公共場所衛(wèi)生監(jiān)測微生物檢驗(yàn)技術(shù)(2014版)

1、公共場所衛(wèi)生監(jiān)測微生物檢驗(yàn)技術(shù) 公共場所衛(wèi)生技術(shù)服務(wù)機(jī)構(gòu)承擔(dān)的工作公共場所衛(wèi)生技術(shù)服務(wù)機(jī)構(gòu)承擔(dān)的工作（一）空氣空氣、微小氣候（濕度、溫度、風(fēng)速）、采光、照明、噪聲等室內(nèi)環(huán)境的衛(wèi)生檢驗(yàn)、檢測與評價；（二）顧客用品用具顧客用品用具的衛(wèi)生檢驗(yàn)、檢測與評價；（三）游泳場（館）和公共浴室水質(zhì)游泳場（館）和公共浴室水質(zhì)衛(wèi)生檢驗(yàn)、檢測與評價；（四）公共場所飲用水公共場所飲用水（包括：自備水、直飲水、二次供水）衛(wèi)生檢驗(yàn)、檢測與評價；（五）集中空調(diào)通風(fēng)系統(tǒng)集中空調(diào)通風(fēng)系統(tǒng)的衛(wèi)生檢驗(yàn)、檢測與評價。2013年公共場所衛(wèi)生監(jiān)測微生物指標(biāo)生活飲用水 生活飲用水標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方法(GB/T 5750) (GB/T 5750)

2、賓館微生物指標(biāo) 公共場所衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方法（GB/T 18204-2000）游泳池水微生物指標(biāo) 公共場所衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方法（GB/T 18204-2000）集中空調(diào)系統(tǒng)微生物指標(biāo) 公共場所集中空調(diào)通風(fēng)系統(tǒng)衛(wèi)生規(guī)范（WS 394-2012）公共場所生活飲用水微生物檢驗(yàn)公共場所生活飲用水微生物檢驗(yàn)n指標(biāo)：n菌落總數(shù)、總大腸菌群、耐熱大腸菌群、大腸埃希氏菌、賈第鞭毛蟲、隱孢子蟲 生活飲用水中微生物指標(biāo)生活飲用水中微生物指標(biāo) 名稱名稱 單位單位 限值限值n菌落總數(shù) CFU/mL 100 n總大腸菌群 MPN/100mL或 CFU/100mL 不得檢出 n耐熱大腸菌群 MPN/100mL或 CFU/100m

3、L 不得檢出 n大腸埃希氏菌 MPN/100mL或 CFU/100mL 不得檢出 n賈第鞭毛蟲 個/10 L 1 n隱孢子蟲 個/10 L 1水樣的采集和保存水樣的采集和保存n采樣的原則: n1. 采集的水樣，必須具有代表性代表性，能真實(shí)n反映水質(zhì)狀況。n2.在實(shí)驗(yàn)室檢測之前水樣中微生物數(shù)量應(yīng)保持不應(yīng)保持不變。變。 采樣容器采樣容器n1.采樣容器應(yīng)采用潔凈、無色、無毒的硬質(zhì)玻璃（又稱硼硅玻璃）。樣品瓶必須專瓶專用，切不可用實(shí)驗(yàn)室盛裝過濃溶液的瓶作采樣瓶。通常我們使用500ml的高壓滅菌的細(xì)口瓶采樣。n2.容器及瓶塞、瓶蓋應(yīng)能經(jīng)受滅菌的溫度容器及瓶塞、瓶蓋應(yīng)能經(jīng)受滅菌的溫度。n3.容器洗滌：將容

4、器用自來水和洗滌劑洗容器洗滌：將容器用自來水和洗滌劑洗n滌，并用自來水徹底沖洗后，用10%鹽酸溶鹽酸溶n液浸泡過夜，然后依次用自來水，蒸餾水洗n凈。n4. 容器滅菌：分干熱和高壓蒸氣滅菌兩種。容器滅菌：分干熱和高壓蒸氣滅菌兩種。n干熱滅菌要求160下維持下維持2 h；高壓蒸氣滅；高壓蒸氣滅n菌要求121下維持下維持15 min，高壓蒸汽滅菌，高壓蒸汽滅菌n后的容器如不立即使用，應(yīng)于60將瓶內(nèi)冷將瓶內(nèi)冷n凝水烘干。滅菌后的容器應(yīng)在2周內(nèi)使用周內(nèi)使用。水樣采集水樣采集n單獨(dú)采樣。n同一水源、同一時間采集幾類檢測指標(biāo)的水樣時，應(yīng)先采先采集供微生物學(xué)指標(biāo)檢測的水樣集供微生物學(xué)指標(biāo)檢測的水樣。n采樣時應(yīng)

