




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1、實(shí)實(shí)時(shí)時(shí)熒熒光光定定量量PCR儀儀比比較較表表ABI,Prism7500ABIStepOne/PlusStratageneMx3000PStratageneMx3005PBio-RadCFX96Eppendorf:2 / 4ColorSystemsRotor-Gene6000RocheLightCycler1.5/2.0RocheLC480光光源源鹵鎢燈藍(lán)光LED石英鹵鎢燈石英鹵鎢燈6個(gè)LED96個(gè)藍(lán)光LEDLED1個(gè)LED氙燈通通道道5通道其中一個(gè)為校正染料通道3通道4 通道5通道52/4通道2、4、5、6不等3塊檢測(cè)濾光片/6塊檢測(cè)濾光片五通道檢檢測(cè)測(cè)器器冷CCD光電二極管PMT PMT6
2、個(gè)光電二極管1/2個(gè)PMTPMT光電二極管濾濾光光系系統(tǒng)統(tǒng)5個(gè)激發(fā)光濾鏡與5個(gè)發(fā)射光濾鏡帶有3個(gè)/4個(gè)檢測(cè)端濾光片4個(gè)激發(fā)光濾鏡與4個(gè)發(fā)射光濾鏡5個(gè)激發(fā)光濾鏡與5個(gè)發(fā)射光濾鏡6個(gè)激發(fā)與6個(gè)檢測(cè)激發(fā)端沒(méi)有濾光片發(fā)射端有2/4個(gè)濾光片檢測(cè)濾鏡片3個(gè)/6個(gè)發(fā)射光檢測(cè)濾光鏡個(gè)激發(fā)端濾光片和個(gè)檢測(cè)斷濾光片樣樣品品通通量量96孔48孔/96孔96孔96孔96孔96孔36/72/10032激激發(fā)發(fā)光光范范圍圍400-660nm470nm350-750nm 350-750nm 450-730 nm470nm365nm/470nm/530nm/585nm/625nm/680nm/460nm470nm430-63
3、0nmABI,Prism7500ABIStepOne/PlusStratageneMx3000PStratageneMx3005PBio-RadCFX96Eppendorf:2 / 4ColorSystemsRotor-Gene6000RocheLightCycler1.5/2.0RocheLC480檢檢測(cè)測(cè)光光范范圍圍500-660nm350-700nm 350-700nm 450-730 nm460nm/510nm/555nm/610nm/660nm530, 640,705nm/530, 560,610,640,670,705nm430-630nm可可用用熒熒光光染染料料FAM/SYBRG
4、reenI,VIC/JOE,NED/TAMRA/CY3,和ROXCY5FAM/SYBRGreen, VIC/JOE,and ROXALEXAFluor 350(350nm-440nm),FAM/SYBR Green I(492nm-516nm), TET(517nm-538nm),HEX/JOE/VIC (535nm-555nm),Cy3(545nm-568nm),TAMRA(556nm-580nm),ROX/TexasRed (585nm-610nm), andCy5(635nm-665nm).ALEXAFluor 350(350nm-440nm),FAM/SYBR Green I(492n
5、m-516nm), TET(517nm-538nm),HEX/JOE/VIC(535nm-555nm),Cy3(545nm-568nm),TAMRA(556nm-580nm),ROX/TexasRed (585nm-610nm), andCy5(635nm-665nm).沒(méi)有明確注明可用染料,SybrGreenI可用SYBRGreen, FAM,VIC, TET,HEX, ROX,JOE,TAMRAFAM/SYBRGreenI,TET,HEXVIC/JOE,/TAMRA/CY3,TexasRed和ROX CY5FAM/SYB,LC610.LC710(2.0增加HEX,JOE,640,670)L
