抗腫瘤藥物藥效學(xué)試驗(yàn)方法及指導(dǎo)原則

1、抗腫瘤藥物藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)方法及指導(dǎo)原則一、基本原則1 .抗月中瘤藥物分類(1)細(xì)胞毒類藥物(cytotoxicagent)：包括干擾核酸和蛋白質(zhì)合成、抑制拓?fù)洚悩?gòu)酶及作用于微管系統(tǒng)的藥物等；(2)生物反應(yīng)調(diào)節(jié)劑(biologicalresponsemodifier)；(3)月中瘤而寸藥逆轉(zhuǎn)齊1J(resistancereversalagent)(4)月中瘤治療增敏劑(oncotherapysensitizer)(5)月中瘤血管生成抑制劑(tumorangiogenesisinhibitor)；(6) 分化誘導(dǎo)齊1J(differentiationinducingagent);生長(zhǎng)因子抑制劑(gro

2、wthfactorinhibitor)；(8)反義寡核甘酸(antisenseoligonucleotide)。2 .抗月中瘤藥物藥效學(xué)需研究?jī)?nèi)容2.1 包括體外抗月中瘤試驗(yàn)，體內(nèi)抗月中瘤試驗(yàn)。2.2 評(píng)價(jià)藥物的抗癌活性時(shí)，以體內(nèi)試驗(yàn)結(jié)果為主，同時(shí)參考體外試驗(yàn)結(jié)果以做出正確的結(jié)論。2.3 I類抗月中瘤新藥應(yīng)進(jìn)行藥物作用機(jī)制初步研究。二、體外抗月中瘤活性試驗(yàn)1 .試驗(yàn)?zāi)康?.1 對(duì)候選化合物進(jìn)行初步篩選；1.2 了解候選化合物的抗瘤譜；1.3 為隨后進(jìn)行的體內(nèi)抗月中瘤試驗(yàn)提供參考，如劑量范圍、月中瘤類別等。2 .試驗(yàn)方法選用10-15株人癌細(xì)胞株，根據(jù)試驗(yàn)?zāi)康倪x擇相應(yīng)細(xì)胞系及適量的細(xì)胞接種濃度，

3、按常規(guī)細(xì)胞培養(yǎng)法進(jìn)行培養(yǎng)；推薦使用四氮唾鹽MTT還原法、XTT還原法、磺酰羅丹明B(SR染色法、或51Cr釋放試驗(yàn)、集落形成法等測(cè)定藥物的抗癌作用。藥物與細(xì)胞共培養(yǎng)時(shí)間一般為48-72小時(shí)，貼壁細(xì)胞需先貼壁24小時(shí)后再給藥。試驗(yàn)應(yīng)設(shè)陽(yáng)性及陰性對(duì)照組，陽(yáng)性對(duì)照用一定濃度的標(biāo)準(zhǔn)抗月中瘤藥，陰性對(duì)照為溶媒對(duì)照。3 .評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)以同一樣品不同濃度對(duì)月中瘤細(xì)胞抑制率作圖可得到劑量效應(yīng)曲線，然后采用Logit法計(jì)算半數(shù)有效濃度（IC50值或EC50值）。體外試驗(yàn)至少重復(fù)一次。附注：評(píng)價(jià)藥物抗癌活性的方法：1 .MTT還原法1.1 基本原理：四氮口坐MTT,3-（4,5-dimethylibiazol-2-y

4、l）-2,5-diphenyl-tetrazoliumbromide是一種能接受氫原子的染料。活細(xì)胞線粒體中與NADP相關(guān)的脫氫酶在細(xì)胞內(nèi)可將黃色的MTT轉(zhuǎn)化成不溶性的藍(lán)紫色的甲月替（formazan）,而死的細(xì)胞則無(wú)此功能。用二甲基亞諷（DMSO）溶解甲月替后，在一定波長(zhǎng)下用酶標(biāo)儀測(cè)定光密度值，即可定量測(cè)出細(xì)胞的存活率。1.2 操作步驟：1.2.1 選用對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的貼壁月中瘤細(xì)胞，用胰酶消化后，用含10%小牛血清的RPMIl640培養(yǎng)基配成5000個(gè)/ml的細(xì)胞懸液，接種在96孔培養(yǎng)板中，每孔接種200晨37C,5%CO2培養(yǎng)24h。1.2.2 實(shí)驗(yàn)組換新的含不同濃度被測(cè)樣品的培養(yǎng)基，對(duì)照組