5、直接采集，不得用水樣涮洗已滅菌的采樣瓶，并避免手指和其他物品對瓶口的沾污。n末梢水采集：采樣前用酒精燈灼燒對水管口進(jìn)行消毒，放水約5分鐘后采集水樣約玻璃瓶的分鐘后采集水樣約玻璃瓶的80%。容積整個過程要。容積整個過程要快，穩(wěn)。不要讓水流過大，以免濺出，管口不要與瓶口接快，穩(wěn)。不要讓水流過大，以免濺出，管口不要與瓶口接觸，收集完應(yīng)馬上將瓶塞旋緊。觸，收集完應(yīng)馬上將瓶塞旋緊。水樣保存方法水樣保存方法n黑暗處，4，4h內(nèi)檢測。內(nèi)檢測。n如有游離余氯應(yīng)在采樣瓶消毒前每125ml加加0.1mg硫代硫酸鈉溶液硫代硫酸鈉溶液(10%)。菌落總數(shù)檢測方法菌落總數(shù)檢測方法n1.平皿計(jì)數(shù)法平皿計(jì)數(shù)法n本法適用于生

6、活飲用水及其水源水中菌落總數(shù)的測定。菌落總數(shù)菌落總數(shù)n指在一定條件培養(yǎng)后(如培基成分、培養(yǎng)溫度和時間、pH、需氧性質(zhì)等)，1mL水樣中所含菌落的總數(shù)。檢驗(yàn)步驟檢驗(yàn)步驟n生活飲用水n以無菌操作方法用滅菌吸管吸取1 mL充分混勻的水樣，充分混勻的水樣，注入滅菌平皿中，傾注約注入滅菌平皿中，傾注約15 mL已融化并冷卻到已融化并冷卻到45左右左右的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，立即旋搖平皿，使水樣與培養(yǎng)基充分的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，立即旋搖平皿，使水樣與培養(yǎng)基充分混勻。每次檢驗(yàn)時應(yīng)做一平行接種，同時另用一個平皿只混勻。每次檢驗(yàn)時應(yīng)做一平行接種，同時另用一個平皿只傾注營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基作為空白對照。傾注營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基作為空白

7、對照。n待冷卻凝固后，翻轉(zhuǎn)平皿，使底面向上，置于36培培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)48 h，進(jìn)行菌落計(jì)數(shù)。即為，進(jìn)行菌落計(jì)數(shù)。即為1mL水樣中的菌落水樣中的菌落總數(shù)?？倲?shù)。水源水水源水n以無菌操作方法吸取1mL充分混勻的水樣，注入盛有9 mL滅菌生理鹽水的試管中，混勻成1:10稀釋液。n吸取1:10的稀釋液1 mL注入盛有9 mL滅菌生理鹽水的試管中，混勻成1：100稀釋液。按同法依次稀釋成1：1 000，1：10 000稀釋液籌備用。如此遞增稀釋一次，必須更換一支1 mL滅菌吸管。n用滅菌吸管取未稀釋的水樣和2個3個適宜稀釋度的水樣1 mL，分別注入滅菌平皿內(nèi)。n以下操作同生活飲用水的檢驗(yàn)步驟。菌

8、落計(jì)數(shù)及報告方法菌落計(jì)數(shù)及報告方法n菌落計(jì)數(shù)方法：先用肉眼觀察，點(diǎn)數(shù)菌落數(shù)，然后再用放大5 倍倍10 倍的放大鏡檢查，以防遺漏。倍的放大鏡檢查，以防遺漏。n兩個平板若其中一個平皿有較大片狀菌落生長時，應(yīng)以無片狀菌落生長的平皿作為該稀釋度的平均菌落數(shù)。若片狀菌落不到平皿的一半，而其余一半中菌落數(shù)分布又很均勻，則可將此半皿計(jì)數(shù)后乘2以代表全皿菌落數(shù)。然后再以代表全皿菌落數(shù)。然后再求該稀釋度的平均菌落數(shù)。求該稀釋度的平均菌落數(shù)。不同稀釋度的選擇及報告方法不同稀釋度的選擇及報告方法n首先選擇平均菌落數(shù)在30300之間者進(jìn)行計(jì)算，若只有之間者進(jìn)行計(jì)算，若只有一個稀釋度的平均菌落數(shù)符合此范圍時一個稀釋度的

