實驗九卵磷脂的提取和鑒定ppt課件

1、實驗九實驗九 卵磷脂的提取、純化和鑒定卵磷脂的提取、純化和鑒定20192019年年1212月月n是細胞膜磷脂雙分子層的重要成分。是細胞膜磷脂雙分子層的重要成分。 n卵磷脂又稱磷脂酰膽堿，是甘油磷脂的一種。在動植物卵磷脂又稱磷脂酰膽堿，是甘油磷脂的一種。在動植物體內均有分布，在動物的腦、精液、心、肝、腎上腺和體內均有分布，在動物的腦、精液、心、肝、腎上腺和卵細胞中含量較多，蛋黃中含量可達卵細胞中含量較多，蛋黃中含量可達8-108-10。n其結構式為：其結構式為： 膽堿膽堿HO 物質提取、純化受到多種因素的影響，如抽提物的種類及其配比、抽提條件溫度、時間等都能影響提取的結果。這種多因素的試驗可以通

2、過正交法，即用一特制的表格正交表來安排試驗，計算和分析試驗結果。這樣就能通過少量試驗取得較好的效果。 本實驗運用正交法抽提物的種類及其配比、時間溫度和料液比這4個因素對卵磷脂提取和純化的影響，并求得在什么樣的條件下可以達到最佳的試驗效果。正交法實驗設計正交法實驗設計水平水平影響因素影響因素乙醇乙醇 乙醚乙醚溫度溫度時間（時間（min）料液比料液比15 14101 424 125201 533 160301 6表表1 1 抽提物、溫度、時間和料液比抽提物、溫度、時間和料液比4 4因素因素3 3水平水平表表3 L9 3 L9 表表按一般方法，如對4個因素3個水平的各種搭配都要考慮，共需做3*3*3

3、*3=81次試驗，而用正交表只需做9次試驗，即選用L9表(L是正交表的代號，下標數字表示試驗次數)。試驗號試驗號影響因素影響因素試驗結果試驗結果乙醇乙醇 乙醚乙醚溫度溫度時間（時間（min）料液比料液比11 5 11 41 101 1 421 5 12 252 202 1 531 5 13 603 303 1 642 4 11 42 203 1 652 4 12 253 301 1 462 4 13 601 102 1 573 3 11 43 302 1 583 3 12 251 103 1 693 3 13 602 201 1 4I （I水平試驗結果總合）水平試驗結果總合）II （II水平試

4、驗結果總合）水平試驗結果總合）III（III水平試驗結果總合）水平試驗結果總合）I/3II/3III/3級差級差表表4 試驗安排試驗安排將本試驗的4個因素依次放在L9表的第1，2，3，4列，再將各列的水平數用該列因素相應的水平寫出來，就得到上表的試驗安排。 （二薄層層析（二薄層層析 薄層層析薄層層析TLCTLC是一種微量而快速的層析方法。是一種微量而快速的層析方法。其層析是在吸附劑固相支持物均勻涂布的的薄其層析是在吸附劑固相支持物均勻涂布的的薄層上進行的，故稱薄層層析。而待分析的樣品，是層上進行的，故稱薄層層析。而待分析的樣品，是點加到薄層板的一端，然后將該端浸入適宜的展層點加到薄層板的一端，

5、然后將該端浸入適宜的展層劑中，在密閉的層析缸中展層。劑中，在密閉的層析缸中展層。 由于各種物質的結構和性質的不同，其在吸附由于各種物質的結構和性質的不同，其在吸附劑表面的吸附能力各異。吸附力大的易被吸附劑吸劑表面的吸附能力各異。吸附力大的易被吸附劑吸附，而較難被展層劑所解吸。吸附力小的則不易被附，而較難被展層劑所解吸。吸附力小的則不易被吸附劑吸附，而易被展層劑攜帶至較遠的距離。這吸附劑吸附，而易被展層劑攜帶至較遠的距離。這樣，各種物質在吸附劑和展層劑之間反復多次的被樣，各種物質在吸附劑和展層劑之間反復多次的被吸附與解吸附，就表現出不同的遷移率而得以分離，吸附與解吸附，就表現出不同的遷移率而得以

6、分離，并可以通過與顯色劑的顯色反應而得到鑒定與區(qū)分。并可以通過與顯色劑的顯色反應而得到鑒定與區(qū)分。（一卵磷脂的提取和純化（一卵磷脂的提取和純化1、實驗材料：雞蛋黃、實驗材料：雞蛋黃2、儀器：恒溫水浴鍋、儀器：恒溫水浴鍋 蒸發(fā)皿蒸發(fā)皿 漏斗漏斗 磁力攪拌磁力攪拌器器 天平天平3、試劑：、試劑： 95乙醇乙醇 乙醚乙醚 丙酮丙酮三、實驗材料、儀器和試劑三、實驗材料、儀器和試劑1、實驗材料：提取的卵磷脂、實驗材料：提取的卵磷脂2、儀、儀 器：器： 電熱鼓風干燥箱、電熱鼓風干燥箱、 層析玻璃板、層析玻璃板、 層析層析 缸、吹風機、小型噴霧器缸、吹風機、小型噴霧器 。3、試、試 劑：劑： （1硅膠硅膠-

