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文檔簡介
1、實驗實驗水中細菌總數的測定水中細菌總數的測定實驗目的v掌握水樣的采取方法。v掌握水樣細菌總數測定的方法;了解水源水的平板菌落計數的原則。v學習檢測水中大腸菌群的原理和方法。v了解大腸菌群數量與水質狀況的關系。v了解大腸菌群的數量在飲水中的重要性。實驗原理v飲用水是否合乎標準,通常通過水中細菌總數和大腸菌群數來確定。v細菌總數是指1毫升水樣在一定的培養(yǎng)基平板(普通瓊脂培養(yǎng)基)中,3724小時培養(yǎng)后所生長的菌落數,此值僅是一種近似值。一般規(guī)定,1毫升自來水的總菌數不得超過100個。v如果水源被糞便污染,則有可能也被腸道病原菌污染而引起傷寒、痢疾、霍亂等腸道病的流行,但腸道病原菌在水中數量較少,又易
2、變異與死亡,故從水中特別是自來水中分離出病原菌,常常有困難。v而大腸菌群是腸道好氧菌中最普遍和數量最多的一種,所以常將其作為糞便污染的標志,即根據水中大腸菌群的數目來判斷水源是否被糞便所污染,并間接推測水源受腸道病原菌污染的可能性。一般規(guī)定每1000毫升自來水中大腸菌群不超過三個。實驗材料v普通瓊脂培養(yǎng)基;乳糖蛋白胨發(fā)酵管;3倍濃縮乳糖蛋白胨發(fā)酵管,復紅亞硫酸鈉培養(yǎng)基。v無菌空瓶;滅菌水;滅菌培養(yǎng)皿、吸管、試管。v自來水、池水、河水或湖水實驗步驟實驗步驟v水樣的采取水樣的采取自來水:自來水: 先將自來水龍頭用火焰灼燒先將自來水龍頭用火焰灼燒3min3min,再,再開放水龍頭水流開放水龍頭水流5
3、min5min,以滅菌三角燒瓶接取,以滅菌三角燒瓶接取水樣。水樣。池水、河水或湖水:池水、河水或湖水: 取距水面取距水面10-15cm10-15cm的深層水樣,將具的深層水樣,將具塞玻璃瓶瓶口向下浸入水中,然后翻轉過來,塞玻璃瓶瓶口向下浸入水中,然后翻轉過來,除去玻璃塞,盛滿后將瓶塞蓋好再從水中取除去玻璃塞,盛滿后將瓶塞蓋好再從水中取出。出。v細菌總數測定細菌總數測定1)自來水 吸取1ml水樣與平皿內冷卻至45的培養(yǎng)基混勻,于37下培養(yǎng)24h計數,共兩皿。同時做不接水樣的空白皿對照試驗。2) 池水、河水或湖水 采用平板菌落計數法:一般中等污穢水樣,取101、102、103三個稀釋度,污穢嚴重的
4、取102、103、104三個稀釋度。 最后三個稀釋度的稀釋水樣重復上述自來水的細菌測定試驗。水樣稀釋過程示意圖水樣稀釋過程示意圖v菌落計數方法菌落計數方法(1)計算相同稀釋度的平均菌落數有較大片菌苔生長時,棄用;以無片菌苔生長的平皿計數。若片菌苔大小不到培養(yǎng)皿的一半,其余一半分布均勻,將此一半計數2(2)選擇平均菌落數在30300之間的平板只有一個符合此范圍時只有一個符合此范圍時,以該平均菌落數乘稀釋倍數。有兩個在有兩個在30300間時間時,按兩者菌落總數比值決定:比值小于2,取平均;比值大于2,取較小的菌落總數。(3)所有菌落數均大于300,取稀釋度最高的平均菌落數乘稀釋倍數。(4) 所有菌
5、落數均小于30,取稀釋度最低的平均菌落數乘稀釋倍數。(5) 所有菌落數均不在30300之間,以最接近30或300的平均菌落數乘稀釋倍數。計算菌數落總數方法舉例計算菌數落總數方法舉例 例次例次不同稀釋的平均菌落數不同稀釋的平均菌落數兩個稀釋度兩個稀釋度菌落數之比菌落數之比菌落總烽(個菌落總烽(個/ml)10-110-210-31136516420-16400或或1.610422760295461.637750或或3.810432890271602.227100或或2.71044無法計數無法計數1650513-513000或或5.1105527115-270或或2.71046無法計數無法計數305
6、12-30500或或3.1104備注備注兩位兩位以后以后的數的數字采字采取四取四舍五舍五入的入的方法方法去掉去掉五、實驗報告五、實驗報告1結果結果(1)自來水)自來水平板平板菌落數菌落數1ml自來水中細自來水中細菌總數菌總數12(2)池水、河水或湖水等)池水、河水或湖水等稀釋稀釋度度10-110-210-3平板平板121212菌落菌落數數平均平均菌落菌落數數計算計算方法方法細菌細菌總數總數/mLv大腸菌群檢查 濾膜法過濾水樣過濾水樣用無菌鑷子夾取滅菌濾膜邊緣部分,將粗糙面向上,帖放在已滅菌的濾床上、,固定好濾器,將100mL水浴(如水樣含菌數較多,可減少過濾水樣量,或將水樣稀釋)注入濾器中,打開濾器閥門,在負0.5大氣壓下抽濾。 v培養(yǎng)培養(yǎng)水樣濾完后,再抽氣約5s,關上濾器閥門,取下濾器,用滅菌鑷子夾取濾膜邊緣部分,移放在品紅亞硫酸鈉培養(yǎng)基(36.1.3.1)上,濾膜截留細菌面向上,濾膜應與培養(yǎng)基完全貼緊,兩者間不得留有氣泡,然后將平皿倒置,放入37恒溫箱內培養(yǎng)2224h。 v觀察結果 挑出符合下列特征菌落進行革蘭氏染色、鏡檢。 紫紅色,具有金屬光澤的菌落。 深紅色,不帶或略帶金屬光澤的菌落淡紅色,中心色較深的菌落。v凡革蘭氏染色為陰性的無芽胞桿菌,再接種乳糖蛋白胨培養(yǎng)基液,于37培養(yǎng)24h,有產酸產氣者,則判定為總大腸菌群陽性。 v計算濾膜上生長的總大腸
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