凝血檢查學(xué)習(xí)課件

1、血栓與止血的一般檢驗(yàn)本章目錄第一節(jié)血栓與止血的基本知識 第二節(jié)血栓與止血常用實(shí)驗(yàn)第三節(jié)血栓與止血檢驗(yàn)的質(zhì)量控制及新進(jìn) 展上一頁下一頁返回第一節(jié)血栓與止血的基本知識一、血管壁的止血功能 二、血小板止血功能 三、血液凝固機(jī)制四、抗凝系統(tǒng)和纖維蛋白溶解系統(tǒng)上一頁下一頁返回一、血管壁的止血功能（一）血管壁結(jié)構(gòu)內(nèi)膜層由單層的內(nèi)皮細(xì)胞組成。中膜層包括基底膜、平滑肌、彈力纖維 和膠原，介于內(nèi)皮細(xì)胞和外膜層之間。 3外膜層主要由結(jié)締組織組成，是血管壁與組織之間的分界層。血管止血作用主要是內(nèi)膜層發(fā)揮作用上一頁下一頁返回一、血管壁的止血功能（二）血管壁的止血功能局部血管受損時血管收縮傷口縮小血流減 慢或阻斷血流。

2、血管受損暴露出膠原激活血小板血小板發(fā) 生粘附、聚集和釋放反應(yīng)形成血小板血栓堵塞 傷口。受損的內(nèi)皮細(xì)胞釋放組織因子啟動外源性凝 血系統(tǒng)；同時暴露的膠原纖維激活內(nèi)源凝血系統(tǒng)加強(qiáng)了止血作用。上一頁下一頁返回血管壁的止血功能血管收縮激活血小板促進(jìn)血液凝固抗纖維溶解二、血小板止血功能（一）血小板的生成（二）血小板的形態(tài)與結(jié)構(gòu)（三）血小板的功能（四）血小板的止血機(jī)制上一頁下一頁返回二、血小板止血功能（一）血小板的生成骨髓中的成熟巨核細(xì)胞的胞質(zhì)脫落血小 板（PLA） 脾(1/3脾池化) 循環(huán)血。血小板的壽命約為714天，每天大約要更 新總量的1/10。衰老的血小板大多在脾中被 清除。上一頁下一頁返回二、血小

3、板止血功能（二）血小板的形態(tài)與結(jié)構(gòu)1 血小板的形態(tài)血小板是最小的血細(xì)胞，直徑為24m， 厚0.51.5m ，容積為68fl，是有折光的 扁圓形小體。正常時呈圓盤狀，被激活后可 伸出偽足。上一頁下一頁返回二、血小板止血功能（二）血小板的形態(tài)與結(jié)構(gòu)1 血小板的形態(tài)在瑞氏染色的血涂片上， 血小板常三五成群分布，大小 不一，呈圓形、橢圓形或不規(guī) 則的形狀，無核，胞質(zhì)外緣通 常染成粉紅色,內(nèi)含紫紅色嗜天 青顆粒。平均每個油鏡視野一 般可見510個血小板。上一頁下一頁返回二、血小板止血功能（二）血小板的形態(tài)與結(jié)構(gòu)2血小板的超微結(jié)構(gòu)（1）表面結(jié)構(gòu)：由多糖復(fù)合物和血小板膜組成。多糖復(fù)合物主要是由糖蛋白構(gòu) 成的

4、多種血小板受體。血小 板膜主要由磷脂、膽固醇、 糖脂和膜蛋白組成。上一頁下一頁返回二、血小板止血功能（二）血小板的形態(tài)與結(jié)構(gòu)2血小板的超微結(jié)構(gòu)（2）骨架蛋白：位于血 小板表面膜下層，由微管、 許多微絲(由肌動蛋白、肌球 蛋白組成)和膜下絲組成，它 們與維持血小板形態(tài)、血小 板伸展變形和血小板的收縮 功能有密切關(guān)系。上一頁下一頁返回二、血小板止血功能（二）血小板的形態(tài)與結(jié)構(gòu)2血小板的超微結(jié)構(gòu)（3）細(xì)胞器和內(nèi)容物： 主要有顆粒、致密顆粒及 溶酶體等，它們含有一些活 性物質(zhì)和多種蛋白水解酶， 與血小板的分泌、釋放功能 有關(guān)。上一頁下一頁返回二、血小板止血功能（二）血小板的形態(tài)與結(jié)構(gòu)2血小板的超微結(jié)構(gòu)