7、G； （20. 2%羧甲基纖維素鈉溶液；羧甲基纖維素鈉溶液； （3展層劑展層劑 ：氯仿：氯仿 甲醇甲醇 水水(65 25 4) ； （4顯色劑：顯色劑：1% 碘液。碘液。（二卵磷脂的薄層層析（二卵磷脂的薄層層析1 1、卵磷脂的粗提、卵磷脂的粗提 蛋黃蛋黃10g10g放入潔凈的帶塞三角瓶中，加入放入潔凈的帶塞三角瓶中，加入95%95%乙醇乙醇40ml40ml，攪拌，攪拌15min15min后，靜置后，靜置15min15min；然后加入；然后加入10ml10ml的乙醚，攪的乙醚，攪拌拌15 min15 min后，靜置后，靜置15min15min；過濾；濾渣進行二次提取，加入；過濾；濾渣進行二次提取

8、，加入乙醇與乙醚乙醇與乙醚( (體積比為體積比為3 3：1)1)的混合液的混合液30ml30ml，攪拌、靜置一定，攪拌、靜置一定時間；第二次過濾，合并二次濾液，加熱濃縮至少量，加入時間；第二次過濾，合并二次濾液，加熱濃縮至少量，加入一定量丙酮除雜，卵磷脂即沉淀出來，即得到卵磷脂粗品。一定量丙酮除雜，卵磷脂即沉淀出來，即得到卵磷脂粗品。 四、實驗步驟四、實驗步驟（一卵磷脂的提?。ㄒ宦蚜字奶崛?2 2卵磷脂的純化卵磷脂的純化 取一定量的卵磷脂粗品，取一定量的卵磷脂粗品，用無水乙醇溶解，得到約用無水乙醇溶解，得到約10% 10% 的的乙醇粗提液，加入相當于卵磷脂乙醇粗提液，加入相當于卵磷脂質量的質

9、量的10% 10% 的的ZnCl2ZnCl2水溶液，室水溶液，室溫攪拌溫攪拌0.5h0.5h；分離沉淀物，加入；分離沉淀物，加入適量冰丙酮適量冰丙酮44）洗滌，攪拌）洗滌，攪拌1h1h，再用丙酮反復研洗，直到丙，再用丙酮反復研洗，直到丙酮洗液為近無色止，得到白色臘酮洗液為近無色止，得到白色臘狀的精卵磷脂；枯燥；稱重。狀的精卵磷脂；枯燥；稱重。（二卵磷脂的薄層層析（二卵磷脂的薄層層析1、調漿：稱取硅膠、調漿：稱取硅膠-G 4.5g 燒杯燒杯 12ml 0. 2%羧羧甲基纖維素鈉溶液甲基纖維素鈉溶液用玻璃棒調勻攪拌為漿狀液。用玻璃棒調勻攪拌為漿狀液。2、涂布：取潔凈、干燥玻璃板一塊、涂布：取潔凈、

10、干燥玻璃板一塊下襯一張白紙下襯一張白紙在桌面上放平在桌面上放平用燒杯將漿狀物均勻倒在玻璃板上，用燒杯將漿狀物均勻倒在玻璃板上，從一端開始，保持均勻一致，涂布面積從一端開始，保持均勻一致，涂布面積1 4/5 。3、枯燥：在室溫下涼干、枯燥：在室溫下涼干2分鐘分鐘60干燥箱烘干燥箱烘30分鐘。分鐘。4、活化：將干燥箱升溫至、活化：將干燥箱升溫至120 ，活化，活化30分鐘后，關分鐘后，關閉電源，當玻璃板面溫度降至不燙手時取出。閉電源，當玻璃板面溫度降至不燙手時取出。5 5、點樣：樣點距玻璃板一端下緣、點樣：樣點距玻璃板一端下緣1cm 1cm ，相互間隔，相互間隔1 11.2 cm 1.2 cm ；

11、每位點重復點五次，每次用冷風吹干；每位點重復點五次，每次用冷風吹干后再點，每次點樣直徑不超過后再點，每次點樣直徑不超過2mm 2mm 。6 6、展層：在層析缸中加入展層劑、展層：在層析缸中加入展層劑0.5cm0.5cm深，加蓋平深，加蓋平衡衡3030分鐘，將點樣端浸入，密閉展層分鐘，將點樣端浸入，密閉展層10-30min10-30min。后。后取出薄層板，標出展層劑前沿位置，用電吹風熱風取出薄層板，標出展層劑前沿位置，用電吹風熱風將薄層板吹干。將薄層板吹干。7 7、顯色：用噴霧器向薄層板上均勻噴灑、顯色：用噴霧器向薄層板上均勻噴灑1%1%碘液溶碘液溶液，熱風吹干至色斑顯現。液，熱風吹干至色斑顯現。1、卵磷脂收率、卵磷脂收率 卵磷脂收率卵磷脂收率 = 卵磷脂粗品重量卵磷脂粗品重量 / 蛋黃重量蛋黃重量100%2、計算各組分的、計算各組分的Rf 值值3、判斷卵磷脂粗提物的組分、判斷卵磷脂粗提物的組分 四種磷脂標準品的f值分別為:溶血卵磷脂0.18；神經鞘磷脂0.33；卵磷脂0.65；磷脂酰乙醇胺0.96 OABCDO1O2E六、思考題：六、思考題： 1 1、簡述卵磷脂的生物學功能。、簡述卵磷脂的生物學功能。2 2、磷脂酰膽堿卵磷脂），磷脂酰乙醇、磷脂酰膽堿卵磷脂），