選修一21微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)上新課用

1、會計(jì)學(xué)1選修一選修一21微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)上新課用微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)上新課用圖圖1-1 常見的三種細(xì)菌典型形態(tài)常見的三種細(xì)菌典型形態(tài)A.球菌球菌 B.桿菌桿菌 C.弧菌弧菌傷傷寒寒桿桿菌菌細(xì)細(xì)胞胞壁壁中中含含毒毒素素 有些細(xì)菌在一定的條件下，細(xì)胞里面形成一個橢圓形的休眠有些細(xì)菌在一定的條件下，細(xì)胞里面形成一個橢圓形的休眠體，叫做體，叫做芽孢芽孢。芽孢的壁很厚，對干旱、低溫、高溫等惡劣的環(huán)。芽孢的壁很厚，對干旱、低溫、高溫等惡劣的環(huán)境有很強(qiáng)的抵抗力。例如，有的細(xì)菌的芽孢，煮沸境有很強(qiáng)的抵抗力。例如，有的細(xì)菌的芽孢，煮沸3 3小時以后才小時以后才死亡。芽孢又小又輕，可以隨風(fēng)飄散。當(dāng)環(huán)境適宜（如溫度

2、、水死亡。芽孢又小又輕，可以隨風(fēng)飄散。當(dāng)環(huán)境適宜（如溫度、水分適宜）的時候，芽孢又可以萌發(fā)，形成一個細(xì)菌分適宜）的時候，芽孢又可以萌發(fā)，形成一個細(xì)菌. .SARS病毒、病毒、 禽流感病毒禽流感病毒病毒的結(jié)構(gòu)病毒的結(jié)構(gòu)2、病毒的增殖：、病毒的增殖：真菌真菌如圖是酵母菌電子顯微如圖是酵母菌電子顯微鏡下的形態(tài)結(jié)構(gòu)鏡下的形態(tài)結(jié)構(gòu)酵母菌和霉菌酵母菌和霉菌青霉青霉生殖生殖直立菌絲直立菌絲 營養(yǎng)菌絲營養(yǎng)菌絲腐生生活腐生生活孢子生殖孢子生殖鏈霉素、土霉素、四環(huán)素、鏈霉素、土霉素、四環(huán)素、氯霉素、紅霉素、慶大霉素氯霉素、紅霉素、慶大霉素 微生物中發(fā)現(xiàn)了幾千種抗生素，其中微生物中發(fā)現(xiàn)了幾千種抗生素，其中2/32/

3、3是是由放線菌產(chǎn)生的由放線菌產(chǎn)生的 應(yīng)用應(yīng)用: :根源在于發(fā)酵物中混入了雜菌根源在于發(fā)酵物中混入了雜菌 防止雜菌入侵，獲得防止雜菌入侵，獲得純凈的培養(yǎng)物純凈的培養(yǎng)物 教材教材14頁頁-背景知識背景知識課題課題1 微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)微生物的實(shí)驗(yàn)微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)室培養(yǎng)條件條件：（1）為培養(yǎng)的微生物）為培養(yǎng)的微生物提供合適的營養(yǎng)和環(huán)境提供合適的營養(yǎng)和環(huán)境條件條件（2）確保其他微生物無法確保其他微生物無法混入混入研究和應(yīng)用研究和應(yīng)用微生物的微生物的前前提提防止雜菌入侵，獲得純凈的培養(yǎng)物一、培養(yǎng)基作用、種類一、培養(yǎng)基作用、種類二、無菌技術(shù)二、無菌技術(shù)三、制備牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基三、制備

4、牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基四、純化大腸桿菌四、純化大腸桿菌主要內(nèi)容主要內(nèi)容一、培養(yǎng)基一、培養(yǎng)基微生物生存的環(huán)境和營養(yǎng)物質(zhì)微生物生存的環(huán)境和營養(yǎng)物質(zhì)1.1.基本成分：基本成分：碳源、氮源、水、無機(jī)鹽碳源、氮源、水、無機(jī)鹽碳源碳源無機(jī)碳源：無機(jī)碳源：有機(jī)碳源：有機(jī)碳源：COCO2 2、COCO3 32 2- -、HCOHCO3 3- -牛肉膏、蛋白胨等牛肉膏、蛋白胨等自養(yǎng)微生物自養(yǎng)微生物異養(yǎng)微生物異養(yǎng)微生物氮源氮源無機(jī)氮源無機(jī)氮源：有機(jī)氮源有機(jī)氮源：NHNH4 4、NONO3 3- -牛肉膏、蛋白胨、酵母膏、尿素牛肉膏、蛋白胨、酵母膏、尿素等等注：含注：含CHONCHON的的有機(jī)物有機(jī)物是是異異養(yǎng)型微生物

