放射免疫檢測(cè)技術(shù)

1、放射免疫檢測(cè)技術(shù)基本內(nèi)容基本內(nèi)容一、一、放射免疫檢測(cè)技術(shù)的基本原理放射免疫檢測(cè)技術(shù)的基本原理二、二、放射免疫分析（放射免疫分析（RIA）三、三、免疫放射分析（免疫放射分析（IRMA）四、四、RIA與與IRMA的比較的比較五、放射免疫分析中造成測(cè)量誤差的因素五、放射免疫分析中造成測(cè)量誤差的因素六、核廢物的處理六、核廢物的處理七、應(yīng)用七、應(yīng)用八、課堂小結(jié)八、課堂小結(jié)九、作業(yè)九、作業(yè)一、放射免疫檢測(cè)技術(shù)的基本原理一、放射免疫檢測(cè)技術(shù)的基本原理1、7個(gè)基本概念個(gè)基本概念2、常用的放射性核素、常用的放射性核素3、放射性核素的選擇原則、放射性核素的選擇原則4、放射性標(biāo)記的抗原或抗體的要求、放射性標(biāo)記的抗原

2、或抗體的要求5、制備放射性核素標(biāo)記物、制備放射性核素標(biāo)記物6、放射性標(biāo)記物的純化、放射性標(biāo)記物的純化7、理想的分離技術(shù)、理想的分離技術(shù)8、免疫復(fù)合物分離常用方法、免疫復(fù)合物分離常用方法9、核射線探測(cè)儀器的探測(cè)原理、核射線探測(cè)儀器的探測(cè)原理1、7個(gè)基本概念個(gè)基本概念放射性核素放射性核素：是指原子核能自發(fā)地產(chǎn)生成分或是指原子核能自發(fā)地產(chǎn)生成分或能級(jí)的變化，能級(jí)的變化，在在變化時(shí)伴有射線的發(fā)射變化時(shí)伴有射線的發(fā)射（放射（放射性），性），然后變成另一種然后變成另一種元素的元素的核素。核素。 一、放射免疫檢測(cè)技術(shù)的基本原理一、放射免疫檢測(cè)技術(shù)的基本原理放射量單位有放射量單位有: 放射性活度放射性活度 放

3、射性比活度放射性比活度 放射性濃度放射性濃度1、7個(gè)基本概念個(gè)基本概念放射性活度放射性活度：一定量的放射性核素在一定量的放射性核素在單位時(shí)間內(nèi)的核衰變數(shù)，即每秒單位時(shí)間內(nèi)的核衰變數(shù)，即每秒核核衰變衰變次數(shù)次數(shù)。單位：?jiǎn)挝唬贺惪衫諣栘惪衫諣?Becquerel，Bq) 1Ci=3.71010Bq 一、放射免疫檢測(cè)技術(shù)的基本原理一、放射免疫檢測(cè)技術(shù)的基本原理1、7個(gè)基本概念個(gè)基本概念放射性比活度放射性比活度：是指是指固體樣品固體樣品的放射的放射性活度，即性活度，即單位質(zhì)量樣品中所含放射性單位質(zhì)量樣品中所含放射性活度，以活度，以Bq/g或或Bq/mmol表示表示 。放射性濃度放射性濃度：是指是指液體

4、樣品液體樣品的放射性的放射性活度，即活度，即單位體積溶液中所含放射性活單位體積溶液中所含放射性活度，以度，以Bq/ml表示。表示。一、放射免疫檢測(cè)技術(shù)的基本原理一、放射免疫檢測(cè)技術(shù)的基本原理1、7個(gè)基本概念個(gè)基本概念比活度：比活度：是是單位質(zhì)量單位質(zhì)量標(biāo)記物的放射強(qiáng)度，標(biāo)記物的放射強(qiáng)度，單位為單位為Bq/ g。 標(biāo)記抗原的比放射性越高，所需標(biāo)記標(biāo)記抗原的比放射性越高，所需標(biāo)記抗原量越少，實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)的敏感度越高?？乖吭缴?，實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)的敏感度越高。 但過(guò)高的比放射性可能會(huì)損傷抗原的但過(guò)高的比放射性可能會(huì)損傷抗原的免疫活性。如碘標(biāo)記化合物以單碘標(biāo)記為免疫活性。如碘標(biāo)記化合物以單碘標(biāo)記為宜。宜。 一、放