9、平均菌落數(shù)符合此范圍時,則將該菌落數(shù)乘則將該菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報告之。以稀釋倍數(shù)報告之。n若有兩個稀釋度，其生長的菌落數(shù)均在30300之間，則之間，則視二者之比值來決定，若其比值小于視二者之比值來決定，若其比值小于2應(yīng)報告兩者的平均應(yīng)報告兩者的平均效。若大于或等于效。若大于或等于2則報告其中稀釋度較小的菌落總數(shù)。則報告其中稀釋度較小的菌落總數(shù)。n若所有稀釋度的平均菌落數(shù)均大于300，則應(yīng)按稀釋度最，則應(yīng)按稀釋度最高的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報告之。高的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報告之。n若所有稀釋度的平均菌落數(shù)均小于30，則應(yīng)以按稀釋度最，則應(yīng)以按稀釋度最低的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報告之。低的平均菌

10、落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報告之。n若所有稀釋度的平均菌落數(shù)均不在30300之間，則應(yīng)以之間，則應(yīng)以最接近最接近30或或300的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報告之。的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報告之。n若所有稀釋度的平板上均無菌落生長，則以未檢出報告之。n如果所有平板上都菌落密布，不要用“多不可計(jì)多不可計(jì)”報告，而報告，而應(yīng)在稀釋度最大的平板上，任意數(shù)其中應(yīng)在稀釋度最大的平板上，任意數(shù)其中2個平板個平板1cm2中的中的菌落數(shù)，除菌落數(shù)，除2求出每平方厘米內(nèi)平均菌落數(shù)，乘以皿底面求出每平方厘米內(nèi)平均菌落數(shù)，乘以皿底面積積63.6 ，再乘其稀釋倍數(shù)作報告。，再乘其稀釋倍數(shù)作報告。n菌落計(jì)數(shù)的報告：菌落數(shù)在100以內(nèi)時

11、按實(shí)有數(shù)報告，大以內(nèi)時按實(shí)有數(shù)報告，大于于100時，采用兩位有效數(shù)字，在兩位有效數(shù)字后面的數(shù)時，采用兩位有效數(shù)字，在兩位有效數(shù)字后面的數(shù)值，以四舍五入方法計(jì)算，為了縮短數(shù)字后面的零數(shù)也可值，以四舍五入方法計(jì)算，為了縮短數(shù)字后面的零數(shù)也可用用10的指數(shù)來表示（見表的指數(shù)來表示（見表1“報告方式報告方式”欄）。欄）?？偞竽c菌群總大腸菌群n定義：一群在36條件下培養(yǎng)2448小時能發(fā)酵乳糖、產(chǎn)酸產(chǎn)氣的需氧和兼性厭氧革蘭氏陰性無芽胞桿菌。n總大腸菌群是衛(wèi)生學(xué)上的概念，不是細(xì)菌分類學(xué)概念，它不代表某一個或某一屬細(xì)菌，而指的是具有某些特性的一組與糞便污染有關(guān)的細(xì)菌，這些細(xì)菌在生化及血清學(xué)方面并非完全一致。n

12、主要包括埃希氏菌屬，克雷伯氏菌屬、腸桿菌屬和檸檬酸桿菌屬等的細(xì)菌。衛(wèi)生學(xué)概念衛(wèi)生學(xué)概念n總大腸菌群分布較廣，在溫血動物糞便和自然界廣泛存在。人、畜糞便對外界環(huán)境的污染是總大腸菌群在自然界存在的主要原因。但它也來自植物的土壤，它所包括的微生物在地面水中也可繁殖。n糞便中多以典型大腸桿菌為主，而外界環(huán)境中則以總大腸菌群其他型別較多。多管發(fā)酵法多管發(fā)酵法n本法適用于生活飲用水及其水源水中總大腸菌群的測定。n總大腸菌群檢測比較簡單，所以被廣泛用做水源的衛(wèi)生指標(biāo)和食品加工衛(wèi)生狀況的通用指標(biāo)。也是評價生活飲用水衛(wèi)生質(zhì)量的重要指標(biāo)之一。EMB分離培養(yǎng)分離培養(yǎng)n將產(chǎn)酸產(chǎn)氣的發(fā)酵管分別轉(zhuǎn)種在伊紅美藍(lán)瓊脂平板上，

