中國(guó)藥科大學(xué)生化設(shè)計(jì)性實(shí)驗(yàn)報(bào)告參考——生化101-05--菠蘿蛋白酶ppt課件

1、班級(jí)：生化班級(jí)：生化101菠蘿蛋白酶的概述菠蘿蛋白酶(Bromelain，簡(jiǎn)稱菠蘿酶，亦稱為鳳梨酶或鳳梨酵素)是從菠蘿果莖、葉、皮提取出來(lái)，經(jīng)精制、提純、濃縮、酶固定化、冷凍干燥而得到的一種純天然植物蛋白酶。其外觀為淺灰色粉末狀，分子量為 33000 ，等電點(diǎn)為 9.55 。品質(zhì)最佳的菠蘿蛋白酶是利用菠蘿的中莖加工,采用超濾方法進(jìn)行過(guò)濾濃縮,低溫冷凍干燥而得的。產(chǎn)品已被廣泛應(yīng)用于食品、醫(yī)藥等行業(yè)。 1、焙烤食品：將菠蘿蛋白酶加入生面團(tuán)中，可使面筋降解，生面團(tuán)被軟化后易于加工。并能提高餅干與面包的口感與品質(zhì)。2、干酪：用于干酪素的凝結(jié)。3、肉類(lèi)的嫩化：菠蘿蛋白酶將肉類(lèi)蛋白質(zhì)的大分子蛋白質(zhì)水解為易

2、吸收的小分子氨基酸和蛋白質(zhì)?？蓮V泛地應(yīng)用于肉制品的精加工。 一、菠蘿蛋白酶在食品加工業(yè)的一、菠蘿蛋白酶在食品加工業(yè)的應(yīng)用應(yīng)用二、菠蘿蛋白酶在醫(yī)藥、保健品二、菠蘿蛋白酶在醫(yī)藥、保健品 業(yè)的應(yīng)用業(yè)的應(yīng)用 1、抑制腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng) 2、對(duì)心血管疾病的防治 3、用于燒傷脫痂 4、消炎作用 菠蘿蛋白酶的作用條件菠蘿蛋白酶的作用條件最佳溫度：531 失活溫度：65 最佳PH值：5.08.0 失活PH值：小于3.0和大與9.5 推薦用量:0.050.1%對(duì)蛋白質(zhì)計(jì) 溫度范圍：5060 作用PH值:6.09.0 三、實(shí)驗(yàn)材料和試劑三、實(shí)驗(yàn)材料和試劑1、實(shí)驗(yàn)材料、實(shí)驗(yàn)材料 新鮮菠蘿新鮮菠蘿(下腳料）、下腳料）、0

3、.1mg/ml牛血清蛋白牛血清蛋白2、實(shí)驗(yàn)試劑、實(shí)驗(yàn)試劑檸檬酸鈉檸檬酸鈉 維生素維生素C 單寧單寧 0.1%EDTA溶液溶液1.5%氯化鈉溶液氯化鈉溶液 1%酪蛋白溶液酪蛋白溶液 1mol/L氫氧化鈉溶液氫氧化鈉溶液0.05mol/L磷酸緩沖液溶解磷酸二氫鉀，加氫磷酸緩沖液溶解磷酸二氫鉀，加氫氧化鉀調(diào)氧化鉀調(diào)PH至至7.0）激活劑激活劑PH7.0，0.05mol/L磷酸緩沖液，內(nèi)含磷酸緩沖液，內(nèi)含15mmol/L硫代硫酸鈉和硫代硫酸鈉和6mmol/LEDTA-2Na,現(xiàn)配現(xiàn)配現(xiàn)用）現(xiàn)用）四、實(shí)驗(yàn)器材和儀器四、實(shí)驗(yàn)器材和儀器1、榨汁機(jī)；2、離心機(jī)；3、紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)1cm石英比色皿）；4、恒