5、則換含等體積溶劑的培養(yǎng)基，每組設(shè)35平行孔，37C,5%CO2培養(yǎng)45d。1.2.3 棄去上清液，每孔加入200仙新鮮配制的含0.2mg/mlMTT的無(wú)血清培養(yǎng)基.37c繼續(xù)培養(yǎng)4h。小心棄上清，并加入200履DMSQ用微型超聲振蕩器混勻后，在酶標(biāo)儀上以試驗(yàn)波長(zhǎng)為570nm,參比波長(zhǎng)為450nm測(cè)定光密度值。1.3 結(jié)果評(píng)定：按下式計(jì)算藥物對(duì)月中瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制率：月中瘤細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率%=（1-OD實(shí)驗(yàn)/OD對(duì)照）100%以同一樣品的不同濃度對(duì)月中瘤細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率作圖可得到劑量反應(yīng)曲線，從中求出樣品的半數(shù)殺傷濃度IC50。合成化合物或植物提取純品的IC50<10世"m1或植物粗

6、提物的IC50<20N/m1時(shí)，則判斷樣品在體外對(duì)月中瘤細(xì)胞有殺傷作用。2 .生長(zhǎng)曲線法的基本原理：在最適條件下，月中瘤細(xì)胞在培養(yǎng)液中呈指數(shù)生長(zhǎng)，如取細(xì)胞數(shù)的對(duì)數(shù)與培養(yǎng)時(shí)間作圖可得一條直線，故稱此時(shí)為對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期。隨著細(xì)胞密度不斷增高，由于代謝產(chǎn)物的積聚及營(yíng)養(yǎng)物的消耗，細(xì)胞生長(zhǎng)逐漸減慢以致停止，此時(shí)稱高坪期或穩(wěn)定期。因此藥物對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)的影響可通過(guò)生長(zhǎng)曲線反映出來(lái)。3 .染料排斥試驗(yàn)的基本原理：活細(xì)胞有排斥某些染料如伊紅、臺(tái)盼藍(lán)、苯胺黑等的能力，而死細(xì)胞由于膜完整性的破壞，可被著色。因此培養(yǎng)的月中瘤細(xì)胞中加入這些染料，一定時(shí)間后，對(duì)著色和未著色的細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)，即可算出被殺死的細(xì)胞比例。4 .

7、集落形成法的基本原理：克隆原細(xì)胞具有持續(xù)增殖能力，當(dāng)單個(gè)細(xì)胞分裂6代或6代以上時(shí)，其后代所組成的群體(集落)便含50個(gè)以上細(xì)胞。通過(guò)集落計(jì)數(shù)可對(duì)克隆原細(xì)胞作定量分析。它反映了單個(gè)細(xì)胞的增殖潛力，故能較靈敏地測(cè)定抗癌藥的活性，日前被認(rèn)為是一種較理想的檢測(cè)方法。常用的集落形成法可分為貼壁法及半固體培養(yǎng)法兩種。5 .SRB法的基本原理：SRB(sulforhodamine是一種蛋白質(zhì)結(jié)合染料，粉紅色，可溶于水。SRB可與生物大分子中的堿性氨基酸結(jié)合。其在515nm波長(zhǎng)的OD讀數(shù)與細(xì)胞數(shù)呈良好的線性關(guān)系。故可用作細(xì)胞數(shù)的定量。MTT法的一個(gè)缺點(diǎn)是OD值可隨放置時(shí)問(wèn)而變，而SRB法無(wú)此現(xiàn)象。因此更適用于

8、進(jìn)行大規(guī)模的試驗(yàn)。三、體內(nèi)抗月中瘤試驗(yàn)體內(nèi)抗月中瘤試驗(yàn)必須選用三種以上月中瘤模型，其中至少一種為人癌裸小鼠移植模型或其它人癌小鼠模型。試驗(yàn)結(jié)果三種模型均為有效，再重復(fù)一次也為有效，評(píng)定該化合物對(duì)這些實(shí)驗(yàn)性月中瘤具有治療作用。鼓勵(lì)使用人類月中瘤裸鼠移植瘤模型和多種類的移植瘤模型、原位接種模型和中空纖維測(cè)定(hollow-fiberassay)等方法。1 .動(dòng)物動(dòng)物要求健康，符合等級(jí)動(dòng)物要求，有實(shí)驗(yàn)動(dòng)物合格證。雌雄均可，但同一批實(shí)驗(yàn)中動(dòng)物性別必須相同。小鼠鼠齡為5-6周，體重為18-22克。評(píng)價(jià)同一物質(zhì)的活性時(shí)，不同批次的實(shí)驗(yàn)必須采用同一品系的小鼠2 .月中瘤模型2.1 小鼠月中瘤模型淋巴細(xì)胞白血

