公子小丑魚的人工繁殖,胚胎發(fā)育及不同鹽度對(duì)其幼魚生長(zhǎng)的影響(共54頁(yè))

1、PAGE 1學(xué)校代碼：研究生學(xué)號(hào)10264M100101041上 海 海 洋 大 學(xué)碩士學(xué)位論文(lnwn) 題 目：公子小丑魚（Amphiprion ocellaris）胚胎發(fā)育的形態(tài)學(xué)觀察及鹽度對(duì)幼魚生長(zhǎng)的影響英文題目：Morphological observation of embryonic development and effects of salinity on growth of False clownfish Amphiprion ocellaris專 業(yè)：水產(chǎn)養(yǎng)殖研究方向：海水觀賞魚繁殖與發(fā)育姓 名：鞠晨曦指導(dǎo)教師：蔡生力 李云 二O一三 年 四 月 九 日 上海海洋大學(xué)學(xué)

2、位(xuwi)論文原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明：我恪守學(xué)術(shù)道德，崇尚嚴(yán)謹(jǐn)學(xué)風(fēng)。所呈交的學(xué)位論文，是本人在導(dǎo)師的指導(dǎo)下，獨(dú)立進(jìn)行研究工作所取得的成果(chnggu)。除文中已經(jīng)明確注明和引用的內(nèi)容外，本論文不包含任何其他個(gè)人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的作品及成果的內(nèi)容。論文為本人親自撰寫，我對(duì)所寫的內(nèi)容負(fù)責(zé)，并完全意識(shí)到本聲明的法律結(jié)果由本人承擔(dān)。 學(xué)位論文作者(zuzh)簽名： 日期(rq)： 年 月 日上海海洋大學(xué)學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書學(xué)位論文作者完全了解學(xué)校有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，同意學(xué)校保留并向國(guó)家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和電子版，允許論文被查閱或借閱。本人授權(quán)上海海洋大學(xué)可以將本學(xué)位

3、論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存和匯編本學(xué)位論文。 保密 ，在 年解密后適用本版權(quán)書。本學(xué)位論文屬于 不保密 學(xué)位論文作者簽名： 指導(dǎo)教師簽名：日期： 年 月 日 日期： 年 月 日PAGE VI公子(gngz)小丑魚（Amphiprion ocellaris）胚胎(piti)發(fā)育的形態(tài)學(xué)觀察(gunch)及鹽度對(duì)幼魚生長(zhǎng)的影響摘 要公子小丑魚，學(xué)名為眼斑雙鋸魚，?？~屬(Amphiprion)，雀鯛科(Pomacentri- dae)，鱸形目（Perciformes）。公子小丑魚是最常見的海洋觀賞魚類，雌雄同體，雄性先熟，分布于西太平洋礁巖海

4、域。公子小丑魚以其鮮艷的色彩、漂亮的花紋及可愛的形象而深受水族愛好者的喜愛。挑選合適的野生的公子小丑魚個(gè)體在實(shí)驗(yàn)室條件下進(jìn)行配對(duì)，調(diào)控適宜的外界環(huán)境因子并進(jìn)行營(yíng)養(yǎng)強(qiáng)化使其產(chǎn)卵，產(chǎn)卵以后進(jìn)行人工孵化。仔魚在孵出的第2d即開口食用由小球藻(Chlorella sp)強(qiáng)化的褶皺臂尾輪蟲(Brachionus plicatilis),全長(zhǎng)4.24.4mm,為仔魚期，46d變態(tài)為稚魚,全長(zhǎng)5.15.4mm;開始投喂剛孵出的鹵蟲無(wú)節(jié)幼體,10d以后開始投喂經(jīng)小球藻強(qiáng)化的鹵蟲(Artemia sp)，1622d 進(jìn)入幼魚期,全長(zhǎng)10.012.4 mm，3545d開始投喂自制人工配合餌料。 在實(shí)驗(yàn)室水溫261

5、、鹽度281的條件下，對(duì)公子小丑魚胚胎發(fā)育過程中的形態(tài)學(xué)變化進(jìn)行了觀察研究。結(jié)果表明，公子小丑魚受精卵屬附著性卵，呈長(zhǎng)橢圓形,長(zhǎng)徑2.0mm0.1mm，短徑0.95mm0.1mm；其卵裂方式為端黃卵盤狀卵裂；胚胎發(fā)育可分為10個(gè)主要階段：卵裂前期、卵裂期、囊胚期、原腸期、神經(jīng)胚期、體節(jié)期、翻轉(zhuǎn)期、血管形成期、器官形成期和孵化期。發(fā)育過程中胚胎的顏色逐漸加深，呈現(xiàn)由橙黃色到棕黃色的變化；在26水溫條件下，整個(gè)胚胎發(fā)育過程需200h左右。在水溫261的條件下,研究了鹽度對(duì)公子小丑魚幼魚生長(zhǎng)、攝食、餌料利用率和生長(zhǎng)激素及其受體mRNA水平的影響。第42d和70d的試驗(yàn)結(jié)果都表明, 公子小丑魚幼魚在各

6、鹽度實(shí)驗(yàn)組成活率無(wú)顯著差異; 當(dāng)鹽度為25和30時(shí)生長(zhǎng)最快,鹽度20時(shí)次之,鹽度15和35時(shí)較慢;與之相應(yīng)的餌料轉(zhuǎn)換效率也是在鹽度25和30時(shí)最高,鹽度20、35、15依次降低;相對(duì)體重增長(zhǎng)率也是在鹽度25和30時(shí)最高,鹽度20、35、15依次降低。第70d時(shí)取樣進(jìn)行分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明，公子小丑魚腦垂體GHmRNA水平在鹽度15時(shí)最高，鹽度25次之，鹽度20、30、35時(shí)較低;肝臟GHR1mRNA水平在鹽度20、25、30時(shí)最高，鹽度35次之，鹽度15時(shí)最低;肝臟GHR2mRNA水平在鹽度25時(shí)最高，鹽度20時(shí)次之，鹽度30、35、15時(shí)較低。公子小丑魚幼魚GHR1和GHR2mRNA表達(dá)

