第6章色譜分離過程

1、1第第6 6章章 色譜分離過程色譜分離過程 6.1 概述概述6.2 色譜分離過程的基本原理色譜分離過程的基本原理6.3 色譜的分類色譜的分類6.4 色譜分離過程基礎(chǔ)理論色譜分離過程基礎(chǔ)理論6.5 典型制備色譜工藝及應(yīng)用典型制備色譜工藝及應(yīng)用2色譜分析法的基本知識色譜定義及分類色譜法分離原理根據(jù)兩相的物理狀態(tài)速率理論利用保留值定性利用經(jīng)驗規(guī)律定性利用聯(lián)用技術(shù)定性色譜法定義色譜法分類根據(jù)分離的物理化學(xué)原理氣相色譜法液相色譜法氣固相色譜法氣液相色譜法液固相色譜法液液相色譜法吸附色譜法分配色譜法色譜圖色譜法基本理論色譜定性定量分析分配系數(shù)分配比色譜圖相關(guān)述語色譜圖所提供的信息塔板理論分離度色譜分離的基

2、本方程定量校正因子峰面積測量定量分析方法色譜定性分析色譜定量分析歸一化法內(nèi)標(biāo)法外標(biāo)法3w定義也稱色譜層析、色譜、色層層析、色譜、色層；樣品中各組成依據(jù)其在固定相與流動相之間作用行為的差別進(jìn)行多次分離的過程。發(fā)展史1903年一位俄國植物學(xué)家首次提出。1931年首次應(yīng)用于制備；1938年適用范圍擴展至無色物質(zhì)； 6.1 6.1 概述概述41903年俄國植物學(xué)家Tswett實驗示意圖固定相固定相CaCO3顆粒顆粒流動相流動相石油醚石油醚 5色譜法的特點優(yōu)點：優(yōu)點：“三高”、“一快”、“一廣”缺點：缺點： 高選擇性可將性質(zhì)相似的組分分開 高效能反復(fù)多次利用組分性質(zhì)的差異 產(chǎn)生很好分離效果 高靈敏度10

3、-1110-13g，適于痕量分析 分析速度快幾幾十分鐘完成分離 一次 可以測多種樣品 應(yīng)用范圍廣氣體，液體、固體物質(zhì) 化學(xué)、生化色譜分離、分析 對未知物分析的定性專屬性差 需要與其他分析方法聯(lián)用(GC-MS,LC-MS)66.2 6.2 色譜分離過程的基本原理色譜分離過程的基本原理1.分離原理色譜法之所以可以分離混合物，關(guān)鍵是它有一個高效的色譜柱。物質(zhì)在柱內(nèi)的分離過程，是物質(zhì)在固定相和流動相之間發(fā)生吸附、脫附（或溶解、解析）的過程。被分離物按其溶解和解析的能力（或吸附和脫附的能力）的大小，以一定的比例分配在固定相和流動相之間。溶解（吸附）能力大的組分分配給固定相多一些，分配給流動相少一些。這可

4、用分配系數(shù)K表示。7w分配系數(shù)的微小差異吸附能力的微小差異w微小差異積累較大差異吸附能力弱的組分先流出； 吸附能力強的組分后流出82.固定相（色譜柱填料） 硅膠衍生的固定相 離子交換樹脂 大孔吸附樹脂 凝膠 手性固定相纖維素衍生物環(huán)糊精相聚（甲基）丙烯酰胺 -酸和 -堿固定相93.色譜柱及柱技術(shù)色譜柱裝填方法色譜柱設(shè)計高壓勻漿填充干法填充徑向壓縮法軸向壓縮法環(huán)形壓縮技術(shù)“餅式”柱面進(jìn)樣軸向流動106.3 6.3 色譜的分類色譜的分類 根據(jù)色譜法中兩相的物理狀態(tài)分：氣 固 色 譜 法 （ GSC）氣 相 色 譜 法 （ GC）氣 液 色 譜 法 （ GLC）液 固 色 譜 法 （ LSC）液 相