9、病腹水瘤L1210和P388、白血病L-615、宮頸癌U14、肝癌H22、Lewis肺癌、黑色素瘤B16、網(wǎng)織細(xì)胞瘤M5076、腸癌26、腸月M癌38、乳腺癌CD8F1、艾氏腹水瘤(EAC)、肉瘤-180等，以及各種小鼠月中瘤的亞型和耐藥株等。2.2 人癌裸小鼠移植瘤模型應(yīng)選用體外試驗(yàn)敏感細(xì)胞株進(jìn)行體內(nèi)抗人癌裸小鼠移植瘤試驗(yàn)。模型建立和使用應(yīng)注意：(1)移植瘤一般由相應(yīng)的細(xì)胞株移植而建立，對(duì)細(xì)胞株和移植瘤的化療敏感性應(yīng)予了解。(2)移植瘤復(fù)蘇后一般應(yīng)傳2-3代后再用于體內(nèi)抗月中瘤試驗(yàn)。(3)對(duì)模型生長(zhǎng)情況應(yīng)全面了解，尤其是生長(zhǎng)快的模型(4)為了保持移植瘤的生物學(xué)特性和遺傳特性，復(fù)蘇后移植瘤體內(nèi)

10、傳代應(yīng)少于15-20代3 .試驗(yàn)過(guò)程3.1 接種：月中瘤接種方法主要有皮下接種、腹腔接種和原位接種。3.1.1 皮下月中瘤模型選擇腫瘤生長(zhǎng)旺盛且無(wú)潰破的荷瘤小鼠，頸椎脫臼處死，在無(wú)菌條件下(超凈臺(tái)或接種罩)，用碘酒、酒精或新潔爾滅消毒動(dòng)物皮膚，切開(kāi)皮膚，剝離月中瘤。將瘤組織剪成1.5mm3左右，用套管針接種于動(dòng)物一側(cè)或雙側(cè)腋窩皮下；或制成細(xì)胞懸液，然后按一定比例加入無(wú)菌生理鹽水，一般每只小鼠接種腫瘤細(xì)胞數(shù)量為(1-5)M06。3.1.2 腹水瘤模型無(wú)菌條件下，消毒動(dòng)物皮膚，吸取生長(zhǎng)良好的動(dòng)物腹水，以生理鹽水按一定比例稀釋后接種于動(dòng)物腹腔，接種細(xì)胞數(shù)量一般為(1-5)X106。3.1.3 原位接

11、種模型原位接種是指將來(lái)源于某臟器的月中瘤接種在動(dòng)物的某臟器，如將人肝癌接種在裸小鼠的肝臟。原位接種不是常規(guī)的方法，但有其優(yōu)越性，是鼓勵(lì)使用的方法。主要有肺、肝、胃、腸、乳腺、顱內(nèi)等原位接種方法。3.2 動(dòng)物分組3.2.1 試驗(yàn)設(shè)陰性對(duì)照組、陽(yáng)性對(duì)照組、治療組。3.2.2 治療組設(shè)高、中、低三個(gè)劑量組。小鼠月中瘤和腹水瘤接種后次日將動(dòng)物隨機(jī)分組,裸鼠移植瘤用游標(biāo)卡尺測(cè)量移植瘤直徑,待月中瘤生長(zhǎng)至100300mm3后將動(dòng)物隨機(jī)分組。3.2.3 動(dòng)物數(shù)普通小鼠每組10只，裸鼠6只。陰性對(duì)照組動(dòng)物數(shù)為治療組動(dòng)物數(shù)戲驗(yàn)組數(shù)1/23.3 劑量設(shè)置3.3.1 治療組設(shè)高、中、低劑量治療組，一般按4:2:1設(shè)

12、置，高劑量使用最大耐受量或LD10的劑量。3.3.2 陰性對(duì)照組給予相應(yīng)的溶劑；3.3.3 陽(yáng)性對(duì)照藥選用對(duì)該動(dòng)物敏感的、臨床應(yīng)用的抗月中瘤藥物，3.3.4 如受試物為一抗癌藥物的衍生物或類似物時(shí)，必須選用該抗癌藥物作為陽(yáng)性對(duì)照藥。3.4 陽(yáng)性對(duì)照藥選擇原則療效確切；與被試物質(zhì)化學(xué)結(jié)構(gòu)類似；與被試物質(zhì)有類似的作用機(jī)理。3.5 藥物配制溶于水的藥物，用生理鹽水或蒸儲(chǔ)水配制；如用酸、堿溶解者，可先用小量酸(0.1-0.5NHCl)或堿(NaHCO3、Na2CO3、NaOH)溶解，調(diào)節(jié)pH在4.5-9.0的范圍內(nèi)。用乙醇、丙二醇、吐溫80、DMSO助溶的藥物，或用吐溫60、吐溫80、2-3%淀粉、0