7、量與其生長(zhǎng)呈正相關(guān)。說明公子小丑魚幼魚最適宜的生長(zhǎng)鹽度為25到30。關(guān)鍵詞：公子小丑魚，胚胎發(fā)育，形態(tài)學(xué)，鹽度(yn d)，成活率，生長(zhǎng)，生長(zhǎng)激素，生長(zhǎng)激素受體Morphological Observation of Embryonic Development and Effects of Salinity on Growth of False clownfish Amphiprion ocellarisABSTACTS False clownfish is placed in Amphiprion ocellaris, Pomacentridae, Perciformes. It is a

8、kind of common marine ornamental fish, hermaphrodite and cross-fertilization and widespread in the sea of south China, Philippines and the western Pacific. False clownfish is a popular fish for ornamental fish enthusiasts for the bright colore, beautiful pattern and lovely figure. The fish was colle

9、cted from the wild as broodstock, and cultured to mature and spawned in artificial condition. The larval fish could be fed rotifer strengthened by unicellular algae chlorella spp. in the next day after hatching and developed into juvenile at 46 days after hatching, newly hatched Artemia nauplii were

10、 supplied, from the 10th day Artemia nauplii strengthen by chlorella spp. were supplied, then developed into parr 1622 days after hatching. The parrs could be fed by artificially made compound feed at 35 45 days after hatching.The study was carried out to investigate the incubation period and the ch

11、anges of morphological character during the embryonic development of Amphiprion ocellaris at water temperature (261),salinity(281)in laboratory condition. It was found that the eggs belonged to the telolecithal and were subject to discoidal cleavage;The HYPERLINK app:ds:adhesiveness adhesive fertili

12、zed eggs, which were ellipsoidal, were 2.0mm0.1 mm long and 0.95mm0.1mm in diameter;The process of embryonic development could be divided into ten stages: pre-cleavage stage, cleavage stage, blastula stage, gastrula stage, neurula stage, somite stage, turnover stage, angiogenesis stage, organ format

13、ion stage and hatching stage. The color of the embryo changed gradually during the development procession, from orange-yellow to claybank. The whole incubation period is about 200h at water temperature 26. The effects of salinity on growth, feeding, food conversion rate (FCR), growth hormone and rec

14、eptor mRNA leve of young Amphiprion ocellaris were studied. The results of the 42th and 70th day showed that there is no significant effect on the survive rate for young Amphiprion ocellaris at each salinity levels. The young Amphiprion ocellaris had a highest growth at the 25 and 30 salinity levels

15、, higher growth at 20 and low growth at 15 and 35. The feed conversion ratio is also higher at the 25 and 30 salinity levels and then reduced along the 20, 35, 15 salinity levels. The growth rate of relative body weight is conformed to this law. The molecular biology study began at the 70th day, the

16、 result showed that the highest level of pituitary GHmRNA was at salinity 15 and higher at 35, the lowest level was at salinity 20, 30, 35. The highest level of hepar (liver) GHR1mRNA was at salinity 20, 25, 30 and higher at 35, the lowest level was at salinity 15. The highest level of hepar GHR2mRN

17、A was at salinity 25 and higher at 20, the lowest level was at salinity 15, 30, 35. The expression of GHR1mRNA and GHR2mRNA positively correlated with growth.The most suitable salinity range is 2535. Key words: false clownfish; Amphiprion ocellaris; embryonic development; morphology; salinity; growt

18、h; GHmRNA; GHR1mRNA; GHR2mRNA 目 錄 TOC o 1-5 h z u HYPERLINK l _Toc22192 摘 要 PAGEREF _Toc22192 I HYPERLINK l _Toc16543 ABSTACTS PAGEREF _Toc16543 III HYPERLINK l _Toc13437 引 言 PAGEREF _Toc13437 1 HYPERLINK l _Toc6283 1. 小丑魚分布和生活(shnghu)習(xí)性 PAGEREF _Toc6283 1 HYPERLINK l _Toc28506 2. 交配(jiopi)產(chǎn)卵 PAGERE

19、F _Toc28506 3 HYPERLINK l _Toc23603 3. 人工繁殖、胚胎(piti)發(fā)育和環(huán)境因子對(duì)仔幼魚的影響 PAGEREF _Toc23603 3 HYPERLINK l _Toc4936 4.熒光定量方法 PAGEREF _Toc4936 4 HYPERLINK l _Toc16603 5.繁殖生產(chǎn)中存在的問題 PAGEREF _Toc16603 5 HYPERLINK l _Toc7323 第一章 公子小丑魚養(yǎng)殖模式和人工繁殖 PAGEREF _Toc7323 6 HYPERLINK l _Toc1313 1 材料與方法 PAGEREF _Toc1313 6 HY

20、PERLINK l _Toc7340 1.1親魚養(yǎng)殖模式 PAGEREF _Toc7340 6 HYPERLINK l _Toc21860 1.1.1 親魚養(yǎng)殖系統(tǒng) PAGEREF _Toc21860 6 HYPERLINK l _Toc5409 1.1.2 親魚的來(lái)源 PAGEREF _Toc5409 7 HYPERLINK l _Toc8301 1.1.3 親魚的暫養(yǎng) PAGEREF _Toc8301 7 HYPERLINK l _Toc18033 1.1.4 親魚的配對(duì) PAGEREF _Toc18033 7 HYPERLINK l _Toc18017 1.1.5 親魚的培養(yǎng) PAGER

21、EF _Toc18017 7 HYPERLINK l _Toc21389 1.2幼體培育系統(tǒng) PAGEREF _Toc21389 7 HYPERLINK l _Toc7237 1.3 培育用水 PAGEREF _Toc7237 8 HYPERLINK l _Toc27608 1.4 生物餌料培養(yǎng) PAGEREF _Toc27608 8 HYPERLINK l _Toc20634 1.5 仔幼魚對(duì)餌料的需求 PAGEREF _Toc20634 8 HYPERLINK l _Toc30163 2.1 親魚產(chǎn)卵 PAGEREF _Toc30163 8 HYPERLINK l _Toc25050 2.

