BJS 201701 食品中西布曲明等化合物的測定

1、 附件1 食品中西布曲明等化合物的測定BJS 201701 1范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了食品（含保健食品）基質(zhì)中西布曲明等 33種違法添加減肥降脂類化合物的高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測定方法。本標(biāo)準(zhǔn)適用于固體沖飲品（咖啡、奶茶、茶葉等）、餅干、液體飲品等食品（含保健食品）中33種減肥降脂類化合物的定性測定，必要時可參考本方法測定添加成分含量。其他低糖、低脂、低蛋白類基質(zhì)可參照本方法定性檢測。含茶多酚、咖啡因等基質(zhì)（如咖啡、奶茶、茶葉等）中，咖啡因不作檢測，奧利司他僅作定性檢測。含紅曲的基質(zhì)中，洛伐他汀不作檢測。2原理試樣經(jīng)甲醇超聲提取，過濾后，上清液供高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測定，外標(biāo)法定量。3試劑和材料注:

2、水為GB/T 6682規(guī)定的一級水。3.1乙腈：色譜純。3.2甲酸：色譜純。3.3甲醇（前處理）：分析純。3.43.50.1%甲酸水溶液：取甲酸 1mL用水稀釋至 1000mL,用濾膜（4.2）過濾后備用。0.1%甲酸乙腈溶液：取甲酸 1mL用乙腈稀釋至 1000mL,用濾膜（4.2）過濾后備用。3.6標(biāo)準(zhǔn)品：鹽酸苯丙醇胺、鹽酸去甲偽麻黃堿、鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿、鹽酸甲基麻黃堿、硫酸安非他明、氯噻嗪、氫氯噻嗪、鹽酸甲基安非他明、咖啡因、鹽酸分特拉明、鹽酸氯卡色林、鹽酸安非他酮、芬氟拉明、普伐他汀鈉、呋塞米、鹽酸 N,N-雙去甲基西布曲明、鹽酸氟西汀、酚酞、鹽酸 N-單去甲基西布曲明、吲達(dá)帕

3、胺、鹽酸西布曲明、鹽酸芐基西布曲明、鹽酸豪莫西布曲明、比沙可啶、鹽酸氯代西布曲明、苯扎貝特、布美他尼、洛伐他汀、辛伐他汀、鹽酸利莫那班、非諾貝特、奧利司他。上述化合物去鹽根后的中文名稱、英文名稱、CAS號、分子式、相對分子質(zhì)量、結(jié)構(gòu)式詳見附錄 A，純度均95%。3.7標(biāo)準(zhǔn)儲備液(500 g/mL)：分別精密稱取鹽酸苯丙醇胺、鹽酸去甲偽麻黃堿、鹽酸麻黃堿、鹽酸 3 偽麻黃堿、鹽酸甲基麻黃堿、硫酸安非他明、氯噻嗪、氫氯噻嗪、鹽酸甲基安非他明、咖啡因、鹽酸分特拉明、鹽酸氯卡色林、鹽酸安非他酮、芬氟拉明、普伐他汀鈉、呋塞米、鹽酸 N,N-雙去甲基西布曲明、鹽酸氟西汀、酚酞、鹽酸 N-單去甲基西布曲明、

4、吲達(dá)帕胺、鹽酸西布曲明、鹽酸芐基西布曲明、鹽酸豪莫西布曲明、比沙可啶、鹽酸氯代西布曲明、苯扎貝特、布美他尼、洛伐他汀、辛伐他汀、鹽酸利莫那班、非諾貝特、奧利司他（3.6）各 10 mg，分別置于 20 mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成濃度為 500 g/mL標(biāo)準(zhǔn)儲備液， -20保存。3.8混合標(biāo)準(zhǔn)中間液 A（1 g/mL）：分別準(zhǔn)確吸取鹽酸苯丙醇胺、鹽酸去甲偽麻黃堿、鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿、鹽酸甲基麻黃堿、硫酸安非他明、鹽酸甲基安非他明、咖啡因、鹽酸分特拉明、鹽酸氯卡色林、鹽酸安非他酮、芬氟拉明、鹽酸 N,N-雙去甲基西布曲明、鹽酸氟西汀、酚酞、鹽酸 N-單去甲基西布曲明、吲

