昆布多糖及其制備方法和應(yīng)用發(fā)明專利

1、昆布多糖及其制備方法和應(yīng)用技術(shù)領(lǐng)域本發(fā)明涉及藥物技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及昆布多糖及其制備方法和應(yīng)用。背景技術(shù)昆布(Ecklonia kurome)，亦稱“黑菜”、鵝掌菜”、“五掌菜”等。屬于海帶科植 物，海帶或翅藻科植物黑昆布的葉狀體。孢子體大型，褐色、革質(zhì)，高30-100cm， 分葉片、柄部、固著器、固著器假根狀。假根兩叉式分支，柄部圓柱狀，近葉片 部漸扁平，葉片兩側(cè)羽狀或復(fù)羽狀分支，中部稍厚，居間生長，長1-12cm，粗 3-7mm，粗鋸齒葉緣。游動(dòng)孢子生于葉片兩面，有明顯的不等世代交替。生長于 溫帶海洋中，主治癭瘤，瘰疬，睪丸腫痛，痰飲水腫。發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明提供了一種昆布多糖及其制備方法和應(yīng)用。

2、一種昆布多糖，以摩爾百分比計(jì)，所述昆布多糖的單糖組成為甘露糖醛酸 89.3%和古洛糖醛酸10.7%。在其中一實(shí)施例中，所述昆布多糖包含第一單元、第二單元和第三單元，所 述第一單元和所述第二單元之間形成醚鍵，所述第二單元和所述第三單元之間形 成醚鍵；其中，所述第一單元為(G-G) a，所述第二單元為(G-M) b，所述第三單元為 (M-M)c，其中，G表示古洛糖醛酸，M表示甘露糖醛酸，a、b和c為大于或等 于1的整數(shù)。在其中一實(shí)施例中，a和b各自獨(dú)立地為1、2、3或4； c為5、6、7、8或 9。在其中一實(shí)施例中，所述昆布多糖具有以下結(jié)構(gòu)：在其中一實(shí)施例中，所述昆布多糖的分子量范圍在20-30k

3、Da之間，優(yōu)選為 27.9kDa。在其中一實(shí)施例中，所述昆布多糖的紅外光譜圖在以下波長處具有伸縮振動(dòng) 峰：3453.88cm -10.2cm -1、2935.13cm -10.2cm -1、1616.06cm -10.2cm -1、 1417.42cm -10.2cm -1、1035.59cm -10.2cm -1、956.52cm -10.2cm -1、890.95cm -10.2cm -1 821.53cm -10.2cm -1 792.12cm-10.2cm -1 ；或所述昆布多糖的1H NMR譜圖在以下位置具有峰：5.12ppm0.02ppm、 4.04ppm0.02ppm、3.95p

4、pm0.02ppm、4.29ppm0.02ppm、4.53ppm0.02ppm3.87ppm0.02ppm、3.93ppm0.02ppm、3.83ppm0.02ppm、 4.10ppm0.02ppm、4.73ppm0.02ppm ；和/或所述昆布多糖的13C NMR譜圖在以下位置具有峰：102.45ppm0.2ppm、 65.87ppm0.2ppm、78.46ppm0.2ppm、81.2ppm0.2ppm、68.57ppm0.2ppm、 176.58ppm0.2ppm、101.22ppm0.2ppm、71.12ppm0.2ppm、72.55ppm0.2ppm、 79.06ppm0.2ppm、7

5、6.69ppm0.2ppm、175.96ppm0.2ppm。上述昆布多糖的制備方法，包括以下步驟：提供昆布多糖提取物，所述昆布多糖提取物為昆布的水提取物；采用柱分離技術(shù)將所述昆布多糖提取物進(jìn)行分離，獲得上述的昆布多糖。在其中一實(shí)施例中，采用DEAE Sepharose TM Fast Flow陰離子交換柱將所述 昆布多糖提取物進(jìn)行分離。在其中一實(shí)施例中，所述制備方法包括以下步驟：將昆布和水混合，在溫度為80C-100C的條件下進(jìn)行提取，得到提取液；將所述提取液進(jìn)行濃縮，得到濃縮物；向所述濃縮物中加入乙醇，有固體析出，收集固體，所述固體為昆布多糖提 取物；將所述昆布多糖提取物配制成昆布多糖溶液，