5、（4）特殊膜系統(tǒng)：主要 是開放管道系統(tǒng)及致密管道 系統(tǒng)，它們與血小板的分泌 (釋放)功能有重要關(guān)系。上一頁下一頁返回二、血小板止血功能（三）血小板的功能粘附功能聚集功能釋放反應(yīng)促凝功能血塊收縮功能上一頁下一頁返回二、血小板止血功能（四）血小板的止血機(jī)制第一階段：血管收縮血流緩慢血小 板被激活粘附聚集形成較松軟的止血 栓子；第二階段：血小板釋放促凝物質(zhì)加速 形成凝血塊形成堅(jiān)實(shí)的止血栓子。上一頁下一頁返回三、血液凝固機(jī)制（一）血液凝固（二）血液凝固機(jī)制上一頁下一頁返回三、血液凝固機(jī)制（一）血液凝固血液由流動狀的液體變?yōu)槟z凍狀的血塊稱 為血液凝固。血液凝固包括三個基本的生 化反應(yīng)：凝血酶原激活物的形

6、成；凝 血酶原激活物在鈣離子的參與下使凝血酶 原轉(zhuǎn)變?yōu)橛谢钚缘哪?；可溶性的纖 維蛋白原在凝血酶的作用下轉(zhuǎn)變?yōu)椴蝗苄?的纖維蛋白。上一頁下一頁返回三、血液凝固機(jī)制（二）血液凝固機(jī)制凝血因子凝血途徑上一頁下一頁返回三、血液凝固機(jī)制（二）血液凝固機(jī)制1凝血因子參與凝血過程的有關(guān)因子統(tǒng)稱為凝血因子。 迄今為止，發(fā)現(xiàn)參與凝血的因子共有14個， 其中用羅馬數(shù)字編號的有12個（從， 其中是的活化形式），未編號的是激肽 釋放酶原（PK）和高分子量激肽原（HMWK）。上一頁下一頁返回凝血因子名稱同義名血漿濃度主要合成部位生化特性功能存在情況血清Ba2SO4吸附血漿貯存血漿纖維蛋白原2000等肝細(xì)胞 肝細(xì)胞內(nèi)

7、皮 巨核細(xì)胞肝 巨核細(xì)胞等 肝細(xì)胞肝細(xì)胞 肝細(xì)胞 肝細(xì)胞 肝細(xì)胞 肝細(xì)胞 肝細(xì)胞肝 內(nèi)皮細(xì)胞肝細(xì)胞二聚體凝塊結(jié)構(gòu)無 很少-無有 無 有 有 有 有 有 有 有有 無-有無 有 無 無 較少 有 有 有 有有 有-無有 無 有 有 有 有有 有 有凝血酶原4000SP VKD酶原組織因子100因子輔因子因子細(xì)胞輔因子 前加速素 前轉(zhuǎn)變素0510a輔因子SP VKD血漿輔因子 酶原 抗血友病因子(AHF)血漿凝血激酶成分(PTC)210因子a輔因子SP VKD血漿輔因子 酶原stuart因子5SP VKD酶原血漿凝血激酶前質(zhì)(PTA)10SP酶原Hageman因子5SP酶原纖維蛋白穩(wěn)定因子(FSF

8、)2.9四聚體轉(zhuǎn)酰氨基作用HK高分子量激肽原(HMWK)2.5接觸活化反應(yīng)輔因血漿輔因子PK激肽釋放酶原(PK)71.55.0子與HK形成復(fù)合物酶原上一頁下一頁返回三、血液凝固機(jī)制（二）血液凝固機(jī)制2凝血途徑 內(nèi)源性凝血途徑 外源性凝血途徑 共同途徑上一頁下一頁返回四、抗凝系統(tǒng)和纖維蛋白溶解系 統(tǒng)（一）抗凝系統(tǒng)（二）纖維蛋白溶解系統(tǒng)上一頁下一頁返回（一）抗凝系統(tǒng)1細(xì)胞抗凝作用單核-吞噬細(xì)胞系統(tǒng)血管內(nèi)皮細(xì)胞肝細(xì)胞四、抗凝系統(tǒng)和纖維蛋白溶解系 統(tǒng)上一頁下一頁返回四、抗凝系統(tǒng)和纖維蛋白溶解系 統(tǒng)（一）抗凝系統(tǒng)2抗凝因子抗凝血酶（AT-）蛋白C系統(tǒng)蛋白C（PC蛋白S（PS）血栓調(diào)節(jié)蛋白（TM）蛋白C抑