5、達(dá)帕胺、鹽酸西布曲明、鹽酸芐基西布曲明、鹽酸豪莫西布曲明、比沙可啶、鹽酸氯代西布曲明、苯扎貝特、布美他尼、洛伐他汀、辛伐他汀、鹽酸利莫那班、非諾貝特、奧利司他標(biāo)準(zhǔn)儲備液(500 g/mL)(3.7)各 0.1 mL，置于同一 50 mL容量瓶中,用甲醇稀釋至刻度，搖勻，制成 1 g/mL的標(biāo)準(zhǔn)使用溶液。3.9混合標(biāo)準(zhǔn)中間液 B（5 g/mL）：分別準(zhǔn)確吸取氯噻嗪、氫氯噻嗪、普伐他汀鈉、呋塞米標(biāo)準(zhǔn)儲備液(500 g/mL)(3.7)各 1.0 mL，置于同一 100mL容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，制成 5 g/mL的標(biāo)準(zhǔn)使用溶液。3.10空白基質(zhì)提取液：稱取空白試樣適量，與樣品同法處理（

6、5.1），作為空白基質(zhì)提取液。3.11混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液：分別準(zhǔn)確吸取混合標(biāo)準(zhǔn)中間液 A(1 g/mL)(3.8)和混合標(biāo)準(zhǔn)中間液 B(5g/mL)(3.9)適量，用甲醇稀釋，搖勻，作為系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液 S1S5，濃度依次為混合標(biāo)準(zhǔn)中間液 A（3.8）中各化合物 1 g/L、2 g/L、5 g/L、8g/L、10 g/L及混合標(biāo)準(zhǔn)中間液 B（3.9）中各化合物 5 g/L、10 g/L、25 g/L、40 g/L、50 g/L，臨用新制或依儀器響應(yīng)情況配制適當(dāng)濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液?；蚋鶕?jù)需要采用空白基質(zhì)提取液（3.10），配制適當(dāng)濃度的基質(zhì)混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。3.12空白溶液：除不加試樣外，均按

7、試樣同法操作，作為空白溶液。4儀器和設(shè)備4.1高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀，配有電噴霧（ESI）離子源。4.2微孔濾膜：0.22m，有機相型。4.3電子天平：感量分別為 0.01 mg和 0.01 g。5分析步驟5.1試樣制備5.1.1固體試樣：取適量混勻，研細(xì)，稱取粉末 1.0g（精確至 0.01 g），精密稱定，置具塞試管中，精密加入甲醇 10mL，密塞，稱重，超聲提取 10min，放冷，再次稱重，用甲醇補足減失的重量， 4 搖勻，用微孔濾膜（4.2）過濾，取續(xù)濾液，根據(jù)實際濃度適當(dāng)稀釋至線性范圍內(nèi)，備用。5.1.2液體試樣：取適量搖勻，吸取 1.0mL，置具塞試管中，精密加入甲醇 9mL，密

8、塞，稱重，超聲提取 10min，放冷，再次稱重，用甲醇補足減失的重量，搖勻，用微孔濾膜（4.2）過濾，取續(xù)濾液，根據(jù)實際濃度適當(dāng)稀釋至線性范圍內(nèi)，備用。5.2儀器參考條件色譜條件5.2.1a)色譜柱：Waters CORTECS T3 (2.1100 mm, 2.7m)，或性能相當(dāng)者。b）流動相：A為含 0.1%甲酸水溶液，B為含 0.1%甲酸乙腈溶液，梯度洗脫程序見表 1。c）流速：300L/min。d)柱溫：30柱。e)進(jìn)樣量：1L。表 1梯度洗脫程序表時間/min流動相 A/%流動相 B/%059595255222727.53298985295955注：在有共流出成分影響目標(biāo)化合物檢測時

9、，可以適當(dāng)調(diào)節(jié)流動相比例，使盡可能與干擾成分分離，減少干擾。5.2.2質(zhì)譜條件a)離子源：電噴霧離子源（ESI源）。b)掃描方式：多反應(yīng)監(jiān)測（MRM）。c)干燥氣、霧化氣、鞘氣、碰撞氣等均為高純氮氣或其他合適氣體，使用前應(yīng)調(diào)節(jié)相應(yīng)參數(shù)使質(zhì)譜靈敏度達(dá)到檢測要求，毛細(xì)管電壓、干燥氣溫度、鞘氣溫度、鞘氣流量、噴嘴電壓、碰撞能量、碎裂電壓等參數(shù)應(yīng)優(yōu)化至最佳靈敏度，監(jiān)測離子對和定量離子對等信息詳見附錄 B。注：（1）方法提供的監(jiān)測離子對等測定條件為推薦條件，各實驗室可根據(jù)所配置儀器的具體情況作適當(dāng)調(diào)整；在樣品基質(zhì)有測定干擾的情況下，可選用其他監(jiān)測離子對。（2）為提高檢測靈敏度，可根據(jù)保留時間分段監(jiān)測各化

