實(shí)驗(yàn)二 細(xì)菌人工培養(yǎng)PPT學(xué)習(xí)教案

1、會(huì)計(jì)學(xué)1實(shí)驗(yàn)二實(shí)驗(yàn)二 細(xì)菌人工培養(yǎng)細(xì)菌人工培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶?shí)驗(yàn)?zāi)康膎了解人工培養(yǎng)基的制作。了解人工培養(yǎng)基的制作。n了解了解細(xì)菌的接種方法細(xì)菌的接種方法 分離培養(yǎng)方法分離培養(yǎng)方法平板劃線法平板劃線法 （混合菌液）（混合菌液）n了解了解細(xì)菌的生長現(xiàn)象細(xì)菌的生長現(xiàn)象 液體、固體、半固體培養(yǎng)基液體、固體、半固體培養(yǎng)基第1頁/共22頁 一、一、人工培養(yǎng)基的制備和種類人工培養(yǎng)基的制備和種類n1. 1.制備原則制備原則n2.2.制備程序制備程序 n3.3.常用培養(yǎng)基的分類常用培養(yǎng)基的分類 第2頁/共22頁第3頁/共22頁配制方法配制方法（1）稱量）稱量 分別稱取所需量的胰化蛋白胨、酵母提取物和分別稱取所需量的胰

2、化蛋白胨、酵母提取物和NaCl，置于燒杯中。置于燒杯中。（2）溶化）溶化 加入所需水量加入所需水量2/3的蒸餾水于燒杯中，用玻棒攪拌，使的蒸餾水于燒杯中，用玻棒攪拌，使藥品全部溶化。藥品全部溶化。（3）調(diào)）調(diào)pH 用用1mol/L NaOH溶液調(diào)溶液調(diào)pH至至7.2。（4）定容）定容 將溶液倒入量筒中，加水至所需體積。將溶液倒入量筒中，加水至所需體積。（5）加瓊脂）加瓊脂 加入所需量瓊脂，加熱融化，補(bǔ)足失水。加入所需量瓊脂，加熱融化，補(bǔ)足失水。（6）分裝、加塞、包扎。）分裝、加塞、包扎。（7）高壓蒸汽滅菌）高壓蒸汽滅菌100Pa滅菌滅菌20min。LBLB培養(yǎng)基的配制：培養(yǎng)基的配制：成分：胰蛋

3、白胨成分：胰蛋白胨(tryptone) 10g、酵母提取物、酵母提取物(yeast extract) 5g氯化鈉氯化鈉(NaCl) 10g、固體培養(yǎng)基另加、固體培養(yǎng)基另加 瓊脂粉瓊脂粉 15-20g，加雙蒸水，加雙蒸水至至1000mL, 用用5mol/L NaOH（約（約0.2ml）調(diào)）調(diào)pH至至7.2，121滅菌滅菌30min。第4頁/共22頁按物理狀態(tài)不同劃分按物理狀態(tài)不同劃分固體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基 液體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基在液體培養(yǎng)基中加入一定量凝固劑，在液體培養(yǎng)基中加入一定量凝固劑，使其成為固體狀態(tài)，瓊脂含量一般為使其成為固體狀態(tài)，瓊脂含量一般為1.5%-2.0%1.5%-2.0%瓊脂含量一

4、般為瓊脂含量一般為0.3%-0.5%不加任何不加任何凝固劑凝固劑半固體培養(yǎng)半固體培養(yǎng)基基固體培養(yǎng)基常用來進(jìn)行微生物的分離、固體培養(yǎng)基常用來進(jìn)行微生物的分離、鑒定、活菌計(jì)數(shù)及菌種保藏鑒定、活菌計(jì)數(shù)及菌種保藏 觀察微生物的運(yùn)動(dòng)特征、分類鑒定及觀察微生物的運(yùn)動(dòng)特征、分類鑒定及噬菌體效價(jià)滴定噬菌體效價(jià)滴定 用于增菌，大規(guī)模工業(yè)生產(chǎn)及在實(shí)驗(yàn)用于增菌，大規(guī)模工業(yè)生產(chǎn)及在實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行微生物的研究室進(jìn)行微生物的研究 第5頁/共22頁按用途不同劃分按用途不同劃分基礎(chǔ)培養(yǎng)基基礎(chǔ)培養(yǎng)基鑒別培養(yǎng)基鑒別培養(yǎng)基含有一般微生物生長繁殖所需的基本營養(yǎng)物。含有一般微生物生長繁殖所需的基本營養(yǎng)物。比如比如 肉湯培養(yǎng)基。肉湯培養(yǎng)基。