6、并加入所述DEAE Sepharose TM FastFlow陰離子交換柱中；依次采用水和濃度梯度遞增的NaCl溶液進(jìn)行梯度洗脫，收集流出液；將所述流出液采用硫酸-苯酚法顯色并用酶標(biāo)儀在490nm下檢測其吸光度；用吸光度和洗脫體積繪制洗脫曲線，根據(jù)所述洗脫曲線，收集所需的昆布多 糖組分；將所述昆布多糖組分進(jìn)行濃縮、透析、干燥，制得所述昆布多糖。上述昆布多糖在制備抗病毒藥物中的應(yīng)用。一種昆布多糖提取物的應(yīng)用，所述應(yīng)用是指昆布多糖提取物在制備抗病毒藥 物中的應(yīng)用，所述昆布多糖提取物為昆布的水提取物。在其中一實(shí)施例中，所述昆布多糖提取物主要由以下方法制備而成：提供昆布；采用水提法提取所述昆布，得到提

7、取液；采用醇沉淀法將所述提取液進(jìn)行純化，得到的沉淀物質(zhì)為所述昆布多糖提取 物。在其中一實(shí)施例中，所述抗病毒藥物為抗冠狀病毒藥物，優(yōu)選為抗2019新 型冠狀病毒藥物。有益效果：本發(fā)明技術(shù)人員以昆布為原料獲得了一種褐藻膠，通過體外生物活性實(shí)驗(yàn)證 明，本發(fā)明的昆布多糖能夠與SARS-COV-2RNA復(fù)制依賴的核糖核酸聚合酶成熟所 需的關(guān)鍵因子之一 3CLpro蛋白結(jié)合，結(jié)合常數(shù)Kd值為4.23x10-6M；同時(shí)其還 能夠競爭性地抑制SARS-CoV-2的S1蛋白與肺血管緊張素酶ACE2的結(jié)合，半數(shù) 抑制濃度IC50值為56.06用/mL。因此本發(fā)明的昆布多糖及包含其的昆布多糖提 取物具治療或者預(yù)防新

8、型冠狀病毒所導(dǎo)致的肺炎等的潛能，有望開發(fā)成為一種全 新的治療或預(yù)防新冠病毒的糖類藥物。附圖說明圖1為制備實(shí)施例1中制得的昆布多糖的高效液相色譜的純度圖；圖2為制備實(shí)施例1中制得的昆布多糖的單糖組成分析圖；圖3為制備實(shí)施例1中制得的昆布多糖的紅外譜圖；圖4為制備實(shí)施例1中制得的昆布多糖的1H NMR和13C NMR圖譜；圖5為制備實(shí)施例1中制得的昆布多糖的COSY、HSQC和HMBC圖譜；圖6為ELISA方法分析昆布多糖競爭性干預(yù)ACE2與SARS-CoV-2的S蛋白體 外結(jié)合圖譜；圖7為ITC方法分析昆布多糖與新型冠狀病毒(SARS-CoV-2)3CLpro蛋白的體外 結(jié)合圖譜。具體實(shí)施方式為

9、了便于理解本發(fā)明，下面將對本發(fā)明進(jìn)行更全面的描述，并給出了本發(fā)明 的較佳實(shí)施例。但是，本發(fā)明可以以許多不同的形式來實(shí)現(xiàn)，并不限于本文所描 述的實(shí)施例。相反地，提供這些實(shí)施例的目的是使對本發(fā)明的公開內(nèi)容的理解更 加透徹全面。除非另有定義，本文所使用的所有的技術(shù)和科學(xué)術(shù)語與屬于本發(fā)明的技術(shù)領(lǐng) 域的技術(shù)人員通常理解的含義相同。本文中在本發(fā)明的說明書中所使用的術(shù)語只 是為了描述具體的實(shí)施例的目的，不是旨在于限制本發(fā)明。本文所使用的術(shù)語和 /或包括一個(gè)或多個(gè)相關(guān)的所列項(xiàng)目的任意的和所有的組合。術(shù)語解釋本發(fā)明的多糖、組合物或藥物的劑型和施用方式?jīng)]有特別限制。代表性的施 用方式包括但并不限于：口服、瘤內(nèi)、直