9、制物（PCI）上一頁下一頁返回四、抗凝系統(tǒng)和纖維蛋白溶解系 統(tǒng)（一）抗凝系統(tǒng)2抗凝因子（3）組織因子途徑抑制物（TFPI）TFPI是血漿中一種新發(fā)現(xiàn)的抗凝蛋白，由血管 內(nèi)皮細(xì)胞、巨核細(xì)胞、肝細(xì)胞和血小板合成，是 組織因子、因子和因子的天然抑制物，在維 持正常凝血中發(fā)揮關(guān)鍵的生理作用。上一頁下一頁返回四、抗凝系統(tǒng)和纖維蛋白溶解系統(tǒng)（二）纖維蛋白溶解系統(tǒng)上一頁下一頁返回四、抗凝系統(tǒng)和纖維蛋白溶解系統(tǒng)（二）纖維蛋白溶解系統(tǒng)纖溶系統(tǒng)的激活途徑上一頁下一頁返回四、抗凝系統(tǒng)和纖維蛋白溶解系 統(tǒng)（二）纖維蛋白溶解系統(tǒng)纖維蛋白的降解過程上一頁下一頁返回四、抗凝系統(tǒng)和纖維蛋白溶解系統(tǒng)（二）纖維蛋白溶解系統(tǒng)纖維蛋

10、白原和纖維蛋白降解產(chǎn)物上一頁下一頁返回目標(biāo)形成性測試上一頁下一頁返回血管壁是如何參與止血的?局部血管受損時血管收縮傷口縮小血流減慢或阻斷血流。血管受損暴露出膠原激活血小板血 小板發(fā)生粘附、聚集和釋放反應(yīng)形成血小 板血栓堵塞傷口。受損的內(nèi)皮細(xì)胞釋放組織因子啟動外 源性凝血系統(tǒng)；同時暴露的膠原纖維激活 內(nèi)源凝血系統(tǒng)加強(qiáng)了止血作用。上一頁下一頁返回血小板的形態(tài)是怎樣的?血小板是最小的血細(xì)胞，直徑為24m， 厚0.51.5m ，容積為68fl，是有折光的 扁圓形小體。正常時呈圓盤狀，被激活后可 伸出偽足。在瑞氏染色的血涂片上，血小板 常三五成群分布，大小不一，呈圓形、橢圓 形或不規(guī)則的形狀，無核，胞質(zhì)

11、外緣通常染 成粉紅色,內(nèi)含紫紅色嗜天青顆粒。平均每個 油鏡視野一般可見510個血小板。上一頁下一頁返回內(nèi)源性途徑和外源性途徑凝血活酶 的生成有何不同?內(nèi)源性途徑參與的因子多，反應(yīng)復(fù)雜， 全部過程約需要38min而外源性途徑參與 的因子少反應(yīng)迅速，全部過程約需10S；內(nèi) 源性途徑凝血活酶的磷脂表面由PF3提供， 而外外源途徑凝血活酶的磷脂表面是由因 子的磷脂部分提供。上一頁下一頁返回內(nèi)源性凝血系統(tǒng)的始動因子是：（C）A凝血因予 B凝血因子 C凝血因子D凝血因子I E凝血因子上一頁下一頁返回E正常止血機(jī)理與哪些因素有關(guān) ? A血小板的質(zhì)和量 B血管壁的結(jié)構(gòu)和功能 C凝血因子 D神經(jīng)和體液的調(diào)解 E