22、2 受精卵人工孵化 PAGEREF _Toc25050 9 HYPERLINK l _Toc18467 2.3 仔幼魚的孵化率和成活率 PAGEREF _Toc18467 10 HYPERLINK l _Toc7644 3討論 PAGEREF _Toc7644 10 HYPERLINK l _Toc11235 第二章 公子小丑魚胚胎發(fā)育的形態(tài)學(xué)觀察 PAGEREF _Toc11235 13 HYPERLINK l _Toc6510 1 材料與方法 PAGEREF _Toc6510 13 HYPERLINK l _Toc31320 1.1 實(shí)驗(yàn)用魚和養(yǎng)殖(yngzh)管理 PAGEREF _To

23、c31320 13 HYPERLINK l _Toc18854 1.2 胚胎(piti)發(fā)育觀察 PAGEREF _Toc18854 13 HYPERLINK l _Toc31113 2 結(jié)果(ji gu)與分析 PAGEREF _Toc31113 14 HYPERLINK l _Toc29870 2.1 卵裂前期 PAGEREF _Toc29870 15 HYPERLINK l _Toc30275 2.2 卵裂期（1h） PAGEREF _Toc30275 16 HYPERLINK l _Toc7717 2.3 囊胚期（5h） PAGEREF _Toc7717 16 HYPERLINK l

24、_Toc20369 2.4 原腸期（10h） PAGEREF _Toc20369 16 HYPERLINK l _Toc29507 2.5 神經(jīng)胚期（20h） PAGEREF _Toc29507 20 HYPERLINK l _Toc1722 2.6 體節(jié)期（22h） PAGEREF _Toc1722 20 HYPERLINK l _Toc7522 2.7 翻轉(zhuǎn)期（35h） PAGEREF _Toc7522 20 HYPERLINK l _Toc16432 2.8 血管形成期（56h） PAGEREF _Toc16432 21 HYPERLINK l _Toc21924 2.9 器官形成期（7

25、2h） PAGEREF _Toc21924 21 HYPERLINK l _Toc17701 2.10 孵化期（199h） PAGEREF _Toc17701 21 HYPERLINK l _Toc10939 3 討論 PAGEREF _Toc10939 22 HYPERLINK l _Toc21151 3.1 胚胎發(fā)育過程 PAGEREF _Toc21151 22 HYPERLINK l _Toc12846 3.2 孵化時(shí)間 PAGEREF _Toc12846 22 HYPERLINK l _Toc10813 3.3 胚胎顏色的變化 PAGEREF _Toc10813 23 HYPERLIN

26、K l _Toc26768 第三章 鹽度對(duì)公子小丑魚幼魚生長(zhǎng)和生長(zhǎng)激素及其受體mRNA水平的影響 PAGEREF _Toc26768 24 HYPERLINK l _Toc14857 1 材料與方法 PAGEREF _Toc14857 24 HYPERLINK l _Toc24694 1.1 實(shí)驗(yàn)材料 PAGEREF _Toc24694 24 HYPERLINK l _Toc7187 1.2 實(shí)驗(yàn)方法 PAGEREF _Toc7187 24 HYPERLINK l _Toc7742 1.2.1 生長(zhǎng)、成活率、攝食實(shí)驗(yàn) PAGEREF _Toc7742 24 HYPERLINK l _Toc29

27、607 1.2.2 生長(zhǎng)激素及其受體mRNA水平實(shí)驗(yàn) PAGEREF _Toc29607 25 HYPERLINK l _Toc11998 總RNA的提取 PAGEREF _Toc11998 25 HYPERLINK l _Toc7508 反轉(zhuǎn)錄及引物設(shè)計(jì) PAGEREF _Toc7508 25 HYPERLINK l _Toc14929 常規(guī)PCR PAGEREF _Toc14929 26 HYPERLINK l _Toc4138 熒光定量PCR 擴(kuò)增 PAGEREF _Toc4138 26 HYPERLINK l _Toc5734 1.3 數(shù)據(jù)分析 PAGEREF _Toc5734 26

28、HYPERLINK l _Toc460 2 結(jié)果 PAGEREF _Toc460 27 HYPERLINK l _Toc17653 2.1 不同鹽度對(duì)公子小丑魚幼魚成活率的影響 PAGEREF _Toc17653 27 HYPERLINK l _Toc11353 2.2 不同鹽度對(duì)公子小丑魚幼魚生長(zhǎng)及攝食的影響 PAGEREF _Toc11353 27 HYPERLINK l _Toc24773 2.3 熒光(ynggung)定量PCR分析 PAGEREF _Toc24773 31 HYPERLINK l _Toc19498 2.4 公子小丑魚生長(zhǎng)激素(shn chn j s)及其受體mRNA

29、基因與-actin mRNA 基因的熒光(ynggung)定量PCR標(biāo)準(zhǔn)曲線 PAGEREF _Toc19498 33 HYPERLINK l _Toc22190 2.5各鹽度組垂體GHmRNA相對(duì)表達(dá)量 PAGEREF _Toc22190 35 HYPERLINK l _Toc23803 3 討論 PAGEREF _Toc23803 36 HYPERLINK l _Toc29881 3.1鹽度變化對(duì)公子小丑魚幼魚存活與生長(zhǎng)的影響 PAGEREF _Toc29881 36 HYPERLINK l _Toc6403 3.2 鹽度變化對(duì)公子小丑魚幼魚生長(zhǎng)激素及其受體mRNA水平的影響 PAGERE

30、F _Toc6403 36 HYPERLINK l _Toc26441 小 結(jié) PAGEREF _Toc26441 38 HYPERLINK l _Toc4599 參考文獻(xiàn) PAGEREF _Toc4599 39 HYPERLINK l _Toc15515 攻讀碩士期間發(fā)表的論文 PAGEREF _Toc15515 43 HYPERLINK l _Toc15129 致 謝 PAGEREF _Toc15129 44PAGE 54引 言公子(gngz)小丑，?？?hi ku)魚屬(Amphiprion)，雀鯛科(Pomacentridae)，鱸形目（Perciformes）。分布于中國(guó)(zhn u

31、)南海、菲律賓、西太平洋的礁巖海域。性成熟后雌魚體形比雄魚大。野生雌性成體體長(zhǎng)10-12cm，人工水族缸養(yǎng)殖體長(zhǎng)多不大于10cm。體色橘紅，橢圓形，體側(cè)有三條銀白色環(huán)帶，分別位于眼睛后、背鰭中央、尾柄處，其中背鰭中央的白帶在體側(cè)形成三角形，各鰭橘紅色有黑色邊緣，喜歡躲在?？?。公子小丑魚由于其鮮艷的色彩、漂亮的花紋及可愛的形象而深受水族愛好者的喜愛。從1997到2002，公子小丑魚占據(jù)了世界觀賞魚類魚類總出口量15.6%和歐洲國(guó)家進(jìn)口份額的25%以上1。海水觀賞魚也占到美國(guó)漁業(yè)貿(mào)易出口總額的20%，價(jià)值約8.9億美元（Johunstou）2。迪士尼動(dòng)畫大片海底總動(dòng)員的熱播更是讓公子小丑魚“尼莫