5、 色 譜 法 （ LC）液 液 色 譜 法 （ LLC）色 譜 法超 臨 界 流 體 色 譜 法根據(jù)固定相的形狀分：填 充 柱空 心 柱柱 色 譜 法 （ L C C ）毛 細(xì) 管 柱紙 色 譜 法 （ PC ）色 譜 法平 板 色 譜 法 （ FB C ）薄 層 色 譜 法 （ TL C ）11 按分配原理分：按分離的動力學(xué)過程分：沖 洗 色 譜 法頂 替 色 譜 法色 譜 法迎 頭 色 譜 法12基本類型色譜法的分離機制w基本概念：固定相固定相（s）；流動相流動相（m）（一）吸附色譜法（二）分配色譜法（三）離子交換色譜法（四）空間排阻色譜法13（一）吸附色譜法要求要求： 固定相吸附劑（硅膠

6、或Al2O3） 具表面活性吸附中心分離機制分離機制：見圖示吸附平衡 Xm + nYaXa + nYm 14分離機制：分離機制： 各組分與流動相分子爭奪吸附劑表面活性中心 利用吸附劑對不同組分的吸附能力差異而實現(xiàn)分離吸附解吸再吸附再解吸無數(shù)次洗脫分開15（二）分配色譜法要求要求： 固定相機械吸附在惰性載體上的液體 流動相必須與固定相不為互溶 載體惰性，性質(zhì)穩(wěn)定， 不與固定相和流動相發(fā)生化學(xué)反應(yīng)分離機制分離機制見圖示 狹義分配系數(shù)狹義分配系數(shù)mmssmsVXVXCCK16圖示分離機制分離機制 利用組分在流動相和固定相間溶解度差別實現(xiàn)分離利用組分在流動相和固定相間溶解度差別實現(xiàn)分離 連續(xù)萃取過程 b

7、ack17（三）離子交換色譜法要求要求： 固定相離子交換樹脂流動相水為溶劑的緩沖溶液被分離組分離子型的有機物或無機物分離機制分離機制見圖示見圖示18圖示分離機制：分離機制： 依據(jù)被測組分與離子交換劑交換能力（親和力）依據(jù)被測組分與離子交換劑交換能力（親和力） 不同而實現(xiàn)分離不同而實現(xiàn)分離 back19（四）空間排阻色譜法要求要求： 固定相多孔性凝膠 流動相水凝膠過濾色譜 流動相有機溶劑凝膠滲透色譜 分離機制分離機制見圖示見圖示20圖示分離機制分離機制： 利用被測組分分子大小不同、在固定相上選擇利用被測組分分子大小不同、在固定相上選擇性性 滲透實現(xiàn)分離滲透實現(xiàn)分離 back21w四種色譜的分離機

8、制各不相同，分別形成吸附平衡、分配平衡、離子交換平衡和滲透平衡K分別為吸附系數(shù)，狹義分配系數(shù)，選擇性系數(shù)和滲透系數(shù)。w除了凝膠色譜法中的K僅與待測分子大小尺寸、凝膠孔徑大小有關(guān)外，其他三種K值都受組分的性質(zhì)、流動相的性質(zhì)、固定相的性質(zhì)以及柱溫的影響。22親和色譜（Affinity chromatography）AC ver 99032630Steric considerations &spacer armsSmall ligand (1,000)Risk of steric interference with binding between matrix and target mole

9、culeOften need spacer armbut watch out for adsorption to the spacer!Spacer arm23色譜圖及有關(guān)術(shù)語色譜圖及有關(guān)術(shù)語 色譜圖是以組分的響應(yīng)信號（或濃度）為縱坐標(biāo)，時間為橫坐標(biāo)的色譜流出曲線；它提供定性和定量分析的依據(jù)及色譜操作條件的有關(guān)信息。如下圖：24(1)基線基線沒有組分進(jìn)入檢測器時，檢測器系統(tǒng)的噪聲隨時間變化的曲線通常為一條直線。當(dāng)系統(tǒng)不穩(wěn)定時，基線會隨時間而定向緩慢變化的現(xiàn)象，稱為基線的漂移；當(dāng)系統(tǒng)不穩(wěn)定時，不同因素引起基線的起伏變化的現(xiàn)象，稱為基線的噪聲。(2)保留值保留值是色譜法定性的依據(jù)?？梢杂媒M分在色譜