5、的養(yǎng)型微生物的碳源碳源、氮源氮源、能源能源一、培養(yǎng)基一、培養(yǎng)基微生物生存的環(huán)境和營養(yǎng)物質(zhì)微生物生存的環(huán)境和營養(yǎng)物質(zhì)1.1.基本成分：基本成分：碳源、氮源、水、無機(jī)鹽碳源、氮源、水、無機(jī)鹽碳源碳源無機(jī)碳源：無機(jī)碳源：有機(jī)碳源：有機(jī)碳源：COCO2 2、COCO3 32 2- -、HCOHCO3 3- -牛肉膏、蛋白胨等牛肉膏、蛋白胨等自養(yǎng)微生物自養(yǎng)微生物異養(yǎng)微生物異養(yǎng)微生物氮源氮源無機(jī)氮源無機(jī)氮源：有機(jī)氮源有機(jī)氮源：NHNH4 4、NONO3 3- -牛肉膏、蛋白胨、酵母膏、尿素牛肉膏、蛋白胨、酵母膏、尿素等等注：含注：含CHONCHON的的有機(jī)物有機(jī)物是是異異養(yǎng)型微生物的養(yǎng)型微生物的碳源碳源、

6、氮源氮源、能源能源1.1.基本成分：基本成分：碳源、氮源、水、無機(jī)鹽碳源、氮源、水、無機(jī)鹽2.2.特殊營養(yǎng)：特殊營養(yǎng)：維生素、堿基等維生素、堿基等（牛肉膏、酵母膏、蛋白胨中含有）（牛肉膏、酵母膏、蛋白胨中含有）3.pH3.pH、氧氣的需求：、氧氣的需求：4.4.種類：種類：固體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基有有無無 凝固劑瓊脂凝固劑瓊脂分離分離 鑒定鑒定工業(yè)工業(yè) 生產(chǎn)生產(chǎn)化學(xué)成分：化學(xué)成分：物理性質(zhì)：物理性質(zhì)：天然培養(yǎng)基天然培養(yǎng)基 合成培養(yǎng)基合成培養(yǎng)基一、培養(yǎng)基一、培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基：液體培養(yǎng)基：表面生長表面生長均勻混濁均勻混濁生長生長沉淀生長沉淀生長固體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基半固體培養(yǎng)基半固體

7、培養(yǎng)基劃分標(biāo)準(zhǔn)劃分標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基種類培養(yǎng)基種類特點(diǎn)特點(diǎn)用途用途物理性質(zhì)物理性質(zhì)化學(xué)成分化學(xué)成分天然培養(yǎng)基天然培養(yǎng)基合成培養(yǎng)基合成培養(yǎng)基用途用途鑒別鑒別培養(yǎng)基培養(yǎng)基培養(yǎng)基的種類培養(yǎng)基的種類不加凝固劑不加凝固劑加凝固劑，如瓊脂加凝固劑，如瓊脂工業(yè)生產(chǎn)工業(yè)生產(chǎn)微生物分離、鑒定微生物分離、鑒定、活菌計(jì)數(shù)、保藏、活菌計(jì)數(shù)、保藏菌種菌種含化學(xué)成分不明確的天然物質(zhì)含化學(xué)成分不明確的天然物質(zhì)工業(yè)生產(chǎn)工業(yè)生產(chǎn)培養(yǎng)基成分明確培養(yǎng)基成分明確分類、鑒定分類、鑒定在培養(yǎng)基中加入某種化學(xué)物在培養(yǎng)基中加入某種化學(xué)物質(zhì)質(zhì), ,以抑制不需要的微生物以抑制不需要的微生物的生長的生長, ,促進(jìn)所需要的微生促進(jìn)所需要的微生物的生長物的生

8、長培養(yǎng)、分離出特培養(yǎng)、分離出特定微生物定微生物在培養(yǎng)基中加入某種指示劑在培養(yǎng)基中加入某種指示劑或化學(xué)藥品或化學(xué)藥品, ,用以鑒別不同用以鑒別不同種類的微生物種類的微生物鑒別不同種類微鑒別不同種類微生物生物選擇培養(yǎng)基選擇培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基加入青霉素的培養(yǎng)基加入青霉素的培養(yǎng)基: :不加氮源的無氮培養(yǎng)基不加氮源的無氮培養(yǎng)基: : 不加含碳有機(jī)物的無碳培養(yǎng)基不加含碳有機(jī)物的無碳培養(yǎng)基: : 幾種選擇培養(yǎng)基舉例：幾種選擇培養(yǎng)基舉例：分離酵母菌、霉菌等真菌分離酵母菌、霉菌等真菌分離固氮菌分離固氮菌 分離自養(yǎng)型微生物分離自養(yǎng)型微生物唯一碳源為纖維素的培養(yǎng)基唯一碳源為纖維素的培養(yǎng)基

