C 人參二醇D

8、人參三醇24（三）原萜烷型（三）原萜烷型1、結(jié)構(gòu)特點(diǎn) 其C8位有-甲基、C9-H、C13位有-H、C14位有-甲基、C17位有-側(cè)鏈，是達(dá)瑪甾烷的立體異構(gòu)體，基本碳骨架相同，只是C8、C9、C13、 C14、 C17的構(gòu)型互異。2、實(shí)例：中藥澤瀉 澤瀉醇A、B、C25澤瀉醇澤瀉醇 b澤瀉澤瀉26（四）葫蘆烷型（四）葫蘆烷型1、結(jié)構(gòu)特點(diǎn) 由羊毛甾烯8進(jìn)行質(zhì)子化，在C-8產(chǎn)生正碳離子，然后19-CH3轉(zhuǎn)移到9位，9-H轉(zhuǎn)移到8位而形成，但A/B環(huán)上的取代和羊毛脂烷類型化合物不同，有5-H、8-H、10-H，C-9位連有-CH3，其余與羊毛脂烷一樣。2、存在：葫蘆科許多植物均含此類成分，總稱為葫蘆苦

9、素類，像葫蘆苦素E是抗肝炎藥物，葫蘆苦素o則具有抗癌活性。2728二、五環(huán)三萜類二、五環(huán)三萜類1 1齊墩果烷型齊墩果烷型 此類又稱-香樹脂烷型。其基本骨架是多氫蒎的五環(huán)母核，環(huán)的稠合方式為A/B，B/C，C/D環(huán)也均為反式，而D/E環(huán)為順式。母核上8個甲基，其中C-10、C-8、C-17的甲基均為-型，而C-14的甲基為-構(gòu)型。如：-乳香酸，山楂酸等。 292 02 83 02 92 72 62 52 42 32 22 11 91 81 71 61 41 21 196312HC O O HO HHABCDE2 32 42 52 62 72 93 0-香樹脂烷香樹脂烷 齊墩果酸齊墩果酸30山楂酸

10、山楂酸山楂山楂312 2烏蘇烷型烏蘇烷型 此類又稱-香樹脂烷型或熊果烷型。其基本結(jié)構(gòu)與齊墩果烷型不同之處是E環(huán)上兩個甲基位置不同，即C-19C-19和和C-20C-20上各上各有有1 1個甲基個甲基，其中C-19位上的甲基為-構(gòu)型，而C-20位上的甲基為-構(gòu)型。熊果酸熊果酸熊果熊果322 02 83 02 92 72 62 52 42 32 22 11 91 81 71 61 41 21 196312COOHHHOABCDE2 32 42 52 62 72 93 02 02 83 02 92 72 62 52 42 32 22 11 91 81 71 61 41 21 196312HC O O

11、 HO HHABCDE2 32 42 52 62 72 93 0-香樹脂烷 齊墩果酸-香樹脂烷 熊果酸333. 3. 羽扇豆烷型羽扇豆烷型 屬此類型中草藥成分較少，且大多以苷元形式存在，少數(shù)以皂苷形式存在。與齊墩果烷型不同的是E環(huán)為五元環(huán)，在C19位上有-構(gòu)型的異丙烯基或異丙烷取代，D/E環(huán)是反式，如白樺脂酸。白樺脂酸白樺脂酸34第二節(jié)第二節(jié) 理化性質(zhì)理化性質(zhì)1 1性狀性狀 （1）三萜類化合物多有較好的結(jié)晶；若與糖結(jié)合成為苷類，則不易結(jié)晶，多為無色無定形粉末，但也有少數(shù)為晶體，如常春藤皂苷為針狀晶體。 常春藤常春藤35（2）皂苷多數(shù)具有苦而辛辣味，其粉末對人體各部位的粘膜有較強(qiáng)的刺激性，尤以鼻