5、射免疫檢測(cè)技術(shù)的基本原理一、放射免疫檢測(cè)技術(shù)的基本原理1、7個(gè)基本概念個(gè)基本概念放射化學(xué)純度：放射化學(xué)純度：是指結(jié)合于抗原上的放是指結(jié)合于抗原上的放射強(qiáng)度占總放射強(qiáng)度的百分率。射強(qiáng)度占總放射強(qiáng)度的百分率。 影響因素影響因素: :被標(biāo)記物不純，雜質(zhì)也被放射性核素標(biāo)被標(biāo)記物不純，雜質(zhì)也被放射性核素標(biāo)記；記；標(biāo)記后的分離純化不完全；標(biāo)記后的分離純化不完全；標(biāo)記化合物貯存過(guò)程中的碘脫落。標(biāo)記化合物貯存過(guò)程中的碘脫落。一、放射免疫檢測(cè)技術(shù)的基本原理一、放射免疫檢測(cè)技術(shù)的基本原理1、7個(gè)基本概念個(gè)基本概念免疫活性：免疫活性：指標(biāo)記抗原結(jié)合于抗體的指標(biāo)記抗原結(jié)合于抗體的放射強(qiáng)度占總放射強(qiáng)度的百分率。放射強(qiáng)度

6、占總放射強(qiáng)度的百分率。 以以檢查標(biāo)記后免疫活性損失檢查標(biāo)記后免疫活性損失情況情況。一、放射免疫檢測(cè)技術(shù)的基本原理一、放射免疫檢測(cè)技術(shù)的基本原理2、常用的放射性核素：、常用的放射性核素： 放射性核素依據(jù)放射性核素依據(jù)衰變方式分衰變方式分、三三種，用于放射性標(biāo)記的有種，用于放射性標(biāo)記的有和和兩類兩類;分別分別用用液體閃爍計(jì)數(shù)器液體閃爍計(jì)數(shù)器及及計(jì)數(shù)器計(jì)數(shù)器測(cè)定。測(cè)定。 型：型：3 3H H（最常用）、（最常用）、1414C C和和3232P P。 型：型：125125I I（最常用）、（最常用）、131131I I、5151CrCr和和6060CoCo。一、放射免疫檢測(cè)技術(shù)的基本原理一、放射免疫檢

7、測(cè)技術(shù)的基本原理125I和和3H標(biāo)記物特點(diǎn)比較標(biāo)記物特點(diǎn)比較 125125I I標(biāo)記物標(biāo)記物3 3H H標(biāo)記物標(biāo)記物標(biāo)記方法標(biāo)記方法方法簡(jiǎn)便，易獲得高方法簡(jiǎn)便，易獲得高比放射性標(biāo)記物比放射性標(biāo)記物方法較難，不易獲得高方法較難，不易獲得高比放射性標(biāo)記物比放射性標(biāo)記物對(duì)標(biāo)記化合對(duì)標(biāo)記化合物影響物影響標(biāo)記時(shí)以標(biāo)記時(shí)以I I代替代替H1H1改變改變物質(zhì)結(jié)構(gòu)，可影響抗物質(zhì)結(jié)構(gòu)，可影響抗原免疫學(xué)活性原免疫學(xué)活性不改變抗原結(jié)構(gòu)，一般不改變抗原結(jié)構(gòu)，一般不影響抗原免疫活性不影響抗原免疫活性測(cè)量方法測(cè)量方法方法簡(jiǎn)便、效率高方法簡(jiǎn)便、效率高方法復(fù)雜，效率低方法復(fù)雜，效率低測(cè)量?jī)x器測(cè)量?jī)x器計(jì)數(shù)器計(jì)數(shù)器液體閃爍計(jì)數(shù)器

8、液體閃爍計(jì)數(shù)器半衰期半衰期60.260.2天天約約1111年年廢棄物廢棄物處理容易處理容易較難較難3、放射性核素選擇原則放射性核素選擇原則 高比活度、適宜半衰期、對(duì)抗原或抗高比活度、適宜半衰期、對(duì)抗原或抗體沒(méi)損害體沒(méi)損害、容易標(biāo)記。容易標(biāo)記。4、放射性放射性標(biāo)記的抗原標(biāo)記的抗原或抗體的或抗體的要求要求 純度高純度高、靈敏、靈敏、有足夠或完整的免疫有足夠或完整的免疫活性活性、高親和常數(shù)、高親和常數(shù)、特異性強(qiáng)、特異性強(qiáng)、交叉反應(yīng)交叉反應(yīng)率低。率低。一、放射免疫檢測(cè)技術(shù)的基本原理一、放射免疫檢測(cè)技術(shù)的基本原理5、制備放射性核素標(biāo)記物、制備放射性核素標(biāo)記物直接標(biāo)記法直接標(biāo)記法 將將125I直接結(jié)合在蛋