13、.5%竣甲基纖維素制成混懸液的藥物，可腹腔注射或口服，但必須設(shè)相同濃度的溶劑對(duì)照組。用注射用花生油配制的溶液或乳劑可口服、皮下或肌肉注射。3.6 給藥方案和給藥途徑分組當(dāng)日開(kāi)始給藥，根據(jù)不同藥物的代謝動(dòng)力學(xué)和毒性反應(yīng)等確定給藥方案。給藥途徑應(yīng)與推薦臨床用藥的途徑相同。給藥次數(shù)較多，或被試物質(zhì)溶解性較差，靜脈給藥有困難時(shí)，可考慮使用腹腔給藥，但在評(píng)價(jià)藥效時(shí)要注意這兩種給藥途徑是有差別的?？刹扇×鲋?、瘤內(nèi)、肌肉、皮下給藥途徑。腹水瘤試驗(yàn)時(shí)一般不能應(yīng)用腹腔給藥途徑。4評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)4.1 腹水瘤模型接種給藥后，觀察和記錄動(dòng)物死亡時(shí)間，計(jì)算生存天數(shù)。如陰性對(duì)照組20%動(dòng)物存活時(shí)間超過(guò)4周，表明腹水瘤生長(zhǎng)不良

14、，實(shí)驗(yàn)作廢。采用中位生存時(shí)間(即mediansurvivaltime,MST)來(lái)評(píng)價(jià)每組的生存時(shí)間，其計(jì)算公式為：每組鼠數(shù)的中間數(shù)-中間生存天數(shù)前死亡的鼠數(shù)MST=(中間生存天數(shù)-0.5)+中間生存天數(shù)死亡的鼠數(shù)治療組與對(duì)照組的比較，采用T/C(%)來(lái)表示，計(jì)算公式為：TMSTT/C%=X100%CMSTTMST:治療組MST;CMST:陰性對(duì)照組MST。評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)以125%為界，當(dāng)T/C%>125%時(shí)。視為有效，反之則無(wú)效。4.2 裸鼠移植瘤模型推薦使用測(cè)量瘤徑的方法，動(dòng)態(tài)觀察受試物抗月中瘤的效應(yīng)。月中瘤直徑的測(cè)量次數(shù)根據(jù)移植瘤的生長(zhǎng)情況而定，一般為每周2-3次,每次測(cè)量同時(shí)還需稱鼠重。

15、月中瘤體積(tumorvolume,TV)的計(jì)算公式為：V=1/2a>Ob2或兀/6XaXbXc其中a、b、c分別表示長(zhǎng)寬高。兩公式的相關(guān)性極好，可采用任一公式。根據(jù)測(cè)量結(jié)果計(jì)算出相對(duì)月中瘤體積(relativetumorvolume,RTV),RTV=Vt/V0O其中V0為分籠給藥時(shí)(即d0)測(cè)量所得月中瘤體積，Vt為每一次測(cè)量時(shí)的腫瘤體積。抗月中瘤活性評(píng)價(jià)指標(biāo)為相對(duì)月中瘤增殖率T/C(%)TRTVT/C%=X100%CRTVTRTV:治療組RTV;CRTV:陰性對(duì)照組RTV。療效評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)：T/C%>60%為無(wú)效；T/C%060%并經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理P<0.05為有效。4.3 小

16、鼠月中瘤模型生長(zhǎng)較慢小鼠月中瘤采用與裸鼠移植瘤同樣的測(cè)量瘤徑的評(píng)價(jià)方法。生長(zhǎng)較快小鼠月中瘤可采用稱瘤重的方法評(píng)價(jià)。試驗(yàn)結(jié)束后處死動(dòng)物，稱體重，解剖剝離瘤塊，稱瘤重。陰性對(duì)照組月中瘤平均瘤重小于1克，或20%月中瘤重量小于400毫克，表示月中瘤生長(zhǎng)不良，試驗(yàn)作廢。療效評(píng)價(jià)公式：給藥組平均瘤重-陰性對(duì)照組平均瘤重月中瘤生長(zhǎng)抑制率=X100%陰性對(duì)照組平均瘤重評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)：月中瘤生長(zhǎng)抑制率<40%為無(wú)效；月中瘤生長(zhǎng)抑制率40%并經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理P<0.05為有效。4.4 原位接種模型不同原位接種模型可采用不同評(píng)價(jià)方法，主要有瘤重和生存時(shí)間評(píng)價(jià)法。如肝原位接種可用瘤重評(píng)價(jià)，顱內(nèi)接種可用生存時(shí)間評(píng)價(jià)