12、以上都是上一頁下一頁返回第二節(jié) 血栓與止血常用實(shí)驗(yàn)一、毛細(xì)血管脆性實(shí)驗(yàn) CFT二、出血時間測定BT三、血塊收縮試驗(yàn)（CRT） 四、凝血時間測定 CT五、活化部分凝血活酶時間測定aptt上一頁下一頁返回第二節(jié) 血栓與止血常用實(shí)驗(yàn)六、血漿凝血酶原時間測定PT七、血漿凝血酶時間測定TT八、血漿纖維蛋白（原）測定Fbg九、血漿纖維蛋白（原）降解產(chǎn)物 fdp十、血漿D-二聚體測定上一頁下一頁返回一、血小板計(jì)數(shù)（PLt）【原理】用稀釋液將血液稀釋一定倍數(shù)，混勻后 充入計(jì)數(shù)池內(nèi)，在顯微鏡下計(jì)數(shù)一定體積 內(nèi)的血小板數(shù)，經(jīng)過計(jì)算求出每升血液中 血小板數(shù)。上一頁下一頁返回二、出血時間測定上一頁下一頁返回二、出血時

13、間測定【原 理】出血時間（BT）是指在一定條件下，人為 刺破皮膚毛細(xì)血管后，從血液自行流出到自 然停止所需的時間。出血時間測定主要是反 映血管壁的結(jié)構(gòu)和功能、血小板數(shù)量和質(zhì)量 以及血小板與毛細(xì)血管之間相互作用的試驗(yàn)。上一頁下一頁返回二、出血時間測定【器 材】血壓計(jì)出血時間測定器為雙刀片彈簧裝置， 兩把刀片每片長均為6mm，深為1mm。干凈濾紙秒表上一頁下一頁返回二、出血時間測定【操 作】將血壓計(jì)袖帶縛于上臂，加壓。在肘前窩凹下二橫指處常規(guī)消毒，輕輕繃緊 皮膚，置出血時間測定器使它貼于皮膚表面，按 其按鈕，使刀片由“測定器”內(nèi)刺入皮膚，同時 啟動秒表。每隔半分鐘，用干凈濾紙吸取流出血液，直 至出

14、血自然停止，按停秒表計(jì)時。上一頁下一頁返回二、出血時間測定【注意事項(xiàng)】 1刀片長度與前臂平行，以保持傷口與神經(jīng)、血 管走向一致。濾紙吸去血液時，避免與傷口接觸，更不能擠 壓傷口?；颊咴跍y定前一周停止服用抗血小板藥物如阿 司匹林等。當(dāng)時間大于20min時，應(yīng)停止測定，并壓迫止 血。上一頁下一頁返回二、出血時間測定【參考值】6.882.08min上一頁下一頁返回二、出血時間測定【臨床意義】1出血時間延長 見于 血小板數(shù)量減 少如特發(fā)性血小板減少性紫癜、血栓性血 小板減少性紫癜； 血小板功能異常如血 小板無力癥；血管壁及結(jié)構(gòu)異常如遺傳性出血性毛細(xì)血管擴(kuò)張癥、維生素C缺乏癥； 某些凝血因子缺乏，如血管

15、性血友?。╒WD）和彌散性血管內(nèi)凝血（DIC）。上一頁下一頁返回二、出血時間測定【臨床意義】2出血時間縮短主要見于血栓前狀態(tài)或 血栓栓塞性疾病，如心肌梗死、腦血管疾 病、DIC的高凝血期、妊娠高血壓綜合征、 糖尿病伴血管病等，均可因血管壁損害， 血小板或凝血因子活性過度增強(qiáng)所致。上一頁下一頁返回小結(jié)血小板計(jì)數(shù)是臨床常用以觀察血栓與止血功 能的檢驗(yàn)項(xiàng)目。血小板稀釋液應(yīng)能有效地阻止凝 血，防止血小板黏附、聚集變形碎裂和盡快固定 血小板形態(tài)的作用。針刺應(yīng)稍深，使血流通暢； 拭去第一滴血后，首先采血作血小板計(jì)數(shù)；操作 應(yīng)迅速；采取標(biāo)本后應(yīng)在1 h內(nèi)計(jì)數(shù)完畢；要充分 混勻，充入計(jì)數(shù)池后一定要靜置1015