9、白質(zhì)側(cè)鏈的直接結(jié)合在蛋白質(zhì)側(cè)鏈的酪氨酸殘酪氨酸殘基苯環(huán)基苯環(huán)上，形成單碘酪氨酸或雙碘酪氨酸。上，形成單碘酪氨酸或雙碘酪氨酸。 操作簡(jiǎn)便，結(jié)合效率高，但只能標(biāo)記含酪氨操作簡(jiǎn)便，結(jié)合效率高，但只能標(biāo)記含酪氨酸的化合物，有時(shí)可能會(huì)損害蛋白質(zhì)的活性酸的化合物，有時(shí)可能會(huì)損害蛋白質(zhì)的活性。間接標(biāo)記法間接標(biāo)記法 先將放射性碘連接到一個(gè)先將放射性碘連接到一個(gè)小分子載體小分子載體上上，再將這個(gè)小分子載體與蛋白質(zhì)結(jié)合。，再將這個(gè)小分子載體與蛋白質(zhì)結(jié)合。一、放射免疫檢測(cè)技術(shù)的基本原理一、放射免疫檢測(cè)技術(shù)的基本原理 6、放射性標(biāo)記物的純化放射性標(biāo)記物的純化 可用可用葡聚糖凝膠過(guò)濾法葡聚糖凝膠過(guò)濾法或或薄層層析法薄層

10、層析法、紙層析法紙層析法、電泳法電泳法、高效液相層析法高效液相層析法等。等。 理想的放射性標(biāo)記物理想的放射性標(biāo)記物： 高放射化學(xué)純度高放射化學(xué)純度 適當(dāng)?shù)谋确派湫赃m當(dāng)?shù)谋确派湫?高的高的免疫活性。免疫活性。 一、放射免疫檢測(cè)技術(shù)的基本原理一、放射免疫檢測(cè)技術(shù)的基本原理7、理想的分離技術(shù)理想的分離技術(shù)簡(jiǎn)便易行，適于大批量樣品分析簡(jiǎn)便易行，適于大批量樣品分析;分離效果完全、快速，非特異結(jié)合低分離效果完全、快速，非特異結(jié)合低;試劑來(lái)源容易、價(jià)格低廉、穩(wěn)定性好、可長(zhǎng)試劑來(lái)源容易、價(jià)格低廉、穩(wěn)定性好、可長(zhǎng)期保存期保存; 不受外界因素和樣品中其他組分的干擾，對(duì)不受外界因素和樣品中其他組分的干擾，對(duì)標(biāo)準(zhǔn)品和

11、待測(cè)抗原分離效果相同標(biāo)準(zhǔn)品和待測(cè)抗原分離效果相同;適合自動(dòng)化分析的要求。適合自動(dòng)化分析的要求。 一、放射免疫檢測(cè)技術(shù)的基本原理一、放射免疫檢測(cè)技術(shù)的基本原理8、免疫復(fù)合物分離常用方法免疫復(fù)合物分離常用方法.吸附法吸附法 用吸附劑用吸附劑 (如活性炭如活性炭)吸附小分子的游離。吸附小分子的游離。.化學(xué)沉淀法化學(xué)沉淀法 RIA反應(yīng)條件接近抗體的等電點(diǎn)，加入聚乙二醇反應(yīng)條件接近抗體的等電點(diǎn)，加入聚乙二醇(PEG)等蛋白質(zhì)沉淀等蛋白質(zhì)沉淀劑可破壞蛋白分子表面的水化層而使蛋白沉淀，從而分離劑可破壞蛋白分子表面的水化層而使蛋白沉淀，從而分離B與與F。.雙抗體法雙抗體法 利用抗抗體和利用抗抗體和Ag-Ab復(fù)

12、合物中的抗體結(jié)合，形成更大免疫復(fù)合物，復(fù)合物中的抗體結(jié)合，形成更大免疫復(fù)合物，離心沉淀即可分離離心沉淀即可分離B與與F。.PR試劑試劑 將雙抗體法和將雙抗體法和PEG結(jié)合起來(lái)的沉淀法，可彌補(bǔ)各自的不足，分離效果結(jié)合起來(lái)的沉淀法，可彌補(bǔ)各自的不足，分離效果好，適用范圍廣。好，適用范圍廣。.固相分離法固相分離法 將抗體或抗原結(jié)合在固相載體（如磁顆粒、聚苯烯管子或珠等）上，將抗體或抗原結(jié)合在固相載體（如磁顆粒、聚苯烯管子或珠等）上，利用固相抗體或抗原分離利用固相抗體或抗原分離B和和F，具有簡(jiǎn)便、快速、適合于自動(dòng)化分析等，具有簡(jiǎn)便、快速、適合于自動(dòng)化分析等特點(diǎn)，已逐步取代傳統(tǒng)的液相分離方法。特點(diǎn)，已逐