10、腸、腸胃外（靜脈內(nèi)、肌肉內(nèi)或皮下）注 射、和局部給藥。用于口服給藥的固體劑型包括膠囊劑、片劑、丸劑、散劑和顆粒劑。在這些 固體劑型中，活性化合物與至少一種常規(guī)惰性賦形劑（或載體）混合，如檸檬酸鈉 或磷酸二鈣，或與下述成分混合：（a）填料或增容劑，例如，淀粉、乳糖、蔗糖、 葡萄糖、甘露醇和硅酸；（b）粘合劑，例如，羥甲基纖維素、藻酸鹽、明膠、聚 乙烯基毗咯烷酮、蔗糖和阿拉伯膠；（c）保濕劑，例如，甘油；（d）崩解劑，例如， 瓊脂、碳酸鈣、馬鈴薯淀粉或木薯淀粉、藻酸、某些復(fù)合硅酸鹽、和碳酸鈉；（e） 緩溶劑，例如石蠟；（f）吸收加速劑，例如，季胺化合物；（g）潤濕劑，例如鯨蠟醇 和單硬脂酸甘油酯；

11、（h）吸附劑，例如，高嶺土；和（i）潤滑劑，例如，滑石、硬脂 酸鈣、硬脂酸鎂、固體聚乙二醇、十二烷基硫酸鈉，或其混合物。膠囊劑、片劑 和丸劑中，劑型也可包含緩沖劑。固體劑型如片劑、糖丸、膠囊劑、丸劑和顆粒 劑可采用包衣和殼材制備，如腸衣和其它本領(lǐng)域公知的材料。它們可包含不透明 劑，并且，這種組合物中活性化合物或化合物的釋放可以延遲的方式在消化道內(nèi) 的某一部分中釋放。可采用的包埋組分的實(shí)例是聚合物質(zhì)和蠟類物質(zhì)。必要時(shí)， 活性化合物也可與上述賦形劑中的一種或多種形成微膠囊形式。用于口服給藥的液體劑型包括藥學(xué)上可接受的乳液、溶液、懸浮液、糖漿或 酊劑。除了活性化合物外，液體劑型可包含本領(lǐng)域中常規(guī)采用

12、的惰性稀釋劑，如 水或其它溶劑，增溶劑和乳化劑，具體例如，乙醇、異丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙 酯、丙二醇、1,3-丁二醇、二甲基甲酰胺以及油，特別是棉籽油、花生油、玉米 胚油、橄欖油、蓖麻油和芝麻油或這些物質(zhì)的混合物。除了這些惰性稀釋劑外， 組合物也可包含助劑，如潤濕劑、乳化劑和懸浮劑、甜味劑、矯味劑和香料。如 懸浮液可包含懸浮劑，具體例如，乙氧基化異十八烷醇、聚氧乙烯山梨醇和脫水 山梨醇酯、微晶纖維素、甲醇鋁和瓊脂或這些物質(zhì)的混合物。用于腸胃外注射的組合物可包含生理上可接受的無菌含水或無水溶液、分散 液、懸浮液或乳液，以及用于重新溶解成無菌的可注射溶液或分散液的無菌粉末。 適宜的含水或非水載體、

13、稀釋劑、溶劑或賦形劑包括水、乙醇、多元醇及其適宜 的混合物。用于局部給藥的劑型包括軟膏劑、散劑、貼劑、噴射劑和吸入劑。由活性成 分在無菌條件下與藥學(xué)上可接受的載體及任何防腐劑、緩沖劑，或必要時(shí)可能需 要的推進(jìn)劑一起混合而成。本發(fā)明的昆布多糖、組合物或藥物還可以做成中成藥的形式。中成藥的劑型 包括但不限于丸劑、散劑、膏劑、片劑、顆粒劑（沖劑）、錠劑、膠囊劑、水劑、 酊劑；（1）丸劑丸劑是藥材細(xì)粉或藥材提取物加適宜粘合劑或輔料，制成的球形或類球形的 固體制劑，是中成藥最古老的劑型之一。根據(jù)粘合劑的不同丸劑又分為蜜丸、水 蜜丸、水丸、糊丸、濃縮丸、微丸等類型。優(yōu)選使用濃縮丸。濃縮丸是全部藥材 或部分