16、min ；計(jì) 數(shù)時光線要適中，不可太強(qiáng)。出血時間測定主要 是反映血管壁的結(jié)構(gòu)和功能、血小板數(shù)量和質(zhì)量 以及血小板與毛細(xì)血管之間相互作用的試驗(yàn)。上一頁下一頁返回目標(biāo)形成性測試上一頁下一頁返回B62109L D12.4109LA3l109L C9.3lO9LE以上都不是給一患者作血小板計(jì)數(shù)，取血20l加至 0.38ml許汝和稀釋液中，充液計(jì)數(shù)中央 大格內(nèi)5個中方格的血小板數(shù)為62個，求 該患者的血小板數(shù)：（ B）上一頁下一頁返回A因子缺乏 B血小板計(jì)數(shù)明顯減少 C血小板功能異常 D血管異常 E藥物影響(阿司匹林)出血時間異?？梢娪冢海˙C）DE上一頁下一頁返回本小節(jié)結(jié)束！上一頁下一頁返回三、凝血時

17、間測定上一頁下一頁返回三、凝血時間測定（一）試管法全血凝固時間測定【原理】靜脈血離體后至完全凝固所需的時間稱為 凝血時間（CT），是反映內(nèi)源凝血系統(tǒng)各 凝血因子活性的篩選試驗(yàn)。上一頁下一頁返回三、凝血時間測定（一）試管法全血凝固時間測定【操作】取內(nèi)徑為8mm小試管3支，編號1、2、3。順利地抽取待測者靜脈血3ml，（自血液 入針頭開始計(jì)時），去掉針頭，分別沿試 管內(nèi)壁依次注入血液lml，置37水浴中。上一頁下一頁返回三、凝血時間測定（一）試管法全血凝固時間測定【操作】33min后，每隔半分鐘將第1管傾斜1次， 直至將試管倒置血液不流動4依次觀察第2管，第2管凝固后，再觀察 第3管。第3管血液凝

18、固時停止計(jì)時，即為 凝血時間。上一頁下一頁返回三、凝血時間測定（一）試管法全血凝固時間測定【注意事項(xiàng)】玻璃試管應(yīng)清潔干燥。靜脈采血應(yīng)順利。傾斜試管的角度應(yīng)以30為宜，且動作要 輕。上一頁下一頁返回三、凝血時間測定（一）試管法全血凝固時間測定【參考值】412min上一頁下一頁返回三、凝血時間測定（二）硅管法全血凝固時間測定【 原理】同試管法CT測定。但不同的是所用試管 均應(yīng)涂硅油，故稱為硅管凝血時間（SCT）。上一頁下一頁返回三、凝血時間測定（二）硅管法全血凝固時間測定【試劑】硅油（二甲基二氯硅烷）石油醚（化學(xué)純）上一頁下一頁返回三、凝血時間測定（二）硅管法全血凝固時間測定【操作】將硅油2ml與

19、石油醚98ml混合，將內(nèi)徑為8mm 潔凈玻璃試管浸泡于該溶液內(nèi)，使試管的內(nèi)壁均 勻涂上硅油后，倒置于試管架上晾干。再置 200250烘箱內(nèi)2h，冷卻后用蒸餾水沖凈， 烘干即為硅管。通常只能用23次。其余操作同試管法CT測定。上一頁下一頁返回三、凝血時間測定（二）硅管法全血凝固時間測定【參考值】1530min上一頁下一頁返回（三）活化凝血時間測定【 原理】同試管法CT測定。試管中加入白陶土-腦 磷脂的混懸液以充分激活因子，并為凝血 反應(yīng)提供豐富的催化表面，以提高本試驗(yàn)的 敏感性。它是內(nèi)源性凝血系統(tǒng)敏感的篩選試 驗(yàn)之一。三、凝血時間測定上一頁下一頁返回三、凝血時間測定（三）活化凝血時間測定【 試劑

20、】1腦磷脂商品試劑240g/L白陶土懸液3巴比妥緩沖液440g/L白陶土一腦磷脂懸液上一頁下一頁返回三、凝血時間測定（三）活化凝血時間測定【操作】在含40g/L白陶土-腦磷脂懸液0.2ml的小 試管中注入待檢者全血O.5ml，輕輕混合其余操作步驟同試管法CT測定。上一頁下一頁返回三、凝血時間測定（三）活化凝血時間測定【參考值】1.12.1min上一頁下一頁返回三、凝血時間測定（三）活化凝血時間測定【 注意事項(xiàng)】 1靜脈采血時要一針見血，盡量減少組織液和空 氣混入，不應(yīng)有溶血。水浴溫度要恒定。傾斜動作要輕，角度要小（約30）。本試驗(yàn)試管法不甚敏感，僅能檢出：C水平2的重型血友病患者。上一頁下一頁