32、”成為家喻戶曉的明星，也使其銷量增加了兩倍。隨著經(jīng)濟(jì)的飛速發(fā)展和人民對(duì)精神文化需求的提高，海水水族缸在2000年后開始在國(guó)內(nèi)興起并飛速發(fā)展，目前在國(guó)內(nèi)大中城市，海水觀賞魚店如雨后春筍般出現(xiàn)。 由于受人工繁殖技術(shù)和生產(chǎn)規(guī)模的局限，目前市場(chǎng)上銷售的公子小丑魚仍以捕撈野生自然群體為主，并多用氰化物等有毒化學(xué)品進(jìn)行捕撈，采捕后由于氰化物的毒性和長(zhǎng)途運(yùn)輸中的氨中毒，能夠作為商品進(jìn)入市場(chǎng)的不足20%3，而且氰化物還會(huì)傷害無(wú)法逃避的珊瑚等海洋生物，破壞珊瑚礁區(qū)的生態(tài)平衡，所以海水觀賞魚的大規(guī)模商業(yè)化人工繁育就變得勢(shì)在必行。目前國(guó)內(nèi)外已有不少學(xué)者對(duì)公子小丑魚的生理生態(tài)、繁殖發(fā)育做了初步研究4-7，并成功進(jìn)行了

33、人工育苗和批量化生產(chǎn)，但規(guī)模仍較小，滿足不了市場(chǎng)所需。1. 小丑魚分布和生活習(xí)性小丑魚是對(duì) HYPERLINK /view/99297.htm t _blank 雀鯛科?？~亞科 HYPERLINK /view/27863.htm t _blank 魚類的俗稱，是一種熱帶海洋魚類。已知有28種，一種來(lái)自棘頰雀鯛屬（Premnas），其余來(lái)自 HYPERLINK /view/14301.htm t _blank 雙鋸魚屬（Amphiprion）。小丑魚與 HYPERLINK /view/24864.htm t _blank ?？兄懿豢煞值墓采P(guān)系，因此又稱?？~。帶毒刺的?？Ｗo(hù)小丑魚，小丑

34、魚則吃?？蟮臍?jiān)?，形成一種互利共生的關(guān)系。形態(tài)特征：背棘(總數(shù))，12 - 12；背的軟條 (總數(shù))，14 - 16；臀棘 2； HYPERLINK /view/406958.htm t _blank 臀鰭軟條，1415，稚魚全體是黑色的；前額與上側(cè)面上有白色的斑塊；所有 HYPERLINK /view/66023.htm t _blank 鰭的外緣都是黑色。成魚的地理分布和顏色是可變的。見圖1圖1 公子(gngz)小丑魚Fig.1 Amphiprion ocellaris（2）生態(tài)習(xí)性(xxng)及食性：棲息(qx)于珊瑚礁與巖礁，常與大的?？?， HYPERLINK /view/648

35、13.htm t _blank 海膽或小的 HYPERLINK /view/1137.htm t _blank 珊瑚頂部共生。形成小群到大群魚群。胃內(nèi)含物包括藻類，橈足類及其他的浮游性 HYPERLINK /view/178719.htm t _blank 甲殼動(dòng)物。（3）常見種類：公子小丑：分布于 HYPERLINK /view/61891.htm t _blank 中國(guó)南海、菲律賓、西太平洋的礁巖 HYPERLINK /view/931683.htm t _blank 海域，屬雀鯛科，體長(zhǎng)10-12cm，橢圓形。體色橘紅，體側(cè)有三條銀白色環(huán)帶，分別位于眼睛后、背鰭中央、尾柄處，其中背鰭中央

36、的白帶在體側(cè)形成三角形，各鰭橘紅色有黑色邊緣。紅小丑：Amphiprion frenatus，地理分布 分布在西太平洋的珊瑚礁海域，分布范圍包括 HYPERLINK /view/47720.htm t _blank 泰國(guó)灣至帕勞群島西南部，北至 HYPERLINK /view/1554.htm t _blank 日本南部，南至印度尼西亞的 HYPERLINK /view/90350.htm t _blank 爪哇一帶海域。成魚體呈橢圓形而側(cè)扁，吻短而鈍。眼中大，上側(cè)位?？诖?，上頜骨末端不及眼前緣；齒單列，齒端具缺刻。背鰭單一，軟條部延長(zhǎng)而呈方形；尾鰭呈扇形，上下葉外側(cè)鰭條不延長(zhǎng)呈絲狀。成魚體黑

37、色，頭部、胸 HYPERLINK /view/1508094.htm t _blank 腹部以及身體各鰭均為紅色。眼睛后方具一鑲白緣之寬白帶，向下延伸至喉峽部。亞成魚體一致橙黃色，眼睛后方具一白色豎帶。隨著成長(zhǎng)，體色逐漸轉(zhuǎn)紅，且身體后方出現(xiàn)黑斑并擴(kuò)散至整個(gè)身體。透紅小丑魚：Premnas biaculeatus，分布于印度洋、太平洋的珊瑚礁海域，屬雀鯛科，體長(zhǎng)10-15cm，橢圓形。全身紫黑色，各鰭紫紅色，體側(cè)在眼睛后、背鰭中間、尾柄處有三條銀白色環(huán)帶。小丑魚也通常被叫為?？~,與特定的?？M成一種互利共生的關(guān)系。一個(gè)大的?？ㄖ睆綖橐幻祝┛梢员幼o(hù)多達(dá)30多個(gè)各種大小的小丑魚。所有的小丑魚都是