6、ightCyclerCyan500/ SYBRGreen I/FAM/HEC(VIC)/LightCyclerRed610/LightCyclerRed640/ Cy5ABI,Prism7500ABIStepOne/PlusStratageneMx3000PStratageneMx3005PBio-RadCFX96Eppendorf:2 / 4ColorSystemsRotor-Gene6000RocheLightCycler1.5/2.0RocheLC480檢檢測(cè)測(cè)動(dòng)動(dòng)態(tài)態(tài)范范圍圍9個(gè)9個(gè)10個(gè)10個(gè)9個(gè)910個(gè)9個(gè)10溫溫度度均均一一性性(+/-)0.5 0.5 C(+/-)0 .25 (
7、+/-)0 .25 0.4C 0.4 C/-0.01/-0.01( (+/)0.40.4(+/-)0 .35 升升降降溫溫速速度度樣品:1.6度/秒,模塊:2.5度/秒模塊最高4.6度/秒,樣品快速功能下2.2度/秒、普通功能下1.6度/秒2.5度/秒2.5度/秒最高5度/秒,平均3.3度/秒鋁質(zhì):升4度/秒,降3度/秒;銀質(zhì):升6度/秒,降4.5度/秒15度度/秒秒0.1-20度/秒升4.8度/秒,降2.5度/秒檢檢測(cè)測(cè)靈靈敏敏度度(準(zhǔn)準(zhǔn)確確性性)單拷貝(區(qū)別5000個(gè)拷貝與10000個(gè)拷貝的可信度為99.7)10拷貝(區(qū)別5000個(gè)拷貝與10000個(gè)拷貝的可信度為99.7)單拷貝(區(qū)別50
8、00個(gè)拷貝與10000個(gè)拷貝的可信度為99.7)單拷貝(區(qū)別5000個(gè)拷貝與10000個(gè)拷貝的可信度為99.7)單個(gè)拷貝的基因組DNA50 fMfluorescein單拷貝單拷貝單拷貝升升降降溫溫方方式式Peltier半導(dǎo)體Peltier半導(dǎo)體/step oneplus使使用用VeriFlex技技術(shù)術(shù)分分為為6 6個(gè)個(gè)獨(dú)獨(dú)立立控控制制區(qū)區(qū)域域Peltier半導(dǎo)體Peltier半導(dǎo)體Peltier半導(dǎo)體Peltier半導(dǎo)體空氣加熱制冷空氣加熱制冷Peltier半導(dǎo)體反反應(yīng)應(yīng)體體積積20100uL10-30uL10100uL10100uL150uL5100ul(通常20ul)20ul100ul的毛
9、細(xì)管(反應(yīng)體積可最少到5ul)10uL-100uL(96 well)and 5uL-20uL (384well)ABI,Prism7500ABIStepOne/PlusStratageneMx3000PStratageneMx3005PBio-RadCFX96Eppendorf:2 / 4ColorSystemsRotor-Gene6000RocheLightCycler1.5/2.0RocheLC480試試劑劑和和耗耗材材專門(mén)為T(mén)aqman設(shè)計(jì)ABI專用耗材(0.1mL)開(kāi)放開(kāi)放(支持FRET)低緣管開(kāi)放36孔可使用0.2ml的單管,其余為專用耗材特制耗材,專用試劑封閉快快速速PCRPCR功
10、功能能無(wú)有,快速功能40分鐘內(nèi)完成與FullVelocity配合使用可以快速至 50分鐘完成與FullVelocity配合使用可以快速至 50分鐘完成有有本身升降溫速度比較快。反應(yīng)時(shí)間45min-1.5h不等本身升降溫速度比較快。35個(gè)循環(huán)反應(yīng)20ul要30min,100ul要60min40-60分鐘之內(nèi)完成40個(gè)PCR循環(huán)軟軟件件易易用用性性軟件操作復(fù)雜、單個(gè)軟件功能薄弱。絕對(duì)定量(標(biāo)準(zhǔn)曲線)、CT進(jìn)行相對(duì)定量分析、基因分型、融解曲線分析軟件功能強(qiáng)大,支持絕對(duì)定量分析、基因表達(dá)差異分析、SNP分析等不同應(yīng)用模式、操作非常方便簡(jiǎn)單,界面直觀。軟件功能強(qiáng)大,支持絕對(duì)定量分析、基因表達(dá)差異分析、S
