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文檔簡介
1、第十六章 基因診斷Gene Diagnosis.基因診斷以DNA或RNA為診斷資料,經(jīng)過檢查基因的存在、缺陷或表達異常,對人體形狀和疾病作出診斷的方法和過程.第一節(jié) 基因診斷的技術(shù)方法.一、基因診斷中常用的分子生物學方法 核酸分子雜交 PCR SSCPPCR-SSCP 限制酶酶譜分析 DNA序列測定 DNA芯片技術(shù). 核酸分子雜交制備樣品制備探針雜交檢測獲得稱心的高特異性雜交的關(guān)鍵是控制好雜交條件和雜交后沖洗條件.雜交雙鏈的穩(wěn)定程度主要由Tm值決議,影響Tm值的要素包括:雙鏈的堿基組成、長度、堿基錯配程度溶液離子強度變性劑的影響在無變性劑存在的情況下,最適雜交發(fā)生在比DNA/DNA Tm低20
2、25,比DNA/RNA Tm低1015. PCR普通與其它技術(shù)合用 單鏈構(gòu)象多態(tài)性SSCP檢測PCR- SSCP由于檢測點突變. 限制酶酶譜分析基因突變導(dǎo)致酶切位點的喪失或相對位置發(fā)生改動 DNA序列測定 DNA芯片技術(shù).二、基因診斷的根本方法基因變異致病的類型:內(nèi)源基因的變異基因構(gòu)造的突變點突變、插入、缺失、重排、異位基因表達異常mRNA剪接異常外源基因的插入.基因突變的診斷點突變的診斷診斷知的點突變 PCR/ASO 一對探針突變堿基置探針中央控制雜交條件結(jié)果分析:反向雜交技術(shù)基因芯片技術(shù):可檢測出新的突變類型.診斷未知的突變 PCR/SSCP/測序DNA芯片技術(shù).針對不同的點突變可采用的方
3、法PCR和限制酶酶解PCR/ASOH等位基因特異的PCR變性梯度凝膠電泳PCR/SSCPPCR/雙脫氧指紋法DDFPCR/測序.少數(shù)核苷酸缺失或插入的診斷大片段喪失或插入的診斷PCR/多重PCR基因重排染色體易位的診斷基因擴增的診斷.多態(tài)性連鎖分析DNA多態(tài)性在同種生物不同個體的基因組中,常存在一些不影響基因功能的DNA順序變異,稱為DNA多態(tài)性polymorphism.DNA多態(tài)性標志 RFLP短串聯(lián)反復(fù)序列short tandom repeat, STR單核苷酸多態(tài)性single nucleotide polymorphism, SNP.限制性片段長度多態(tài)性RFLPDNA酶切Souther
4、n雜交分析DNAPCR 酶切電泳分析由串聯(lián)反復(fù)順序?qū)е碌拈L度多態(tài)性STR含有較高的信息量且容易檢測STR由26個核苷酸串聯(lián)反復(fù)組成,微衛(wèi)星DNA.基因表達異常的診斷mRNA的相對定量分析斑點雜交或狹縫雜交RTPCRmRNA的絕對定量分析RTPCR/競爭性PCRmRNA長度分析Northern雜交/ RTPCR產(chǎn)物電泳. 外源DNA檢測核酸分子雜交PCR技術(shù).第二節(jié) 遺傳病的基因診斷.一、遺傳性疾病基因診斷的戰(zhàn)略直接診斷點突變間接診斷多態(tài)性連鎖分析.鐮刀型紅細胞貧血癥:第六位密碼由GAG突變成GTG.第三節(jié) 感染性疾病的基因診斷.一、感染性疾病基因診斷的戰(zhàn)略針對病原體特異的核酸序列設(shè)計探針進展雜交運用PCR技術(shù)擴增病原體基因保守序列核酸雜交技術(shù)與PCR技術(shù)結(jié)合運用.第四節(jié) 腫瘤的基因診斷.一、腫瘤基因診斷的戰(zhàn)略檢測腫瘤相關(guān)基因癌基因、抑癌基因、腫瘤轉(zhuǎn)移基因檢測腫瘤相關(guān)病毒的基因鼻咽癌EB,宮頸癌HPV檢測腫瘤標志物基因或mRNA 肝癌甲胎蛋白AFP結(jié)腸癌癌胚抗原CEA.二、腫瘤相關(guān)基因的檢測ras癌基因的檢測ras基因中最常見的點突變是第12,13或61密碼子突變檢測方法:PCR/ASOPCR-SSCP. p53的檢測p53基因突變主要為點突變,熱點區(qū)域位于密碼子130290檢測方法:PCR
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