10、柱中的滯留時間或使組分流出色譜柱所需要的流動相體積表示。死時間（tR0）-不與固定相發(fā)生作用的組分（空氣或甲烷）流過色譜柱所需的時間。死時間正比于色譜柱中的空隙體積。25保留時間（tR）-組分流過色譜柱所需要的時間，一般指從進(jìn)樣到柱后組分濃度最大值時所需的時間。調(diào)整保留時間（tR）-扣除死時間后的保留時間 （tR=tR-tM）。用使組分流出色譜柱所需流動相體積表示時為：a死體積（Vm） VM=tMF0b保留體積（VR） VR=tRF0c調(diào)整保留體積（VR） VR=tRF0=VR-VM 26(3)峰高與峰面積峰高與峰面積 峰高是色譜峰的頂點到基線之間的垂直距離，用h表示；峰面積是色譜流出曲線與基

11、線所圍成的面積，用A表示。(4)區(qū)域?qū)挾葏^(qū)域?qū)挾?是反映分離好壞的一個重要參數(shù)。一般，區(qū)域?qū)挾仍秸胶??？捎萌N方法表示：標(biāo)準(zhǔn)偏差（）：0.607倍峰高處峰寬的一半。峰底寬度（）：色譜峰兩側(cè)切線在基線上的截距 =4半峰寬度（ 1/2）：又稱半寬度或區(qū)域?qū)挾?，峰高一半處的寬度?354. 22/12728 1.根據(jù)色譜峰的數(shù)目，可以判斷試樣中所含根據(jù)色譜峰的數(shù)目，可以判斷試樣中所含有組分的最少個數(shù)。有組分的最少個數(shù)。 2.根據(jù)色譜峰的保留值可以進(jìn)行定性分析。根據(jù)色譜峰的保留值可以進(jìn)行定性分析。 3.根據(jù)色譜峰高或面積可以進(jìn)行定量測定。根據(jù)色譜峰高或面積可以進(jìn)行定量測定。 4.根據(jù)色譜峰間距及其寬

12、度，可對色譜柱的根據(jù)色譜峰間距及其寬度，可對色譜柱的分離效能進(jìn)行評價。分離效能進(jìn)行評價。 5.色譜峰間距色譜峰間距固定相或流動相選擇是否固定相或流動相選擇是否合適的依據(jù)。合適的依據(jù)。從色譜流出曲線可以獲得許多重要信息：從色譜流出曲線可以獲得許多重要信息：296.4 6.4 色譜分離過程基礎(chǔ)理論色譜分離過程基礎(chǔ)理論1.保留值、分離度和柱效率分配系數(shù)（K）：溶質(zhì)在流動相的濃度溶質(zhì)在固定相的濃度msccKK因物質(zhì)不同而不同；K是溫度的函數(shù)；是色譜分離的基礎(chǔ)。K大的物質(zhì)在柱內(nèi)停留的時間長，反之則反。由于在柱中的多次平衡分配故K有微小差別的組分，在通過柱子后被擴大，從而被分離。30溶質(zhì)在流動相的量溶質(zhì)在

13、固定相的量msqqk分配比（k）：又稱容量因子。K與k之比較：/kVVkVmVmccKSmmmSSmS式中，為相比，為柱中流動相體積與固定相體積之比。它反映了柱型的特點：填充柱=635；毛細(xì)管柱=50-1500。1000RRRRRtttttk31wK和k與物質(zhì)及兩相的性質(zhì)有關(guān)；wK 與k都是溫度、壓力的函數(shù)；wK與兩相的體積無關(guān)；k與兩相的體積有關(guān)，即與相比有關(guān)；wK與k是衡量色譜柱對組分保留能力的參數(shù)；K與k值越大，保留時間越長；32分離度：相鄰色譜峰峰頂之間的距離除以此兩色譜峰的平均寬度。2121122)(2/1bbRbbRRstttR33柱效率：22/1)(54. 5RtN 2)(16b