9、分解纖維素的細(xì)菌分解纖維素的細(xì)菌加加入高濃度食鹽的培養(yǎng)基入高濃度食鹽的培養(yǎng)基: : 分離金黃色葡萄球菌分離金黃色葡萄球菌加入青霉素等抗生素的培養(yǎng)基加入青霉素等抗生素的培養(yǎng)基: : 分離導(dǎo)入了目的基因的受體細(xì)胞分離導(dǎo)入了目的基因的受體細(xì)胞加入氨基喋呤、次黃嘌呤和胸腺嘧啶加入氨基喋呤、次黃嘌呤和胸腺嘧啶核核苷的培養(yǎng)基苷的培養(yǎng)基: : 分離雜交瘤細(xì)胞分離雜交瘤細(xì)胞編號編號成分成分含量含量粉狀硫粉狀硫10g10g（NHNH4 4）2 2SOSO4 40.4g0.4gK K2 2HPOHPO4 44.0g4.0gMgSOMgSO4 49.25g9.25gFeSOFeSO4 40.5g0.5gCaClCa

10、Cl2 20.5g0.5gH H2 2OO100ml100ml4 4、右表是某微生物培、右表是某微生物培養(yǎng)基成分，請據(jù)此回答：養(yǎng)基成分，請據(jù)此回答：（1 1）右表培養(yǎng)基可培）右表培養(yǎng)基可培養(yǎng)的微生物類型養(yǎng)的微生物類型是是 。（2 2）若不慎將過量）若不慎將過量NaClNaCl加入培養(yǎng)基中。加入培養(yǎng)基中。如不想浪費(fèi)此培養(yǎng)基，如不想浪費(fèi)此培養(yǎng)基，可再加入可再加入 ，用于用于培養(yǎng)金黃色葡萄球菌。培養(yǎng)金黃色葡萄球菌。自養(yǎng)型微生物自養(yǎng)型微生物 含碳有機(jī)物含碳有機(jī)物 （3 3）若除去成分，加入（）若除去成分，加入（CHCH2 2O O），該培養(yǎng)），該培養(yǎng)基可用于培養(yǎng)基可用于培養(yǎng) 。（4 4）表中營養(yǎng)成分共

11、有）表中營養(yǎng)成分共有 類。類。（5 5）不論何種培養(yǎng)基，在各種成分都溶化后）不論何種培養(yǎng)基，在各種成分都溶化后分裝前，要進(jìn)行的是分裝前，要進(jìn)行的是 。（6 6）右表中各成分重量確定的原則是）右表中各成分重量確定的原則是 。（7 7）若右表培養(yǎng)基用于菌種鑒定，應(yīng)該增加）若右表培養(yǎng)基用于菌種鑒定，應(yīng)該增加的成分是的成分是 。自生固氮微生物自生固氮微生物 3 調(diào)整調(diào)整pHpH 依微生物的生長需要確定依微生物的生長需要確定 瓊脂（或凝固劑）瓊脂（或凝固劑） 牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基 是一種應(yīng)用最廣泛和最普通的細(xì)菌基礎(chǔ)培養(yǎng)是一種應(yīng)用最廣泛和最普通的細(xì)菌基礎(chǔ)培養(yǎng)基基。1000ml1000ml牛

12、肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的配方牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的配方H2O 定容至定容至1000mlNacl 5g蛋白胨蛋白胨 10g牛肉膏牛肉膏 5g瓊脂瓊脂20.0g分析營養(yǎng)構(gòu)成？各成分主要提供何種營養(yǎng)成分析營養(yǎng)構(gòu)成？各成分主要提供何種營養(yǎng)成分分(1)水水(2)碳源碳源 ：CO2、糖類、脂肪酸、牛、糖類、脂肪酸、牛肉膏等，構(gòu)成微生物的結(jié)構(gòu)物質(zhì)和肉膏等，構(gòu)成微生物的結(jié)構(gòu)物質(zhì)和代謝物，并提供能量。代謝物，并提供能量。 (3)氮源氮源：N2、氨鹽、硝酸鹽、蛋白、氨鹽、硝酸鹽、蛋白胨等，主要用來合成蛋白質(zhì)、核酸胨等，主要用來合成蛋白質(zhì)、核酸及含氮代謝物等。及含氮代謝物等。(4)無機(jī)鹽無機(jī)鹽一、培養(yǎng)基（小結(jié)）一、培養(yǎng)基（

13、小結(jié)） 人們按著微生物對營養(yǎng)物質(zhì)的不同需求人們按著微生物對營養(yǎng)物質(zhì)的不同需求，配制出供其生長繁殖的營養(yǎng)基質(zhì)。，配制出供其生長繁殖的營養(yǎng)基質(zhì)。1、概念、概念1）、一般都含有水、碳源水、碳源、氮源氮源、和、和無機(jī)鹽。無機(jī)鹽。2）、還需要滿足微生物生長對pHpH、特、特殊營養(yǎng)物質(zhì)以及氧氣的要求殊營養(yǎng)物質(zhì)以及氧氣的要求碳源氮源（nitrogen source） 生長因子生長因子 微生物生長不可缺少的微量有機(jī)物質(zhì)叫生長因子。微生物生長不可缺少的微量有機(jī)物質(zhì)叫生長因子。維維生素生素 氨基酸氨基酸 堿堿 基基 無機(jī)鹽（mineral salts） 水（wahtor） Cncnc-micro 凡能為微生物提供