13、于36 l 培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)18h24h，觀察菌落形態(tài)，挑取，觀察菌落形態(tài)，挑取符合下列特征的菌落作革蘭氏染色、鏡檢和證實(shí)試驗(yàn)。符合下列特征的菌落作革蘭氏染色、鏡檢和證實(shí)試驗(yàn)。n深紫黑色、具有金屬光澤的菌落；n紫黑色、不帶或略帶金屬光澤的菌落；n淡紫紅色、中心較深的菌落。鏡鏡 檢檢復(fù)發(fā)酵復(fù)發(fā)酵結(jié)果報告結(jié)果報告n根據(jù)證實(shí)為總大腸菌群陽性的管數(shù)，查MPN（most probable number，最可能數(shù)）檢索表，最可能數(shù)）檢索表，報告每報告每1 00 mL水樣中的總大腸菌群最可能數(shù)水樣中的總大腸菌群最可能數(shù)(MPN)值。值。n稀釋樣品查表后所得結(jié)果應(yīng)乘稀釋倍數(shù)。n如所有乳糖發(fā)酵管均陰性時

14、，可報告總大腸菌群未檢出（注意稀釋度）。耐熱大腸菌群計(jì)數(shù)耐熱大腸菌群計(jì)數(shù)n定義：在44.5培養(yǎng)24h48h能發(fā)酵乳糖、產(chǎn)酸產(chǎn)氣的需氧和兼性厭氧革蘭氏陰性無芽胞桿菌。n是大腸菌群的一個亞群，主要是埃希氏菌屬和耐熱克雷伯菌屬。它很少在地面水中繁殖，且僅來源于人和溫血動物的糞便，因此其衛(wèi)生學(xué)意義更大，檢出之表明飲水已被糞便污染，有可能有腸道致病菌和寄生蟲等病原體的危險。大腸埃希氏菌大腸埃希氏菌定義：大腸埃希氏菌廣泛存在于是人和溫血動物的腸道中，能夠在44.5發(fā)酵乳糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣、IMViC生化試驗(yàn)為+ + -或-+ -大腸埃希氏菌主要是用于指示水源近期受到糞便污染。該指標(biāo)與糞便污染的相關(guān)性好檢驗(yàn)方法檢驗(yàn)

15、方法n多管發(fā)酵法n總大腸菌群多管發(fā)酵法初發(fā)酵檢測陽性管，用接種環(huán)挑一環(huán)到EC-MUG管中，管中，44.5培養(yǎng)培養(yǎng)24h2h，用，用366nm紫外燈照攝，產(chǎn)生蘭色熒光紫外燈照攝，產(chǎn)生蘭色熒光者為陽性者為陽性酶底物法酶底物法n大腸埃希氏菌產(chǎn)生-葡萄糖醛酸酶（-glucuronidase）分解四甲基傘形酮-D-葡萄糖苷（4-methyl-umbelliferyl-D-glucuronide，MUG ）使培養(yǎng)液在波長366nm紫外光下產(chǎn)生熒光的原理，來判斷水樣中是否含有大腸埃希氏菌。n定性試驗(yàn)、定量試驗(yàn)（10管法、51孔定量盤法）n培養(yǎng)基：EC-MUGn黃色有藍(lán)色熒光者為陽性黃色有藍(lán)色熒光者為陽性n水