14、藥材的煎液或提取液，與適宜的輔料或藥物細(xì)粉加適宜的粘合劑制成。根 據(jù)粘合劑的不同，又分為濃縮蜜丸、濃縮水丸、濃縮水蜜丸。濃縮丸體積小，藥 物有效成分含量高，易于服用，在體內(nèi)溶化吸收比較緩慢。在一種優(yōu)選的實(shí)施方式中，將全部藥材或部分藥材的煎液或提取液，與輔料 或藥物細(xì)粉加粘合劑制成濃縮丸。優(yōu)選地，將全部藥材煎液或提取液與粘合劑和 可選的輔料制成濃縮丸。散劑散劑是一種或多種藥材混合制成的粉末狀制劑，分內(nèi)服散劑和外用散劑，是 我國古代劑型之一。散劑治療范圍廣，服用后分散快，奏效迅速，且具有制作方 便、攜帶方便、節(jié)省藥材等優(yōu)點(diǎn)。膏劑膏劑系藥物劑型之一。膏劑是將藥物用水或植物油煎熬濃縮而成的劑型。有 內(nèi)

15、服和外用兩種。內(nèi)服膏通常又分流浸膏、浸膏、煎膏三種；外用膏有軟膏、硬 膏兩種。其中內(nèi)服煎膏和外用軟膏是膏劑中常見的劑型。內(nèi)服的煎膏又叫膏滋， 是把藥物加水煎熬，濾滓，加入冰糖、蜂蜜等，熬成稠厚的膏，可長期服用。常 用于慢性疾病或身體虛弱者。片劑片劑是藥材細(xì)粉或提取物與適宜的輔料或藥材細(xì)粉壓制而成的片狀制劑，分 浸膏片、半浸膏片和全粉片等，是常用的現(xiàn)代劑型之一。片劑體積小，用量準(zhǔn)確， 易崩解生效快，且具有生產(chǎn)效率高、成本低、服用及儲運(yùn)方便的優(yōu)點(diǎn)。片劑適用 于各種疾病。本發(fā)明優(yōu)選使用浸膏片。顆粒劑顆粒劑(沖劑)是藥材提取物與適宜的輔料或與藥材細(xì)粉制成的顆粒狀制劑， 是在湯劑、散劑和糖漿劑的基礎(chǔ)上發(fā)

16、展起來的新劑型。有顆粒狀和塊狀兩種，分 為可溶性、混懸性、泡騰性及含糖型、無糖型等不同類型。顆粒劑體積小，重量 輕，服用簡單，口感好，作用迅速，多用于補(bǔ)益、止咳、清熱等作用的藥物。優(yōu) 選地，制備時(shí)采用水提取物(煎液)制備。(6)錠劑錠劑是藥材細(xì)粉與適量粘合劑如蜂蜜、糯米粉或利用藥材本身的粘性制成規(guī) 定形狀的固體制劑?？晒﹥?nèi)服或外用，內(nèi)服作用與糊丸接近，外用多用水或醋磨 汁后涂敷患處。錠劑型大多作噙化之用。優(yōu)選地，本發(fā)明的錠劑為內(nèi)服錠劑。膠囊劑膠囊劑包括硬膠囊劑和軟膠囊劑。硬膠囊劑是將適量的藥材提取物、藥材提取物加藥粉或輔料制成均勻的粉末 或顆粒，填充于硬膠囊中而制成的劑型。主要是口服。硬膠囊外

17、觀整潔美觀，易 于吞服，可掩蓋藥物的不良嗅味，崩解快，吸收好。適用于對光敏感、不穩(wěn)定或 遇濕、熱不穩(wěn)定的藥物，或有特異氣味的藥物，或需要定時(shí)定位釋放的藥物。兒 童用藥、對胃粘膜刺激性強(qiáng)的藥物不宜制成膠囊劑。軟膠囊劑是將油類或?qū)γ髂z等囊材無溶解作用的液體藥物或混懸液封閉于 囊材內(nèi)制成的劑型。特點(diǎn)與硬膠囊相似。硬膠囊和軟膠囊經(jīng)過適宜方法處理或用 其他藥用高分子材料加工，使囊殼不溶于胃液，但在腸液中崩解釋放活性成分， 為腸溶膠囊。優(yōu)選地，本發(fā)明的膠囊為將煎液或提取液獲得的藥材提取物加輔料 制成均勻的粉末或顆粒，填充于硬膠囊中而制成的劑型。(8)酊劑酊劑是藥物用規(guī)定濃度的乙醇浸出或溶解制成的澄清液體制

