人可溶性CD40配體(sCD40L)酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說(shuō)明書

1、人可溶性配0體（）酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說(shuō)明書本試劑盒僅供研究使用檢測(cè)范圍：最低檢測(cè)限：特異性：本試劑盒可同時(shí)檢測(cè)天然或重組的人4且與其他相關(guān)蛋白無(wú)交叉反應(yīng)。有效期：6個(gè)月預(yù)期應(yīng)用：法定量測(cè)定人血清、血漿、細(xì)胞培養(yǎng)上清或其它相關(guān)生物液體中含量。說(shuō)明1試劑盒保存：C（較長(zhǎng)時(shí)間不用時(shí)）；C（頻繁使用時(shí)）。2濃洗滌液低溫保存會(huì)有鹽析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶。3中、英文說(shuō)明書可能會(huì)有不一致之處，請(qǐng)以英文說(shuō)明書為準(zhǔn)。4剛開啟的酶聯(lián)板孔中可能會(huì)含有少許水樣物質(zhì)，此為正?，F(xiàn)象，不會(huì)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果造成任何影響。實(shí)驗(yàn)原理用純化的抗體包被微孔板，制成固相載體，往包被抗抗體的微孔中依次加入標(biāo)本或標(biāo)準(zhǔn)品、生物素化的抗

2、抗體、標(biāo)記的親和素，經(jīng)過(guò)徹底洗滌后用底物顯色。在過(guò)氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（值），計(jì)算樣品濃度。試劑盒組成及試劑配制酶聯(lián)板（）：一塊（孔）。標(biāo)準(zhǔn)品（）：瓶（凍干品）。酶樣品稀釋液（u）e：瓶長(zhǎng)。.生物素標(biāo)記抗體稀釋液（u）ie：瓶。.辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記親和素稀釋液生物素標(biāo)記抗體（-辣.根過(guò)氧化物酶標(biāo)記親和素（HR底物溶液（）：濃洗滌液（）：終止液（）：（）:瓶,:瓶（：）:瓶（：）瓶。瓶，使用時(shí)每瓶用蒸餾水稀釋倍瓶（O。需要而未提供的試劑和器材1標(biāo)底準(zhǔn)規(guī)格酶標(biāo)儀2高底速離心機(jī)3底電熱恒溫培養(yǎng)箱干凈的試管

3、和管5系底列可調(diào)節(jié)移液器及吸頭，一次檢測(cè)樣品較多時(shí)，最好用多通道移液器6蒸底餾水，容量瓶等標(biāo)本的采集及保存血清：全血標(biāo)本請(qǐng)于室溫放置小時(shí)或過(guò)夜后于離心分鐘，取上清即可檢測(cè)，或?qū)?biāo)本放于C或C保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。血漿：可用或肝素作為抗凝劑，標(biāo)本采集后分鐘內(nèi)于離心分鐘，或?qū)?biāo)本放于C或C保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。細(xì)胞培養(yǎng)物上清或其它生物標(biāo)本：離心分鐘，取上清即可檢測(cè)，或?qū)?biāo)本放于C或C保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。注：標(biāo)本溶血會(huì)影響最后檢測(cè)結(jié)果，因此溶血標(biāo)本不宜進(jìn)行此項(xiàng)檢測(cè)。標(biāo)本的稀釋原則：首先通過(guò)文獻(xiàn)檢索的方式了解待測(cè)樣本的大致含量，確定適當(dāng)?shù)南♂尡稊?shù)。只有稀釋至標(biāo)準(zhǔn)曲線的范圍內(nèi)，檢測(cè)的結(jié)果才是準(zhǔn)確

4、的。稀釋的過(guò)程中，應(yīng)做好詳細(xì)的記錄。最后計(jì)算濃度時(shí)，稀釋了倍，標(biāo)本的濃度應(yīng)再乘以。標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋原則：瓶，每瓶臨用前以樣品稀釋液稀釋至，蓋好后靜置分鐘以上,然后反復(fù)顛倒搓動(dòng)以助溶解，其濃度為/做系列倍比稀釋后，分別稀釋/樣品稀釋液直接作為標(biāo)準(zhǔn)濃度，臨用前分鐘內(nèi)配制。如配制標(biāo)準(zhǔn)品：?。ú灰儆?的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含樣品稀釋液的管中，混勻即可，其余濃度以此類推。生物素標(biāo)記抗體的稀釋原則：臨用前以生物素標(biāo)記抗體稀釋液稀釋，稀釋前根據(jù)預(yù)先計(jì)算好的每次實(shí)驗(yàn)所需的總量配制（每孔0,實(shí)際配制時(shí)應(yīng)多配制。如生物素標(biāo)記抗體加生物素標(biāo)記抗體稀釋液的比例配制，輕輕混勻，在使用前一小時(shí)內(nèi)配制。辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記親和素的稀