13、步取代傳統(tǒng)的液相分離方法。一、放射免疫檢測(cè)技術(shù)的基本原理一、放射免疫檢測(cè)技術(shù)的基本原理9、核射線探測(cè)儀器核射線探測(cè)儀器的探測(cè)原理的探測(cè)原理 核射線探測(cè)器是個(gè)能量轉(zhuǎn)化器，其檢測(cè)原理是當(dāng)射線作用于閃爍體，閃爍體吸收了射線的能量而引起閃爍體中的原子或分子激發(fā)，當(dāng)受激的原子或分子退激時(shí)，則發(fā)出光子進(jìn)入光電倍增管光陰極，轉(zhuǎn)換為光電子，光電子在光電倍增管電場(chǎng)作用下到達(dá)陽(yáng)極，形成電脈沖。 轉(zhuǎn)換模式：放射能轉(zhuǎn)換模式：放射能光能光能電電能能脈沖。脈沖。一、放射免疫檢測(cè)技術(shù)的基本原理一、放射免疫檢測(cè)技術(shù)的基本原理二、放射免疫分析（二、放射免疫分析（RIA）1、基本原理基本原理 抗原抗體競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合反應(yīng)，即待測(cè)抗原抗

14、原抗體競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合反應(yīng)，即待測(cè)抗原(Ag)和定量的標(biāo)記抗原和定量的標(biāo)記抗原(Ag)與限量的抗體與限量的抗體(Ab)進(jìn)行特異性反應(yīng)，其中進(jìn)行特異性反應(yīng)，其中Ab的結(jié)合位點(diǎn)數(shù)的結(jié)合位點(diǎn)數(shù)小于小于AgAg的結(jié)合位點(diǎn)總數(shù)，則的結(jié)合位點(diǎn)總數(shù)，則Ag和和Ag與與Ab發(fā)生競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合。如待測(cè)發(fā)生競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合。如待測(cè)Ag含量多，則含量多，則Ag-Ab復(fù)合物形成得多，復(fù)合物形成得多，Ag-Ab復(fù)合物復(fù)合物 (B)形成少，游離的形成少，游離的Ag（F）多，反之亦然。）多，反之亦然。 二、放射免疫分析（二、放射免疫分析（RIA）2、分類、分類 根據(jù)加樣順序不同，根據(jù)加樣順序不同，RIA可分為可分為2個(gè)類型：個(gè)類型： 平衡

15、法平衡法 將將Ag和和Ag同時(shí)與同時(shí)與Ab反應(yīng)，達(dá)到平衡后反應(yīng)，達(dá)到平衡后分離分離Ag-Ab和和Ag，方法穩(wěn)定，但敏感度，方法穩(wěn)定，但敏感度稍差；稍差； 順序飽和法順序飽和法 先將待測(cè)先將待測(cè)Ag與與Ab充分反應(yīng)，達(dá)平衡后再加充分反應(yīng)，達(dá)平衡后再加入入Ag，敏感度提高，穩(wěn)定性不如平衡法。，敏感度提高，穩(wěn)定性不如平衡法。二、放射免疫分析（二、放射免疫分析（RIA）3、數(shù)據(jù)處理數(shù)據(jù)處理根據(jù)放射性核素的類型分別選用液體閃爍計(jì)數(shù)儀（根據(jù)放射性核素的類型分別選用液體閃爍計(jì)數(shù)儀（型）和型）和計(jì)數(shù)儀（計(jì)數(shù)儀（型），測(cè)定型），測(cè)定各待測(cè)標(biāo)本和備抗原標(biāo)準(zhǔn)品的各待測(cè)標(biāo)本和備抗原標(biāo)準(zhǔn)品的Ag-Ab放射性強(qiáng)度放射性強(qiáng)