18、劑，也可以用流 浸膏稀釋制成。分內(nèi)服和外用兩種。酊劑制備無需加熱，成分較純凈，有效成分 含量高，劑量準(zhǔn)確，吸收迅速，適宜于制備含有揮發(fā)性成分或不耐熱成分的制劑。 優(yōu)選地，本發(fā)明的酊劑為內(nèi)服酊劑。詳細(xì)解釋本發(fā)明第一方面提供了一種昆布多糖，以摩爾百分比計(jì)，昆布多糖的單糖組 成為甘露糖醛酸89.3%和古洛糖醛酸10.7%。在一實(shí)施例中，昆布多糖包含第一單元、第二單元和第三單元，所述第一單 元和所述第二單元之間形成醚鍵，所述第二單元和所述第三單元之間形成醚鍵；其中，所述第一單元為(G-G)a，所述第二單元為(G-M) b，所述第三單元為 (M-M)c，其中，G表示古洛糖醛酸，M表示甘露糖醛酸，a、b和

19、c為大于或等 于1的整數(shù)?？衫斫獾?，本發(fā)明中G-G表示古洛糖醛酸和古洛糖醛酸之間通過化學(xué)鍵(例 如醚鍵)連接，同樣，G-M表示古洛糖醛酸和甘露糖醛酸之間通過化學(xué)鍵(例如醚 鍵)連接，M-M表示甘露糖醛酸和甘露糖醛酸之間通過化學(xué)鍵(例如醚鍵)連接?？衫斫獾模景l(fā)明中第一單元的G可以和第二單元的G之間通過醚鍵連接， 第二單元的M與第三單元的M之間通過醚鍵連接，即(G-G)a-(G-M)b-(M-M)c， 也可以第一單元的G可以和第二單元的M之間通過醚鍵連接，第二單元的G與 第三單元的M通過醚鍵連接，即(G-G) a-(M-G) b-(M-M) c。在其中一實(shí)施例中，a和b各自獨(dú)立地為1、2、3或4

20、。在其中一實(shí)施例中，c為5、6、7、8或9。在其中一實(shí)施例中，所述昆布多糖的分子量范圍在20-30kDa之間，優(yōu)選為 27.9kDa。在其中一實(shí)施例中，昆布多糖具有以下結(jié)構(gòu)：在其中一實(shí)施例中，昆布多糖的紅外光譜圖在以下波長處具有伸縮振動(dòng)峰： 3453.88cm -10.2cm -1、 2935.13cm-10.2cm -1、 1616.06cm -10.2cm -1、 1417.42cm -10.2cm -1、 1035.59cm -10.2cm -1、 956.52cm -10.2cm -1、 890.95cm -10.2cm -1 821.53cm -10.2cm -1 792.12cm-

21、10.2cm -1O在一實(shí)施例中，昆布多糖的1H NMR譜圖在以下位置具有峰： 5.12ppm0.02ppm、4.04ppm0.02ppm、3.95ppm0.02ppm、4.29ppm0.02ppm、 4.53ppm0.02ppm、3.87ppm0.02ppm、3.93ppm0.02ppm、3.83ppm0.02ppm、 4.10ppm0.02ppm、4.73ppm0.02ppm。在一實(shí)施例中，昆布多糖的1H NMR譜圖如圖4中B所示。在一實(shí)施例中，昆布多糖的13C NMR譜圖在以下位置具有峰 102.45ppm0.2ppm、65.87ppm0.2ppm、78.46ppm0.2ppm、81.2

22、ppm0.2ppm、 68.57ppm0.2ppm、176.58ppm0.2ppm、101.22ppm0.2ppm、71.12ppm0.2ppm、 72.55ppm0.2ppm、79.06ppm0.2ppm、76.69ppm0.2ppm、175.96ppm0.2ppm。在一實(shí)施例中，昆布多糖的13C NMR譜圖如圖4中A所示。本發(fā)明第二方面提供了上述第一方面的昆布多糖的制備方法，包括以下步 驟：S110：提供昆布多糖提取物，其中，昆布多糖提取物為昆布的水提物；可理解的，本發(fā)明所述的昆布多糖提取物是指對昆布進(jìn)行提取所得到的物 質(zhì)，水提物是指用水進(jìn)行提取所得到的組分，可以為固體也可以為液體，應(yīng)理解