14、RtNNLH 2)1(kkNN有效2)1(kkHH有效342.色譜理論模型色譜分離過程涉及到兩個方面：其一是色譜分離與物質(zhì)在兩相中的分配系數(shù)有關(guān)這由物質(zhì)（包括組分、流動相、固定相）的分子結(jié)構(gòu)和性質(zhì)決定這也就決定了各組分在柱后的出峰時間，即色譜過程中的熱力學(xué)因素；其二是色譜分離與物質(zhì)在柱內(nèi)的運動情況有關(guān)這由物質(zhì)在流動相和固定相間的傳質(zhì)阻力決定這也就決定了各組分色譜峰的形狀和區(qū)域?qū)挾?，即色譜過程的動力學(xué)因素。35 色譜理論包括兩方面色譜理論包括兩方面:熱力學(xué)理論熱力學(xué)理論：研究分配：研究分配(分離分離)過程，過程，塔板理論（塔板理論（plate theory）。）。動力學(xué)理論動力學(xué)理論：研究各種動

15、力學(xué)因：研究各種動力學(xué)因素對峰展寬的影響，速率理論素對峰展寬的影響，速率理論（rate theory）。）。36塔板理論 (the plate model) 1941年，Martin和Synge闡明了色譜、蒸餾和萃取之間的相似性，將色譜柱設(shè)想成由許多液液萃取單元或理論塔板組成；與精餾相似，色譜分離也是一個分配平衡過程。這就是Martin等人提出的塔板理論。37塔板理論基本假設(shè)l 色譜柱由一系列塔板組成色譜柱由一系列塔板組成l 塔板內(nèi)，組分在兩相間迅速達(dá)到平衡塔板內(nèi)，組分在兩相間迅速達(dá)到平衡（理想色譜）（理想色譜）l 組分的分配系數(shù)不隨它的濃度變化而組分的分配系數(shù)不隨它的濃度變化而變化（線性分布

16、等溫線）變化（線性分布等溫線）l 組分的軸向擴散為零組分的軸向擴散為零l 流動相的流動是跳躍過程流動相的流動是跳躍過程3839塔板理論方程：22/1)(54. 5RtN 若扣除死時間（體積）的影響，得到有效塔板數(shù)（n）和有效塔板高度(H)：222/11654. 5RRttN40w它們比理論塔板數(shù)及高度，能更有效地反映色譜分離好壞與塔板數(shù)和塔板高度之間的對應(yīng)關(guān)系。w一般說來，色譜柱的理論塔板數(shù)越大，表示組分在色譜柱中達(dá)到分配平衡的次數(shù)越多，越有利于分離，但不能說明組分間分離的好壞，因為分離好壞決定于各組分在流動相和固定相之間分配系數(shù)的差別，而不是分配次數(shù)的多少。41無論是有效還是理論塔板數(shù)不能作

17、為實際分離可能的依據(jù)。另一方面，塔板理論中有很多不合實際的假設(shè)，如：假定無縱向擴散、分配系數(shù)與濃度無關(guān)；再者，塔板理論不能解釋塔板高度是受哪些因素的影響及流動相不同流速下測得的理論塔板數(shù)不同的事實。因而它有一定的局限性。422速率理論速率理論1956年由荷蘭學(xué)者范弟姆特把影響塔板高度的動力學(xué)因素與塔板理論結(jié)合起來，導(dǎo)出了塔板高度與流動相線速關(guān)系的方程。認(rèn)為色譜峰的總擴張等于各獨立因素對擴張影響之和；色譜柱的總板高等于各獨立因素對板高貢獻(xiàn)之和。即w式中A、B、C為常數(shù)，A為渦流擴散項，B為分子擴散項系數(shù)，C為傳質(zhì)阻力項系數(shù)。CuuBAH43（1）渦流擴散項渦流擴散項在填充色譜柱中，當(dāng)組分隨流動相