38、雄性先熟的雌雄同體魚，開始是雄性后來(lái)變?yōu)榇菩?。與其它雀鯛科魚類的成對(duì)關(guān)系不一樣的是，大部分小丑魚種類都是永久的一夫一妻制。雌雄的結(jié)合非常緊密直到其中的一個(gè)成員消失時(shí)才會(huì)被打破。在大部分情況下，雌性的死亡更普遍，因?yàn)榇菩砸话闶亲畲蠛妥罾系膫€(gè)體，當(dāng)一個(gè)小丑魚家族的的雌魚死亡后，雄魚會(huì)轉(zhuǎn)化為雌魚，與此同時(shí)優(yōu)勢(shì)的未成熟的雄魚就會(huì)轉(zhuǎn)化為成熟的雄魚，這個(gè)過程通常需要幾個(gè)月到一年才能徹底完成，而且這個(gè)過程是不可逆的8,9。小丑魚在深海產(chǎn)卵，把單層的卵產(chǎn)到堅(jiān)硬的基面上。在自然環(huán)境中，?？麜?huì)警戒著卵使之不受外界侵?jǐn)_，因?yàn)槁言诤？墓茌?gunxi)范圍之內(nèi)。親魚通常都照顧受精卵直到幼魚孵出。用鰭條扇動(dòng)的行為使圍

39、繞在巢穴的水富含氧氣，同時(shí)用嘴去除受損和壞掉的卵以保證健康的卵不被污染10。2. 交配(jiopi)產(chǎn)卵公子小丑魚典型(dinxng)的產(chǎn)卵信號(hào)是親魚在產(chǎn)卵前約3-4小時(shí)清潔陶罐內(nèi)部的污點(diǎn)。在此期間，雌性的產(chǎn)卵器，一個(gè)白色的小管，從肛門附近的微孔延伸出來(lái)。根據(jù)對(duì)于小丑魚的產(chǎn)卵觀察，透紅小丑魚一般在上午十一點(diǎn)左右產(chǎn)卵，而公子小丑一般在下午產(chǎn)卵，時(shí)間不定。雄魚積極的參與瓦罐的清潔工作而雌魚在產(chǎn)卵前0.5-1h更積極參與瓦罐的清理。 在第一批10到20個(gè)卵被產(chǎn)出后，雌魚將在產(chǎn)下下一批卵之前仔細(xì)檢查這批卵。這些卵被產(chǎn)在陶罐的內(nèi)壁并呈圓形排列。雌魚產(chǎn)卵后，雄魚肛門孔擴(kuò)大對(duì)卵進(jìn)行受精。雄魚在卵上游動(dòng)并用生

40、殖器觸碰卵。這種行為在魚進(jìn)行下一組魚產(chǎn)卵前通常重復(fù)2-3次。剛產(chǎn)的卵為橙黃色，長(zhǎng)橢圓形(2.01.0mm),而且在卵黃的中部成輕微的弧形。卵可以通過外殼看到因?yàn)槁涯な峭该鞯?。卵黃呈鮮亮的橙色，同時(shí)油滴清晰可見。3. 人工繁殖、胚胎發(fā)育和環(huán)境因子對(duì)仔幼魚的影響 目前對(duì)于海水觀賞魚的專業(yè)性研究相對(duì)較少，主要集中在生活習(xí)性11,12、分布13,14、分類、生理、人工繁殖與發(fā)育等的研究。能夠?qū)崿F(xiàn)人工繁殖的也僅限于蝦虎科、擬雀鯛科和雀鯛科的幾個(gè)品種，蝦虎科有金燈蝦虎（Elacatinus sp）、藍(lán)燈蝦虎（Elacatinus oceanops）15等，擬雀鯛科有美國(guó)草莓（Pseudochromis f

41、ridmani）16、藍(lán)線（Pseudochromis springeri）、日出龍（Pseudochromis flavivertex）17等，雀鯛科主要就集中在小丑魚身上，小丑魚是對(duì)雀鯛科海葵魚亞科魚類的俗稱，已發(fā)現(xiàn)的小丑魚約有28種，目前報(bào)道能夠人工繁育的有十幾種。雖然在海水水族缸里人工養(yǎng)殖小丑魚歷史已有幾十年, 而且早在1978年Ross就研究了黑紅小丑(Amphiprion melanopus)的繁殖習(xí)性18，但對(duì)小丑魚進(jìn)行人工繁殖和發(fā)育的相關(guān)研究主要在近十年。2000年M.Arvedlund等研究了黑紅小丑的光周期對(duì)黑紅小丑(A.melanopus)仔稚魚生長(zhǎng)的影響19，2001年

42、Ignatius等研究了一種黑雙帶小丑（A.sebae）的人工繁育技術(shù)20，2002年Madhu報(bào)道了黑邊公子小丑(A.percula)的人工繁殖21，2004年Bridget報(bào)道了黑紅小丑(A.melanopus)胚胎發(fā)育和耗氧量之間的關(guān)系22，2005年Ho描述了銀邊小丑(A.perideraion)親魚的繁殖行為以及胚胎發(fā)育及幼體培養(yǎng)23；Sukjai描述了鞍背小丑(A polymnus)的胚胎發(fā)育24；滕力平等簡(jiǎn)述了二線小丑的人工繁殖和胚胎發(fā)育25；Aratake先后研究了將紅雙帶小丑(A.clarkii)暫養(yǎng)在日本九州島的西、南兩個(gè)海域中產(chǎn)卵卵徑及數(shù)量的季節(jié)性變化和卵徑與蘊(yùn)含能量之間

43、的關(guān)系26,27，2006年L J LIEW和何興源分別報(bào)道了公子小丑實(shí)驗(yàn)室條件下的胚胎發(fā)育和生殖行為與育苗5,6，2007年Yasir報(bào)道了公子小丑魚(Aocellaris)繁殖習(xí)性及胚胎和仔魚的發(fā)育4，2008年鮑鷹等先后對(duì)紅小丑(A.frenatus)人工育苗與胚胎發(fā)育和透紅小丑（P biaculeatus）人工繁殖與育苗進(jìn)行了初步的研究28,29，2009年K V Dhaneesh描述了黑邊小丑(A percula)的胚胎發(fā)育30，2010年王斌對(duì)公子小丑魚的人工繁育技術(shù)進(jìn)行了初步的研究7，2011年Ye Le等報(bào)道了溫度對(duì)紅雙帶小丑(A.clarkii)幼魚成活率、發(fā)育、生長(zhǎng)的影響3