10、合物。5.3定性測定按照高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜條件測定試樣和標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，記錄試樣和標(biāo)準(zhǔn)溶液中各化合物的色譜保留時間，以相對于最強離子豐度的百分比作為定性離子對的相對豐度，記錄濃度相當(dāng)?shù)脑嚇优c標(biāo)準(zhǔn)工作溶液中相應(yīng)成分的相對離子豐度。當(dāng)試樣中檢出與 33種化合物中某標(biāo)準(zhǔn)品質(zhì)量色譜峰保留時間一致的色譜峰（變化范圍在2.5%之內(nèi)），并且相對離子豐度允許偏差不超過表 2規(guī)定的范圍，可以確定試樣中檢出相應(yīng)化合物。 5 表 2定性確證時相對離子豐度的最大允許偏差相對離子豐度/%允許的相對偏差/%5.4定量測定502020501020102530505.4.1標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作將混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液（3.11）分別按

11、儀器參考條件（5.2）進(jìn)行測定，得到相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)溶液的色譜峰面積。以混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的濃度為橫坐標(biāo)，以色譜峰的峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。標(biāo)準(zhǔn)品提取離子色譜圖參見附錄 C。5.4.2試樣溶液的測定將試樣溶液（5.1）按儀器參考條件（5.2）進(jìn)行測定，得到相應(yīng)的樣品溶液的色譜峰面積。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線得到待測液中組分的濃度，平行測定次數(shù)不少于兩次。注：如基質(zhì)復(fù)雜情況（如固體沖飲品等），可采用基質(zhì)混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，以降低基質(zhì)影響。6結(jié)果計算將液相色譜 -質(zhì)譜測得濃度代入下式計算含量：X cV K （1）m式中：X 試樣中各待測物的含量，單位為微克每千克（ g/kg）；c 從標(biāo)準(zhǔn)曲線中讀出的供

12、試品溶液中各待測物的濃度，單位為納克每毫升（ g /L）；V 樣液最終定容體積，單位為毫升（ mL）；m 試樣溶液所代表的質(zhì)量，單位為克（g）；K 稀釋倍數(shù)；計算結(jié)果以重復(fù)性條件下獲得的兩次獨立測定結(jié)果的算術(shù)平均值表示，結(jié)果保留三位有效數(shù)字。7檢測方法的靈敏度、精密度和專屬性7.1靈敏度當(dāng)取樣量為 1.0g或 1.0mL，定容體積為 10mL時，本方法中各化合物的測定低限如下：苯丙醇胺、去甲偽麻黃堿、麻黃堿、偽麻黃堿、甲基麻黃堿、安非他明、甲基安非他明、咖啡因、分特拉明、氯卡色林、安非他酮、芬氟拉明、N,N-雙去甲基西布曲明、氟西汀、酚酞、N-單去甲基西布曲明、吲達(dá)帕胺、西布曲明、芐基西布曲明

13、、豪莫西布曲明、比沙可啶、氯代西布曲明、苯扎貝特、布美他尼、洛伐他汀、辛伐他汀、利莫那班、非諾貝特、奧利司他檢測限為 5g/kg 6 或 5g/L，定量限為 10 g/kg或 10g/L；氯噻嗪、氫氯噻嗪、普伐他汀、呋塞米檢測限為 25g/kg或 25g/L，定量限為 50g/kg或 50g/L。固體沖飲品（咖啡、奶茶、茶葉等）基質(zhì)中，奧利司他僅作定性檢測，檢測限為 100g/kg。7.2精密度在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨立測定結(jié)果的絕對差值不得超過算術(shù)平均值的 15%。7.3專屬性取空白溶液(3.12)進(jìn)樣測定，應(yīng)無干擾。 7 附錄A西布曲明等33種化合物相關(guān)信息表A.1 33種化合物中文名稱