16、度 (B)或游離或游離Ag放射性強(qiáng)度放射性強(qiáng)度 (F)。制作標(biāo)準(zhǔn)曲線制作標(biāo)準(zhǔn)曲線時(shí)，縱坐標(biāo)為放射性反應(yīng)參數(shù)，有各種表示方時(shí)，縱坐標(biāo)為放射性反應(yīng)參數(shù)，有各種表示方式，可選用式，可選用B/F、B/（BF）、）、F/B、B/B0（零標(biāo)準(zhǔn)管）（零標(biāo)準(zhǔn)管）等比值等比值或或B或或F的的cpm（脈沖）（脈沖）值，常選用值，常選用B/B0比值作為參數(shù)。橫比值作為參數(shù)。橫坐標(biāo)為已知測(cè)定物標(biāo)準(zhǔn)品的濃度，以算術(shù)數(shù)或?qū)?shù)表示。放坐標(biāo)為已知測(cè)定物標(biāo)準(zhǔn)品的濃度，以算術(shù)數(shù)或?qū)?shù)表示。放射免疫分析的標(biāo)準(zhǔn)曲線為雙曲線射免疫分析的標(biāo)準(zhǔn)曲線為雙曲線。根據(jù)待測(cè)抗原管的放射性強(qiáng)度計(jì)算相應(yīng)反應(yīng)參數(shù)值，再根據(jù)待測(cè)抗原管的放射性強(qiáng)度計(jì)算相應(yīng)

17、反應(yīng)參數(shù)值，再?gòu)臉?biāo)從標(biāo)準(zhǔn)曲線圖上查得待測(cè)抗原相應(yīng)含量準(zhǔn)曲線圖上查得待測(cè)抗原相應(yīng)含量。二、放射免疫分析（二、放射免疫分析（RIA）RIA標(biāo)準(zhǔn)曲線的類型標(biāo)準(zhǔn)曲線的類型 （1）以測(cè)定物標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)，）以測(cè)定物標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)，B%或或B/F、B/B0、計(jì)數(shù)（、計(jì)數(shù)（cpm） 為縱坐標(biāo)，呈雙曲函數(shù)；為縱坐標(biāo)，呈雙曲函數(shù)；（2）以測(cè)定物標(biāo)準(zhǔn)品濃度的對(duì)數(shù)為橫坐標(biāo)，）以測(cè)定物標(biāo)準(zhǔn)品濃度的對(duì)數(shù)為橫坐標(biāo)，B%或或B/F、B/B0、cpm為為 縱坐標(biāo)，曲線呈反縱坐標(biāo)，曲線呈反S型；型； (3）以標(biāo)準(zhǔn)品濃度的算術(shù)數(shù)（或?qū)?shù)）為橫坐標(biāo)，）以標(biāo)準(zhǔn)品濃度的算術(shù)數(shù)（或?qū)?shù)）為橫坐標(biāo)，F(xiàn)/B（或（或B0/B） 為縱坐

18、標(biāo)，呈雙曲函數(shù)；為縱坐標(biāo)，呈雙曲函數(shù)；（4）以標(biāo)準(zhǔn)品濃度的對(duì)數(shù)為橫坐標(biāo)，）以標(biāo)準(zhǔn)品濃度的對(duì)數(shù)為橫坐標(biāo)， logitB/B0為縱坐標(biāo)，為縱坐標(biāo)， 標(biāo)準(zhǔn)曲線為從左到右的漸降直線。標(biāo)準(zhǔn)曲線為從左到右的漸降直線。4 4、方法學(xué)評(píng)價(jià)、方法學(xué)評(píng)價(jià)優(yōu)點(diǎn)優(yōu)點(diǎn)敏感度高，能測(cè)到敏感度高，能測(cè)到g/Lg/L，甚至可測(cè)到，甚至可測(cè)到ng/Lng/L或或pg/pg/水平；水平；特異性強(qiáng)，與結(jié)構(gòu)類似物質(zhì)間的交叉反應(yīng)少；特異性強(qiáng)，與結(jié)構(gòu)類似物質(zhì)間的交叉反應(yīng)少；準(zhǔn)確性好，重復(fù)性好，批間批內(nèi)誤差低；準(zhǔn)確性好，重復(fù)性好，批間批內(nèi)誤差低；用血量少。用血量少。缺點(diǎn)缺點(diǎn)有放射性核素對(duì)環(huán)境和實(shí)驗(yàn)室污染；有放射性核素對(duì)環(huán)境和實(shí)驗(yàn)室污染；放

19、射性核素易衰變以及放射性標(biāo)記物不穩(wěn)定，放射性核素易衰變以及放射性標(biāo)記物不穩(wěn)定，導(dǎo)致試劑有效期短。導(dǎo)致試劑有效期短。二、放射免疫分析（二、放射免疫分析（RIA）三三、免疫放射分析、免疫放射分析（IRMA）1、原理原理 屬于非競(jìng)爭(zhēng)性免疫結(jié)合反應(yīng)。是將放屬于非競(jìng)爭(zhēng)性免疫結(jié)合反應(yīng)。是將放射性同位素標(biāo)記在抗體上，用過(guò)量的標(biāo)記射性同位素標(biāo)記在抗體上，用過(guò)量的標(biāo)記抗體抗體(Ab)與待測(cè)抗原反應(yīng)，反應(yīng)式為與待測(cè)抗原反應(yīng)，反應(yīng)式為Ag+Ab=Ag-Ab+ Ab。待充分反應(yīng)后。待充分反應(yīng)后，除去游離的標(biāo)記抗體，除去游離的標(biāo)記抗體，Ag-Ab結(jié)合物的結(jié)合物的放射性強(qiáng)度與待測(cè)抗原量呈正比關(guān)系，即放射性強(qiáng)度與待測(cè)抗原量