44、1，2012年K.V.Dhaneesh等報(bào)道了線小丑(A akallopisos)的繁殖、胚胎發(fā)育和耐鹽性32。綜上所述，十年來(lái)對(duì)于小丑魚繁殖與發(fā)育的研究(ynji)呈井噴之勢(shì)，國(guó)內(nèi)對(duì)于小丑魚的研究也開始逐漸增多，隨著對(duì)小丑魚發(fā)育和繁殖機(jī)理的研究不斷深入，相信小丑魚的大規(guī)模商業(yè)化必將(b jin)成為現(xiàn)實(shí)。4.熒光定量(dngling)方法實(shí)時(shí)熒光定量PCR（Real-time PCR）技術(shù)由美國(guó)Applied Biosystems 公司推出，它實(shí)現(xiàn)了PCR從定性到定量的飛躍。熒光定量PCR 具有特異性強(qiáng)，無(wú)污染，自動(dòng)化程度高等優(yōu)點(diǎn)，廣泛應(yīng)用于不同的研究領(lǐng)域。實(shí)時(shí)熒光定量PCR（Real-ti

45、me PCR）技術(shù)是指在普通的PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號(hào)的累積實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR過程，最后通過構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)曲線和目的及內(nèi)參基因達(dá)到熒光閾值的CT值對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析。熒光化學(xué)材料可分為熒光染料和熒光探針兩類。熒光染料主要以SYBR Green為主要代表，是非特異性熒光化學(xué)材料。SYBR Green 是熒光定量常用的染料，SYBR Green可以與擴(kuò)增過程中形成的雙鏈DNA結(jié)合并且發(fā)出熒光。在游離的狀態(tài)下，SYBR Green只能發(fā)出非常微弱的熒光，但是SYBR Green與雙鏈DNA結(jié)合之后，熒光的強(qiáng)度就可以增強(qiáng)到其在游離狀態(tài)的1000倍以上。所以一個(gè)PCR反應(yīng)中檢測(cè)到的全部熒

46、光信號(hào)與擴(kuò)增得到的雙鏈DNA量的是成正比例關(guān)系的，我們也就可以通過檢測(cè)熒光信號(hào)計(jì)算出出PCR體系中擴(kuò)增出來(lái)的的雙鏈DNA的量。5.繁殖生產(chǎn)中存在的問題首先是人工配對(duì)的問題，親魚如和配對(duì)，如何挑選親魚，其次是配對(duì)后使用什么餌料才能促使親魚成熟并產(chǎn)卵，產(chǎn)卵后胚胎發(fā)育所需要的條件，如何人工孵化，孵化后幼魚生長(zhǎng)的最佳條件，比如用什么餌料、鹽度、溫度、光照、pH、溶氧、氨氮亞硝酸鹽、海水中鎂離子與鈣離子的比例與含量等等還研究很少，并沒有產(chǎn)生完整的操作規(guī)范。小丑魚是雄性先熟的雌雄同體魚，在生長(zhǎng)過程中可能會(huì)經(jīng)歷由雄性向雌性的性逆轉(zhuǎn)，性逆轉(zhuǎn)的過程中主要由什么基因控制，也研究不多。本文的介紹了公子小丑魚親魚的養(yǎng)

47、殖模式及人工繁殖，觀察了胚胎發(fā)育(fy)的形態(tài)學(xué)變化，并研究了鹽度對(duì)公子小丑魚幼魚生長(zhǎng)、攝食(shsh)、餌料(r lio)利用率和生長(zhǎng)激素及其受體mRNA水平的影響，以期為公子小丑魚和其它海水觀賞魚的大規(guī)模人工繁殖提供更多的理論依據(jù)。第一章 公子小丑魚養(yǎng)殖模式和人工繁殖1 材料(cilio)與方法 1.1親魚養(yǎng)殖(yngzh)模式 1.1.1 親魚養(yǎng)殖(yngzh)系統(tǒng) 親魚培育系統(tǒng)共有上下四個(gè)玻璃缸，下面一個(gè)為過濾缸（808060cm）。上面三個(gè)為養(yǎng)殖缸（805040cm）。最上面一個(gè)養(yǎng)殖缸養(yǎng)羽毛藻來(lái)調(diào)控水質(zhì)，中間兩個(gè)養(yǎng)殖缸每個(gè)隔為三格，每格放入一個(gè)產(chǎn)卵罐供親魚產(chǎn)卵。 圖1-1親魚養(yǎng)殖系統(tǒng)

48、 Fig.1-1 Broodstock breeding system 1.1.2 親魚的來(lái)源(liyun) 第一批親魚購(gòu)自浙江(zh jin)海水養(yǎng)殖研究所，以后的幾批均購(gòu)自廣州花地灣水族市場(chǎng)(shchng)，其來(lái)源為菲律賓和印尼的珊瑚礁海域。 1.1.3 親魚的暫養(yǎng) 鹽度為25-30，養(yǎng)殖水溫為281，pH為8.0-8.1，光照2500-5000lx，NH3-N水平低于0.5mg/L,NO2-N水平低于0.15 mg/L，NO3-N水平低于25mg/L。 1.1.4 親魚的配對(duì) 選擇體長(zhǎng)在8cm以上的作為雌魚，體長(zhǎng)7cm以下的較大個(gè)體為雄魚。雌雄比例可以按1:1,1:2,1:N等。 1.1

49、.5 親魚的培養(yǎng) 控制親魚養(yǎng)殖水溫為261，pH為8.0-8.1，鹽度為27-29，光照2500 -5000lx，NH3-N水平低于0.5mg/L,NO2-N水平低于0.15 mg/L，NO3-N水平低于50mg/L。水溫通過水系統(tǒng)中加熱棒控制。每天下午用虹吸管吸出缸底剩餌，及時(shí)補(bǔ)充因虹吸損失的水，每三天檢測(cè)并調(diào)整一次鹽度。在水系統(tǒng)中適量培養(yǎng)羽毛藻等水生植物來(lái)調(diào)控改善水質(zhì)。每天投喂由鮮蝦肉，魷魚，蟶子，冰凍鹵蟲，冰凍紅蟲，螺旋藻等混合而成的自制配合餌料。分別于上午10:00和下午4:00投喂2次。1.2幼體培育系統(tǒng) 仔魚，幼魚養(yǎng)殖在800L的圓柱形塑料桶中，桶中央固定一個(gè)氣石，溫度用加熱棒來(lái)控