5、釋原則：臨用前以辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記親和素稀釋液稀釋，稀釋前根據(jù)預(yù)先計(jì)算好的每次實(shí)驗(yàn)所需的總量配制（每孔100）,，實(shí)際配制時(shí)應(yīng)多配制0.1-。0如.21，0,辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記親和素加990辣,根過(guò)氧化物酶標(biāo)記親和素稀釋液的比例配制，輕輕混勻，在使用前一小時(shí)內(nèi)配制。操作步驟實(shí)驗(yàn)開始前，請(qǐng)?zhí)崆芭渲煤盟性噭?，試劑或樣品稀釋時(shí)，均需混勻，混勻時(shí)盡量避免起泡。每次檢測(cè)都應(yīng)該做標(biāo)準(zhǔn)曲線。如樣品濃度過(guò)高時(shí)，用樣品稀釋液進(jìn)行稀釋，以使樣品符合試劑盒的檢測(cè)范圍。加樣：分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔?？瞻卓准訕悠废♂屢?00，,余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品100，,注意不要有氣泡，加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，

6、盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻，酶標(biāo)板加上蓋或覆膜，7反應(yīng)分鐘。為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性，每次實(shí)驗(yàn)請(qǐng)使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。棄去液體，甩干，不用洗滌。每孔加生物素標(biāo)記抗體工作液（取生物素標(biāo)記抗體加生物素標(biāo)記抗體稀釋液的比例配制，輕輕混勻，在使用前一小時(shí)內(nèi)配制），7分鐘。溫育分鐘后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板次，每次浸泡分鐘，每孔，甩干。每孔加辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記親和素工作液（同生物素標(biāo)記抗體工作液），7，分鐘。棄育分鐘后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板次，每次浸泡分鐘，每孔，甩干。依序每孔加底物溶液，7避光顯色（分鐘內(nèi)，此時(shí)肉眼可見標(biāo)準(zhǔn)品的前孑4有明顯的梯度藍(lán)色，后3-孔4顯色不明顯，即可終止）。依序每孔加終止溶

7、液，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，底物反應(yīng)時(shí)間到后應(yīng)盡快加入終止液。用酶聯(lián)儀在波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的光密度（值）。在加終止液后分鐘以內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)。注：1棄用戶在初次使用試劑盒時(shí)，應(yīng)將各種試劑管離心數(shù)分鐘，以便試劑集中到管底。2棄每次實(shí)驗(yàn)留一孔作為空白調(diào)零孔，該孔不加任何試劑，只是最后加底物溶液及2NH2SO。測(cè)量時(shí)先用此孔調(diào)值至零。3棄為防止樣品蒸發(fā)，試驗(yàn)時(shí)將反應(yīng)板放于鋪有濕布的密閉盒內(nèi)，酶標(biāo)板加上蓋或覆膜。4棄未使用完的酶標(biāo)板或者試劑，請(qǐng)于2-78保存。標(biāo)準(zhǔn)品、生物素標(biāo)記抗體工作液、辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記親和素工作液請(qǐng)依據(jù)所需的量

8、配置使用。請(qǐng)勿重復(fù)使用已稀釋過(guò)的標(biāo)準(zhǔn)品、生物素標(biāo)記抗體工作液、或辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記親和素工作液。5棄建議檢測(cè)樣品時(shí)均設(shè)雙孔測(cè)定，以保證檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。洗板方法手工洗板方法：吸去（不可觸及板壁）或甩掉酶標(biāo)板內(nèi)的液體；在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上鋪墊幾層吸水紙，酶標(biāo)板朝下用力拍幾次；將推薦的洗滌緩沖液至少注入孔內(nèi)，浸泡分鐘。根據(jù)需要，重復(fù)此過(guò)程數(shù)次。自動(dòng)洗板：如果有自動(dòng)洗板機(jī)，應(yīng)在熟練使用后再用到正式實(shí)驗(yàn)過(guò)程中。計(jì)算以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)（對(duì)數(shù)坐標(biāo)），值為縱坐標(biāo)（普通坐標(biāo)），在半對(duì)數(shù)坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品的值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式，將樣品的值代入方程式，計(jì)算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實(shí)際濃度。注意事項(xiàng)當(dāng)混合蛋白溶液時(shí)應(yīng)盡量輕緩，避免起泡。洗滌過(guò)程非常重要，不充分的洗滌易造成假陽(yáng)性。一次加樣時(shí)間最好控制在5分鐘內(nèi)，如標(biāo)本