14、生長繁殖所需碳元凡能為微生物提供生長繁殖所需碳元素的營養(yǎng)物質(zhì)都稱為碳源素的營養(yǎng)物質(zhì)都稱為碳源 。3. 3. 配制原則（配制原則（補(bǔ)充補(bǔ)充）目的明確：目的明確：營養(yǎng)全面、濃度適宜、比例恰當(dāng)營養(yǎng)全面、濃度適宜、比例恰當(dāng)適宜的適宜的pHpH值：值：有機(jī)碳源有機(jī)碳源異養(yǎng)型：異養(yǎng)型：根據(jù)微生物的根據(jù)微生物的種類、培養(yǎng)目的種類、培養(yǎng)目的選擇原料選擇原料自養(yǎng)型：自養(yǎng)型： 不加碳源不加碳源加入緩沖劑加入緩沖劑細(xì)菌偏堿，真菌偏酸。細(xì)菌偏堿，真菌偏酸。細(xì)菌培養(yǎng)基細(xì)菌培養(yǎng)基pHpH中性或偏堿性中性或偏堿性pHpH為：為：6.5-7.56.5-7.5，霉菌培，霉菌培養(yǎng)基呈酸性養(yǎng)基呈酸性pHpH為：為：5.0-6.05

15、.0-6.0。放線菌。放線菌pHpH為：為：7.5-8.57.5-8.5。（COCO2 2碳源）碳源）生產(chǎn)生產(chǎn)科研科研1）對實(shí)驗(yàn)操作空間、操作者的衣著和）對實(shí)驗(yàn)操作空間、操作者的衣著和手進(jìn)行手進(jìn)行 清潔和消毒清潔和消毒 ；（2）將培養(yǎng)器皿、接種用具和培養(yǎng)基）將培養(yǎng)器皿、接種用具和培養(yǎng)基等器具進(jìn)行等器具進(jìn)行 滅菌滅菌 ；（3）為避免周圍微生物污染，實(shí)驗(yàn)操）為避免周圍微生物污染，實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)在作應(yīng)在 酒精燈火焰附近酒精燈火焰附近 旁進(jìn)行；旁進(jìn)行；（4）避免已滅菌處理的材料用具與）避免已滅菌處理的材料用具與 周圍物品周圍物品 相接觸。相接觸。耐高溫需保持干燥的耐高溫需保持干燥的 物品，物品，16017

16、0 12小時小時接種環(huán)、接種針等接種環(huán)、接種針等 金屬用具金屬用具7075、30min 80、15min100、56min消毒消毒滅菌滅菌定義定義方法方法較為較為溫和溫和理化方法，理化方法，殺死殺死部分有害菌體部分有害菌體（不不包括芽孢、孢子）包括芽孢、孢子）強(qiáng)烈強(qiáng)烈的理化方法，的理化方法，殺死殺死所有微生物所有微生物（包括（包括芽孢、孢子芽孢、孢子）煮沸消毒法煮沸消毒法巴氏消毒法巴氏消毒法化學(xué)藥劑化學(xué)藥劑紫外線紫外線灼燒滅菌灼燒滅菌干熱滅菌干熱滅菌酒精、氯氣、石炭酸等酒精、氯氣、石炭酸等高壓蒸汽滅菌高壓蒸汽滅菌培養(yǎng)基，培養(yǎng)基，100KPa、121、1530min防止外來雜菌的污染防止外來雜菌

17、的污染2.2.消毒與滅菌：消毒與滅菌：二、無菌技術(shù)二、無菌技術(shù)1 1、煮沸消毒法煮沸消毒法:100100煮沸煮沸5-6min5-6min2 2、巴氏消毒法：、巴氏消毒法：70-75 70-75 下煮下煮30min30min或或 80 80 下煮下煮15min15min3 3、化學(xué)藥劑消毒法、化學(xué)藥劑消毒法: :用用75%75%酒精、新潔酒精、新潔爾滅等進(jìn)行皮膚消毒爾滅等進(jìn)行皮膚消毒; ;氯氣消毒水源氯氣消毒水源4 4、紫外線消毒、紫外線消毒(1)消毒的方法消毒的方法：3 3. .常用的消毒與滅菌的方法常用的消毒與滅菌的方法1 1、灼燒滅菌、灼燒滅菌2 2、干熱滅菌：、干熱滅菌：160-170

18、160-170 下加下加熱熱1-2h1-2h。3 3、高壓蒸氣滅菌、高壓蒸氣滅菌：100kPa100kPa、121 121 下維持下維持15-15-30min.30min.(2)滅菌的方法：滅菌的方法：消毒消毒滅菌滅菌條件條件溫和溫和強(qiáng)烈強(qiáng)烈作用作用范圍范圍物體表面或內(nèi)部一部物體表面或內(nèi)部一部分分,不包括芽孢和孢子不包括芽孢和孢子物體內(nèi)外所有微生物物體內(nèi)外所有微生物,包括芽孢和孢子包括芽孢和孢子無菌技術(shù)還能有效避免操作者自身被微生物感染無菌技術(shù)還能有效避免操作者自身被微生物感染。滅菌滅菌 滅菌滅菌 消毒消毒巴氏消毒法，營養(yǎng)成分不被破壞巴氏消毒法，營養(yǎng)成分不被破壞2.2.無菌范圍：無菌范圍：實(shí)驗(yàn)