5、選擇培養(yǎng)基選擇培養(yǎng)基利用細(xì)菌代謝產(chǎn)物不同而使指示劑顯色反應(yīng)利用細(xì)菌代謝產(chǎn)物不同而使指示劑顯色反應(yīng)不同的原理，鑒別和鑒定細(xì)菌。如不同的原理，鑒別和鑒定細(xì)菌。如麥糠凱瓊麥糠凱瓊脂培養(yǎng)基。脂培養(yǎng)基。營養(yǎng)培養(yǎng)基營養(yǎng)培養(yǎng)基在培養(yǎng)基中加入相應(yīng)的特殊營養(yǎng)物質(zhì)或化學(xué)在培養(yǎng)基中加入相應(yīng)的特殊營養(yǎng)物質(zhì)或化學(xué)物質(zhì)，抑制不需要的微生物的生長，有利于物質(zhì)，抑制不需要的微生物的生長，有利于所需微生物的生長。所需微生物的生長。用來將某種或某類微生用來將某種或某類微生物從混雜的微生物群體中分離出來。物從混雜的微生物群體中分離出來。如如SS瓊瓊脂培養(yǎng)基。脂培養(yǎng)基。在基礎(chǔ)培養(yǎng)基中加入某些特殊營養(yǎng)物質(zhì)制成的在基礎(chǔ)培養(yǎng)基中加入某些特

6、殊營養(yǎng)物質(zhì)制成的一類營養(yǎng)豐富的培養(yǎng)基。如一類營養(yǎng)豐富的培養(yǎng)基。如血瓊脂培養(yǎng)基。血瓊脂培養(yǎng)基。特殊培養(yǎng)基特殊培養(yǎng)基如厭氧培養(yǎng)基。如厭氧培養(yǎng)基。用于厭氧菌的培養(yǎng)。用于厭氧菌的培養(yǎng)。第6頁/共22頁第7頁/共22頁無菌操作：無菌操作：在無菌箱或操作室內(nèi)無菌的環(huán)境下進(jìn)行在無菌箱或操作室內(nèi)無菌的環(huán)境下進(jìn)行第8頁/共22頁第9頁/共22頁圖6第10頁/共22頁 第11頁/共22頁 1、以無菌操作用接種環(huán)取待分離純化的菌液，將菌液點(diǎn)種在、以無菌操作用接種環(huán)取待分離純化的菌液，將菌液點(diǎn)種在平板邊緣一處，取出接種環(huán)，燒去多余的菌種。平板邊緣一處，取出接種環(huán)，燒去多余的菌種。 2、將接種環(huán)再次通過稍打開皿蓋的縫隙

7、（約、將接種環(huán)再次通過稍打開皿蓋的縫隙（約45度角）伸入平度角）伸入平板，在平板邊緣空白處接觸一下使接種環(huán)冷卻板，在平板邊緣空白處接觸一下使接種環(huán)冷卻,然后從接種有然后從接種有菌的部位在平板上自左向右輕輕劃線。菌的部位在平板上自左向右輕輕劃線。 3、劃線時(shí)平板面與接種環(huán)面成、劃線時(shí)平板面與接種環(huán)面成30-40度角，以手腕力量在平板度角，以手腕力量在平板表面輕巧滑動(dòng)劃線表面輕巧滑動(dòng)劃線, 線條要平行密集，充分利用平板表面積，線條要平行密集，充分利用平板表面積，注意勿使前后兩條線重疊，劃線完畢，關(guān)上皿蓋注意勿使前后兩條線重疊，劃線完畢，關(guān)上皿蓋.灼燒接種環(huán)。灼燒接種環(huán)。 4.用接種環(huán)先將培養(yǎng)物涂布

8、于平板用接種環(huán)先將培養(yǎng)物涂布于平板1區(qū)并作數(shù)次劃線區(qū)并作數(shù)次劃線,再在再在2、3區(qū)依次劃線。區(qū)依次劃線。 5.每劃完一個(gè)區(qū)域，均將接種環(huán)滅菌一次，待冷后再劃下一區(qū)每劃完一個(gè)區(qū)域，均將接種環(huán)滅菌一次，待冷后再劃下一區(qū)域域 6.每一區(qū)域的劃線均接觸上一區(qū)域的接種線每一區(qū)域的劃線均接觸上一區(qū)域的接種線12次，使接種量次，使接種量逐漸減少，以獲得單個(gè)菌落。其他操作與上述曲線劃線分離逐漸減少，以獲得單個(gè)菌落。其他操作與上述曲線劃線分離法相同。法相同。 斜線斜線( (分區(qū)分區(qū)) )劃線分離法劃線分離法第12頁/共22頁第13頁/共22頁純種細(xì)菌接種法純種細(xì)菌接種法 第14頁/共22頁純種細(xì)菌接種法純種細(xì)菌接種法 第15頁/共22頁 純種細(xì)菌接種法純種細(xì)菌接種法 第16頁/共22頁三三. .細(xì)菌生長