14、、英文名稱、CAS號、分子式、相對分子質(zhì)量、結(jié)構(gòu)式序號分子中文名稱英文名稱CAS號分子式結(jié)構(gòu)式量12345678苯丙醇胺Phenylpropanolamine37577-28-9C9H13NO151.21OH去甲偽麻黃堿NorpseudoephedrineEphedrine37577-07-4299-42-3321-97-1552-79-4300-62-958-94-6C9H13NOC10H15NO151.21165.23165.23179.26135.21295.72297.74NH2OH麻黃堿偽麻黃堿甲基麻黃堿安非他明氯噻嗪HNOHPseudoephedrineMethylephedrin

15、eAmphetamineC10H15NONHOHC11H17NONC9H13NChlorothiazideC7H6ClN3O4S2C7H8ClN3O4S2氫氯噻嗪Hydrochlorothiazide58-93-5 8 甲基安非他明9MethylamphetamineCaffeine4846-07-558-08-2C10H15NC8H10N4O2C10H15N149.23194.19149.23195.69239.74231.26424.53330.74251.79309.33318.3210111213141516171819咖啡因分特拉明氯卡色林安非他酮芬氟拉明普伐他汀呋塞米Phenter

16、mineLorcaserin122-09-8616202-92-734841-39-9458-24-2C11H14ClNC13H18ClNOC12H16F3NC23H36O7BupropionFenfluraminePravastatin81093-37-054-31-9FurosemideC12H11ClN2O5SC15H22ClNC17H18F3NOC20H14O4N,N-雙去甲N-DidesmethylSibutramine84467-54-954910-89-377-09-8基西布曲明氟西汀酚酞FluoxetinePhenolphthalein 9 N-單去甲基N-monodesmet

17、hylsibutramine2021222324252627282930168835-59-426807-65-8106650-56-01446140-91-5935888-80-5603-50-9C16H25ClNC16H16ClN3O3SC17H26ClNC20H24ClNC18H28ClNC22H19NO4C17H25Cl2NC19H20ClNO4C17H20N2O5SC24H36O5266.83365.83279.85313.86293.87361.39314.29361.82364.42404.54418.57西布曲明吲達(dá)帕胺西布曲明IndapamideSibutramine芐基西布

18、曲明11-Desisobutyl-11-benzylSibutramine豪莫西布曲明HomosibutramineBisacodyl比沙可啶氯代西布曲明Chloro SibutramineBezafibrate766462-77-541859-67-028395-03-175330-75-579902-63-9苯扎貝特布美他尼洛伐他汀辛伐他汀BumetanideLovastatinSimvastatinC25H38O5 10 313233利莫那班非諾貝特奧利司他RimonabantFenofibrateOrlistat168273-06-149562-28-996829-58- 2C22H2

19、1Cl3N4OC20H21ClO4C29H53NO5463.79360.83495.73 11 附錄B質(zhì)譜參考條件a)離子源：電噴霧離子源(ESI)；b)檢測方式：多反應(yīng)監(jiān)測 (MRM)；c)掃描方式：正離子模式和負(fù)離子模式；d)毛細(xì)管電壓：正離子模式，4000V；負(fù)離子模式，3500V；e)離子源溫度：200 ；f)干燥氣流量：12L/min；g)霧化氣壓力：25psi；h)鞘氣溫度：250；鞘氣（N2）流量：10L/min；i)噴嘴電壓：正離子模式，500V；負(fù)離子模式，2000V；j)其他質(zhì)譜參數(shù)見表 B.1。表 B.1西布曲明等 33種化合物定性、定量離子和質(zhì)譜分析參數(shù)參考值電離方式母

20、離子子離子(m/z)碰撞能量保留時序號化合物名稱( m/z)(V)9間（min）134.1*117.1134.0*117.0148.0*116.9148.0*117.0162.1*147.0214.0*178.791.0*119.0268.8*204.991.0*1234567苯丙醇胺去甲偽麻黃堿麻黃堿ESI+ESI+ESI+ESI+ESI+ESI-152.1152.1166.1166.1180.1293.9136.12.522.813.643.974.504.755.23179219219偽麻黃堿甲基麻黃堿氯噻嗪2113253749215安非他明ESI+17252989氫氯噻嗪ESI-296.0150.15.896.82甲基安非他明ESI+ 12 119.0138.0*110.192129179101112131415161718咖啡因分特拉明氯卡色林安非他酮芬氟拉明普伐他汀呋塞米ESI+ESI+ESI+ESI+ESI+ESI-ESI-ESI+ESI+195.1150.1196.1240.1232.1423.2329.0366.1319.17.467.7491.0*133.0128.9*144.1372199.76184.0*131.010.0810.5111.8111.9812.3812.50333313171717251353214