19、操作空間消毒實(shí)驗(yàn)操作空間消毒操作者的手、衣著消毒操作者的手、衣著消毒實(shí)驗(yàn)用具滅菌實(shí)驗(yàn)用具滅菌實(shí)驗(yàn)操作過程實(shí)驗(yàn)操作過程二二. .無菌技術(shù)：無菌技術(shù)：防止外來雜菌的污染防止外來雜菌的污染1.1.消毒與滅菌：消毒與滅菌：酒精燈旁操作酒精燈旁操作超凈工作臺超凈工作臺1.1.計(jì)算計(jì)算2.2.稱量稱量3.3.溶化溶化4.4.滅菌滅菌5.5.倒平板倒平板三、實(shí)驗(yàn)操作步驟三、實(shí)驗(yàn)操作步驟（一）制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基（一）制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基1 1. .計(jì)算計(jì)算：（根據(jù)微生物生長時對營養(yǎng)物質(zhì)的需求）：（根據(jù)微生物生長時對營養(yǎng)物質(zhì)的需求）物質(zhì)物質(zhì)牛肉膏牛肉膏蛋白胨蛋白胨NaClNaCl瓊脂瓊脂水水重量重

20、量5g5g10g10g5g5g20g20g定溶至定溶至1000mL1000mL2.2.稱量稱量 準(zhǔn)確稱取各種成分，注意事項(xiàng)：牛肉膏要放在準(zhǔn)確稱取各種成分，注意事項(xiàng)：牛肉膏要放在稱量紙上稱量紙上稱量，牛肉膏、蛋白胨都易稱量，牛肉膏、蛋白胨都易吸潮吸潮，稱取時，稱取時動作要迅速，稱后及時蓋上瓶蓋動作要迅速，稱后及時蓋上瓶蓋。三、實(shí)驗(yàn)操作三、實(shí)驗(yàn)操作思考：該培養(yǎng)基從物理性質(zhì)分屬于哪種？原因？含有思考：該培養(yǎng)基從物理性質(zhì)分屬于哪種？原因？含有幾種營養(yǎng)成分？牛肉膏提供上述哪幾種成分？幾種營養(yǎng)成分？牛肉膏提供上述哪幾種成分？1 1計(jì)算計(jì)算 2 2。稱。稱量量操作步驟操作步驟 （加塞、包扎）滅菌（加塞、包扎

21、）滅菌高壓蒸氣滅菌 3.3.溶化溶化：先將先將牛肉膏連同稱量紙一起牛肉膏連同稱量紙一起放入燒放入燒杯，加少量水，加熱至牛肉膏溶化并與稱量紙杯，加少量水，加熱至牛肉膏溶化并與稱量紙分離后，用分離后，用玻璃棒玻璃棒取出稱量紙取出稱量紙。加入蛋白胨和。加入蛋白胨和氯化鈉，用玻璃棒攪拌使之溶解，再加入氯化鈉，用玻璃棒攪拌使之溶解，再加入瓊脂瓊脂，不斷用玻璃棒攪拌，不斷用玻璃棒攪拌，原因：防止瓊脂糊底而原因：防止瓊脂糊底而導(dǎo)致燒杯破裂導(dǎo)致燒杯破裂。待溶解后，加自來水定溶至待溶解后，加自來水定溶至100mL100mL。（熔化后滅菌前應(yīng)該調(diào)節(jié)。（熔化后滅菌前應(yīng)該調(diào)節(jié)PHPH) ) 4. 4.滅菌滅菌：將配制

22、好的培養(yǎng)基放到錐形瓶中（瓶口將配制好的培養(yǎng)基放到錐形瓶中（瓶口加棉塞，包上牛皮紙），連同培養(yǎng)皿（加棉塞，包上牛皮紙），連同培養(yǎng)皿（3 35 5套，用套，用幾層報(bào)紙包好）一起放到高壓蒸汽滅菌鍋內(nèi)滅菌。幾層報(bào)紙包好）一起放到高壓蒸汽滅菌鍋內(nèi)滅菌。 5.5.倒平板倒平板：待培養(yǎng)基冷卻到待培養(yǎng)基冷卻到5050O OC C左右左右時倒平板。時倒平板?？杀ＷC粘附在稱量紙上的牛肉膏也能可保證粘附在稱量紙上的牛肉膏也能溶于水中溶于水中,減少誤差減少誤差作為凝固劑作為凝固劑約約50防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染灼燒滅菌，灼燒滅菌，防止瓶口的微生物污染培養(yǎng)基防止瓶口的微生