20、呈正比關(guān)系，即待測(cè)抗原含量越多，則復(fù)合物的計(jì)數(shù)率就待測(cè)抗原含量越多，則復(fù)合物的計(jì)數(shù)率就越高，反之則越低。越高，反之則越低。2、技術(shù)路線、技術(shù)路線 抗體包被反應(yīng)管抗體包被反應(yīng)管待測(cè)抗原待測(cè)抗原過(guò)量過(guò)量的的標(biāo)記抗體標(biāo)記抗體抗原抗體反應(yīng)抗原抗體反應(yīng)（溫育溫育）平衡平衡分離分離Ag-Ab+ Ab放射性強(qiáng)度放射性強(qiáng)度測(cè)定測(cè)定繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算計(jì)算待測(cè)抗原量待測(cè)抗原量三、免疫放射分析（三、免疫放射分析（IRMA）3 3、方法學(xué)評(píng)價(jià)、方法學(xué)評(píng)價(jià)優(yōu)點(diǎn)優(yōu)點(diǎn) 敏感性高敏感性高 特異性高特異性高 標(biāo)記物穩(wěn)定，標(biāo)記容易。標(biāo)記物穩(wěn)定，標(biāo)記容易。 結(jié)果穩(wěn)定結(jié)果穩(wěn)定缺點(diǎn)缺點(diǎn) IRMAIRMA抗體用量偏多抗體用量偏

21、多 抗體的特異性純化較難抗體的特異性純化較難（如用單克隆抗體可克服這些缺點(diǎn)）（如用單克隆抗體可克服這些缺點(diǎn)） 。三、免疫放射分析（三、免疫放射分析（IRMA）四、四、RIA與與IRMA的比較的比較 放射免疫分析（放射免疫分析（RIA）是放射免疫技術(shù)是放射免疫技術(shù)最經(jīng)典最經(jīng)典的模式。它是以放射性的模式。它是以放射性核素標(biāo)記抗原與反應(yīng)系核素標(biāo)記抗原與反應(yīng)系統(tǒng)中未標(biāo)記抗原統(tǒng)中未標(biāo)記抗原競(jìng)爭(zhēng)性競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)結(jié)合特異性抗體為基本合特異性抗體為基本原理來(lái)測(cè)定待檢樣品中原理來(lái)測(cè)定待檢樣品中抗原量的一種分析方法抗原量的一種分析方法。 免疫放射分析（免疫放射分析（IRMA）是用放射性核素標(biāo)記是用放射性核素標(biāo)記的過(guò)量抗

22、體與待檢測(cè)抗的過(guò)量抗體與待檢測(cè)抗原直接結(jié)合，采用固相原直接結(jié)合，采用固相免疫吸附載體分離結(jié)合免疫吸附載體分離結(jié)合與游離標(biāo)記抗體的與游離標(biāo)記抗體的非競(jìng)非競(jìng)爭(zhēng)性爭(zhēng)性放射免疫分析。放射免疫分析。二者的異同點(diǎn)如下：二者的異同點(diǎn)如下： 標(biāo)記物標(biāo)記物 RIA 以放射性核素標(biāo)記抗原；以放射性核素標(biāo)記抗原；IRMA 則是標(biāo)記則是標(biāo)記抗體?？贵w。 反應(yīng)速率反應(yīng)速率 IRMA 反應(yīng)速度比反應(yīng)速度比RIA 快?？?。 反應(yīng)原理反應(yīng)原理 RIA 為競(jìng)爭(zhēng)抑制性結(jié)合，反應(yīng)參數(shù)與待檢抗為競(jìng)爭(zhēng)抑制性結(jié)合，反應(yīng)參數(shù)與待檢抗原量成反相關(guān)；原量成反相關(guān)；IRMA為非競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合，反應(yīng)參數(shù)與待為非競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合，反應(yīng)參數(shù)與待檢抗原成正相關(guān)。檢抗