23、 為均在本發(fā)明的保護(hù)范圍內(nèi)。本發(fā)明的昆布多糖提取物可以采用現(xiàn)有方法進(jìn)行制 備，例如：煎煮法、低溫高壓提取技術(shù)、低溫萃取技術(shù)、復(fù)合式微波萃取技術(shù)和 超臨界二氧化碳萃取分離技術(shù)等，不應(yīng)理解為對本發(fā)明的限制。在一實(shí)施例中， 采用加熱煎煮法獲取昆布多糖提取物。進(jìn)一步地，步驟S110包括以下步驟：S111：將昆布和水混合，在溫度為80C-100C的條件下進(jìn)行提取，得到提取 液。進(jìn)一步地，步驟S111中，昆布和水的質(zhì)量比約為（8-14）:1，優(yōu)選為12:1；進(jìn)一步地，步驟S111中，提取1-3次（優(yōu)選2次），每次3-5h（優(yōu)選4h）。進(jìn)一步地，步驟S111中，將昆布和水加熱煎煮后，還包括過濾步驟，以獲 得

24、提取液。S112 :將提取液進(jìn)行濃縮，得到濃縮物。進(jìn)一步地，步驟S112中，濃縮液用3,500kDa的透析袋包裹，用自來水進(jìn)行 透析，歷時(shí)40-60h（優(yōu)選48h）。S113：向透析后的提取液中加入乙醇（優(yōu)選為95%的工業(yè)乙醇），有沉淀析出， 自然靜置過夜，收集沉淀，即為昆布粗多糖。進(jìn)一步地，步驟S113中，每1mL的提取液加入5mL的95%的工業(yè)乙醇。S120：采用柱分離技術(shù)將昆布粗多糖進(jìn)行分離，獲得第一方面所述的昆布多 糖。進(jìn)一步地，步驟S120中采用DEAE Sepharose TM Fast Flow陰離子交換柱進(jìn)行 分離。進(jìn)一步地，步驟S120包括以下步驟：S121:將昆布粗多糖配制

25、成昆布多糖溶液，并加入DEAE Sepharose TM Fast Flow 陰離子交換柱中；進(jìn)一步地，步驟S121中，每1mg昆布多糖提取物加入0.05mL-0.15mL的去 離子水。S122:依次采用水和濃度梯度遞增的NaCl溶液進(jìn)行梯度洗脫，收集流出液。進(jìn)一步地，步驟S122中，依次采用去離子水和0.05M的NaCl溶液、0.1M的 NaCl溶液和0.2M的NaCl溶液進(jìn)行梯度洗脫。進(jìn)一步地，步驟S122中，流速為0.5mL/min-1mL/min；更進(jìn)一步地，流速為 0.7mL/min-0.9mL/min。S123：將流出液采用硫酸-苯酚法顯色并用酶標(biāo)儀在490nm下檢測其吸光度。S1

26、24:用吸光度和洗脫體積繪制洗脫曲線，根據(jù)洗脫曲線收集所需的昆布多 糖組分。進(jìn)一步地，步驟S124的目標(biāo)昆布多糖組分在0.2M洗脫液洗脫的組分中。S125 :將昆布多糖組分進(jìn)行濃縮、透析、干燥。進(jìn)一步地，采用截留分子量為3,500kDa的透析袋進(jìn)行透析；更進(jìn)一步地，透 析時(shí)間為24-72h。進(jìn)一步地，可以采用真空干燥、噴霧干燥或冷凍干燥的方法進(jìn)行干燥；優(yōu)選 冷凍干燥的方法進(jìn)行干燥。本發(fā)明第三方面提供了第一方面的昆布多糖在制備抗病毒藥物中的應(yīng)用。在一實(shí)施例中，抗病毒藥物為抗新冠狀病毒藥物；優(yōu)選為抗2019新型冠狀 病毒(2019-nCoV)藥物。3CLpro蛋白是SARS-C0V-2RNA復(fù)制依

27、賴的核糖核酸聚合酶成熟所需的關(guān)鍵因 子之一。因此，3CLpro已被認(rèn)為是治療冠狀病毒的藥物靶標(biāo)之一。本發(fā)明技術(shù) 人員采用等溫滴定量熱法(ITC)分析了本發(fā)明的昆布多糖與新型冠狀病毒 (SARS-CoV-2)3CLpro蛋白的體外結(jié)合實(shí)驗(yàn)。結(jié)果表明昆布多糖與3CLpro蛋白的結(jié) 合常數(shù)K d值為4.23x10 -6M。另外，目前ACE2是科學(xué)家公認(rèn)的SARS-CoV-2的結(jié)合受體，因此如果化合物 可以有效的干預(yù)SARS-CoV-2與ACE2的結(jié)合，即可以有效預(yù)防或治療SARS-CoV-2 的感染。本發(fā)明技術(shù)人員采用酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA)分析了昆布多糖競爭性干 預(yù)肺血管緊張素酶(Angio