23、物污染培養(yǎng)基在滅菌時能避免水蒸汽凝結(jié)時浸濕棉塞；在滅菌時能避免水蒸汽凝結(jié)時浸濕棉塞；在取出培養(yǎng)基錐形瓶時也能起到隔絕空氣中雜在取出培養(yǎng)基錐形瓶時也能起到隔絕空氣中雜菌污染的作用菌污染的作用不能不能,因?yàn)榕囵B(yǎng)皿要保持干燥因?yàn)榕囵B(yǎng)皿要保持干燥,應(yīng)該用干熱滅菌應(yīng)該用干熱滅菌倒平板操作的討論 1.1.培養(yǎng)基滅菌后要冷卻到培養(yǎng)基滅菌后要冷卻到5050O OC C時倒平板。用時倒平板。用什么辦法來估計(jì)培養(yǎng)基的溫度？什么辦法來估計(jì)培養(yǎng)基的溫度？ 用手觸摸錐形瓶，溫度下降到剛剛不燙手時用手觸摸錐形瓶，溫度下降到剛剛不燙手時即可開始倒平板。即可開始倒平板。 2.2.為什么需要使錐形瓶的為什么需要使錐形瓶的瓶口通

24、過火焰瓶口通過火焰？ 通過灼燒滅菌，防止瓶口的微生物污染培養(yǎng)通過灼燒滅菌，防止瓶口的微生物污染培養(yǎng)基?；?。 3.3.平板冷凝后，為什么要將平板冷凝后，為什么要將平板倒置平板倒置？ 平板冷凝后，皿蓋上會凝結(jié)水珠，凝固后的培平板冷凝后，皿蓋上會凝結(jié)水珠，凝固后的培養(yǎng)基表面的濕度也比較高，將平板倒置，既可以使養(yǎng)基表面的濕度也比較高，將平板倒置，既可以使培養(yǎng)基表面的水分更好地?fù)]發(fā)，又可以防止皿蓋上培養(yǎng)基表面的水分更好地?fù)]發(fā)，又可以防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染。的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染。 4.4.在倒平板的過程中，如果不小心將培養(yǎng)基濺在倒平板的過程中，如果不小心將培養(yǎng)基濺在在皿蓋與皿底皿蓋與皿

25、底之間的部位，這個平板還能用來培養(yǎng)之間的部位，這個平板還能用來培養(yǎng)微生物嗎？為什么？微生物嗎？為什么？ 空氣中的微生物可能在皿蓋與皿底之間的培養(yǎng)空氣中的微生物可能在皿蓋與皿底之間的培養(yǎng)基上滋生，因此最好不要用這個平板培養(yǎng)微生物?；献躺?，因此最好不要用這個平板培養(yǎng)微生物。四、大腸桿菌的純化培養(yǎng)四、大腸桿菌的純化培養(yǎng)分散成單個細(xì)胞分散成單個細(xì)胞, ,形成單個菌落形成單個菌落3.3.功能：功能：單個單個或少數(shù)菌體或少數(shù)菌體2.2.特征：特征：大小、形狀、光澤度、大小、形狀、光澤度、顏色、透明度等。顏色、透明度等。鑒定菌種鑒定菌種的重要依據(jù)的重要依據(jù)固體固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)基上大量繁殖大量繁殖子細(xì)胞群體

26、子細(xì)胞群體1.1.定義：定義：菌落細(xì)菌的菌落特征因種細(xì)菌的菌落特征因種而異而異 平板劃線法：菌種菌種劃劃3 3個平板個平板1 1個不劃線個不劃線1.1.接種：接種：接種環(huán)接種環(huán)防止劃破培養(yǎng)基防止劃破培養(yǎng)基（重復(fù)實(shí)驗(yàn)）（重復(fù)實(shí)驗(yàn)）（空白對照）（空白對照）四、大腸桿菌的純化培養(yǎng)四、大腸桿菌的純化培養(yǎng) 平板劃線的操作方法平板劃線的操作方法連續(xù)劃線法連續(xù)劃線法 1.1.為什么在操作的第一步以及每次劃線之前都要灼為什么在操作的第一步以及每次劃線之前都要灼燒接種環(huán)？在劃線操作結(jié)束時，仍然需要灼燒接種環(huán)燒接種環(huán)？在劃線操作結(jié)束時，仍然需要灼燒接種環(huán)嗎？為什么？嗎？為什么？操作的第一步灼燒接種環(huán)是為了避免接種

27、環(huán)上操作的第一步灼燒接種環(huán)是為了避免接種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)物可能存在的微生物污染培養(yǎng)物殺死上次殘留的菌種，保證使下一次劃線時，殺死上次殘留的菌種，保證使下一次劃線時，菌種直接來源于上次劃線的末端，從而通過劃菌種直接來源于上次劃線的末端，從而通過劃線次數(shù)的增加，使每次劃線時菌種的數(shù)目逐漸線次數(shù)的增加，使每次劃線時菌種的數(shù)目逐漸減少，以便得到菌落。減少，以便得到菌落。及時殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免細(xì)菌污染及時殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免細(xì)菌污染環(huán)境和感染操作者。環(huán)境和感染操作者。2.2.在灼燒接種環(huán)之后，為什么要等其冷卻后再進(jìn)行劃線？在灼燒接種環(huán)之后，為什么要等其冷卻后再進(jìn)行劃線？3.