4、溫水浴鍋37）；5、試管、試管架；6、燒杯、容量瓶；7、移液管；實(shí)驗(yàn)原理實(shí)驗(yàn)原理 蛋白質(zhì)與單寧作用可以發(fā)生沉淀反應(yīng),形成單寧菠蘿蛋白酶復(fù)合物，所以可以用單寧提取菠蘿酶。五、實(shí)驗(yàn)操作方法法和步驟（一從菠蘿中提取菠蘿蛋白酶操作步驟：將下腳料切碎加檸檬酸鈉，榨汁菠蘿汁紗布過(guò)濾紗布過(guò)濾澄清液2000r/min，7min離心上清液沉淀物酶復(fù)合物酶復(fù)合物沉淀蛋白糊酶）加Vc,0.2%單寧溶液攪拌15min,靜置40min4200r/min,5min離心加100ml0.1%EDTA溶液，200ml1.5%氯化鈉液4200r/min,5min離心加適量加適量1.5%氯化氯化鈉溶液，鈉溶液，4000r/min,

5、7min離心離心凍存?zhèn)溆贸瑸V濃縮 在提取菠蘿蛋白酶時(shí),添加單寧溶液的濃度為0. 2 %沉淀蛋白的效果最好,同時(shí)果汁的總酸度不大,糖酸比合適,菠蘿汁中菠蘿蛋白酶的沉淀率達(dá)到72%。菠蘿蛋白酶提取時(shí),pH值為6. 58.5左右,溫度為6 0,菠蘿蛋白酶的活性最強(qiáng) ,可作為最佳提取條件。菠蘿蛋白酶活力的測(cè)定菠蘿蛋白酶活力的測(cè)定主值空白值底物溶液（35）酶溶液（35）2.5ml2.5ml2.5ml混合，在35精確保溫10min，加蛋白質(zhì)凝固劑酶溶液5.0ml5.0ml2.5ml振搖，在水浴中繼續(xù)靜置30min，然后過(guò)濾；用分光光度計(jì)（275nm）以空白值為參比測(cè)定吸光度計(jì)算酶的比活性 酶的比活性 （F

6、.I.P.-U/mg)=E275/(Ew0.11610） E275275nm處得吸光度 Ew每2.5ml所用酶液中含酶的重量，mg 0.116275nm處酪氨酸溶液1umol酪氨酸/10ml的吸光度 10反應(yīng)時(shí)間，min實(shí)驗(yàn)中的注意事項(xiàng)實(shí)驗(yàn)中的注意事項(xiàng)1.1.菠蘿蛋白酶易受熱失活，注意控制溫度菠蘿蛋白酶易受熱失活，注意控制溫度2.2.某些化學(xué)藥品和金屬離子易引起菠蘿蛋白酶失活某些化學(xué)藥品和金屬離子易引起菠蘿蛋白酶失活，生產(chǎn)過(guò)程忌堿、忌強(qiáng)酸作用，勿與鐵、銅等重，生產(chǎn)過(guò)程忌堿、忌強(qiáng)酸作用，勿與鐵、銅等重金屬接觸。金屬接觸。3.3.菠蘿蛋白酶是一種膠體，生產(chǎn)過(guò)程中易產(chǎn)生氣泡菠蘿蛋白酶是一種膠體，生產(chǎn)過(guò)程中易產(chǎn)生氣泡造成損失，所以生產(chǎn)過(guò)程應(yīng)注意操作。造成損失，所以生產(chǎn)過(guò)程應(yīng)注意操作。4.4.所加酪蛋白溶液的量對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果有影響。需要多所加酪蛋白溶液的量對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果有影響。需要多次實(shí)驗(yàn)確定所加的量，避免反應(yīng)不完全或蛋白剩次實(shí)驗(yàn)確定所加的量，避免反應(yīng)不完全或蛋白剩余，影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。余，影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。建議與改進(jìn) 超濾法生產(chǎn)工藝和操作比較復(fù)雜，且設(shè)備一次性投資大。濃縮濾液若再用單寧沉淀法提取，可大大節(jié)約其他輔助原料的用量，總生產(chǎn)成本減少且產(chǎn)品質(zhì)量好，純度高，酶活力高，酶活總回收率高，經(jīng)濟(jì)效益明顯較好。超濾法是指液體或氣體混合物在外界壓力驅(qū)動(dòng)下通過(guò)一種