12、粘膜最為敏感。吸入鼻內(nèi)可引起噴嚏，還可反射性地促進(jìn)呼吸道粘液腺分泌，使?jié)馓迪♂?，易于排出。如桔梗、遠(yuǎn)志、枇杷葉、紫菀等止咳化痰藥均含有皂苷。少數(shù)皂苷如甘草皂苷有顯著的甜味，對粘膜刺激性也弱。 桔梗桔梗36遠(yuǎn)志遠(yuǎn)志37（3）皂苷具有吸濕性，保存時應(yīng)干燥放置。（4）多數(shù)三萜皂苷屬于酸性。分子中羧基有的在皂苷元部分，有的在糖醛酸部分，在植物體內(nèi)常與金屬離子如鉀、鈣、鎂等結(jié)合成鹽的形式存在。382 2溶解性溶解性 三萜皂苷元易溶于石油醚、苯、氯仿等有機(jī)溶劑，不溶于水； 三萜皂苷可溶于水，易溶于熱水，稀醇、熱甲醇和熱乙醇中。幾乎不溶于石油醚、苯等極性小的有機(jī)溶劑，皂苷在含水正丁醇中有較大的溶解度，可利用

13、此性質(zhì)從含皂苷水溶液中用正丁醇或戊醇正丁醇或戊醇進(jìn)行萃取，從而與糖類、蛋白質(zhì)等親水性強(qiáng)的雜質(zhì)分離。39三、發(fā)泡性三、發(fā)泡性 皂苷有降低水溶液表面張力的作用。多數(shù)皂苷水溶液經(jīng)強(qiáng)烈振搖后能產(chǎn)生大量持久性泡沫（少數(shù)泡沫量較少，如甘草皂苷）。蛋白質(zhì)水浸液也可產(chǎn)生泡沫，但是加熱后蛋白質(zhì)因凝固而泡沫消失，而皂苷產(chǎn)生的泡沫不因加熱消失。方法是取1g中藥粉末，加水10ml，煮沸10分鐘后濾出水液，振搖后產(chǎn)生持久性泡沫（15分鐘以上）為陽性。40 利用發(fā)泡試驗(yàn)可區(qū)別甾體皂苷與三萜皂苷：取兩支試管，分別加入5ml 0.1mol/L的HCl及0.1mol/L的NaOH，再各加中藥水提液3滴，振搖1分鐘，如兩管形成泡

14、沫持久性、高度相同，則提示中藥含三萜皂苷（酸性皂苷）；如堿液管的泡沫較酸液管的泡沫高數(shù)倍，持續(xù)時間長，則提示中藥含甾體皂苷（中性皂苷）。這是由于中性皂苷在堿水溶液中能形成較穩(wěn)定的泡沫。41四、溶血性四、溶血性 大多數(shù)皂苷能有破壞紅細(xì)胞而具有溶血作用。因此含有皂苷的藥材制成靜脈注射液時必須做溶血試驗(yàn)。皂苷溶血作用的強(qiáng)弱可用溶血指數(shù)來表示。溶血指數(shù)是指皂苷對同一動物來源的紅細(xì)胞稀懸浮液，在同一的等滲條件、緩沖條件及恒溫下造成完全溶血的最低濃度。例如：薯蕷皂苷的溶血指數(shù)為 140 0000，甘草皂苷為 14000，洋菝葜皂苷為112 5000。而人參總皂苷無溶血現(xiàn)象，但經(jīng)分離后，A型有抗溶血作用，而

15、B型和C型人參皂苷則有顯著的溶血作用。42 皂苷的溶血作用是因?yàn)樵碥漳芘c紅細(xì)胞膜上膽甾醇膽甾醇結(jié)合生成不溶于水的復(fù)合物，破壞了紅細(xì)胞的正常滲透，造成細(xì)胞內(nèi)滲透壓增高而使細(xì)胞破裂，從而導(dǎo)致溶血。皂苷溶血現(xiàn)象的有無與皂苷元結(jié)構(gòu)有關(guān)。溶血作用強(qiáng)弱則與結(jié)合糖的多少有關(guān)。單糖鏈皂苷溶血作用一般較顯著，雙糖鏈皂苷中，苷元是中性三萜類的溶血作用較弱或無溶血作用，屬于酸性皂苷的溶血作用介于兩者之間。 43皂苷具溶血作用的原因?yàn)椋?）vA具表面活性 vB與細(xì)胞壁上膽甾醇生成沉淀 vC具甾體母核vD多為寡糖苷，親水性強(qiáng) vE有酸性基團(tuán)存在44不符合皂苷通性的是（ ）vA分子較大，多為白色結(jié)晶 vB有顯著而強(qiáng)烈的甜

