實(shí)驗(yàn)4離體蛙心灌流

1、蟾蜍離體心臟灌流蟾蜍離體心臟灌流 實(shí)驗(yàn)五實(shí)驗(yàn)五學(xué)習(xí)離體蛙心灌流法學(xué)習(xí)離體蛙心灌流法觀察觀察K K+ +、CaCa2+2+及腎上腺素、乙酰膽堿等對(duì)及腎上腺素、乙酰膽堿等對(duì)離體心臟活動(dòng)的影響。離體心臟活動(dòng)的影響。 實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶?shí)驗(yàn)?zāi)康膶?shí)驗(yàn)原理實(shí)驗(yàn)原理心肌具有自動(dòng)節(jié)律性、傳導(dǎo)性和興奮性。心肌具有自動(dòng)節(jié)律性、傳導(dǎo)性和興奮性。離體和脫離神經(jīng)支配的動(dòng)物心臟離體和脫離神經(jīng)支配的動(dòng)物心臟, ,保持在適當(dāng)?shù)沫h(huán)境保持在適當(dāng)?shù)沫h(huán)境中中, ,在一定的時(shí)間內(nèi)在一定的時(shí)間內(nèi), ,仍然能夠有節(jié)律性地產(chǎn)生興奮仍然能夠有節(jié)律性地產(chǎn)生興奮和收縮。和收縮。利用心肌細(xì)胞的這一特性利用心肌細(xì)胞的這一特性, ,可用來(lái)制作離體心臟模型可用來(lái)制

2、作離體心臟模型, , 來(lái)觀察藥物和來(lái)觀察藥物和電解質(zhì)水平對(duì)心肌活動(dòng)的影響。電解質(zhì)水平對(duì)心肌活動(dòng)的影響。離體蛙心循環(huán)回路離體蛙心循環(huán)回路靜脈插管靜脈插管動(dòng)脈插管動(dòng)脈插管橡膠連接管橡膠連接管實(shí)驗(yàn)材料及儀器設(shè)備實(shí)驗(yàn)材料及儀器設(shè)備蟾蜍蟾蜍蛙用手術(shù)器械，蛙心套管，蛙心夾，張力蛙用手術(shù)器械，蛙心套管，蛙心夾，張力換能器，受滴換能器，受滴- -刺激兩用電極刺激兩用電極RM6240RM6240系統(tǒng)，任氏液，系統(tǒng)，任氏液，2%CaCl2%CaCl2 2，2%KCl2%KCl，0.01%0.01%腎上腺素，腎上腺素，0.01%0.01%乙酰膽堿。乙酰膽堿。（一）離體蛙心灌流制作（一）離體蛙心灌流制作1.1.破壞蟾

3、蜍腦和脊髓，暴露心臟，剪除心包膜和肝破壞蟾蜍腦和脊髓，暴露心臟，剪除心包膜和肝系膜（不要損傷血管）系膜（不要損傷血管）2.2.第第1 1次結(jié)扎：雙結(jié)扎右主動(dòng)脈次結(jié)扎：雙結(jié)扎右主動(dòng)脈3.3.第第2 2次結(jié)扎：結(jié)扎左右肺靜脈、前腔靜脈（遠(yuǎn)離次結(jié)扎：結(jié)扎左右肺靜脈、前腔靜脈（遠(yuǎn)離靜脈竇）靜脈竇） 4.4.第第3 3次結(jié)扎：在左右肝靜脈和后腔靜脈下次結(jié)扎：在左右肝靜脈和后腔靜脈下穿線穿線在右肝靜脈（或左肝靜脈、或后腔在右肝靜脈（或左肝靜脈、或后腔靜脈）上用眼科剪剪一斜口靜脈）上用眼科剪剪一斜口用加有任氏用加有任氏液的蛙心套管靜脈插管插入剪口液的蛙心套管靜脈插管插入剪口結(jié)扎固結(jié)扎固定（遠(yuǎn)離靜脈竇）定（遠(yuǎn)

4、離靜脈竇） 5. 5. 第第4 4次結(jié)扎：在左主動(dòng)脈下穿線次結(jié)扎：在左主動(dòng)脈下穿線在動(dòng)脈在動(dòng)脈上剪一斜口上剪一斜口插入動(dòng)脈蛙心套管動(dòng)脈插管插入動(dòng)脈蛙心套管動(dòng)脈插管（不要插入動(dòng)脈球內(nèi)）（不要插入動(dòng)脈球內(nèi)） 結(jié)扎固定結(jié)扎固定6. 6. 在所有結(jié)扎處外緣遠(yuǎn)離心臟端剪除周圍血在所有結(jié)扎處外緣遠(yuǎn)離心臟端剪除周圍血管，將與蛙心套管靜脈插管和動(dòng)脈插管的離管，將與蛙心套管靜脈插管和動(dòng)脈插管的離體蛙心固定在鐵架臺(tái)上體蛙心固定在鐵架臺(tái)上第第1次結(jié)扎：雙結(jié)扎右主動(dòng)脈次結(jié)扎：雙結(jié)扎右主動(dòng)脈第第2次結(jié)扎：結(jié)扎左右肺靜脈、前腔靜脈次結(jié)扎：結(jié)扎左右肺靜脈、前腔靜脈第第3次結(jié)扎：左次結(jié)扎：左右肝靜脈右肝靜脈后腔靜脈后腔靜脈第