21、返回三、凝血時間測定（三）活化凝血時間測定【臨床意義】1凝血時間延長見于較明顯的因子、 減少的血友病A和血友病B， 凝血因子XI缺乏癥；嚴(yán)重的纖維蛋白原和凝血酶原缺乏、因子V和因 子X缺乏等；應(yīng)用肝素等抗凝藥物；循環(huán)血液中存在病理性抗凝物。上一頁下一頁返回三、凝血時間測定（三）活化凝血時間測定【臨床意義】凝血時間縮短見于 血液呈高凝狀態(tài)時，如DIC早期（高凝期）； 血栓性疾病。本試驗(yàn)（特別是ACT法）也是監(jiān)護(hù)體外循環(huán) 肝素用量的較好指標(biāo)之一。上一頁下一頁返回四、血塊收縮試驗(yàn)（CRT）上一頁下一頁返回四、血塊收縮試驗(yàn)（CRT）（一）全血定量法【原理】血液凝固后，血小板收縮蛋白使血小板伸出偽 足，

22、附著于纖維蛋白束上。當(dāng)偽足向心性收縮， 使纖維蛋白網(wǎng)眼縮小，將網(wǎng)隙中的血清擠出。計(jì) 算在一定條件下析出的血清量占原有血量的百分 數(shù)，表示血塊收縮程度，可間接反映血小板的功 能。本試驗(yàn)為血小板功能診斷的篩選試驗(yàn)。上一頁下一頁返回四、血塊收縮試驗(yàn)（CRT）（一）全血定量法【 器材】15ml刻度離心管2軟木塞中央部位插有一根長14cm下端呈 槌形玻璃棒上一頁下一頁返回四、血塊收縮試驗(yàn)（CRT）（一）全血定量法【操作】采靜脈血5ml，拔去針頭，沿管壁徐徐注 入5ml刻離心管。插入玻棒，使槌形下端插入血中，將軟木 塞蓋好管口，置37水?。ɑ驕赜洌?育。上一頁下一頁返回四、血塊收縮試驗(yàn)（CRT）（一）

23、全血定量法【 操作】當(dāng)血液完全凝固后1h，將血塊輕輕分離， 使其脫離管壁，并將血塊提起，棄去。將離心管經(jīng)RCFl600g（3000r/min）離心10min后觀察析出的血清量和有形成分體積。上一頁下一頁返回四、血塊收縮試驗(yàn)（CRT）100%血塊收縮率(%) 全血量(5ml) 血漿比容血清量(ml)（一）全血定量法【計(jì)算】（血漿比容=100-紅細(xì)胞比容）【參考值】4864上一頁下一頁返回四、血塊收縮試驗(yàn)（CRT）（一）全血定量法【臨床意義】血塊收縮40表明收縮不良，見于血小板 無力癥、血小板減少癥；血塊收縮顯著減退，見 于嚴(yán)重凝血因子缺乏和凝血障礙、纖維蛋白原或 凝血酶原嚴(yán)重減少、紅細(xì)胞增多癥等

24、。血塊收縮過度 見于先天性凝血因子缺乏癥、 嚴(yán)重貧血。上一頁下一頁返回四、血塊收縮試驗(yàn)（CRT）（二）血漿定量法【原理】在富含血小板的血漿中加入氯化鈣或凝 血酶，使血漿凝固形成凝塊，測定析出血 清的體積可反映血小板收縮功能。上一頁下一頁返回四、血塊收縮試驗(yàn)（CRT）（二）血漿定量法【器材和試劑】1刻度小試管2O.05moL/L氯化鈣溶液或20U/ml凝血酶 溶液3O.109moL/L枸櫞酸鈉抗凝劑上一頁下一頁返回四、血塊收縮試驗(yàn)（CRT）（二）血漿定量法【 操作】靜脈采血1.8ml，以0.109mol/L枸櫞酸鈉 溶液0.2ml抗凝。以RCFl77g（1000r/min）離心10minm， 制

