地貧專業(yè)血紅蛋白電泳

1、血紅蛋白電泳檢查（電泳法）1. 原理血紅蛋白是由兩對多肽鏈組成的復雜分子。每一條鏈含有血紅素和絡合鐵原子的卜啉。所有血紅蛋白的血紅素部分都是相同的。所測定的血紅蛋白的蛋白部分稱之為珠蛋白。正常人血紅蛋白多肽鏈包括、和。血紅蛋白的結構、分子特性取決于形成其肽鏈的氨基酸順序和性狀。氨基酸不同可形成不同的血紅蛋白，其表面電荷不同，在電場中的泳動率不同。本實驗在堿性（PH=8.60）條件下，以瓊脂糖凝膠電泳的方法進行，對紅細胞洗滌后造成溶血，電泳分離血紅蛋以氨基黑染色。多余的染色液用洗去。待瓊脂糖凝膠板干燥后，肉眼可直接判別有無電泳條帶異常。運用光密度掃描儀檢測準確定量分析電泳條帶異常情況。血紅蛋白異

2、常有二種類型：血紅蛋白性質或結構的異常稱之為血紅蛋白病。血紅蛋白中的一條鏈減少引起血紅蛋白性質異常，稱之為地中海貧血。2. 標本2.12.22.3標本前準備：受檢者應空腹。標本種類：抗凝血標本要求：抗凝劑選用 EDTA，檸檬酸或肝素均可，避免碘乙酸。常規(guī)靜脈采血 1.8ml，加入含有 109mmol/L 枸櫞酸鈉溶液 0.2ml 的干燥。清潔試管中，充分混勻。4.5.6.7.于 2-8冰箱中，5 天。于 2-8狀態(tài)下的冰壺或標本：標本：箱密封。標本拒收標準：細菌污染、溶血或脂血標本不能作測定。試劑7.17.27.37.4試劑名稱：血紅蛋白電泳檢查試劑試劑生產廠家：法國 Sebia 公司包裝規(guī)格

3、：150tests試劑盒組成瓊脂糖凝膠 10 塊緩沖液條帶 10 包2 條氨基黑（濃縮液）1 瓶100ml溶血素 1 瓶薄濾紙 110 張點樣模具濾紙 10 條1 盒7.5 試劑條件及有效期：于室溫（1530）或冰箱（28），不能冷凍。有效期兩年。8. 儀器設備8.18.28.3儀器名稱：SEBIA 電泳儀儀器廠家：法國 Sebia 公司儀器型號：HYDRASYS操作步驟血紅蛋白液制作：抗凝血離心，5000rpm，5 分鐘，去掉血漿，用 10 倍體積的生理鹽水洗滌紅細胞 3 次，若紅細胞體積小于 10ul，需特別。取 10ul 紅細胞加入 130ul 溶血液造成溶血。震蕩混勻 10 秒鐘，室溫

4、下培育 5 分鐘待測。啟動電泳儀將加樣器放在一平板上，有數字的一端向上。各加樣孔加入 10ul 溶血的樣品，2 分鐘內加樣完畢。將加樣器放入保濕盒內，齒端向上（轉運時用齒保護架）。等待 5 分鐘，使樣品擴散至齒端。打開電泳儀蓋，抬起電極和加樣器支架。9.4 使用 HYDRAGEL 15 HEMOGLOBINCE 時選擇儀器的“HBTOTAL”程序（位于鏈盤左側）。9.5 從包裝袋內取出緩沖條，拿出末端的片，將緩沖條兩端片固定在電極支架背側的釘上，片應緊貼支架。9.6 取出凝膠板。將薄的濾紙輕輕吸去凝膠板表面的多余液體，然后立即丟棄濾紙。在電泳儀溫度控制板表面的邊線內加 200ul 蒸餾水或去離

