實驗二十四凱氏定氮法測定生物樣品中有機氮的含量(精)

1、實驗二十五凱氏定氮法測定生物樣品中有機氮的含量、實驗?zāi)康?. 學(xué)習(xí)凱氏定氮法的基本原理和操作；2. 用凱氏定氮法測定生物樣品中氮的含量。二、實驗原理凱氏定氮法是使樣品經(jīng)硫酸和催化劑一同加熱消化，使有機氮分解，其中有機氮素轉(zhuǎn)化為氮，與硫酸化合為硫酸銨。然后加堿蒸餾，使銨游離出來，用硼酸吸收，再用標(biāo)準(zhǔn)硫酸或鹽酸滴定，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)酸的消耗量，即可計算有機氮的含量。三、主要儀器及試劑2.硫酸銅4.硫酸6.40%氫氧化鈉溶液8.0.2%溴甲酚綠1. 凱氏定氮瓶及蒸餾裝置3. 硫酸鉀5.2%硼酸溶液7.0.2%甲基紅9.0.2%甲基紅及0.2%溴甲酚綠的1+5混合指示劑10.0.1mol/L的標(biāo)準(zhǔn)鹽酸溶液(或

2、1/2硫酸溶液)：O.lmol/LHCl的配制及標(biāo)定：吸取9mL濃HCl注入大約lOOOmL無二氧化碳蒸餾水中，此溶液濃度約為O.lmol/L,用下述方法進(jìn)行標(biāo)定：準(zhǔn)確稱取于180C烘2小時，并于干燥器內(nèi)冷至室溫的無水碳酸鈉11.5g,置于250mL容量瓶中，定容后搖勻，用移液管吸取25mL放入錐形瓶內(nèi)，加入無二氧化碳蒸餾水至100mL及4滴甲基橙指示劑，用待標(biāo)的0.1mol/LHCl滴定至淡桔紅色，記錄用量。同時用無二氧化碳蒸餾水做空白滴定。計算鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度。C(HCl)=mX1000(V-V)X53.0010式中：m無水NaCO的重量，g；23V 滴定無水NaCO消耗HCl溶液體積，

3、mL；123V 滴定無二氧化碳蒸餾水消耗HCl溶液體積，mL；053.00M(1/2NaCO),g/mol。23四、實驗操作步驟精確稱取固體試樣1g(含氮總量約30-40mg)于500mL凱氏定氮瓶中，加研細(xì)的硫酸銅0.5g，硫酸鉀10g，濃硫酸20mL，輕輕搖勻。于瓶口裝好小漏斗，將凱氏瓶以45角斜支于石棉網(wǎng)上，小火加熱，使其全部碳化(泡沫消失)后加強火，使溶液微沸，至液體變?yōu)樗{(lán)綠色透明再加熱30min。冷后加200mL水再放冷。連接蒸餾裝置，冷凝管下端插入接收瓶液面下。接收瓶內(nèi)盛有2%硼酸溶液50mL及混合指示劑2-3滴。從漏斗放入40%氫氧化鈉溶液70-80mL,搖動，瓶內(nèi)物料變?yōu)樯钏{(lán)色

4、或產(chǎn)生黑色，自漏斗再加水lOOmL。加熱蒸餾至氨全部蒸餾出來（250mL），使冷凝管下端離開吸收液，再蒸餾lmin，停止加熱。用水沖洗冷凝管下端的外部下端。吸收液用標(biāo)準(zhǔn)鹽酸滴定至灰色為終點。同時做空白實驗。注意事項1消化時若不易呈透明溶液，可將試液放冷后慢慢加入30%過氧化氫23mL，以促進(jìn)氧化。2消化過程以微火集中于凱氏瓶底部，保持緩慢沸騰，避免試樣濺于瓶壁，難于消化使氨損失。3實驗中要保證硫酸足量，否則過多的硫酸鉀形成硫酸氫鉀，而削弱了硫酸的消化作用。硫酸鉀的作用是增加溶液的沸點，硫酸銅為催化劑，而且可做蒸氨時加入堿量的指示劑。五、實驗結(jié)果計算有機氮（）二x100(V-V)xCx0.01412式中：V樣品消耗標(biāo)準(zhǔn)酸的體積，mL；1V試劑空白消耗標(biāo)準(zhǔn)酸的體積，mL；2C標(biāo)準(zhǔn)鹽酸的物質(zhì)的量濃度，mol/L；0.014每毫升1mol/LHCl相當(dāng)于氮的克數(shù)W一樣品重量（或體積），g（或mL）。數(shù)據(jù)列表表示如下：1鹽酸濃度的標(biāo)定:編號瓶+NaCO23重m(g)瓶+NaCO重23m(g)2NaCO重23m(g)VHCl(mL)V(mL)0CHCl(mol/L)d相對(%)123平均值2. 樣品測定:六、思考題1.蒸氨時為什么蒸餾瓶內(nèi)要加濃堿？吸收液為什么要用硼酸溶液？為什么要將冷凝管下端插入接收瓶液面下？能否