25、備富含血小板血漿（PRP）。上一頁下一頁返回四、血塊收縮試驗(yàn)（CRT）（二）血漿定量法【操作】吸取PRP0.6ml加入刻度小試管內(nèi)，置37水浴 中溫育3min后，加入0.05mol/L CaCl2或20/ml凝 血酶0.2ml?；靹蚝?，置37水浴中溫育2h。用玻璃棒將血 漿凝塊輕輕棄除，觀察析出血清的體積。上一頁下一頁返回四、血塊收縮試驗(yàn)（CRT）（二）血漿定量法【計(jì)算】血清量（ml）上一頁下一頁返回血塊收縮率（）=100全血量（5ml）血漿比容四、血塊收縮試驗(yàn)（CRT）（二）血漿定量法【參考值】血塊收縮率40?！九R床意義】 同定量法。上一頁下一頁返回五、活化部分凝血活酶時間測定上一頁下一頁返

26、回五、活化部分凝血活酶時間測定【原理】在37下以白陶土激活因子和，以腦 磷脂（部分凝血活酶）代替血小板，以提供 凝血的催化表面，在Ca2+參與下，觀察乏血 小板血漿凝固所需時間即稱為活化部分凝血 活酶時間（APTT）。是內(nèi)源性凝血系統(tǒng)較敏 感和常用的篩選試驗(yàn)。上一頁下一頁返回五、活化部分凝血活酶時間測定【試劑】1APTT試劑（含白陶土或腦磷脂）20.109mol/L枸櫞酸鈉溶液30.025mol/L氯化鈣溶液4正常人凍干血漿上一頁下一頁返回五、活化部分凝血活酶時間測定【操作】1靜脈血 1.8ml + 0.109mol/L枸櫞酸鈉0.2mlRCFl600g（3000r/min），離心10min分

27、離乏血小板血漿。2待檢血漿0.1ml + APTT試劑0.1ml37水浴3min，其間輕輕振搖數(shù)次。上一頁下一頁返回五、活化部分凝血活酶時間測定【操作】加入經(jīng)37預(yù)溫的 O.025mol/L氯化鈣 溶液0.1ml，立即開啟秒表，置水浴中不斷的 振搖，約30s時取出試管，并傾斜試管觀察， 至出現(xiàn)纖維蛋白絲時停止記時，重復(fù)兩次取 平均值。同時按上法測定正常對照。上一頁下一頁返回五、活化部分凝血活酶時間測定【注意事項(xiàng)】靜脈采血應(yīng)順利完成，血液與抗凝劑要充分混勻， 避免產(chǎn)生微小凝塊。抽血后應(yīng)在兩小時內(nèi)完成。血液離心速度和時間應(yīng)達(dá)到要求，以盡可能除去 血小板。若正常對照APTT延長，提示APTT試劑質(zhì)量

28、不佳， 應(yīng)重新配制。上一頁下一頁返回五、活化部分凝血活酶時間測定【參考值】男性：（373.3）s，女性（37.52.8）s。待檢者的測定值較 正常對照值延長超過10s以上才有病理意義。上一頁下一頁返回五、活化部分凝血活酶時間測定【臨床意義】基本與凝血時間意義相同。1. APTT延長 見于因子、和血漿水 平減低，如血友病A、B及凝血因子、缺乏癥； 因子減少還見于部分血管性血友?。╲WD）患者； 嚴(yán)重的凝血酶原、因子V、因子X和纖維蛋白原 缺乏；纖溶活性增強(qiáng)； 血循環(huán)中有異?？鼓?質(zhì)。上一頁下一頁返回五、活化部分凝血活酶時間測定【臨床意義】APTT縮短見于高凝狀態(tài)，如彌散性血管 內(nèi)凝血的高凝血期

29、； 血栓性疾病，如心肌梗死、 不穩(wěn)定性心絞痛、腦血管病變、糖尿病伴血管病變、 肺梗死、深靜脈血栓形成、妊娠高血壓綜合征和腎 病綜合征以及重灼傷等。肝素治療的監(jiān)測：一般以APTT值維持在正常 對照的1.53.O倍為宜。上一頁下一頁返回上一頁下一頁返回目標(biāo)形成性測試上一頁下一頁返回對凝血時間最有影響的因素是：（C ）B血小板功能 D血管壁的完整性A血小板數(shù)量 C血漿凝血因子 E血管壁的收縮功能上一頁下一頁返回下列哪項(xiàng)不是測定內(nèi)源系統(tǒng)凝血因子缺乏的 試驗(yàn)：（C）A凝血時間 C凝血酶時間B血漿復(fù)鈣時間 D凝血酶原消耗試驗(yàn)E凝血活酶生成試驗(yàn)上一頁下一頁返回APTT測定的原理是怎樣的?在37下以白陶土激活