28、3.在作第二次以及其后的劃線操作時，為什么總是從在作第二次以及其后的劃線操作時，為什么總是從上一次劃線的末端開始劃線？上一次劃線的末端開始劃線？答：以免接種環(huán)溫度太高，殺死菌種。答：以免接種環(huán)溫度太高，殺死菌種。答：劃線后，線條末端細(xì)菌的數(shù)目比線條起始處要少答：劃線后，線條末端細(xì)菌的數(shù)目比線條起始處要少，每次從上一次劃線的末端開始，能使細(xì)菌的數(shù)目隨，每次從上一次劃線的末端開始，能使細(xì)菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐步減少，最終能得到由單個細(xì)著劃線次數(shù)的增加而逐步減少，最終能得到由單個細(xì)菌繁殖而來的菌落。菌繁殖而來的菌落。6 6支試管，分別加入支試管，分別加入9ml9ml無菌水無菌水1ml1011

29、ml1021ml1031ml1041ml1051ml106稀釋涂布平板法稀釋涂布平板法：a.a.梯度稀釋菌液：梯度稀釋菌液：菌液菌液微量微量 移移液器液器稀釋涂布平板法：稀釋涂布平板法：a.a.梯度稀釋菌液：梯度稀釋菌液：b.b.涂布平板：涂布平板：不超過不超過0.1ml0.1ml各梯度分別涂布各梯度分別涂布3個平板個平板1 1個不涂布作空白對照個不涂布作空白對照滴滴灼灼試試涂涂稀稀釋釋10103 3倍倍稀稀釋釋10104 4倍倍稀稀釋釋10105 5倍倍稀釋涂布平板法獲取的菌落稀釋涂布平板法獲取的菌落平板劃線法：平板劃線法：1.1.接種：接種：稀釋涂布平板法：稀釋涂布平板法：2.2.培養(yǎng)：培

30、養(yǎng)：將將接種后接種后的培養(yǎng)基和一個的培養(yǎng)基和一個未接種未接種的培養(yǎng)基的培養(yǎng)基放入放入3737恒溫箱中培養(yǎng)恒溫箱中培養(yǎng)12h12h24h24h后，后，觀察并記錄觀察并記錄四、大腸桿菌的純化培養(yǎng)四、大腸桿菌的純化培養(yǎng)涂布平板操作討論涂布平板操作討論 涂布平板的所有操作都應(yīng)在火焰附近進(jìn)行。結(jié)涂布平板的所有操作都應(yīng)在火焰附近進(jìn)行。結(jié)合平板劃線與系列稀釋的無菌操作要求，想一想，合平板劃線與系列稀釋的無菌操作要求，想一想，第第2 2步應(yīng)如何進(jìn)行無菌操作？步應(yīng)如何進(jìn)行無菌操作？ 應(yīng)從操作的各個細(xì)節(jié)保證應(yīng)從操作的各個細(xì)節(jié)保證“無菌無菌”。例如，酒。例如，酒精燈與培養(yǎng)皿的距離要合適、吸管頭不要接觸任何精燈與培養(yǎng)

31、皿的距離要合適、吸管頭不要接觸任何其他物體、吸管要在酒精燈火焰周圍等等。其他物體、吸管要在酒精燈火焰周圍等等。 將接種后和未接種（作為對照組）的培養(yǎng)基均將接種后和未接種（作為對照組）的培養(yǎng)基均放到放到37370 0C C的恒溫箱中，培養(yǎng)的恒溫箱中，培養(yǎng)121224h24h后進(jìn)行觀察并后進(jìn)行觀察并記錄結(jié)果。記錄結(jié)果。 1.1.未接種的培養(yǎng)基表面是否有菌落生長？如未接種的培養(yǎng)基表面是否有菌落生長？如果有菌落生長，說明了什么？果有菌落生長，說明了什么？ 未接種的培養(yǎng)基在恒溫箱中保溫未接種的培養(yǎng)基在恒溫箱中保溫1 12 d2 d后無后無菌落生長，說明培養(yǎng)基的制備是成功的，否則需菌落生長，說明培養(yǎng)基的制

32、備是成功的，否則需要重新制備。要重新制備。 2.2.在接種大腸桿菌的培養(yǎng)基上，能否觀察到在接種大腸桿菌的培養(yǎng)基上，能否觀察到獨(dú)立的菌落？它們的大小、形狀、顏色相似嗎？獨(dú)立的菌落？它們的大小、形狀、顏色相似嗎？ 如果接種成功的話，在培養(yǎng)基的表面可觀察如果接種成功的話，在培養(yǎng)基的表面可觀察到大小、形狀、顏色相似的菌落。到大小、形狀、顏色相似的菌落。五、結(jié)果分析與評價(jià)五、結(jié)果分析與評價(jià) 3.3.培養(yǎng)培養(yǎng)12h12h和和24h24h后，觀察到的實(shí)驗(yàn)結(jié)果相同后，觀察到的實(shí)驗(yàn)結(jié)果相同嗎？如果不同，請分析產(chǎn)生差異的原因？嗎？如果不同，請分析產(chǎn)生差異的原因？ 培養(yǎng)培養(yǎng)12 h12 h與與24 h24 h后的大