16、樣不變黃有藍(lán)色熒光者不屬于陽性水樣不變黃有藍(lán)色熒光者不屬于陽性公共場所衛(wèi)生檢驗(yàn)、檢測與評價公共場所衛(wèi)生檢驗(yàn)、檢測與評價n公共場所空氣細(xì)菌總數(shù)測定(GB/T 18204.1-2000)n茶具、毛巾、床上臥具等公共用品的細(xì)菌總數(shù)和大腸菌群 公共場所空氣細(xì)菌總數(shù)檢驗(yàn)方法公共場所空氣細(xì)菌總數(shù)檢驗(yàn)方法 （GB/T 18204.1-2000GB/T 18204.1-2000）n撞擊法：將集菌的營養(yǎng)瓊脂平板置361培養(yǎng)48h，計(jì)數(shù)菌落數(shù)。n自然沉降法：將已采樣平板置361培養(yǎng)48h，計(jì)數(shù)每塊平板上菌落數(shù)，求出全部采樣點(diǎn)的平均菌落數(shù)。公共場所空氣細(xì)菌總數(shù)結(jié)果報告公共場所空氣細(xì)菌總數(shù)結(jié)果報告n撞擊法 計(jì)算公式：

17、細(xì)菌總數(shù)=平皿菌落數(shù)/（采樣器流量*采樣時間） 結(jié)果單位： cfu/m3 n自然沉降法 計(jì)算公式：細(xì)菌總數(shù)=平均每皿菌落數(shù) 結(jié)果單位：cfu/皿茶具細(xì)菌總數(shù)檢驗(yàn)方法茶具細(xì)菌總數(shù)檢驗(yàn)方法 （GB/T 18204.2-2000GB/T 18204.2-2000）n采樣：采樣：用滅菌生理鹽水濕潤棉拭子，在茶具與口唇接觸的內(nèi)外緣涂抹50cm2，既，既1-1.5cm高處一高處一圈。用滅菌剪刀剪去棉簽手接觸的部分，將棉拭圈。用滅菌剪刀剪去棉簽手接觸的部分，將棉拭子放入子放入10mL生理鹽水內(nèi)，生理鹽水內(nèi)，4h內(nèi)送檢。內(nèi)送檢。n此液作為1:10茶具細(xì)菌總數(shù)檢驗(yàn)方法茶具細(xì)菌總數(shù)檢驗(yàn)方法n將采來的1:10樣品涂

18、抹液（棉拭子涂抹）充分混勻，再取1:10樣液1mL于9mL的NS中充分混勻?yàn)?:100樣液。兩稀釋度各吸樣液于兩個平皿中，每皿1mL。最后注入營養(yǎng)瓊脂，置361培養(yǎng)48h計(jì)數(shù)菌落數(shù)。n同時做空白對照。茶具細(xì)菌總數(shù)結(jié)果報告茶具細(xì)菌總數(shù)結(jié)果報告n計(jì)算公式： 細(xì)菌總數(shù)=平均菌落數(shù)*稀釋倍數(shù)/50n單位：cfu/cm2茶具大腸菌群檢驗(yàn)方法茶具大腸菌群檢驗(yàn)方法 （GB/T 18204.3-2000GB/T 18204.3-2000）茶具大腸菌群檢驗(yàn)茶具大腸菌群檢驗(yàn)n發(fā)酵法：取測定茶具菌落總數(shù)剩余樣品，倒入雙料乳糖膽鹽發(fā)酵溶液中，置37培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)24 h后進(jìn)行觀察。陰后進(jìn)行觀察。陰性報告。陽

19、性進(jìn)一步接種性報告。陽性進(jìn)一步接種EMB、乳糖發(fā)酵管。、乳糖發(fā)酵管。n紙片法：用滅菌生理鹽水濕潤5 cm5 cm大腸菌群快速大腸菌群快速檢測紙片兩張，分別粘貼在茶具內(nèi)、外緣口唇接觸處，約檢測紙片兩張，分別粘貼在茶具內(nèi)、外緣口唇接觸處，約30 S后取下，置于無菌塑料袋內(nèi)。置后取下，置于無菌塑料袋內(nèi)。置37培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)24 h后進(jìn)行觀察。結(jié)果報告后進(jìn)行觀察。結(jié)果報告茶具大腸菌群發(fā)酵法檢驗(yàn)步驟茶具大腸菌群發(fā)酵法檢驗(yàn)步驟n推測性試驗(yàn)：將測定細(xì)菌總數(shù)剩余的檢樣倒入雙料乳糖膽鹽發(fā)酵液中，置361培養(yǎng)24h觀察結(jié)果。n證實(shí)試驗(yàn)：自推測性試驗(yàn)陽性管中取一接種環(huán)培養(yǎng)液，接種EMB平板上，置361培養(yǎng)