50、制。圖1-2 魚苗(ymio)養(yǎng)殖容器模式圖（自張雅靜）Fig.1-2 sketch of barrel for larval culture圖1-3 魚苗養(yǎng)殖(yngzh)容器實(shí)體圖 Fig.1-3 entity of barrel for larval culture 1.3 培育(piy)用水 試驗(yàn)用水為以色列RED SEA海鹽和淡水配制而成。1.4 生物餌料培養(yǎng) 小丑魚仔幼魚生長(zhǎng)所需要的生物餌料主要為輪蟲和鹵蟲無(wú)節(jié)幼體。輪蟲需要投喂小球藻才能存活和不斷繁殖。鹵蟲無(wú)節(jié)幼體用幸運(yùn)牌鹵蟲卵孵化得到，投喂時(shí)把蟲體和卵殼以及沒有孵化的蟲卵分離。1.5 仔幼魚對(duì)餌料的需求仔、稚魚培養(yǎng)期間的水溫控制

51、在271，pH為8.0-8.2，鹽度控制在27-29，氨氮量低于0.1 mg/L。仔魚孵化后前三天投喂用小球藻強(qiáng)化的輪蟲，輪蟲的密度保持在1015個(gè)/ml左右。第四天開始投喂輪蟲并開始投喂鹵蟲無(wú)節(jié)幼體，此期保證輪蟲的密度保持在5個(gè)/ml左右，鹵蟲無(wú)節(jié)幼體的密度保持在3個(gè)/ml左右。第七天開始全部用鹵蟲無(wú)節(jié)幼體投喂，鹵蟲無(wú)節(jié)幼體的密度保持在5個(gè)/ml左右，第十天以后投喂用小球藻強(qiáng)化培養(yǎng)的鹵蟲，可根據(jù)稚魚的體長(zhǎng)培養(yǎng)大小相適應(yīng)的鹵蟲。一個(gè)月后可以投喂小顆粒飼料和自制人工配合飼料。每天下午吸出缸底的污物，每天更換水體1/10的左右的水。2 實(shí)驗(yàn)(shyn)結(jié)果 2.1 親魚產(chǎn)卵(chn lun) 公子

52、(gngz)小丑魚親魚一般在白天產(chǎn)卵，產(chǎn)卵時(shí)雌魚的輸卵管明顯伸長(zhǎng)，雄魚的輸精管也伸長(zhǎng)，雌魚身體抖動(dòng)，依次將卵粒排在瓦罐上，雄魚以相同的動(dòng)作排精，雌魚身體抖動(dòng)一次可產(chǎn)卵幾十粒，然后雄魚排精，以此往復(fù)幾十次，魚卵為粘性卵，排列緊密，在瓦罐上形成大約3cm5cm的卵塊，產(chǎn)卵一般持續(xù)60min，平均產(chǎn)卵量為200500。圖1-4 公子小丑魚受精卵 Fig.1-4 the fertilized egg of A. ocellaris2.2 受精卵人工孵化公子小丑魚的胚胎發(fā)育在26度左右需要200h，產(chǎn)卵后160h眼睛開始變亮，反光性極強(qiáng)，這是判斷孵化時(shí)間的重要標(biāo)志。孵化當(dāng)天用氣石調(diào)節(jié)適量的氣流吹動(dòng)受精卵

53、，以模擬親魚用鰭扇動(dòng)受精卵，防止其缺氧死亡。孵化率在90%以上。圖1-5 受精卵人工孵化 Fig.1-5 Fertilized egg artificial incubation2.3 仔幼魚的孵化率和成活率根據(jù)從2011年2月至9月對(duì)18批公子(gngz)小丑魚仔幼魚的孵化率的統(tǒng)計(jì)，其孵化率高達(dá)93.235.56%。魚苗前十五天的成活率如圖所示，孵化后當(dāng)天成活率接近100%，第二天部分體質(zhì)較差的魚苗開始死亡，成活率大幅下降。孵化后的第四天部分生長(zhǎng)(shngzhng)快的魚苗開始攝食鹵蟲無(wú)節(jié)幼體，而一部分體質(zhì)較差，競(jìng)爭(zhēng)力較弱的魚苗由于無(wú)法攝食足夠的輪蟲，也開始部分死亡，使成活率有所下降。孵化后

54、第十天，由于魚苗在這個(gè)階段很貪吃，有部分魚苗撐死導(dǎo)致成活率降低。魚苗(ymio)在孵出的第2d，全長(zhǎng)4.24.4mm,為仔魚期，成活率為68.212.76%；第5d變態(tài)為稚魚,全長(zhǎng)5.15.3mm，成活率為39.673.34%;第15d開始進(jìn)入幼魚期,全長(zhǎng)9.510.53 mm，成活率為20.351.78%。（圖1-6）圖1-6 魚苗孵化后15d內(nèi)成活率變化Fig.1-6 The survive rate change of the fry within 15 days after hatching3討論(toln) 公子小丑魚雌性成熟時(shí)間較晚，由人工養(yǎng)殖愛好者報(bào)道的來(lái)總結(jié)，小丑魚從人工孵化到

55、產(chǎn)卵需要兩年以上，所以購(gòu)買人工繁殖三個(gè)月大的幼魚來(lái)作為親魚配對(duì)周期太長(zhǎng)。親魚的來(lái)源主要就集中于野外捕撈。野外捕撈又可分為(fn wi)網(wǎng)捕和藥捕，網(wǎng)捕成本較高，而且數(shù)量有限，所以市場(chǎng)上見到的大部分海水觀賞魚都來(lái)自氰化鈉捕撈，但是采捕后由于氰化物的毒性和長(zhǎng)途運(yùn)輸中的氨中毒，公子小丑魚暫養(yǎng)時(shí)如果處理不當(dāng)會(huì)有超過80%在十天內(nèi)死亡(swng)。由于氰化物的毒性和長(zhǎng)途運(yùn)輸中的氨中毒，小丑魚非常虛弱，這個(gè)時(shí)候不用喂食，并按水體體積滴入少量的水質(zhì)穩(wěn)定劑。由于其身體虛弱導(dǎo)致滲透壓調(diào)節(jié)能力的降低，所以選擇鹽度為25-30，防止因鹽度變化過快引起的應(yīng)激。此時(shí)要保證水質(zhì)盡量接近珊瑚礁海域的水平。由于一個(gè)野生小丑魚