18、向柱出口遷移時，流動相由于受到固定相顆粒障礙，不斷改變流動方向，使組分分子在前進(jìn)中形成紊亂的類似渦流的流動，故稱渦流擴散。填充柱的多孔性，引起的多徑性與填充物的顆粒直徑dp（cm）的大小和填充不均勻性有關(guān)。顆粒越大、填充越不均勻，渦流擴散就越嚴(yán)重，使板高增大。pdA 244（2）分子擴散項分子擴散項（又稱縱向擴散項）B/u 組分在固定相和流動相中的濃差分子擴散。流動相的線速在分子擴散項中使板高減小，但分子擴散項系數(shù)使板高增大。表明B與組分在流動相的擴散系數(shù)和彎曲因子有關(guān)。流動相的粘度和相對分子量越小，組分在其中的擴散系數(shù)越大；溫度越高擴散系數(shù)越大。彎曲因子與填充物有關(guān)，填充物的存在使分子自由擴

19、散的能力降低；填充物填充的均勻性對彎曲因子影響不是主要的，只要有填充物存在，影響流動相路徑彎曲的因素和減小分子擴散的因素就存在。gDB 245（3）傳質(zhì)阻力項傳質(zhì)阻力項Cu組分在固定相和流動相中移動的速率，包括：流動相和固定相傳質(zhì)阻力即兩相對組分分子運動能力的影響。若傳質(zhì)阻力大，就會引起組分分子的超前和滯后，從而引起色譜峰的擴張。對氣相色譜的填充柱而言，有：gpgDkdkC222101. 0lflDkkdC22132流動相傳質(zhì)阻力系數(shù) 固定相傳質(zhì)阻力系數(shù) 46范底姆特方程：uDkkdDkdkuDdHlfgpgp132101. 02222222該方程為氣相色譜的板高載氣線速方程，對分離條件的選擇

20、具有很好的指導(dǎo)作用，它說明了固定相粒度、填充均勻性、流動相種類及流速、柱溫、固定相的特性等對柱效及峰擴張的影響。由此方程得到板高對線速的曲線。476.5 6.5 典型制備色譜工藝及應(yīng)用典型制備色譜工藝及應(yīng)用1.模擬移動床色譜（SMBC）A 模擬移動床色譜技術(shù)，是模擬移動床技術(shù)與色譜分離技術(shù)的組合，是連續(xù)色譜的一種，屬吸附分離技術(shù)。它是一系列色譜柱的串聯(lián)，通過進(jìn)樣口與出樣口定期變更，模仿填料的逆流，故稱模擬移動床色譜。48模擬移動床（ SMB）色譜的工作原理 對于傳統(tǒng)的單柱色譜，假設(shè)是一個兩組分分離體系，當(dāng)脈沖進(jìn)樣后用適當(dāng)?shù)娜軇┫疵摃r就產(chǎn)生如圖的效果：一個物質(zhì)移動慢，另一個物質(zhì)移動快，當(dāng)色譜柱足

21、夠長時兩者將最終分開。49 在逆流模擬移動床的色譜分離系統(tǒng)中，可將固定相設(shè)想為是逆向于流體移動方向運動。待分離混合物在分離工作區(qū)中部的某一點被連續(xù)輸入。選定雙向流速比率，料液自入口處就分離成相互雙向流動的兩部分。以進(jìn)料入口為參考點，吸附介質(zhì)似乎吸附了產(chǎn)品向上移動，因此稱“模擬移動床(Simulation Moving Bed, 簡稱SMB)”。在進(jìn)料點以上的位置越高，產(chǎn)品純度就越高，而副產(chǎn)品卻是在相反方向富集。 5051SMB系統(tǒng)常可分為四個區(qū)，每區(qū)都有各自特有的流速。在相對于全程分離系統(tǒng)中，一旦達(dá)到穩(wěn)定的濃度曲線，它將會在再循環(huán)流的助動下緩慢流過系統(tǒng)。在系統(tǒng)分離中保持濃度穩(wěn)定是通過移動料液入