23、原成正相關(guān)。 特異性特異性 IRMA 特異性較特異性較RIA高。高。 靈敏度和檢測(cè)范圍靈敏度和檢測(cè)范圍 IRMA測(cè)定的靈敏度明顯高于測(cè)定的靈敏度明顯高于RIA， IRMA標(biāo)準(zhǔn)曲線工作范圍較標(biāo)準(zhǔn)曲線工作范圍較RIA寬寬12個(gè)數(shù)量級(jí)。個(gè)數(shù)量級(jí)。 其他其他 RIA 所用抗體為多克隆抗體，對(duì)親和力和特異性所用抗體為多克隆抗體，對(duì)親和力和特異性要求較高，但用量很少；要求較高，但用量很少；IRMA 為試劑過(guò)量的反應(yīng)，為試劑過(guò)量的反應(yīng)，對(duì)抗體親和力的要求不及對(duì)抗體親和力的要求不及 RIA，但用量大。此外，但用量大。此外，RIA 可以測(cè)量半抗原，但可以測(cè)量半抗原，但I(xiàn)RMA只能測(cè)定至少有兩個(gè)以只能測(cè)定至少有兩

24、個(gè)以上表位的抗原。上表位的抗原。四、四、RIA與與IRMA的比較的比較五、五、放射免疫分析中造成測(cè)量誤差的因放射免疫分析中造成測(cè)量誤差的因素素 誤差包括誤差包括系統(tǒng)誤差系統(tǒng)誤差和和隨機(jī)誤差隨機(jī)誤差。系統(tǒng)誤差發(fā)生在測(cè)量過(guò)程中由于儀器不準(zhǔn)。系統(tǒng)誤差發(fā)生在測(cè)量過(guò)程中由于儀器不準(zhǔn)、試劑不純、標(biāo)準(zhǔn)品不穩(wěn)定等原因，使測(cè)定結(jié)果呈傾向性偏大或偏小，這種誤、試劑不純、標(biāo)準(zhǔn)品不穩(wěn)定等原因，使測(cè)定結(jié)果呈傾向性偏大或偏小，這種誤差應(yīng)力求避免。隨機(jī)誤差是測(cè)量過(guò)程中各種偶然因素造成的，沒(méi)有固定的傾向差應(yīng)力求避免。隨機(jī)誤差是測(cè)量過(guò)程中各種偶然因素造成的，沒(méi)有固定的傾向性，這類誤差是不可避免的，必要時(shí)做統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。性，這類誤

25、差是不可避免的，必要時(shí)做統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。造成誤差的可能來(lái)源有以下幾個(gè)方面：造成誤差的可能來(lái)源有以下幾個(gè)方面：1 1各種儀器：各種儀器：設(shè)備的準(zhǔn)確性、穩(wěn)定性、效率以及被污染等情況帶來(lái)的誤差設(shè)備的準(zhǔn)確性、穩(wěn)定性、效率以及被污染等情況帶來(lái)的誤差。如：由于放射性測(cè)量?jī)x器的穩(wěn)定性、效率、樣品試管的材料和均勻性及被。如：由于放射性測(cè)量?jī)x器的穩(wěn)定性、效率、樣品試管的材料和均勻性及被測(cè)物的放射性強(qiáng)度等原因。由于樣品的自吸收，本底校正，測(cè)定時(shí)間，可能測(cè)物的放射性強(qiáng)度等原因。由于樣品的自吸收，本底校正，測(cè)定時(shí)間，可能的污染等原因。在試驗(yàn)室中所有的移液管、微量取樣器以及天平的刻度、校的污染等原因。在試驗(yàn)室中所有的移液管

26、、微量取樣器以及天平的刻度、校準(zhǔn)和使用方法等原因。由于反應(yīng)試管、移液管以及測(cè)定用試管等表面清潔度準(zhǔn)和使用方法等原因。由于反應(yīng)試管、移液管以及測(cè)定用試管等表面清潔度和所引起的不同吸附等原因都可以對(duì)測(cè)定結(jié)果帶來(lái)誤差。和所引起的不同吸附等原因都可以對(duì)測(cè)定結(jié)果帶來(lái)誤差。2 2試劑的純度、質(zhì)量和穩(wěn)定性試劑的純度、質(zhì)量和穩(wěn)定性的影響也是造成誤差的重要因素。如標(biāo)記抗的影響也是造成誤差的重要因素。如標(biāo)記抗原的比度、純度，輻射自分解，抗體的穩(wěn)定性，分離劑、阻斷劑及緩沖液等試原的比度、純度，輻射自分解，抗體的穩(wěn)定性，分離劑、阻斷劑及緩沖液等試劑的純度等。劑的純度等。 3在放射免疫分析中一些基本操作在放射免疫分析中