17、。評(píng)價(jià)方法、標(biāo)準(zhǔn)和注意事項(xiàng)同腹水瘤模型和小鼠月中瘤模型。四、抗月中瘤藥物的特殊要求I類抗月中瘤新藥應(yīng)進(jìn)行藥物作用機(jī)制的初步研究。非細(xì)胞毒類藥物除完成體內(nèi)外抗月中瘤試驗(yàn)，還應(yīng)進(jìn)行特定抗月中瘤作用研究。1 .生物反應(yīng)調(diào)節(jié)劑藥效學(xué)包括：體內(nèi)抗癌試驗(yàn)和免疫功能研究。1.1 體內(nèi)抗癌試驗(yàn)注意點(diǎn)：模型：裸鼠是免疫缺陷動(dòng)物，一般應(yīng)用正常免疫鼠月中瘤模型。給藥時(shí)間：可按常規(guī)給藥，也可在接種前預(yù)先給藥，接種后繼續(xù)給藥或停藥。105個(gè)瘤細(xì)胞/小鼠。M月中瘤細(xì)胞接種量：可比細(xì)胞毒類藥物低一個(gè)數(shù)量級(jí)，一般為(1-5)給藥方法：可單獨(dú)給藥，也可與其它抗月中瘤藥物合并使用，觀察增效或減毒作用。1.2免疫功能試驗(yàn)方法具有抑

18、瘤作用的生物反應(yīng)調(diào)節(jié)劑，還需作免疫功能測(cè)定，以明確其抑瘤作用是否與免疫功能調(diào)控有關(guān)。免疫功能測(cè)定包括細(xì)胞免疫和體液免疫兩方面。免疫功能測(cè)定有：(1)巨噬細(xì)胞功能測(cè)定(2)天然殺傷細(xì)胞(naturalkillcell)測(cè)定(3)淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn)(4) 淋巴因子活化的殺傷細(xì)胞測(cè)定(lymphocyte-activatedkillercell)(5) 各種細(xì)胞因子測(cè)定，如IL-2、IL-6、IL-12、IFN-丫TNF-a等。(6)遲發(fā)型超敏反應(yīng)檢測(cè)2 .月中瘤耐藥逆轉(zhuǎn)劑2.1 體外抗耐藥活性試驗(yàn)選才?2-3對(duì)月中瘤耐藥/敏感細(xì)胞株，采用MTT法或SRB法測(cè)定細(xì)胞毒性。一般在無(wú)毒劑量或相當(dāng)于IC10

19、的劑量下設(shè)三個(gè)劑量，并設(shè)立相應(yīng)的陽(yáng)性和陰性對(duì)照組。評(píng)價(jià)逆轉(zhuǎn)效果用逆轉(zhuǎn)倍數(shù)(foldreversal,FR)表示：FR=IC50(不加逆轉(zhuǎn)劑)/IC50(加逆轉(zhuǎn)劑)。注意的方面：耐藥株的耐藥性：耐藥株因傳代，尤其是撤藥后耐藥性可改變或消失；試驗(yàn)前必須對(duì)試驗(yàn)?zāi)退幹赀M(jìn)行耐藥倍數(shù)(FR)測(cè)定，確保試驗(yàn)的可靠性。若非逆轉(zhuǎn)多藥耐藥(MDR)而是逆轉(zhuǎn)單藥耐藥，則實(shí)驗(yàn)的瘤株中需有針對(duì)該藥的耐藥細(xì)胞株。陽(yáng)性對(duì)照藥建議采用維拉帕米(verapamil)10環(huán)抱菌素A(cyclosporinA)3的M2.2 體內(nèi)抗月中瘤耐藥活性試驗(yàn)小鼠敏感和對(duì)應(yīng)的耐藥月中瘤和人癌裸鼠敏感和對(duì)應(yīng)的耐藥移植瘤2.3 耐藥基因及其表達(dá)產(chǎn)