5、子水。凝膠面朝上，放置凝膠板，邊緣對齊邊線。略略將凝膠彎曲，然后放平，使水均勻分布在凝膠板下面而不含氣泡。降低支架，使緩沖條不接觸到凝膠板。從保溫盒里取出加樣器。取時拿保護框。折斷加樣器齒端保護框。將加樣器放在 4 號位置。關上電泳儀蓋子，按下鍵盤左側的綠色箭頭“START”鍵，電泳開始。凝膠染色掃描打開蓋子取出并丟棄加樣器9.10.3 升高兩個支架，握住端取出并丟棄緩沖條。打開凝膠托架，平放，將干燥的凝膠片放入兩層間，然后關上托架。將凝膠支架放入染色池取出凝膠支架，打開蓋子，取出干燥的凝膠片。在光密度儀的 570nm 處或以黃色濾光片掃描測定。使用 HYDRYS，DVSE或 PREFEREN

6、CE 光密度儀時，使 A2 片段的標記置于掃描板 5mm 的標志處。10. 結果判斷與參考范圍掃描得到的只是每種血紅蛋白條帶的相對濃度值。取出膠片后，首先清潔膠片的背面。判斷溶血液的濃度是否合適，主要看基質帶的濃度，如基質帶濃度過淡，說明溶血液的濃度太淡。正常時 A2 濃度大約為基質帶濃度的 1-2 倍。半歲-成人:HbA94.5,HbF2.0,HbA23.51 個月：HbA 12-40,HbF 60-93,HbA2 0.1-1.06 個月：HbA 86-98,HbF 0.84-10.7,HbA2 0.87-2.9臍帶血：HbA 4-40,HbF 30-96,HbA21.0質量控制建議測定每一

7、批樣本時都附有一控制品或含有血紅蛋白 A,F,C 和 S 的血樣本。臨床意義檢測-地中海貧血輕型：HbA2 輕度升高，大多在 4-8中間型：HbA1A2 缺如，HbF 可達 1012.1.3 重型：HbF：30-90，HbA 多低于 40或甚至 012.2 檢測-地中海貧血12.2.1經煌焦油-地中海貧血：新生兒期 HbBarts 可達 5-15，幾個月后。后，少數紅細胞內有 H 包涵體。血紅蛋白電泳無異常發(fā)現。12.2.2 血紅蛋白 H ?。篐bH 在 PH8.6 或 8.8 電泳時，向陽極方向移動，泳速快于HbA;在 PH6.5 電泳時，仍向陽極方向移動。12.2.3 血紅蛋白 BartH

8、bA、A2 及 F 均缺如。水腫綜合癥：Hb Barts 占 80-100，可有少量 HbH。12.3 檢測血紅蛋白病：引起臨床注意的異常血紅蛋白有四種：S，C，E 和 D。12.3.1 血紅蛋白 S：在堿性緩沖條件下血紅蛋白 S 的條帶位于 A 和 A2 片段之間12.3.2 血紅蛋白 C：在堿性緩沖條件下血紅蛋白 C，E 和 A2 的條帶若這一片段15，應懷疑有血紅蛋白 C 或 E 的異常。在一起。12.3.3 血紅蛋白 E：與血紅蛋白 C 不同的是，E 在酸性凝膠電泳中不與 A2 分離。12.3.4 血紅蛋白 D：在堿性緩沖條件下，血紅蛋白 D 和 S 的條帶D 在酸性凝膠電泳中不與 A

9、2 分離。操作性能：靈敏度高、特異性強、操作簡便，重復性好。注意事項：在一起，但14.114.214.3試劑于室溫（1530）或冰箱（28）內，不能冷凍。不要應用溶血標本若檢測到異常血紅蛋白，而又與常見的異常血紅蛋白 S,C,D 或 E 不同，可使用其他方法（如球蛋白鏈電泳）檢測，或求助于有關專門。14.4 HbF 小于全部血紅蛋白的 2-3時，掃描檢測 HbF（或其它一些較少見的血紅蛋白）只是半定量的，結果不十分準確。14.5 對于中度或重度貧血的病例，點樣量應增大為 15ul 或 20ul，其結果不受影響。14.6 電泳過程中不能打開蓋子。在染色脫色以及干燥過程中，儀器的一些程序處于鎖定狀態(tài)。14.7 最后染色后立即掃描測定。若欲保存，可用一保護物覆蓋后置于干燥、暗處，避免受熱，可保存約 3 個月臨床意義H