16、味 vC對粘膜有刺激 vD振搖后能產(chǎn)生泡沫 vE大多數(shù)有溶血作用45五、皂苷的水解五、皂苷的水解 皂苷可被植物中共存的酶水解，酶水解配合化學(xué)方法水解可提高收率。皂苷中若存在酯苷鍵，可在堿性條件下水解。由于皂苷所含的糖都是-羥基糖，因此水解所需條件較為劇烈，一般可用2mol/L4mol/L的礦酸。若酸濃度過高或酸性過強(qiáng)（如高氯酸），可導(dǎo)致皂苷元在水解過程中發(fā)生脫水、環(huán)合、雙鍵位移、取代基位移、構(gòu)型轉(zhuǎn)化等變化，導(dǎo)致水解產(chǎn)物不是原始的皂苷元，從而造成研究工作復(fù)雜化，甚至?xí)a(chǎn)生錯誤結(jié)論。46 如具有重要活性的人參皂苷，其原始皂苷元結(jié)構(gòu)到1970年以后才得到闡明。最初得到的人參二醇和人參三醇均是原始皂苷

17、元在酸水解過程中異構(gòu)化的產(chǎn)物，現(xiàn)經(jīng)研究證明人參皂苷的原始皂苷元是20（S）-原人參二醇和20（S）-原人參三醇。因此在選擇水解條件時，應(yīng)考慮保護(hù)苷元不被異構(gòu)化。采用溫和的水解方法（如酶解法、土壤微生物培養(yǎng)法、Smith氧化降解法或光解法等）可以得到原始皂苷元。47沉淀反應(yīng)沉淀反應(yīng) 皂苷的水溶液可以和一些金屬鹽類如鉛鹽、鋇鹽、銅鹽等產(chǎn)生沉淀。利用這一性質(zhì)可以進(jìn)行皂苷的提取和分離。 酸性皂苷（通常指三萜皂苷）的水溶液加入硫酸銨、醋酸鉛或其它中性鹽即產(chǎn)生沉淀。 中性皂苷（通常指甾體皂苷）的水溶液則需加入堿式醋酸鉛或氫氧化鉀等鹽類才能生成沉淀。48一、顯色反應(yīng)一、顯色反應(yīng) 皂苷在無水條件下，與濃酸或某

18、些Lewis酸作用，會出現(xiàn)顏色變化或呈現(xiàn)熒光。此類反應(yīng)雖然比較靈敏，但專屬性較差。常用呈色反應(yīng)有：（）醋酐-濃硫酸反應(yīng)（Liebermann-Burchard反應(yīng)） 試樣溶于醋酐中，加入醋酐-濃硫酸（201）數(shù)滴，可出現(xiàn)： 三萜皂苷：黃 紅 紫 褪色 甾體皂苷：黃 紅 紫 藍(lán) 綠色 褪色 甾體皂苷顏色變化較快，最后呈藍(lán)綠色。三萜皂苷只能呈紅或紫色，不出現(xiàn)綠色。用此法可初步區(qū)別甾體皂苷和三萜皂苷。49（二）氯仿-濃硫酸反應(yīng)（Salkowski反應(yīng)） 試樣溶于氯仿，加入濃硫酸后，氯仿層呈紅或藍(lán)色，硫酸層呈現(xiàn)綠色熒光。（三）三氯醋酸反應(yīng)（Rosen-Heimer反應(yīng)） 將試樣的氯仿溶液滴在濾紙上，噴