20、24h觀察結(jié)果。挑取可疑菌落染色鏡檢，同時接種乳糖發(fā)酵管做復(fù)發(fā)酵試驗(yàn)，361培養(yǎng)24h觀察結(jié)果。茶具大腸菌群紙片法檢驗(yàn)步驟茶具大腸菌群紙片法檢驗(yàn)步驟n將已采樣的大腸菌群測定紙片置361培養(yǎng)1618h觀察結(jié)果。n結(jié)果判定：若紙片保持紫藍(lán)色不變?yōu)榇竽c菌群陰性，紙片變黃并在黃色背景上呈現(xiàn)紅色斑點(diǎn)或片狀紅暈為陽性。毛巾、床上臥具細(xì)菌總數(shù)檢驗(yàn)方法毛巾、床上臥具細(xì)菌總數(shù)檢驗(yàn)方法 （GB/T 18204.4-2000GB/T 18204.4-2000）涂抹法：涂抹法：25 c(5 cm 5 cm)面積范圍面積范圍;床單、被單在上下床單、被單在上下兩部各兩部各25 c面積范圍內(nèi)有順序地來回涂抹，將棉拭子放人面

21、積范圍內(nèi)有順序地來回涂抹，將棉拭子放人10 mL生理鹽水內(nèi)，生理鹽水內(nèi)，4h內(nèi)送檢內(nèi)送檢n戳印法戳印法毛巾、床上臥具細(xì)菌總數(shù)涂抹法毛巾、床上臥具細(xì)菌總數(shù)涂抹法檢驗(yàn)步驟檢驗(yàn)步驟n將采來的1:10樣品涂抹液（棉拭子涂抹）充分混勻，再取1:10樣液1mL于9mL的NS中充分混勻?yàn)?:100樣液。兩稀釋度各吸樣液于兩個平皿中，每皿1mL。最后注入營養(yǎng)瓊脂，置36培養(yǎng)48h計(jì)數(shù)菌落數(shù)。n同時做空白對照。毛巾、床上臥具細(xì)菌總數(shù)結(jié)果報告毛巾、床上臥具細(xì)菌總數(shù)結(jié)果報告n計(jì)算公式： 細(xì)菌總數(shù)=平均菌落數(shù)*稀釋倍數(shù)/2n單位：cfu/25cm2毛巾、床上臥具大腸菌群檢驗(yàn)方法毛巾、床上臥具大腸菌群檢驗(yàn)方法 （GB/

22、T 18204.5-2000GB/T 18204.5-2000）n發(fā)酵法n紙片法采樣采樣n涂抹法：用測定細(xì)菌總數(shù)時采集的樣品，無需重采。n紙片法：用滅菌生理鹽水濕潤5 cm 5 cm大腸大腸菌群快速測定紙片兩張，分別粘貼在毛巾、床上菌群快速測定紙片兩張，分別粘貼在毛巾、床上臥具規(guī)定部位和面積范圍內(nèi)，約臥具規(guī)定部位和面積范圍內(nèi)，約30 s后取下，置后取下，置于無菌塑料袋內(nèi)。培養(yǎng)。于無菌塑料袋內(nèi)。培養(yǎng)。毛巾、床上臥具大腸菌群發(fā)酵法毛巾、床上臥具大腸菌群發(fā)酵法檢驗(yàn)步驟檢驗(yàn)步驟n推測性試驗(yàn)：將測定細(xì)菌總數(shù)剩余的檢樣倒入雙料乳糖膽鹽發(fā)酵液中，置361培養(yǎng)24h觀察結(jié)果。n證實(shí)試驗(yàn)：自推測性試驗(yàn)陽性管中取