11、NP分析等不同應(yīng)用模式、操作非常方便簡(jiǎn)單,界面直觀。支持激發(fā)光濾光片與發(fā)射光濾光片的單獨(dú)控制,能形成濾光片的錯(cuò)配,從而來(lái)滿足 FRET應(yīng)用。標(biāo)準(zhǔn)曲線分析,CT與CT進(jìn)行相對(duì)定量分析,基因分型、讀板實(shí)驗(yàn)。數(shù)據(jù)輸出方便。具有e-mail提醒功能。軟件功能比較強(qiáng)大。ABI,Prism7500ABIStepOne/PlusStratageneMx3000PStratageneMx3005PBio-RadCFX96Eppendorf:2 / 4ColorSystemsRotor-Gene6000RocheLightCycler1.5/2.0RocheLC480主主體體評(píng)評(píng)價(jià)價(jià)5通道,能與Taqman探針
12、很好的匹配,軟件使用麻煩,需要校正染料。儀器搬動(dòng)后需要校正光路。有引物探針設(shè)計(jì)軟件,但只能設(shè)計(jì)引物與Taqman探針。有單獨(dú)的相對(duì)定量軟件。目前StepOne系列的光學(xué)系統(tǒng)沒(méi)有詳細(xì)信息。只是知道LED激發(fā)所有的孔。1.開(kāi)放的系統(tǒng),寬廣的波長(zhǎng)范圍,能采用所有可用的探針染料 . 2.孔間溫差小,實(shí)驗(yàn)重復(fù)性好。 3.采用PMT檢測(cè),減少激發(fā)光、檢測(cè)光交叉干擾,提高靈敏度 4.軟件功能強(qiáng)大,但非常簡(jiǎn)單易用5,機(jī)器內(nèi)置芯片能保存數(shù)據(jù),電腦死機(jī)等情況不會(huì)丟失數(shù)據(jù)。 6,完全的熒光定量PCR培訓(xùn)項(xiàng)目。7,個(gè)人化的熒光定量PCR儀1.開(kāi)放的系統(tǒng),寬廣的波長(zhǎng)范圍,能采用所有的定量探針染料 . 2.孔間溫差小,實(shí)
13、驗(yàn)重復(fù)性好。 3.采用PMT檢測(cè),減少激發(fā)光、檢測(cè)光交叉干擾,提高靈敏度 4.軟件功能強(qiáng)大,但非常簡(jiǎn)單易用5,機(jī)器內(nèi)置芯片能保存數(shù)據(jù),電腦死機(jī)等情況不會(huì)丟失數(shù)據(jù)。 6,5通道配置,支持FRET應(yīng)用。7,完全的熒光定量PCR培訓(xùn)項(xiàng)目。8,個(gè)人化的熒光定量PCR儀具有梯度和快速功能LED+光電二極管(檢測(cè)靈敏度值得懷疑);逐孔掃描(光源移動(dòng));操作溫度30-100有梯度功能;采用LED作為光源,光強(qiáng)弱。陣列光源有個(gè)體差異,影響檢測(cè)的重復(fù)性;是普通PCR的升級(jí)產(chǎn)品,穩(wěn)定性有待考查RG 6000有5種型號(hào):2Plex,2Plex+HRM,5Plex,5Plex+HRM,6Plex。空氣加熱制冷,升降溫
14、速度快,溫度均一性好。但是控制溫度不精確。通量少,不能使用96孔板等耗材。支持FRET應(yīng)用空氣加熱制冷,升降溫速度快,溫度均一性好。但是控制溫度不精確。通量少,必須使用專用的耗材。大多數(shù)通道只能用專用的試劑。光源采用氙燈壽命短500小時(shí),燈泡價(jià)格未知。只能使用羅氏的微孔板和貼膜?;顒?dòng)的加熱模塊溫度均一性差。CCD成像光路中光源距樣品較遠(yuǎn)(減少邊緣效應(yīng))帶來(lái)的問(wèn)題是檢測(cè)靈敏度降低。貌似這里的參數(shù)與羅氏單頁(yè)不符。?簡(jiǎn)簡(jiǎn) 評(píng)評(píng)鹵鹵鎢鎢燈燈激發(fā)范圍寬廣,光強(qiáng)強(qiáng),非常適合做多通道的定量PCR,LED的激發(fā)光源是冷光源相對(duì)壽命相對(duì)也要長(zhǎng),但是光強(qiáng)度低,光的激發(fā)范圍受限制,氙燈波普偏窄。 多通道是定量PCR