19、25三氯醋酸乙醇溶液，加熱至60，生成紅色漸變?yōu)樽仙ㄧ摅w皂苷），加熱到100才顯色，生成紅色漸變?yōu)樽仙ㄈ圃碥眨?。由于三氯醋酸較濃硫酸溫和，故可用于紙色譜。50（四）五氯化銻反應(yīng)（Kahlenberg反應(yīng)） 皂苷與五氯化銻的氯仿溶液呈藍(lán)、灰藍(lán)或紫色。用三氯化銻結(jié)果相同。（五）冰醋酸-乙酰氯的反應(yīng)（Tschugaeff反應(yīng)） 試樣溶于冰醋酸中，加乙酰氯數(shù)滴及氯化鋅結(jié)晶數(shù)粒，稍加熱，呈現(xiàn)淡紅色或紫色。51 Liebermann-Burchard反應(yīng)所使用的試劑是（ ） vA氯仿-濃硫酸 vB三氯醋酸 vC香草醛-濃硫酸 vD醋酐-濃硫酸 vE鹽酸-對二甲氨基苯甲醛52v檢識皂苷類成分的化學(xué)反應(yīng)

20、有（ ）vALiebermann-Burchard反應(yīng) vBRosen-Heimer反應(yīng) vCGibbs反應(yīng)vDKedde反應(yīng) vESalkowski反應(yīng)53v可以作為皂苷紙色譜顯色劑的是（ ）vA醋酐-濃硫酸試劑 vB香草醛-濃硫酸試劑 vC三氯化鐵-冰醋酸試劑vD三氯醋酸試劑 vE-萘酚-濃硫酸試劑54提取與分離提取與分離一、提取方法（一）三萜皂苷的提取 三萜皂苷常用不同濃度的甲醇、乙醇等溶劑提取，若皂苷含有羥基、羧基極性基團(tuán)較多，親水性強(qiáng)、宜用稀醇提取，提取效果較好。提取液減壓濃縮后，加適量水，必要時先用石油醚等親脂性溶劑萃取，除去親脂性雜質(zhì)，然后用正丁醇萃取，皂苷轉(zhuǎn)溶至正丁醇中，而糖類

21、等水溶性則留在水中，分取正丁醇，減壓蒸干，得粗制總皂苷。此法被認(rèn)為是皂苷提取的通法。 55 此外亦可將醇提取液減壓回收醇后，通過大孔吸附樹脂，先用少量水洗去糖分和其他水溶性成分，后改用30%50%乙醇洗脫（黃酮類成分被吸附在大孔樹脂上），洗脫液減壓蒸干，亦得粗制總皂苷。由于皂苷難溶于乙醚、丙酮，如將粗制總皂苷溶于少量甲醇，然后乙醚、丙酮或乙醚丙酮（11）的混合溶劑，混合均勻，皂苷即行析出。如此反復(fù)數(shù)次，可提高皂苷純度，再行分離，效果更佳。 56 三萜皂苷也可先用石油醚或苯將藥材進(jìn)行脫脂處理，除去油脂、色素、脫脂后的藥材再用甲醇或乙醇為溶劑加熱提取，多數(shù)皂苷難溶于冷乙醇或甲醇，就可能沉淀析出；或

22、將醇提取液適當(dāng)濃縮，再加入適量的丙酮或乙醚，皂苷就可以析出沉淀；酸性皂苷可先加堿水溶解，再加酸酸化使皂苷又重新析出而與雜質(zhì)分離。57（二）三萜化合物的提取 三萜化合物的提取方法大致分三類：一是用乙醇或甲醇提取，提取物直接進(jìn)行分離(皂苷類)；二是用醇類溶劑提取后，提取物依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯進(jìn)行分步提取，然后進(jìn)一步分離，三萜成分主要由氯仿部位中獲得（皂苷元）；三是有許多三萜化合物在植物體中是以皂苷形式存在，可用三萜皂苷水解后獲得，即將三萜皂苷進(jìn)行水解，水解產(chǎn)物用氯仿萃取，然后進(jìn)行分離。但有些三萜在酸水解時，由于水解反應(yīng)比較強(qiáng)烈，發(fā)生結(jié)構(gòu)變異而生成次生結(jié)構(gòu)，得不到原始皂苷元，如欲獲得原始皂苷