28、tensin-Converting Enzyme 2，簡稱“ACE2”)與 SARS-CoV-2 的棘突蛋白(Spikeprotein,，簡稱“S蛋白”)的S1體外結(jié)合實(shí)驗(yàn)(S1介導(dǎo)病毒入侵宿 主)。結(jié)果表明昆布多糖可以競爭性干預(yù)ACE2與SARS-CoV-2的S1蛋白結(jié)合，半 抑制濃度(IC50)值為56.06用/mL。綜上，本發(fā)明的昆布多糖具有治療冠狀病毒， 特別是2019新型冠狀病毒的潛能，特別適用于制備抗冠狀病毒藥物。本發(fā)明第四方面提供了一種藥物，包括：第一方面的昆布多糖；藥學(xué)上可接受輔料。進(jìn)一步地，藥物的劑型為膠囊劑、片劑、丸劑、散劑或顆粒劑。本發(fā)明第五方面提供了一種治療或預(yù)防病毒感

29、染疾病的方法，包括向待施加 對象施加第四方面所述的藥物的步驟。進(jìn)一步地，待施加對象為哺乳動(dòng)物；更進(jìn) 一步地，待施加對象為人。進(jìn)一步地，病毒感染疾病為新冠狀病毒所導(dǎo)致的肺炎。本發(fā)明第六方面提供了一種昆布多糖提取物，其中，昆布多糖提取物為昆布 的水提物。在一實(shí)施例中，昆布多糖提取物主要由以下方法制備而成：提供昆布；(2)采用水提法提取所述昆布，得到提取液；(3)采用醇沉淀法將 所述提取液進(jìn)行純化，得到的沉淀物質(zhì)為所述昆布多糖提取物。進(jìn)一步地，昆布多糖提取物采用步驟S110的方法制備而成，具體如上步驟 S110所述，在此不再進(jìn)行贅述。本發(fā)明第七方面提供了第六方面所述的昆布多糖提取物在制備抗病毒藥物

30、中的應(yīng)用。進(jìn)一步地，抗病毒藥物為抗冠狀病毒藥物，優(yōu)選為抗2019新型冠狀 病毒藥物。本發(fā)明技術(shù)人員通過研究發(fā)現(xiàn)本發(fā)明第一方面的昆布多糖抗冠狀病毒的潛 能，故含有該昆布多糖的昆布多糖提取物同樣具有相應(yīng)的作用。且昆布多糖提取 物中還含有豐富的多糖、蛋白質(zhì)、脂肪、纖維素和礦物質(zhì)等，適宜制備中藥制劑 等。本發(fā)明第八方面提供了一種中成藥，包括第六方面的昆布多糖提取物。進(jìn)一 步地，中成藥為丸劑、散劑、膏劑、片劑、顆粒劑沖劑)、錠劑、膠囊劑、水劑、 酊劑。本發(fā)明第九方面提供了一種治療或預(yù)防病毒感染疾病的方法，包括向待施加 對象施加第八方面的中成藥的步驟。進(jìn)一步地，待施加對象為哺乳動(dòng)物；更進(jìn)一步地，待施加對象

31、為人。下面列舉具體實(shí)施例來對本發(fā)明進(jìn)行說明。制備實(shí)施例1昆布多糖（以下簡稱37502,或多糖37502）的分離純化和結(jié)構(gòu)表 征（一）多糖的純化每次取200mg昆布多糖提取物溶解于20mL去離子水中，攪拌過夜，離心取 上清上樣于DEAE Sepharose TM Fast Flow陰離子交換柱，用去離子水和不同濃度 的NaCl溶液（0.05M、0.1M、0.2M）進(jìn)行梯度洗脫，流速控制在13mL/15min，用 自動(dòng)收集儀收集。每管取100皿用硫酸-苯酚法顯色并用酶標(biāo)儀在490nm下檢測 其吸光度，用吸光度和洗脫體積繪制洗脫曲線。根據(jù)洗脫曲線收集分離的多糖進(jìn) 行減壓濃縮、透析、冷凍干燥，最后得到

