常用抗體標記熒光染料的選擇

1、1、藍色（350-450nm處激發(fā)）CF350、AlexaFluor350、AMCA等亮藍和紫外光激發(fā)。CF350是類似于AlexaFluor350和傳統(tǒng)熒光染料AMCA的藍色熒光染料，CF350的熒光強度高于AlexaFluor350、AMCA，吸附在蛋白上的熒光超過50%，水溶性更好，耐光性非常優(yōu)秀亮，更容易與現(xiàn)有的綠色熒光基團區(qū)分。CF405S/CF405M、AlexaFluor405近乎完美的匹配藍色二極管激光器。CF405S/CF405M、AlexaFluor405與近來使用的熒光顯微鏡和流式細胞儀405nm;譜線的藍色二極管激光器完美的匹配。在流式細胞儀上的分析結(jié)果顯示CF405S

2、/CF405M熒光信號強度高于AlexaFluor405染料1.7倍。2、綠色（488nm處激發(fā)）CF488A、AlexaFluor488、FITC、FAM、DyLight488、Cy2等針對488nm氬離子激光器的綠色熒光染料。以上染料其標記的抗體蛋白適用于所有配備488nm氬離子激光器的流式細胞儀，流式細胞儀的FL1通道檢測，或者可用于熒光顯微鏡技術(shù)。CF488A最低限度的帶電量降低了與抗體耦聯(lián)物的非特異性結(jié)合，在紅色通道溢出少于AlexaFluor488，耐光性好、水溶性好和pH不敏感，良好的穩(wěn)定性和活性染料的標記率。AlexaFluor488在較寬的PH值范圍內(nèi)保持穩(wěn)定（PH410）；

3、FITC激發(fā)波長488nm，最大發(fā)射波長525nm，缺點：熒光強度易受PH值影響，PH值降低時其熒光強度減弱。3、橙紅色（543-555nm處激發(fā)）CF543、AlexaFluor546ATTO550,Cy3,DyLight549,Rhodamine（TRITC）匹配543nm的橙色熒光染料；CF543熒光條帶明亮，耐光，水溶性好，確保了CF543染料與抗體的耦聯(lián)物保持優(yōu)異的水溶性，為該波段最亮的橙色熒光染料。例如：同等的標記程度下，CF543標記的羊抗鼠IgG抗體的亮度高于用AlexaFluor546標記的210倍。CF555、AlexaFluor555、Tetramethylrhodami

4、ne（TAMRA）等匹配Cy3濾光片的橙色熒光染料。4、紅色（568-594nm處激發(fā)）CF568、AlexaFluor®568,ATTO565,RhodamineRed等568nm處紅色熒光染料。CF568染料耐光性最好；高效水溶性；比AlexaFluor568標記的抗體亮度更亮。CF594、AlexaFluor®594,ATTO594,DyLight594,TexasRed等最亮紅色熒光染料。CF594由于其高量子產(chǎn)量和優(yōu)異的水溶性而比AlexaFluor594明亮24倍。同時CF594對光極其穩(wěn)定，使它能被理想地應(yīng)用于諸如共聚焦顯微鏡和單分子顯像條件苛刻的應(yīng)用中去。5

5、、遠紅外(620-660nm處激發(fā))CF620R、LightCyclerRed640等620nm處。CF620R是以紅色熒光染料羅若丹(rhodamine)為基礎(chǔ)的遠紅外的熒光染料，該染料有高熒光亮度和極度的耐光性。它的吸收和發(fā)射光譜為617和639nm，該染料能被用于熒光能量共振轉(zhuǎn)移中高能量的接收者，或者在激發(fā)和發(fā)射窗口能和該染料的光譜特性匹配的條件下，被應(yīng)用于多色檢測中的最高熒光量采集。染料的卓越的水溶性有利于生物耦合在水介質(zhì)中，更好的保持耦聯(lián)物的生物特異性結(jié)合。CF633、AlexaFluor633,AlexaFluor647,Cy5,DyLight633,DyLight649等633/

6、635nm激光線的最佳染料熒光染料。CF633染料的優(yōu)點：當被633nm氦氖激光或635nm紅色二極管激光激發(fā)時,產(chǎn)生最亮的抗體耦聯(lián)物，光穩(wěn)定性遠高于AlexaFluor647，高效的水溶性。CF640、AlexaFluor647,ATTO647N,Cy5,DyLight649等遠紅外熒光染料。CF640R的優(yōu)點：以紅色染料羅丹明(rhodamine)為基礎(chǔ)，吸收和發(fā)射峰類似Cy5、AlexaFluor647；但以羅丹明(rhodamine)為基礎(chǔ)的紅色染料CF640R它最大的優(yōu)點就是對光穩(wěn)定性，Cy5和AlexaFluor647以花青素為基礎(chǔ)，因此有著和花青素一樣的特點即耐光性較差。極好的亮

7、度和耐光性使CF640R被理想的用于共聚焦顯微鏡和單分子成像等條件苛刻的檢測中。CF647、AlexaFluor647,ATTO647N,DyLight649等遠紅外熒光染料。以花青素為基礎(chǔ)的遠紅外熒光染料CF647比Cy5、AlexaFluor647明亮。CF660、AlexaFluor®660,Allophycocyanin(APC)等介于遠紅外近紅外之間的熒光染料。6、近紅外(680-790nm處激發(fā))CF680R/680、AlexaFluor680,Cy5.5,IRDye680等近紅外熒光染料。CF680是高水溶性的以花青素為基礎(chǔ)的染料，分子量大約為3000。該染料標記抗體極佳，發(fā)出最亮的熒光和在免疫染色光譜相似的染料中產(chǎn)生最高的信噪比。CF680R分子量約為900，更適合標記核酸或者相對小的生物分子。CF680R是新型的以羅丹明(rhodamine)為基礎(chǔ)的高熒光亮度，極度耐光性染料，這使它可被理想地用于共聚焦顯微鏡，單分子成像等條件要求苛刻的應(yīng)用中。CF750、CF770andCF790等近紅外熒光染料。CF750、CF770、CF790是領(lǐng)域內(nèi)真正具有突破性的長波長的新型染料代表。其他近紅外染由于受到染料聚集和穩(wěn)定性差等因素的影響而導(dǎo)致熒光亮度有限?；贐iotium科學(xué)家研制的新型分子工程技術(shù)，近紅外CF染料克服了這些問題。即使在633nm被