分析方法驗(yàn)證指導(dǎo)原則

1、分析方法驗(yàn)證指導(dǎo)原則驗(yàn)證的分析項(xiàng)目有：鑒別試驗(yàn)、雜質(zhì)測(cè)定（限度或定量分析）、含量測(cè)定（包括特性參數(shù)和含量/效價(jià)測(cè)定，其中特性參數(shù)如：藥物溶出度、釋放度等）。驗(yàn)證的指標(biāo)有：專屬性、準(zhǔn)確度、精密度（包括重復(fù)性、中間精密度和重現(xiàn)性）、檢測(cè)限、定量限、線性、范圍和耐用性。在分析方法驗(yàn)證中，須用標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)進(jìn)行試驗(yàn)。由于分析方法具有各自的特點(diǎn),并隨分析對(duì)象而變化，因此需要視具體情況擬訂驗(yàn)證的指標(biāo)。表1中限度十線性十列出的分析項(xiàng)目和相應(yīng)的驗(yàn)證指標(biāo)可供參考。表1檢驗(yàn)項(xiàng)目和驗(yàn)還指標(biāo)方法驗(yàn)證內(nèi)容如下。雜質(zhì)測(cè)Jg含童測(cè)定-特性參數(shù)含繪或效怖測(cè)定專屬性陸確度稀密度車復(fù)性中間精密債檢測(cè)眼耐用性已有重現(xiàn)件驗(yàn)證，不需臉證中間

2、精密度.如一種方裁不夠?qū)Ｇ?可用其他分祈方袪予以補(bǔ)充'視具體悄況予肛驗(yàn)證.專屬性專屬性系指在其他成分（如雜質(zhì)、降解產(chǎn)物、輔料等）可能存在下，采用的分析方法能正確測(cè)定出被測(cè)物的能力。鑒別反應(yīng)、雜質(zhì)檢查和含量測(cè)定方法，均應(yīng)考察其專屬性。如方法專屬性不強(qiáng)，應(yīng)采用一種或多種不同原理的方法予以補(bǔ)充。二、準(zhǔn)確度準(zhǔn)確度系指用所建立方法測(cè)定的結(jié)果與真實(shí)值或參比值接近的程度，一般用回收率（）表示。準(zhǔn)確度應(yīng)在規(guī)定的線性范圍內(nèi)試驗(yàn)。準(zhǔn)確度也可由所測(cè)定的精密度、線性和專屬性推算出來。在規(guī)定范圍內(nèi)，取同一濃度（相當(dāng)于100%濃度水平）的供試品，用至少6份樣品的測(cè)定結(jié)果進(jìn)行評(píng)價(jià)；或設(shè)計(jì)至少3種不同濃度，每種濃度分

3、別制備至少3份供試品溶液進(jìn)行測(cè)定，用至少9份樣品的測(cè)定結(jié)果進(jìn)行評(píng)價(jià)，且濃度的設(shè)定應(yīng)考慮樣品的濃度范圍。兩種方法的選定應(yīng)考慮分析的目的和樣品的濃度范圍。三、精密度精密度系指在規(guī)定的測(cè)定條件下，同一份均勻供試品，經(jīng)多次取樣測(cè)定所得結(jié)果之間的接近程度。精密度一般用偏差、標(biāo)準(zhǔn)偏差或相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差表示。在相同條件下，由同一個(gè)分析人員測(cè)定所得結(jié)果的精密度稱為重復(fù)性；在同一實(shí)驗(yàn)室內(nèi)的條件改變，如不同時(shí)間、不同分析人員、不同設(shè)備等測(cè)定結(jié)果之間的精密度，稱為中間精密度；不同實(shí)驗(yàn)室測(cè)定結(jié)果之間的精密度，稱為重現(xiàn)性。含量測(cè)定和雜質(zhì)的定量測(cè)定應(yīng)考察方法的精密度。1. 重復(fù)性在規(guī)定范圍內(nèi)，取同一濃度（分析方法擬定的樣品測(cè)