23、一接種環(huán)培養(yǎng)液，接種EMB平板上，置361培養(yǎng)24h觀察結(jié)果。挑取可疑菌落染色鏡檢，同時接種乳糖發(fā)酵管做復(fù)發(fā)酵試驗(yàn)，361培養(yǎng)24h觀察結(jié)果。毛巾、床上臥具大腸菌群紙片法毛巾、床上臥具大腸菌群紙片法檢驗(yàn)步驟檢驗(yàn)步驟n將已采樣的大腸菌群測定紙片置361培養(yǎng)1618h觀察結(jié)果。n結(jié)果判定：若紙片保持紫藍(lán)色不變?yōu)榇竽c菌群陰性，紙片變黃并在黃色背景上呈現(xiàn)紅色斑點(diǎn)或片狀紅暈為陽性。理發(fā)用具微生物檢驗(yàn)方法理發(fā)用具微生物檢驗(yàn)方法 -金黃色葡萄金黃色葡萄球菌測定球菌測定n指在BaurdParker培養(yǎng)基或血平板培養(yǎng)基上生長良好，分解甘露醇產(chǎn)酸；血漿凝固酶陽性的革蘭氏陽性葡萄球菌。n菌落直徑為2 3 mm，顏色

24、呈灰色到黑色，邊緣為淡色，周圍為一混濁帶，在其外層有一透明圈。金黃色葡萄球菌檢測金黃色葡萄球菌檢測n取大腸菌群檢測后剩余的5 mL待檢樣品，放入待檢樣品，放入45 mL7.5%氯化鈉肉湯或胰酪胨大豆肉湯培養(yǎng)基中氯化鈉肉湯或胰酪胨大豆肉湯培養(yǎng)基中，361增菌增菌24 h。n分離于P-k培養(yǎng)基（或用血平皿），培養(yǎng)基（或用血平皿），36124 h。挑取典型菌落作涂片鏡檢、甘露醇發(fā)酵試驗(yàn)。挑取典型菌落作涂片鏡檢、甘露醇發(fā)酵試驗(yàn)和血漿凝固酶試驗(yàn)和血漿凝固酶試驗(yàn)公共場所拖鞋微生物檢驗(yàn)方法公共場所拖鞋微生物檢驗(yàn)方法-霉菌和酵母菌測定霉菌和酵母菌測定n指在一定條件培養(yǎng)后，50cm2面積檢樣中所含有的霉菌和酵母

25、菌落數(shù)。霉菌和酵母菌主要作為判定被檢樣品被霉菌和酵母菌污染程度的標(biāo)志，以便對被檢樣進(jìn)行衛(wèi)生學(xué)評價時提供依據(jù)。n將無菌棉拭子蘸取無菌生理鹽水，在每只拖鞋鞋面與腳趾接觸處5 cm5 cm面積上，有順序地均勻涂抹3次（一雙拖鞋為一份樣品）后，用滅菌剪刀將棉拭子手執(zhí)部分剪斷，將棉拭子放入10 mL裝有玻璃珠的無菌鹽水管中。n將盛有棉拭子的鹽水管在手心用力振蕩100次，再用帶橡皮乳頭的1mL滅菌吸管反復(fù)吹吸50次，使霉菌孢子充分散開。此液為1:10稀釋液。n依次做10倍遞增稀釋，根據(jù)樣品的污染情況，選擇3個合適的稀釋度。n將溶化并冷卻至45左右的培養(yǎng)基注入滅菌的平皿中，待瓊脂凝固后，倒置于2528溫箱中

26、，3天后開始觀察，共培養(yǎng)觀察一周。游泳池水微生物指標(biāo)游泳池水微生物指標(biāo)細(xì)菌總數(shù)大腸菌群 游泳池水細(xì)菌總數(shù)檢驗(yàn)方法游泳池水細(xì)菌總數(shù)檢驗(yàn)方法 （GB/T 18204.9-2000GB/T 18204.9-2000）n取樣液到2只平皿中，每皿1mL；另取樣液1mL到9mL滅菌生理鹽水中作1：10稀釋，取稀釋液到2只平皿中，每皿1mL。最后注入營養(yǎng)瓊脂置36培養(yǎng)48h計(jì)數(shù)菌落數(shù)。n同時做空白對照。游泳池水細(xì)菌總數(shù)結(jié)果報告游泳池水細(xì)菌總數(shù)結(jié)果報告n計(jì)算公式： 細(xì)菌總數(shù)=平均菌落數(shù)*稀釋倍數(shù)n單位：cfu/mL游泳池水大腸菌群檢驗(yàn)方法游泳池水大腸菌群檢驗(yàn)方法 （GB/T 18204.10-2000GB/T