22、口和解吸劑注入進(jìn)口位置以及產(chǎn)品和副產(chǎn)品的出口位置來實現(xiàn)的，如下圖所示。進(jìn)出料位置的變換是由多孔旋轉(zhuǎn)閥或自控閥來實現(xiàn)的。 52移動床色譜示意圖53應(yīng)用實例（一）模擬移動床色譜提純槲皮素 原樣品譜圖 分離后產(chǎn)品譜圖54SMB的優(yōu)缺點：Y優(yōu)點：溶劑消耗大量減少；收集到的產(chǎn)品稀釋度?。惶盍细佑行Ю?。Y缺點：SMB是一種二元分離器，限制了它的應(yīng)用范圍；設(shè)備復(fù)雜，可能比HPLC更難使用和維護，一般要用816根性能相似的柱子，致使優(yōu)化提純條件更加復(fù)雜。55擴張床吸附（擴張床吸附（EBA）的操作步）的操作步驟驟包括平衡、進(jìn)料、淋洗、洗脫等步驟包括平衡、進(jìn)料、淋洗、洗脫等步驟進(jìn)料前必須實現(xiàn)穩(wěn)定擴張，進(jìn)料前必

23、須實現(xiàn)穩(wěn)定擴張，洗脫后進(jìn)行清洗，除去吸附洗脫后進(jìn)行清洗，除去吸附介質(zhì)上附著雜質(zhì)介質(zhì)上附著雜質(zhì)56未進(jìn)行未進(jìn)行操作，操作，介質(zhì)沉介質(zhì)沉降在柱降在柱下面下面開始操作，開始操作，泵入平衡泵入平衡液，實現(xiàn)液，實現(xiàn)穩(wěn)定擴張穩(wěn)定擴張切換到進(jìn)切換到進(jìn)料，泵入料，泵入料液，至料液，至吸附接近吸附接近飽和飽和擴張床吸附操作步驟擴張床吸附操作步驟切換到淋切換到淋洗，泵入洗，泵入淋洗液，淋洗液，洗除殘存洗除殘存雜質(zhì)雜質(zhì)洗脫，洗脫，可以改可以改變方向變方向從上至從上至下洗脫下洗脫再生再生清洗清洗57擴張度：（受流體流速影響）擴張度：（受流體流速影響）w流速低，擴張度小，原料液中的固體顆粒通過流速低，擴張度小，原料液中

24、的固體顆粒通過床層困難，易滯留。床層困難，易滯留。流速高，擴張度大，固體通過床層比較容易，流速高，擴張度大，固體通過床層比較容易，流速過高使介質(zhì)上的吸附配基流速過高使介質(zhì)上的吸附配基對目標(biāo)產(chǎn)物的捕集效率下降對目標(biāo)產(chǎn)物的捕集效率下降.一般控制流速：一般控制流速：3cm/h,擴張床高度是固定床的二倍擴張床高度是固定床的二倍.58床層高度增加床層高度增加(1) 進(jìn)料：進(jìn)料：原料液濃度、粘度、固體原料液濃度、粘度、固體顆粒含量與平衡液不同顆粒含量與平衡液不同流量計轉(zhuǎn)子位置流量計轉(zhuǎn)子位置保持恒定的擴張度保持恒定的擴張度調(diào)節(jié)流速調(diào)節(jié)流速床進(jìn)行穩(wěn)定擴張后，床進(jìn)行穩(wěn)定擴張后，平衡液切換成原料液平衡液切換成原料

25、液59在線檢測和分在線檢測和分析流出液中目析流出液中目標(biāo)蛋白濃度標(biāo)蛋白濃度確定進(jìn)料吸附終點確定進(jìn)料吸附終點預(yù)測目標(biāo)蛋白在柱預(yù)測目標(biāo)蛋白在柱中吸附飽和或近飽中吸附飽和或近飽和時停止進(jìn)料和時停止進(jìn)料在實際應(yīng)用中在實際應(yīng)用中60(2) 淋洗淋洗多采用擴張床淋洗多采用擴張床淋洗a.目的：目的： 除去柱內(nèi)滯留的除去柱內(nèi)滯留的細(xì)胞或細(xì)胞碎片細(xì)胞或細(xì)胞碎片 洗去部分吸附洗去部分吸附不牢的雜蛋白不牢的雜蛋白b.淋洗緩沖液淋洗緩沖液粘度高粘度高利于床層穩(wěn)定，利于床層穩(wěn)定，利于流體以平推流流過床層，利于流體以平推流流過床層，較有效除去雜質(zhì)顆粒較有效除去雜質(zhì)顆粒61 固定床洗脫固定床洗脫利于目標(biāo)蛋白濃縮利于目標(biāo)蛋白