4、定濃度，相當(dāng)于100%濃度水平）的供試品，用至少6份的測(cè)定結(jié)果進(jìn)行評(píng)價(jià)；或設(shè)計(jì)至少3種不同濃度，每種濃度分別制備至少3份供試品溶液進(jìn)行測(cè)定，用至少9份樣品的測(cè)定結(jié)果進(jìn)行評(píng)價(jià)。采用至少9份測(cè)定結(jié)果進(jìn)行評(píng)價(jià)時(shí)，濃度的設(shè)定應(yīng)考慮樣品的濃度范圍。2. 中間精密度考察隨機(jī)變動(dòng)因素，如不同日期、不同分析人員、不同儀器對(duì)精密度的影響，應(yīng)進(jìn)行中間精密度試驗(yàn)。3. 重現(xiàn)性國家藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)采用的分析方法，應(yīng)進(jìn)行重現(xiàn)性試驗(yàn)，如通過不同實(shí)驗(yàn)室協(xié)同檢驗(yàn)獲得重現(xiàn)性結(jié)果。協(xié)同檢驗(yàn)的目的、過程和重現(xiàn)性結(jié)果均應(yīng)記載在起草說明中。應(yīng)注意重現(xiàn)性試驗(yàn)所用樣品質(zhì)量的一致性及貯存運(yùn)輸中的環(huán)境對(duì)該一致性的影響，以免影響重現(xiàn)性試驗(yàn)結(jié)果。四、

5、檢測(cè)限檢測(cè)限系指試樣中被測(cè)物能被檢測(cè)出的最低量。檢測(cè)限僅作為限度試驗(yàn)指標(biāo)和定性鑒別的依據(jù)，沒有定量意義。常用的方法如下。1.直觀法用已知濃度的被測(cè)物，試驗(yàn)出能被可靠地檢測(cè)出的最低濃度或2.信噪比法用于能顯示基線噪聲的分析方法，即把已知低濃度試樣測(cè)出的信號(hào)與空白樣品測(cè)出的信號(hào)進(jìn)行比較，計(jì)算出能被可靠地檢測(cè)出的被測(cè)物質(zhì)最低濃度或量。一般以信噪比為3:1時(shí)相應(yīng)濃度或注人儀器的量確定檢測(cè)限。3.基于響應(yīng)值標(biāo)準(zhǔn)偏差和標(biāo)準(zhǔn)曲線斜率法按照L0Q=10&/S公式計(jì)算。式中LOQ:檢測(cè)限；響應(yīng)值的偏差；S:標(biāo)準(zhǔn)曲線的斜率。&可以通過下列方法測(cè)得：測(cè)定空白值的標(biāo)準(zhǔn)偏差；標(biāo)準(zhǔn)曲線的剩余標(biāo)準(zhǔn)偏差或是截

6、距的標(biāo)準(zhǔn)偏差。五、定量限定量限系指試樣中被測(cè)物能被定量測(cè)定的最低量，其測(cè)定結(jié)果應(yīng)符合準(zhǔn)確度和精密度要求。對(duì)微量或痕量藥物分析、定量測(cè)定藥物雜質(zhì)和降解產(chǎn)物時(shí)，應(yīng)確定方法的定量限。常用的方法如下。1.直觀法用已知濃度的被測(cè)物，試驗(yàn)出能被可靠地定量測(cè)定的最低濃度或2.信噪比法用于能顯示基線噪聲的分析方法，即將已知低濃度試樣測(cè)出的信號(hào)與空白樣品測(cè)出的信號(hào)進(jìn)行比較，計(jì)算出能被可靠地定量的被測(cè)物質(zhì)的最低濃度或量。一般以信噪比為10:1時(shí)相應(yīng)濃度或注人儀器的量確定定量限。3.基于響應(yīng)值標(biāo)準(zhǔn)偏差和標(biāo)準(zhǔn)曲線斜率法按照L0Q=10&/S公式計(jì)算。式中LOQ:檢測(cè)限；響應(yīng)值的偏差；S:標(biāo)準(zhǔn)曲線的斜率。&am