32、0.2M NaCl洗脫液的洗脫組分（次級粗多 糖 37502）。（二）多糖的結(jié)構(gòu)鑒定多糖 37502 在串連 Ultrahydrogel TM 802 和 Ultrahydrogel TM 804 分析凝膠柱上 的特征圖譜如圖1所示，其色譜條件為：流動(dòng)相：0.1M NaNO3；流速：0.6mL/min； 柱溫：40C； Agilent 1260液相色譜儀；檢測器：示差檢測器和紫外檢測器。取多糖37502樣品約4mg于雞心瓶中，溶于2M TFA（2mL），在110C下密閉 反應(yīng)4h，反應(yīng)完畢后用甲醇進(jìn)行旋蒸除去TFA，將反應(yīng)物復(fù)溶于200皿水中，取 其中50皿進(jìn)行PMP衍生化反應(yīng)，萃取完畢后取上

33、層水相500皿于液相瓶，在高 效液相上用C-18柱進(jìn)行37502樣品的單糖組成分析，同時(shí)取各單糖（甘露糖、甘 露糖醛酸、古羅糖醛酸、鼠李糖、葡萄糖醛酸、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、 木糖、阿拉伯糖、巖藻糖）作為混標(biāo)做相同的處理進(jìn)行分析。標(biāo)準(zhǔn)圖譜與樣品圖 譜如圖2所示。單糖組成結(jié)果顯示，37502中含有古羅糖醛酸和甘露糖醛酸，其 比例為10.7%和89.3%。_取37502樣品約2mg，采用漠化鉀壓片法測定多糖的紅外光譜，結(jié)果如圖3 所示。其中，3453.88cm -1為O-H的伸縮振動(dòng)峰。2935.13cm -1為C-H的伸縮振 動(dòng)峰。1616.06cm -1和1417.42cm -1為COO

34、-的不對稱和對稱的伸縮振動(dòng)峰，證明 了該糖中有糖醛酸的存在。1035.59cm-1代表了 C-C單鍵的伸縮振動(dòng)。956.52cm-1 代表了糖醛酸的伸縮振動(dòng)890.95cm_1代表了 8甘露糖醛酸的C1-H的變角振動(dòng)。 821.53cm-1是甘露糖醛酸的特殊吸收峰。792.12cm是古洛糖醛酸的特殊吸收 峰。取37502多糖30mg，加D 2O 0.5mL溶解，加2.5皿丙酮為內(nèi)標(biāo)0 H = 2.29ppm， 6C = 31.5ppm），于Bruker AVANCE III 500M核磁共振儀上，25C分別測定一維和 二維核磁共振譜，結(jié)果如圖4和圖5所示。圖4的A中的異頭碳區(qū)域，102.45p

35、pm屬于1,4連接的古洛糖醛酸的異頭碳 的信號峰，101.22ppm屬于1,4連接的甘露糖醛酸的異頭碳的信號峰。在圖4的 A中的非異頭碳區(qū)域，71.12ppm，72.55ppm和76.69ppm被歸屬于甘露糖醛酸的 C2，C3和C5信號峰。三個(gè)信號峰65.87ppm，78.46ppm和68.87ppm歸屬于1,4 連接的古洛糖醛酸的C2，C3和C5。同時(shí)81.2ppm和79.06ppm被歸屬于古洛糖 醛酸和半乳糖醛酸的C-4。根據(jù)圖5中的二維核磁圖譜A和B，圖4B中異頭氫同 時(shí)被歸屬，5.12ppm和4.73ppm屬于古洛糖醛酸的甘露糖醛酸的H1信號。 4.04ppm和4.10ppm被歸屬于古洛糖醛酸和甘露糖醛酸的H2信號。其余的信號 峰見表1。在圖5C中37502的糖殘基連接方式被歸屬。信號峰1（101.22/3.93）表 示了甘露糖醛酸的C-1和H-4的相關(guān)峰，信號峰2（79.06/4.73）表示了甘露糖醛酸 的H-1和C-4的相關(guān)峰。信號峰3(101.22/4.29)表示了甘露糖醛酸的C1和古洛糖 醛酸的H4的相關(guān)峰，信號峰4(81.2/4.73)表示了古洛糖醛酸的C4和甘露糖醛酸 的H1的相關(guān)峰。信號峰5(102.45/4.29)代表了古洛糖醛酸的C1和H4的相關(guān)信 號峰。信號峰6(102.45/3.93)代表了古洛糖醛酸的C1和甘露糖醛酸的H4