南醫(yī)微生物實(shí)驗(yàn)課件肥達(dá)腸道等

1、微生物與免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)（五）1主要內(nèi)容一、錄像：真菌二、操作：肥達(dá)試驗(yàn)三、示教：腸道桿菌 其他細(xì)菌 真菌2肥達(dá)試驗(yàn)原理：用已知的傷寒沙門菌菌體（O）抗原和鞭毛（H）抗原，以及引起副傷寒的甲型副傷寒沙門菌、乙型副傷寒沙門菌H抗原的診斷菌液與受檢血清做試管或微孔板凝集實(shí)驗(yàn)，測定受檢血清中有無相應(yīng)抗體及其效價(jià)的試驗(yàn)。3操作：肥達(dá)試驗(yàn)（試管凝集反應(yīng)）器材：試管6支/人，試管架1個(gè)/2人 吸管1支/人，標(biāo)簽1個(gè)/人已知： 傷寒H抗原、O抗原（4人/組） 甲型副傷寒H抗原 乙型副傷寒H抗原待檢：病人血清（1:10稀釋）40.5 ml生理鹽水 1 2 3 4 560.5 ml 0.5 ml 0.5 ml 0.5

2、 ml 0.5 ml0.5ml血清1：40 1：80 1：160 1：320 1：640 對(duì)照加菌液0.5ml/管（61），震蕩混勻，43水浴1.5 h，觀察結(jié)果5一、糖發(fā)酵試驗(yàn)由于細(xì)菌各自具有不同的酶系統(tǒng)，故對(duì)糖（醇）類的分解能力不盡相同。 產(chǎn)酸產(chǎn)氣 指示劑變色，小倒管內(nèi)有氣泡； 以 表示 產(chǎn)酸 指示劑變色；以表示 不能分解 指示劑不變色；以表示指示劑為酸性復(fù)紅細(xì)菌生化反應(yīng)6二、硫化氫試驗(yàn) 硫化氫遇鉛鹽或鐵鹽形成黑色硫化鉛或硫化亞鐵沉淀物。7三、吲哚（靛基質(zhì)）試驗(yàn) 有些細(xì)菌分解色氨酸生成吲哚（靛基質(zhì)），與加入的二甲基氨基苯甲醛反應(yīng)生成玫瑰吲哚呈玫瑰紅色為陽性；黃色為陰性。8四、尿素酶試驗(yàn) 有

3、些細(xì)菌具有尿素酶，能分解尿素形成大量的氨，使培養(yǎng)基PH上升，而變成堿性，使含有酚紅指示劑的培養(yǎng)基呈紅色為陽性；不變色為陰性。9腸道桿菌（G）10腸道桿菌的鑒定標(biāo)本增菌培養(yǎng)接種SS平板雙糖鐵培養(yǎng)基初步鑒定其他生化反應(yīng)鑒定血清學(xué)鑒定有菌可疑的乳白色菌落11SS培養(yǎng)基膽鹽枸櫞酸鹽煌綠乳糖蛋白胨中性紅抑制雜菌生長被非致病菌分解產(chǎn)酸被致病菌分解產(chǎn)堿酸：紅 堿：黃12雙糖鐵培養(yǎng)基 上層 （固體） 下層 （半固體）乳糖硫酸亞鐵酚紅葡萄糖13生化反應(yīng)表14白喉棒狀桿菌：G+ 一端或兩端膨大，排列不規(guī)則，常呈柵欄狀或英文字母樣，如V、W、X等其 他 細(xì) 菌革蘭染色15Albert染色觀察白喉?xiàng)U菌異染顆粒一端或兩

4、端16鑒別選擇培養(yǎng)基 含0.03%0.04%亞碲酸鉀血平板亞碲酸鉀血瓊脂平板上形成黑色菌落17Elek平板18炭疽桿菌：G粗大桿菌，兩端平切、排列呈竹節(jié)狀；有莢膜，芽胞呈橢圓形，位于菌體中央193035，普通瓊脂培養(yǎng)基上形成灰白色粗糙型菌落，邊緣不整齊，在低倍鏡下觀察呈卷發(fā)狀炭疽桿菌培養(yǎng)基20結(jié)核桿菌：羅氏培養(yǎng)基21厭氧芽胞梭菌破傷風(fēng)梭菌肉毒梭菌產(chǎn)氣莢膜梭菌22破傷風(fēng)梭菌：庖肉培養(yǎng)基、毒素動(dòng)物試驗(yàn)產(chǎn)氣莢膜梭菌：血平板（靶樣溶血）、庖肉培養(yǎng)基 高層瓊脂斷裂試驗(yàn)、洶涌發(fā)酵試驗(yàn)肉毒梭菌：庖肉培養(yǎng)基23真菌形態(tài)與結(jié)構(gòu)單細(xì)胞真菌 圓形或卵圓形 酵母菌(yeast) 多細(xì)胞真菌 菌絲和孢子 絲狀菌(fil

5、amentous fungus) 交織成團(tuán) 或霉菌(mold)二相性(dimorphic)24真 菌（fungus）大 分 生 孢 子25厚 膜 孢 子26白假絲酵母菌（白色念珠菌） G+27新生隱球菌（新型隱球菌） 墨汁負(fù)染28真菌培養(yǎng)物新生隱球菌：表面粘稠白假絲酵母菌：濃厚的酵母氣味29第6管 均勻混濁 少量凝集 細(xì)菌部分沉于管底，液體半澄清，凝集 呈顆粒狀 大部分凝集，液體輕度混濁，凝集塊較大 全部凝集，液體澄清，大片凝集塊以出現(xiàn)凝集的血清最高稀釋倍數(shù)為該血清抗體效價(jià)O達(dá)到1:80，H達(dá)到1:160 H甲或H乙達(dá)到1:80或以上有診斷意義結(jié)果判斷30 血清稀釋度 菌液 1：40 1：80 1：1