26、濃縮 擴張床洗脫擴張床洗脫可以直接從擴張床淋可以直接從擴張床淋洗切換，節(jié)省時間洗切換，節(jié)省時間(3) 洗脫洗脫（I）床選擇）床選擇-固定床固定床/擴張床擴張床（II）洗脫劑選擇）洗脫劑選擇取決于吸附介質(zhì)配基與目標(biāo)產(chǎn)物相互作用特性取決于吸附介質(zhì)配基與目標(biāo)產(chǎn)物相互作用特性介質(zhì)配基介質(zhì)配基產(chǎn)物產(chǎn)物吸附特異性強吸附特異性強一種洗脫液一種洗脫液特異性差（離子交換特異性差（離子交換和疏水作用介質(zhì)）和疏水作用介質(zhì)）分段洗脫分段洗脫/梯度洗脫梯度洗脫62(4）再生和清洗）再生和清洗非特異性吸附，使介質(zhì)上吸附非特異性吸附，使介質(zhì)上吸附細(xì)胞、細(xì)胞碎片或雜蛋白細(xì)胞、細(xì)胞碎片或雜蛋白.每個操作周期末，都要清每個操作周

27、期末，都要清洗，恢復(fù)介質(zhì)吸附容量洗，恢復(fù)介質(zhì)吸附容量降低介質(zhì)吸附容量降低介質(zhì)吸附容量清洗操作：清洗操作：u 對于擴張床，洗脫結(jié)對于擴張床，洗脫結(jié)束后，把床層擴張到堆束后，把床層擴張到堆積高度積高度5倍左右，倍左右，u 提高清洗液的提高清洗液的流速，沖去介質(zhì)流速，沖去介質(zhì)附著雜質(zhì)附著雜質(zhì)u 清洗液為偏酸、偏清洗液為偏酸、偏堿、含有有機溶劑或堿、含有有機溶劑或表面活性劑表面活性劑u 清洗時間一般為清洗時間一般為3小時小時63吸附介質(zhì)吸附介質(zhì)擴張床介質(zhì)易在流體自上而下的流動場中懸浮，并實現(xiàn)擴張床介質(zhì)易在流體自上而下的流動場中懸浮，并實現(xiàn)穩(wěn)定。穩(wěn)定。1) 介質(zhì)物性：介質(zhì)顆粒尺寸及分布、密度及透水性。介質(zhì)物性：介質(zhì)顆粒尺寸及分布、密度及透水性。流體流速和床擴張度流體流速和床擴張度松散床層高度要求到達(dá)堆積高度松散床層高度要求到達(dá)堆積高度23倍倍2) 應(yīng)用介質(zhì)應(yīng)用介質(zhì)u高交聯(lián)度瓊脂糖凝膠：高交聯(lián)度瓊脂糖凝膠： 適合吸附蛋白質(zhì)類大分子，密度小，不易形成適合吸附蛋白質(zhì)類大分子，密度小，不易形成 穩(wěn)定擴張床。穩(wěn)定擴張床。u全氟碳化物乳膠：全氟碳化物乳膠： 密度高，化學(xué)穩(wěn)定性密度高，化學(xué)穩(wěn)定性/生物相容性好，實心介生物相容性好，實心介 質(zhì)，比表面積小，不易形成穩(wěn)定擴張床質(zhì)，比表面積小，不易形成穩(wěn)定擴張床.64u Streamline介質(zhì)（介質(zhì)（Ph