5、第4次結(jié)扎：插管并結(jié)扎左主動(dòng)脈次結(jié)扎：插管并結(jié)扎左主動(dòng)脈離體蛙心循環(huán)回路離體蛙心循環(huán)回路靜脈插管靜脈插管動(dòng)脈插管動(dòng)脈插管橡膠連接管橡膠連接管實(shí)驗(yàn)步驟實(shí)驗(yàn)步驟 7.7.用蛙心夾在心室舒張時(shí)夾住心尖約用蛙心夾在心室舒張時(shí)夾住心尖約1mm1mm，用絲線將蛙心夾與張力換能器相連。用絲線將蛙心夾與張力換能器相連。8.8.在動(dòng)脈套管與靜脈套管之間放置記滴電極，在動(dòng)脈套管與靜脈套管之間放置記滴電極，記錄滴數(shù)。記錄滴數(shù)。蛙心灌流裝置安裝通道通道1受滴信號(hào)線受滴信號(hào)線受滴受滴- -刺激刺激- -兩用電極兩用電極RM6240RM6240記錄系統(tǒng)記錄系統(tǒng) 點(diǎn)擊點(diǎn)擊“實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)”菜單，選擇菜單，選擇“蛙心灌流蛙心灌流”

6、，系統(tǒng)進(jìn)入信號(hào)記錄狀態(tài)。系統(tǒng)進(jìn)入信號(hào)記錄狀態(tài)。儀器參數(shù)：通道，時(shí)間常數(shù)：直流；濾波儀器參數(shù)：通道，時(shí)間常數(shù)：直流；濾波頻率頻率10Hz10Hz；靈敏度；靈敏度3g3g，采樣頻率，采樣頻率400Hz400Hz，掃描速度掃描速度1s/div1s/div。實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目 1.1.正常蛙心收縮曲線和每搏心輸出量記滴正常蛙心收縮曲線和每搏心輸出量記滴（最大收縮力、心率、心輸出量）。（最大收縮力、心率、心輸出量）。2.2.向套管的任氏液中加向套管的任氏液中加2%CaCl2%CaCl2 21 1滴，觀察并記滴，觀察并記錄心搏曲線的變化。錄心搏曲線的變化。實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目3.3.當(dāng)心臟恢復(fù)當(dāng)心臟恢復(fù)正常正常

7、時(shí)，向套管內(nèi)加入時(shí)，向套管內(nèi)加入2 2滴滴2%KCl2%KCl溶液，溶液，觀察心搏變化頻率和幅度，當(dāng)曲線出現(xiàn)明顯變化時(shí)，觀察心搏變化頻率和幅度，當(dāng)曲線出現(xiàn)明顯變化時(shí)，立即更換任氏液。立即更換任氏液。4.4.當(dāng)心臟恢復(fù)當(dāng)心臟恢復(fù)正常正常時(shí)，向套管內(nèi)加入時(shí)，向套管內(nèi)加入1 1滴滴0.01%0.01%腎上腺腎上腺素溶液，觀察心搏變化頻率和幅度，當(dāng)曲線出現(xiàn)明素溶液，觀察心搏變化頻率和幅度，當(dāng)曲線出現(xiàn)明顯變化時(shí)，立即更換任氏液。顯變化時(shí)，立即更換任氏液。5.5.當(dāng)心臟恢復(fù)當(dāng)心臟恢復(fù)正常正常時(shí)，向套管內(nèi)加入時(shí)，向套管內(nèi)加入1 1滴滴0.01%0.01%乙酰膽乙酰膽堿溶液，觀察心搏變化頻率和幅度，當(dāng)曲線出現(xiàn)

8、明堿溶液，觀察心搏變化頻率和幅度，當(dāng)曲線出現(xiàn)明顯變化時(shí)，立即更換任氏液。顯變化時(shí)，立即更換任氏液。實(shí)驗(yàn)要求實(shí)驗(yàn)要求每一項(xiàng)實(shí)驗(yàn)記錄出一段有代表性的曲線，每一項(xiàng)實(shí)驗(yàn)記錄出一段有代表性的曲線，包括連續(xù)三部分包括連續(xù)三部分: : (1) (1)正常對(duì)照正常對(duì)照 (2)(2)加藥后的反應(yīng)加藥后的反應(yīng) (3)(3)更換灌流液后恢復(fù)至更換灌流液后恢復(fù)至正常正常狀態(tài)。狀態(tài)。最大最大收縮力收縮力（g）波谷波谷值（值（g）心率心率記錄滴記錄滴數(shù)（滴）數(shù)（滴）心輸出心輸出量（滴量（滴/分）分）每搏輸出每搏輸出量（滴量（滴/搏）搏）1正常曲線正常曲線22%CaCl23更換任氏液更換任氏液42%KCl注意事項(xiàng)注意事項(xiàng)每次換液時(shí)液面應(yīng)保持每次換液