15、發(fā)展的趨勢(shì),現(xiàn)在多通道的熒光定量實(shí)驗(yàn)也越來(lái)越多,主流的是4通道采用CCD檢測(cè)器具有邊緣效應(yīng),做實(shí)驗(yàn)時(shí)必須加入校正染料。采用PMT檢測(cè)器,能將光信號(hào)放大,檢測(cè)靈敏度高,無(wú)需校正染料。發(fā)光二極管的檢測(cè)靈敏度低。激發(fā)光與發(fā)射光的雙重過(guò)濾能排除雜光的影響,從而提高檢測(cè)的準(zhǔn)確性96孔通量高,可以采用多孔板方便操作。Stratagene擴(kuò)大了光譜的檢測(cè)范圍,從350-750nm。目前市場(chǎng)上所有的熒光探針都適用。優(yōu)化的4通道能減少各通道光譜之間的相互干擾。簡(jiǎn)簡(jiǎn) 評(píng)評(píng)Stratagene檢測(cè)光范圍最寬廣Stratagene的可用染料最多,開(kāi)放性最好簡(jiǎn)簡(jiǎn) 評(píng)評(píng)寬廣的動(dòng)態(tài)范圍有利于摸索實(shí)驗(yàn)條件Stratagene
16、改進(jìn)了傳統(tǒng)的模塊加熱方式,使得溫度非常均勻,實(shí)驗(yàn)的重復(fù)性更好相比同類型產(chǎn)品,Stratagene的升降溫速度快半導(dǎo)體加熱制冷控溫更加精確??諝饧訜嶂评潆m然快速,但是控溫不精確。PCR反應(yīng)的一般體積都是2050ul簡(jiǎn)簡(jiǎn) 評(píng)評(píng)Stratagene試劑和耗材完全開(kāi)放快速PCR功能有利于縮短反應(yīng)時(shí)間,提高實(shí)驗(yàn)效率。Stratagene定量軟件的操作簡(jiǎn)單,有口皆碑!簡(jiǎn)簡(jiǎn) 評(píng)評(píng)stratagene Mx系列 是高性能,全開(kāi)方的個(gè)人化實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀指標(biāo)參數(shù)ABI Q6ABI7500或fast2.1熱循環(huán)系統(tǒng):珀耳帖效應(yīng)系統(tǒng),加熱模式采取銀質(zhì)控溫模塊.2.2通道數(shù):5色激發(fā)光濾光片和5色檢測(cè)光濾光片;另
17、外可以升級(jí)至6色激發(fā)光通道和6色檢測(cè)光通道。2.3模塊規(guī)格:標(biāo)準(zhǔn)96孔模塊。2.4反應(yīng)體積:標(biāo)準(zhǔn)96孔模式: 10-100 L; 。2.5支持耗材: 國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)96孔 (0.2 mL) 反應(yīng)板與光學(xué)蓋膜,0.2 mL八連管,0.2mL單管。2.6溫控模塊最高升溫速率 6.5C/秒。2.7溫控范圍: 39C97C。2.8光學(xué)系統(tǒng):高能量合金鹵素?zé)?,配備光源壽命監(jiān)測(cè)并且光源壽命不低于10000小時(shí)2.9支持的熒光染料: FAM, SYBR, SYTO9 (MeltDoctor),Fluorescein, SYPRO Orange,VIC, JOE, TET, HEX,TAMRA,NED, BODIPY TMR-X,Texas Red,LIZ, Cy5 。2.10被動(dòng)參照染料:軟件支持Rox熒光校正去除移液誤差和氣泡及熒光聚集引起的誤差。2.11數(shù)據(jù)同時(shí)采集:冷CCD一體成像,所有反應(yīng)孔同時(shí)采集熒光數(shù)據(jù),不同孔之
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