20、物測(cè)定可測(cè)定月中瘤細(xì)胞內(nèi)的藥物濃度變化和耐藥基因及其表達(dá)產(chǎn)物，初步明確其逆轉(zhuǎn)耐藥機(jī)制。包括多藥耐藥基因及其編碼蛋白(multidrugresistancegene/p-glycoprotein,Mdr1/Pgp)、多藥而寸藥相關(guān)蛋白(multidrugresistance-relatedprotein,MRP)、肺耐藥相關(guān)蛋白(lungresistance-relatedprotein,LRP)其它與耐藥相關(guān)的基因/蛋白及酶等。3 .抗月中瘤轉(zhuǎn)移藥物月中瘤是否轉(zhuǎn)移不僅依賴于月中瘤細(xì)胞本身具有的內(nèi)在轉(zhuǎn)移潛能，而且也取決于機(jī)體抗轉(zhuǎn)移因素的消長(zhǎng)。所以，抗轉(zhuǎn)移藥物只有在動(dòng)物體內(nèi)模型上才能得出符合實(shí)際的

21、結(jié)果。3.1 體外試驗(yàn)測(cè)定候選化合物作用下月中瘤細(xì)胞對(duì)基底膜的侵襲、粘附和月中瘤細(xì)胞趨化性運(yùn)動(dòng)的能力。3.2 體內(nèi)試驗(yàn)3.2.1 模型：小鼠B16黑色素瘤、小鼠Lewis肺癌等和人癌裸鼠移植高轉(zhuǎn)移瘤模型。3.2.2 接種方法：常用靜脈注射方法，也可用皮下接種等方法。3.2.3 評(píng)價(jià)指標(biāo)接種給藥后，觀察記錄動(dòng)物死亡時(shí)間，計(jì)算生存天數(shù)。試驗(yàn)結(jié)束后，稱動(dòng)物體重、肺重、移植瘤重，解剖顯微鏡下計(jì)數(shù)肺轉(zhuǎn)移瘤灶、測(cè)瘤徑(計(jì)算肺轉(zhuǎn)移瘤體積)和病理組織學(xué)切片觀察等；計(jì)算轉(zhuǎn)移率轉(zhuǎn)移抑制率=1-(治療組轉(zhuǎn)移率/對(duì)照組轉(zhuǎn)移率)M00%。4 .月中瘤血管生成抑制劑4.1 體外試驗(yàn)體外試驗(yàn)?zāi)Ｐ陀校?1)人血管內(nèi)皮細(xì)胞模型

22、：人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞和人微血管(肺、皮膚等)內(nèi)皮細(xì)胞。(2)血管形成促進(jìn)因子等刺激細(xì)胞DNA合成、增殖、遷移、血管形成(tubeformation)來(lái)觀察藥物的抗血管形成作用。如血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)或堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(basicfibroblastgrowthfactor,bFGF)(3)月中瘤細(xì)胞模型：主要應(yīng)用國(guó)內(nèi)已建立的人實(shí)體癌細(xì)胞系，確定VEGF、FGF等高分泌的細(xì)胞株。檢測(cè)細(xì)胞增殖、轉(zhuǎn)移能力及血管形成因子的基因表達(dá)狀況來(lái)評(píng)價(jià)藥物。4.2 體內(nèi)試驗(yàn)4.2.1 血管抑制試驗(yàn)經(jīng)典的血管形成評(píng)價(jià)方法有：雞絨毛膜尿囊和卵黃膜囊(CAM)、嚙齒動(dòng)物虹膜和角膜等。也可用如皮下移植塑料或多孔的polytetrafluoroethylene管、皮下移植無(wú)菌的海綿；一些自然的或化學(xué)修飾的物質(zhì)如Matrigel和纖維凝膠等用于體內(nèi)模型。4.2.2 抗月中瘤試驗(yàn)通過(guò)觀察新生血管生成抑制劑的體內(nèi)抗月中瘤效應(yīng)檢測(cè)移植瘤的血管密度、血管生成因子和抑制因子的分泌和表達(dá)，以及月中瘤的轉(zhuǎn)移情況等綜合評(píng)價(jià)月中瘤血管生成抑制劑的作用和作用機(jī)制。5 .分化誘導(dǎo)劑分化誘導(dǎo)劑的藥效學(xué)研究包括體外和體內(nèi)研究模型；目前的藥物主要能對(duì)急性白血病進(jìn)行有效的分化治療。陽(yáng)性對(duì)照藥選用維甲