23、元，則應(yīng)采用溫和的水解條件，異相酸水解、酶水解或Smith降解等方法。58二、三萜皂苷的分離(一)分段沉淀法（溶劑沉淀法） 利用皂苷難溶于乙醚、丙酮等溶劑的性質(zhì)進(jìn)行分離。將總皂苷先溶于少量甲醇或乙醇中，然后逐漸加入數(shù)倍于醇體積的乙醚、丙酮或乙醚丙酮的混合溶劑至皂苷從醇溶液中析出為止，搖勻，皂苷即以粉質(zhì)沉淀的形式析出。如此處理數(shù)次，逐漸降低溶劑極性，分批析出皂苷即可。此法雖較簡便，但分離不完全，不易獲得純品。59 溶劑沉淀法分離皂苷是利用總皂苷中各皂苷（ ）vA酸性強(qiáng)弱不同 vB在乙醇中溶解度不同 vC極性不同 vD難溶于石油醚的性質(zhì) vE分子量大小的差異60(二)?；品?大多數(shù)的三萜皂苷親

24、水性強(qiáng)，分離純化的難度較大。將水溶性大的粗皂苷制成?；苌镆栽龃笃溆H脂性，則可以將三萜皂苷溶于低極性溶劑中，無論是脫色、層析、重結(jié)晶都比較容易，待純化后再用堿液水解(常用氫氧化鋇，過量的鋇可通入二氧化碳除去)脫去乙?；吹眉冊碥?。此法不宜用于分子中本就有?；蝓ユI的皂苷的分離精制。61（三）膽甾醇沉淀法 甾體皂苷可與膽甾醇生成難溶性的分子復(fù)合物，利用此性質(zhì)可與其他水溶性成分分離，達(dá)到精制目的。先將粗皂苷溶于少量乙醇中，再加入膽甾醇的飽和乙醇溶液，直至不再析出沉淀為止（混合后需稍加熱），濾取沉淀，用水、乙醇、乙醚依次洗滌，以除去糖類、色素、油脂及游離的膽甾醇。最后將沉淀干燥，用乙醚連續(xù)回流提取

25、，此時甾體皂苷與膽甾醇形成的分子復(fù)合物分解，膽甾醇溶于乙醚中，殘留物為較純的皂苷。 在中藥中，有的皂苷可能與其共存的植物甾醇形成分子復(fù)合物，在用稀醇提取時不被提出，在提取時應(yīng)加注意。62v（四）鉛鹽沉淀法 利用此法可以分離酸性皂苷和中性皂苷。在粗皂苷的乙醇溶液中，加入過量的飽和中性醋酸鉛，酸性皂苷可與之產(chǎn)生沉淀，濾出沉淀，濾液再加過量的飽和堿性醋酸鉛，中性皂苷也可產(chǎn)生沉淀。然后將沉淀分別懸浮于水或稀醇中用硫化氫進(jìn)行脫鉛處理，脫鉛后將濾液減壓濃縮，殘?jiān)苡谝掖?，滴加乙醚至產(chǎn)生沉淀。這樣可分離得到酸性皂苷和中性皂苷。63v可用于分離中性皂苷與酸性皂苷的方法是（ ）vA中性醋酸鉛沉淀 vB堿性醋酸鉛

26、沉淀 vC分段沉淀法vD膽甾醇沉淀法 vE酸提取堿沉淀法64(三)色譜分離法 三萜皂苷的分離，采用分配柱層析法要比吸附柱層析法好，常用硅膠為支持劑，以CHCl3-MeOH-H2O、CH2Cl2-MeOH-H2O、EtOAc-EtOH-H2O、水飽和EtOAc-MeOH等溶劑系統(tǒng)進(jìn)行梯度洗脫。65 也可用反相層析法，通常以反相鍵合相，如Rp-18、Rp-8或Rp-2為填充劑（固定相），用MeOH-H2O（91，73等比例）為洗脫劑。一般Rp-18吸附力最強(qiáng)，可用H2O比例較小的溶劑系統(tǒng)（如MeOH-H2O91，82），而Rp-2吸附力較弱，宜用水比例較多的溶劑（如MeOH-H2O64，73等）。