27、一些基本操作，如取樣、提取、沉，如取樣、提取、沉淀、分離以及保溫條件不適當(dāng)?shù)仍斐傻恼`差。由于工作人淀、分離以及保溫條件不適當(dāng)?shù)仍斐傻恼`差。由于工作人員熟練程度不同也常常帶來(lái)誤差，如操作移液管垂直程度員熟練程度不同也常常帶來(lái)誤差，如操作移液管垂直程度、下流速度、吹氣與不吹氣等。工作人員草率、不按規(guī)程、下流速度、吹氣與不吹氣等。工作人員草率、不按規(guī)程操作等也都可以造成誤差。操作等也都可以造成誤差。 4樣品誤差。樣品誤差。樣品的收集方法、貯存溫度、放置條件，樣品的收集方法、貯存溫度、放置條件，微量樣品取樣的準(zhǔn)確度，樣品可能造成的污染以及樣品的微量樣品取樣的準(zhǔn)確度，樣品可能造成的污染以及樣品的變性（如

28、免疫反應(yīng)活性的降低、蛋白質(zhì)的變性等）也都能變性（如免疫反應(yīng)活性的降低、蛋白質(zhì)的變性等）也都能造成測(cè)量的誤差。造成測(cè)量的誤差。 5提取及層析分離過(guò)程中的丟失。提取及層析分離過(guò)程中的丟失。五、五、放射免疫分析中造成測(cè)量誤差的因放射免疫分析中造成測(cè)量誤差的因素素六、核廢物的六、核廢物的處理處理 放射性廢物中的放射性物質(zhì)，采用一般放射性廢物中的放射性物質(zhì)，采用一般的的物理、化學(xué)及生物學(xué)的方法物理、化學(xué)及生物學(xué)的方法都不能將都不能將其消滅或破壞，只有通過(guò)其消滅或破壞，只有通過(guò)放射性核素的放射性核素的自身衰變自身衰變才能使放射性衰減到一定的水才能使放射性衰減到一定的水平。而許多放射性元素的平。而許多放射性

29、元素的半衰期十分長(zhǎng)半衰期十分長(zhǎng)，并且衰變的產(chǎn)物又是新的放射性元素，并且衰變的產(chǎn)物又是新的放射性元素，所以放射性廢物與其它廢物相比在處，所以放射性廢物與其它廢物相比在處理和處置上有許多不同之處。理和處置上有許多不同之處。 1、放射性廢水的處理放射性廢水的處理 放射性廢水的處理方法主要有稀釋排放法、放置衰變法、混放射性廢水的處理方法主要有稀釋排放法、放置衰變法、混凝沉降法、離子變換法、蒸發(fā)法、瀝青固化法、水泥固化法凝沉降法、離子變換法、蒸發(fā)法、瀝青固化法、水泥固化法、塑料固化法以及玻璃固化法等。、塑料固化法以及玻璃固化法等。 2、放射性廢氣的處理放射性廢氣的處理 (1)鈾礦開采過(guò)程中所產(chǎn)生廢氣、粉

30、塵，一般可通過(guò)改善操作鈾礦開采過(guò)程中所產(chǎn)生廢氣、粉塵，一般可通過(guò)改善操作條件和通風(fēng)系統(tǒng)得到解決。條件和通風(fēng)系統(tǒng)得到解決。 (2)實(shí)驗(yàn)室廢氣，通常是進(jìn)行預(yù)過(guò)濾，然后通過(guò)高效過(guò)濾后再實(shí)驗(yàn)室廢氣，通常是進(jìn)行預(yù)過(guò)濾，然后通過(guò)高效過(guò)濾后再排出。排出。 (3)燃料后處理過(guò)程的廢氣，大部分是放射性碘和一些惰性氣燃料后處理過(guò)程的廢氣，大部分是放射性碘和一些惰性氣體。體。 3、放射性固體廢物的處理和處置放射性固體廢物的處理和處置 放射性固體廢物主要是被放射性物質(zhì)污染而不能再用的各種放射性固體廢物主要是被放射性物質(zhì)污染而不能再用的各種物體物體 (1)焚燒焚燒 (2)壓縮壓縮 (3)去污去污 (4)包裝包裝六、核廢物的六、核廢物的處理處理七、七、在醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)中應(yīng)用在醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)中應(yīng)用1.激素的測(cè)定激素的測(cè)定 RIA可用于大多數(shù)激素的測(cè)定，對(duì)相關(guān)疾可用于大多數(shù)激素的測(cè)定，對(duì)相關(guān)疾病的診斷和治療提供重要的實(shí)驗(yàn)