56、家族中只有一只為雌魚，有幾條相對(duì)較大的為雄魚，而大部分都是沒有成熟的雄魚。所以配對(duì)時(shí)應(yīng)選擇體長(zhǎng)在8cm以上的作為雌魚，由于由雄魚變?yōu)榇启~的過程是不可逆的，所以最好選擇體長(zhǎng)7cm以下的較大個(gè)體為雄魚。雌雄比例可以按1:1,1:2,1:N等，一條雌魚和多條雄魚可以增加配對(duì)的成功率，配對(duì)成功的兩條小丑魚會(huì)共同生活在一個(gè)瓦罐里，并且會(huì)驅(qū)趕其他沒有配對(duì)的雄魚，這個(gè)時(shí)候就可以把沒有配對(duì)的雄魚撈出。 如何配對(duì)和促使親魚成熟產(chǎn)卵是公子小丑魚繁殖過程中的難點(diǎn)，曾觀察到配對(duì)后正在產(chǎn)卵的一對(duì)親魚中雄魚死亡的情況，將另一對(duì)尚未產(chǎn)卵的雄魚與此雌魚配對(duì)，十天后新配對(duì)的親魚重新產(chǎn)卵。以此推測(cè)性成熟的雌魚能刺激或加快未成熟的

57、雄魚性成熟，或者公子小丑魚配對(duì)后未產(chǎn)卵的原因是雌魚未性成熟，顯然雌魚是否性成熟對(duì)一對(duì)小丑魚能否產(chǎn)卵起著更為關(guān)鍵的作用。充氣對(duì)魚卵的孵化非常重要，自然狀況下魚卵的胚胎發(fā)育需要親魚不斷地用鰭扇動(dòng)魚卵來(lái)補(bǔ)充氧氣，人工孵化時(shí)考慮到親魚養(yǎng)殖在循環(huán)水系統(tǒng)中，魚苗孵化后會(huì)被水流帶到過濾缸，所以附著有受精卵的產(chǎn)卵罐要拿出單獨(dú)的充氣孵化，氣石充氣的位置不對(duì)，會(huì)導(dǎo)致沒有被氣流吹動(dòng)的受精卵缺氧白化死亡。所以，人工孵化時(shí)要調(diào)整氣石和產(chǎn)卵罐處于一個(gè)合適的位置，使所有的卵都能被氣流吹動(dòng)，而且盡量注意不要碰到孵化缸，以免產(chǎn)卵罐的位置發(fā)生偏移。氣流的大小也有講究，氣流太大會(huì)導(dǎo)致沒有到孵化時(shí)間的受精卵直接被氣流吹掉，而氣流太小

58、又會(huì)導(dǎo)致受精卵的缺氧死亡。 公子小丑魚的孵化時(shí)間會(huì)受到光照和溫度等的影響。在適宜的范圍內(nèi)，溫度越高，孵化時(shí)間越短。公子小丑一般在晚上的黑暗環(huán)境下孵化，如果孵化過程中受到外界光源的影響，會(huì)導(dǎo)致孵化時(shí)間推遲，孵化率降低。在公子小丑魚人工育苗中,生物餌料的培養(yǎng)是一個(gè)非常重要的環(huán)節(jié)。公子小丑魚仔魚孵出之后, 卵黃囊已消耗殆盡,孵化后即需要開口攝食輪蟲。魚苗養(yǎng)殖過程中要注意生物餌料的投餌量,尤其是在稚魚期要嚴(yán)格控制鹵蟲的投喂量,因?yàn)橹婶~在這個(gè)階段很貪吃, 如果投喂過量,很容易導(dǎo)致稚魚撐死。投喂剛孵出的鹵蟲時(shí)，應(yīng)注意把活體和卵殼以及未孵化的鹵蟲卵分離。公子小丑魚在仔、稚魚期只能用天然餌料來(lái)喂養(yǎng),因?yàn)樵谶@個(gè)

59、階段,沒有完整的消化系統(tǒng),體內(nèi)的消化酶缺乏,攝食到鹵蟲卵殼會(huì)使魚苗消化不良導(dǎo)致死亡。目前的配合餌料大多無(wú)法滿足這階段的需求。在本次試驗(yàn)中有其他因素也對(duì)小丑魚胚胎發(fā)育產(chǎn)生影響。魚卵的胚胎發(fā)育在完全充氣孵化和親魚照看兩種情況下比較(bjio)，親魚照看比充氣孵化的速度要快，魚卵的孵化時(shí)間會(huì)提前1天，而且親魚照看受精卵的孵化率的比人工充氣孵化率的要高。在親魚產(chǎn)卵期，領(lǐng)域性很強(qiáng)。第二章 公子小丑魚胚胎(piti)發(fā)育的形態(tài)學(xué)觀察由于受人工繁殖技術(shù)和生產(chǎn)規(guī)模的局限，目前市場(chǎng)上銷售的公子小丑魚仍以捕撈野生(yshng)自然群體為主，并多用氰化物等有毒化學(xué)品進(jìn)行捕撈，采捕后由于氰化物的毒性和長(zhǎng)途運(yùn)輸中的氨中

60、毒，能夠作為商品進(jìn)入市場(chǎng)的不足20%2，而且氰化物還會(huì)傷害無(wú)法逃避的珊瑚等海洋生物，破壞珊瑚礁區(qū)的生態(tài)平衡，所以海水觀賞魚的大規(guī)模商業(yè)化人工繁育就變得勢(shì)在必行(sh zi b xng)。目前國(guó)內(nèi)外已有不少學(xué)者對(duì)公子小丑魚的生理生態(tài)、繁殖發(fā)育做了初步研究4-7,并成功進(jìn)行(jnxng)了人工育苗和批量化生產(chǎn),但規(guī)模仍較小，滿足不了市場(chǎng)所需。為進(jìn)一步探討公子小丑魚的繁殖與發(fā)育生物學(xué)規(guī)律，改進(jìn)人工繁殖技術(shù)，本文研究了該種類胚胎發(fā)育的全過程,描述了胚胎發(fā)育過程中的形態(tài)結(jié)構(gòu)變化,并與相關(guān)研究進(jìn)行了比較分析，以期為未來(lái)海水觀賞魚的人工繁育提供理論依據(jù)。 1 材料與方法 1.1 實(shí)驗(yàn)用魚和養(yǎng)殖管理 公子小丑