27、反相層析柱有相對應(yīng)的反相薄層層析配合應(yīng)用。如果皂苷結(jié)構(gòu)中有羧基，可用CH2N2甲酯化制成甲酯，然后用硅膠柱層析分離，常以己烷、乙酸乙酯為溶劑系統(tǒng)。66第四節(jié)第四節(jié) 鑒定及結(jié)構(gòu)測定鑒定及結(jié)構(gòu)測定一、色譜鑒定（一）薄層色譜 親水性強(qiáng)的皂苷用分配色譜效果較好，用硅膠作載體，用極性較大溶劑系統(tǒng)作展開劑。常用的展開劑有：水飽和的正丁醇、正丁醇乙酸乙酯水（415）、乙酸乙酯吡啶水（313）、乙酸乙酯乙酸水（821）；67 親脂性強(qiáng)的三萜皂苷和三萜皂苷元極性較小，可用吸附色譜，用硅膠為吸附劑，采用親脂性較強(qiáng)的展開劑如苯乙酸乙酯（11）、環(huán)己烷乙酸乙酯（11）、苯丙酮（81）、氯仿丙酮（955）。皂苷（元）分

28、子中極性基團(tuán)增多時，Rf值減少。分離酸性三萜皂苷時，應(yīng)在展開劑加少量酸，可避免產(chǎn)生拖尾現(xiàn)象。681. 分配色譜法 皂苷極性較大，用分配柱色譜分離效果較好。支持劑可用水飽和的硅膠，用氯仿-甲醇-水等極性較大的溶劑系統(tǒng)進(jìn)行梯度洗脫。如用硅膠柱色譜法，以3草酸水溶液為固定相，氯仿-甲醇-水（26 14 37）為流動相，從美遠(yuǎn)志總苷中可分離得到遠(yuǎn)志皂苷A、B、C、D 4種單體。692. 吸附色譜法 吸附劑常用硅膠和氧化鋁，適用于分離親脂性皂苷元，用苯、氯仿、甲醇等混合溶劑梯度洗脫，可依次得到極性從小到大的皂苷元。 703. 高效液相色譜法 大多采用反相色譜柱，以甲醇-水或乙腈-水等溶劑為流動相分離和純

29、化皂苷效果較好。也有將極性較大的皂苷制成極性較小的衍生物后進(jìn)行正相色譜分離，如將人參皂苷制成苯甲酰衍生物，用硅膠柱色譜以石油醚-氯仿-乙腈（15 3 2）洗脫，分離測定了單體人參皂苷的含量。714. 大孔樹脂吸附法 對極性較大的皂苷可先用甲醇提取，回收甲醇，殘?jiān)盟芙?，上大孔樹脂柱，用水洗去糖類雜質(zhì)，再用乙醇梯度洗脫，得到不同組份的皂苷混合物，初步分離后還需進(jìn)一步用硅膠柱色譜或高效液相色譜分離得皂苷單體。72 （一）薄層色譜 薄層色譜常用的顯色劑有三氯乙酸、濃硫酸、50%硫酸、三氯化銻或五氯化銻、醋酐濃硫酸及磷鉬酸等試劑。73（二）紙色譜 親水性皂苷的紙色譜，多以水為固定相，展開劑的極性也相應(yīng)增大，常用的展開劑有：水飽和的正丁醇、正丁醇乙醇水（929）、正丁醇乙酸水（451）。分離苷元或親脂性皂苷多用甲酰胺為固定相，用甲酰胺飽和的氯仿或苯為展開劑。常用的顯色劑為磷鉬酸、三氯化銻或五氯化銻。74提取分離實(shí)例：人參人參 人參為五加科人參屬植物人參 Panax ginsens的根，是傳統(tǒng)的名貴藥材，具大補(bǔ)元?dú)?、?fù)脈固脫、補(bǔ)脾益肺、生津安神的功能。臨床常用于體虛欲脫、肢冷脈微、脾虛食少、肺虛喘咳、津傷口渴、久病虛贏、陽痿、心力衰竭等病證。75 人參