33、腸桿菌菌落的大小會后的大腸桿菌菌落的大小會有明顯不同。隨著時間的延長、菌落的不斷生長有明顯不同。隨著時間的延長、菌落的不斷生長，使菌落不斷增大。，使菌落不斷增大。 4.4.如果在培養(yǎng)基上觀察到不同形態(tài)的菌落，如果在培養(yǎng)基上觀察到不同形態(tài)的菌落，請分析其可能的原因。請分析其可能的原因。 無菌操作未達(dá)到要求：可能是培養(yǎng)基滅菌不無菌操作未達(dá)到要求：可能是培養(yǎng)基滅菌不徹底；可能是接種時發(fā)生了污染；也可能是在培徹底；可能是接種時發(fā)生了污染；也可能是在培養(yǎng)的過程中受到了污染養(yǎng)的過程中受到了污染。五、（補(bǔ)）課題成果評價(jià)五、（補(bǔ)）課題成果評價(jià) 培養(yǎng)培養(yǎng)12 h12 h與與24 h24 h后的大腸桿菌菌落的大小

34、會有明顯不同后的大腸桿菌菌落的大小會有明顯不同（一）培養(yǎng)基的制作是否合格（一）培養(yǎng)基的制作是否合格如果未接種的培養(yǎng)基在恒溫箱中保溫如果未接種的培養(yǎng)基在恒溫箱中保溫12 d后無菌落生長，說明培養(yǎng)基的后無菌落生長，說明培養(yǎng)基的制備是成功的，否則需要重新制備。制備是成功的，否則需要重新制備。（二）接種操作是否符合無菌要求（二）接種操作是否符合無菌要求如果培養(yǎng)基上生長的菌落的顏色、形狀、大小基本一致，并符合大腸桿菌菌落如果培養(yǎng)基上生長的菌落的顏色、形狀、大小基本一致，并符合大腸桿菌菌落的特點(diǎn)，則說明接種操作是符合要求的；如果培養(yǎng)基上出現(xiàn)了其他菌落，則說的特點(diǎn)，則說明接種操作是符合要求的；如果培養(yǎng)基上出

35、現(xiàn)了其他菌落，則說明接種過程中，無菌操作還未達(dá)到要求，需要分析原因，再次練習(xí)。明接種過程中，無菌操作還未達(dá)到要求，需要分析原因，再次練習(xí)。（三）是否進(jìn)行了及時細(xì)致的觀察與記錄（三）是否進(jìn)行了及時細(xì)致的觀察與記錄1.1.臨時保藏：臨時保藏： 試管固體斜面培養(yǎng)基上試管固體斜面培養(yǎng)基上442.2.長期保存：長期保存：菌種易被污染、變異菌種易被污染、變異甘油管藏甘油管藏1ml1ml甘油甘油1ml1ml菌液菌液2020六、課題延伸（菌種的保藏）六、課題延伸（菌種的保藏）微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)培養(yǎng)基培養(yǎng)基無菌技術(shù)無菌技術(shù)制備牛肉蛋白胨固制備牛肉蛋白胨固體培養(yǎng)基體培養(yǎng)基純化大腸桿菌純化大腸桿菌

36、結(jié)果分析與評價(jià)結(jié)果分析與評價(jià)培養(yǎng)基的類型培養(yǎng)基的類型培養(yǎng)基的營養(yǎng)物質(zhì)培養(yǎng)基的營養(yǎng)物質(zhì)避免雜菌污染的方法避免雜菌污染的方法實(shí)驗(yàn)室常用的消毒方法實(shí)驗(yàn)室常用的消毒方法實(shí)驗(yàn)室常用的滅菌方法實(shí)驗(yàn)室常用的滅菌方法平板劃線法平板劃線法稀釋涂布法稀釋涂布法（步驟）（步驟）編號編號成分成分含量含量粉狀硫粉狀硫10g10g（NHNH4 4）2 2SOSO4 40.4g0.4gK K2 2HPOHPO4 44.0g4.0gMgSOMgSO4 49.25g9.25gFeSOFeSO4 40.5g0.5gCaClCaCl2 20.5g0.5gHH2 2OO100m100ml l例例3 3右表是某微生物右表是某微生物培養(yǎng)基成分，請據(jù)此回培養(yǎng)基成分，請據(jù)此回答：答：（1 1）右表培養(yǎng)基可培）右表培養(yǎng)基可培養(yǎng)的微生物類型是養(yǎng)的微生物類型是 。（2 2）若不慎將過量）若不慎將過量NaClNaCl加入培養(yǎng)基中。加入培養(yǎng)基中。如不想浪費(fèi)此培養(yǎng)基，如不想浪費(fèi)此培養(yǎng)基，可再