27、 18204.10-2000）n發(fā)酵法n濾膜法游泳池水大腸菌群發(fā)酵法游泳池水大腸菌群發(fā)酵法檢驗(yàn)步驟檢驗(yàn)步驟n推測性試驗(yàn)：在2個裝有50mL三倍濃縮乳糖蛋白胨發(fā)酵管內(nèi)各加入100mL水樣，在10支裝有5mL三倍濃縮乳糖蛋白胨發(fā)酵管內(nèi)各加入10mL水樣，36培養(yǎng)24h觀察結(jié)果。n證實(shí)試驗(yàn)：自推測性試驗(yàn)陽性管中取一接種環(huán)培養(yǎng)液，接種EMB平板上，置36培養(yǎng)24h觀察結(jié)果。挑取可疑菌落染色鏡檢，同時接種乳糖發(fā)酵管做復(fù)發(fā)酵試驗(yàn)，36培養(yǎng)24h觀察結(jié)果。游泳池水大腸菌群濾膜法游泳池水大腸菌群濾膜法檢驗(yàn)步驟檢驗(yàn)步驟n水樣過濾，濾膜截留細(xì)菌面向上，貼緊乳糖瓊脂分離培養(yǎng)基，置36培養(yǎng)24h觀察結(jié)果。n典型菌落染

28、色鏡檢n挑取可疑菌落染色鏡檢，同時接種乳糖發(fā)酵管做復(fù)發(fā)酵試驗(yàn)，36培養(yǎng)24h觀察結(jié)果。集中空調(diào)系統(tǒng)微生物指標(biāo)集中空調(diào)系統(tǒng)微生物指標(biāo)送風(fēng)中細(xì)菌總數(shù)、真菌總數(shù)、-溶血性鏈球菌風(fēng)管內(nèi)表面細(xì)菌總數(shù)、真菌總數(shù)冷卻水、冷凝水中嗜肺軍團(tuán)菌送風(fēng)中細(xì)菌總數(shù)檢驗(yàn)方法送風(fēng)中細(xì)菌總數(shù)檢驗(yàn)方法 （WS 394-2012 WS 394-2012 附錄附錄D D）n送風(fēng)中細(xì)菌總數(shù)：集中空調(diào)通風(fēng)系統(tǒng)送風(fēng)中通過六級篩孔空氣撞擊式采樣器采集的樣品，計(jì)數(shù)在營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上經(jīng)3537、48h培養(yǎng)所形成的菌落數(shù)。n以每立方米空氣中菌落形成單位（CFU/m3）報告。送風(fēng)中真菌總數(shù)檢驗(yàn)方法送風(fēng)中真菌總數(shù)檢驗(yàn)方法 （WS 394-2012

29、WS 394-2012 附錄附錄E E）n送風(fēng)中真菌總數(shù)：集中空調(diào)通風(fēng)系統(tǒng)送風(fēng)中通過六級篩孔空氣撞擊式采樣器采集的樣品，計(jì)數(shù)在沙氏瓊脂培養(yǎng)基上經(jīng)28、5d培養(yǎng)所形成的菌落數(shù)。n以每立方米空氣中菌落形成單位（CFU/m3）報告。送風(fēng)中送風(fēng)中-溶血性鏈球菌檢驗(yàn)方法溶血性鏈球菌檢驗(yàn)方法 （WS 394-2012 WS 394-2012 附錄附錄F F）n送風(fēng)中-溶血性鏈球菌：集中空調(diào)通風(fēng)系統(tǒng)送風(fēng)中通過六級篩孔空氣撞擊式采樣器采集的樣品，計(jì)數(shù)在血瓊脂培養(yǎng)基上經(jīng)3537、24h48h培養(yǎng)所形成的典型菌落數(shù)。n以每立方米空氣中菌落形成單位（CFU/m3）報告。風(fēng)管內(nèi)表面微生物檢驗(yàn)方法風(fēng)管內(nèi)表面微生物檢驗(yàn)方法 （WS 394-2012 WS 394-2012 附錄附錄I I）n風(fēng)管內(nèi)表面微生物檢測主要包括細(xì)菌總數(shù)和真菌總數(shù)。n采樣面積：每一點(diǎn)采樣面積應(yīng)為50cm2。 n采樣方法：空調(diào)風(fēng)管內(nèi)表面積塵較多時用刮拭法采樣，積塵較少不適宜刮拭法采樣時用擦拭法采樣。整個采樣過程應(yīng)無菌操作。為避免人工采樣對采