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1、1二、基因表達載體的構(gòu)建（核心步二、基因表達載體的構(gòu)建（核心步驟）驟）2先用同一種限制先用同一種限制酶分別切割目的酶分別切割目的基因和質(zhì)粒，再基因和質(zhì)粒，再用用DNA連接酶將連接酶將二者連接，形成二者連接，形成重組重組DNA分子。分子。3三、將目的基因?qū)胧荏w細胞（轉(zhuǎn)化）三、將目的基因?qū)胧荏w細胞（轉(zhuǎn)化）41、受體細胞是植物細胞、受體細胞是植物細胞n農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法：農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法：主要侵染雙子葉植物主要侵染雙子葉植物（傷口分泌酚類化合物吸引農(nóng)桿菌）（傷口分泌酚類化合物吸引農(nóng)桿菌）n基因槍法基因槍法n花粉管通道法花粉管通道法51）土壤農(nóng)桿菌法）土壤農(nóng)桿菌法62）基因槍法）基因槍法73）花粉管通道法）

2、花粉管通道法82、受體細胞是動物細胞、受體細胞是動物細胞n顯微注射法顯微注射法n注入動物受精卵注入動物受精卵91982年，世界上第一例體型比普通年，世界上第一例體型比普通小鼠大小鼠大1.8倍的轉(zhuǎn)基因超級小鼠誕生倍的轉(zhuǎn)基因超級小鼠誕生103、受體細胞是微生物、受體細胞是微生物n將目的基因?qū)朐松锏暮锰幨鞘裁矗繉⒛康幕驅(qū)朐松锏暮锰幨鞘裁?？n繁殖快、多為單細胞、遺傳物質(zhì)相對較少繁殖快、多為單細胞、遺傳物質(zhì)相對較少n要想使重組要想使重組DNA順利進入細菌細胞內(nèi)，最順利進入細菌細胞內(nèi)，最大的難題是什么？大的難題是什么？n一般用一般用CaCl2處理，改變細胞膜的通透性，處理，改變細胞膜的通透性，使得重組使得重組DNA能夠進入細胞。能夠進入細胞。11四、目的基因的檢測與鑒定四、目的基因的檢測與鑒定檢測轉(zhuǎn)基因生物的檢測轉(zhuǎn)基因生物的DNA是否插入目的基因是否插入目的基因檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)檢測性狀檢測性狀分子分子水平水平個體水平個體水平121、檢測目的基因、檢測目的基因nDNA分子雜交技術(shù)分子雜交技術(shù)n提取轉(zhuǎn)基因生物的提取轉(zhuǎn)基因生物的DNAn制作分子探針（目的基因的一段單鏈序列）制作分子探針（目的基因的一段單鏈序列）n進行分子雜交進行分子雜交132、檢測、檢測mRNAn分子雜交技術(shù)分

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