7、p;可以通過下列方法測(cè)得：測(cè)定空白值的標(biāo)準(zhǔn)偏差；標(biāo)準(zhǔn)曲線的剩余標(biāo)準(zhǔn)偏差或是截距的標(biāo)準(zhǔn)偏差。六、線性線性系指在設(shè)計(jì)的范圍內(nèi)，線性試驗(yàn)結(jié)果與試樣中被測(cè)物濃度直接呈比例關(guān)系的能力。應(yīng)在設(shè)計(jì)的范圍內(nèi)測(cè)定線性關(guān)系?？捎猛粚?duì)照品貯備液經(jīng)精密稀釋，或分別精密稱取對(duì)照品，制備一系列對(duì)照品溶液的方法進(jìn)行測(cè)定，至少制備5個(gè)不同濃度水平。以測(cè)得的響應(yīng)信號(hào)作為被測(cè)物濃度的函數(shù)作圖，觀察是否呈線性，再用最小二乘法進(jìn)行線性回歸。必要時(shí)，響應(yīng)信號(hào)可經(jīng)數(shù)學(xué)轉(zhuǎn)換，再進(jìn)行線性回歸計(jì)算，或者可采用描述濃度-響應(yīng)關(guān)系的非線性模型。數(shù)據(jù)要求：應(yīng)列出回歸方程、相關(guān)系數(shù)、殘差平方和、線性圖（或其他數(shù)學(xué)模型）。七、范圍范圍系指分析方法能達(dá)

8、到精密度、準(zhǔn)確度和線性要求時(shí)的高低限濃度或量的區(qū)間。范圍應(yīng)根據(jù)分析方法的具體應(yīng)用及其線性、準(zhǔn)確度、精密度結(jié)果和要求確定。原料藥和制劑含量測(cè)定，范圍一般為測(cè)定濃度的80%120%；制劑含量均勻度檢查，范圍一般為測(cè)定濃度的70%130%,特殊劑型，如氣霧劑和噴霧劑，范圍可適當(dāng)放寬；溶出度或釋放度中的溶出量測(cè)定，范圍一般為限度的土30%，如規(guī)定了限度范圍，則應(yīng)為下限的一20%至上限的+20%；雜質(zhì)測(cè)定，范圍應(yīng)根據(jù)初步實(shí)際測(cè)定數(shù)據(jù)，擬訂為規(guī)定限度的土20%o如果一個(gè)試驗(yàn)同時(shí)進(jìn)行含量測(cè)定和純度檢查，且僅使用100%的對(duì)照品，線性范圍應(yīng)覆蓋雜質(zhì)的報(bào)告水平至規(guī)定含量的120%o在中藥分析中，范圍應(yīng)根據(jù)分析方法的具體應(yīng)用和線性、準(zhǔn)確度、精密度結(jié)果及要求確定。對(duì)于有毒的、具特殊功效或藥理作用的成分，其驗(yàn)證范圍應(yīng)大于被限定含量的區(qū)間。溶出度或釋放度中的溶出量測(cè)定，范圍一般為限度的土30%o八、耐用性耐用性系指在測(cè)定條件有小的變動(dòng)時(shí)，測(cè)定結(jié)果不受影響的承受程度，為所建立的方法用于常規(guī)檢驗(yàn)提供依據(jù)。開始研究分析方法時(shí)，就應(yīng)考慮其耐用性。如果測(cè)試條件要求苛刻，則應(yīng)在方法中寫明，并注明可以接受變動(dòng)的范圍，可以先采用均勻設(shè)計(jì)確定主要影響因素，再通過單因素分析等確定變動(dòng)范圍。典型的變動(dòng)因素有被測(cè)溶液的穩(wěn)定性、樣品的提取次數(shù)