30、因子和，以 腦磷脂（部分凝血活酶）代替血小板， 以提供凝血的催化表面，在Ca2+參與下， 觀察乏血小板血漿凝固所需時間即稱為 活化部分凝血活酶時間（APTT）。上一頁下一頁返回本小節(jié)結(jié)束！上一頁下一頁返回六、血漿凝血酶原時間測定 七、血漿凝血酶時間測定上一頁下一頁返回六、血漿凝血酶原時間測定上一頁下一頁返回六、血漿凝血酶原時間測定一期法【原理】在待檢血漿中加入過量的組織凝血活酶和 Ca2+，使凝血酶原轉(zhuǎn)變?yōu)槟福笳呤估w 維蛋白原轉(zhuǎn)變?yōu)槔w維蛋白。觀察血漿凝固所 需時間即血漿凝血酶原時間（PT）。該試驗(yàn) 是外源性凝血系統(tǒng)的篩選試驗(yàn)。上一頁下一頁返回六、血漿凝血酶原時間測定【器材和試劑】1秒表、

31、塑料試管、塑料注射器、恒溫水浴 箱20.109mol/L枸櫞酸鈉3組織凝血活酶浸出液40.025mol/L氯化鈣溶液上一頁下一頁返回六、血漿凝血酶原時間測定【操作】制備乏血小板血漿(同APTT)。取小試管1支，加入待測血漿和組織凝血活酶 浸出液各0.1ml，37預(yù)溫，再加入已在37水 浴中預(yù)溫的0.025mol/L氯化鈣溶液0.1ml，立即開 啟秒表，不斷輕輕傾斜試管，記錄至液體停止流 動所需要的時間。重復(fù)以上操作23次，取平均 值即凝血酶原時間。必須同時按上述步驟測定正常對照。上一頁下一頁返回六、血漿凝血酶原時間測定【報(bào)告方式及參考值】 直接報(bào)告患者及正常對照PT秒數(shù)，參考值為1114s，患

32、者PT值比正常對照延長或縮短3為異常； 報(bào)告凝血酶原時間比值（PTR），參考值為0.821.15； 當(dāng)PT用于監(jiān)測口服抗凝劑時，則必須同時報(bào)告國 際標(biāo)準(zhǔn)化比值（INR），INR=PTRISI 。ISI為國 際敏感指數(shù)，ISI值愈低，則INR愈準(zhǔn)確 。上一頁下一頁返回六、血漿凝血酶原時間測定【注意事項(xiàng)】抗凝劑的選擇及用量用0.109mol/L枸櫞酸鈉。 在紅細(xì)胞比容（Hct）(20%或)55%時，抗凝劑量=0.00185擬采血量（ml）（100-患 者Hct）抽血要順利，抗凝要充分，不可有凝塊或溶血。 采血管應(yīng)加蓋。上一頁下一頁返回六、血漿凝血酶原時間測定【注意事項(xiàng)】采血后要在l2h內(nèi)完成，置4

33、冰箱保 存不能超過4h，-20下可放置兩周。選用ISI2.0s的組織凝血活酶為宜。測定標(biāo)本時，每份標(biāo)本作雙份測定，嚴(yán) 格按試劑和儀器說明書要求進(jìn)行測定，水浴 溫度應(yīng)穩(wěn)定控制在（371）。上一頁下一頁返回六、血漿凝血酶原時間測定【臨床意義】1PT延長或PTR增加見于先天性因子、 、缺乏癥和低（無）纖維蛋白原血癥；獲得性凝血因子缺乏見于DIC、原發(fā)性纖 維蛋白溶解癥、維生素K缺乏癥、血循環(huán)中有 抗凝物質(zhì)如口服抗凝劑、肝素和FDP存在。上一頁下一頁返回六、血漿凝血酶原時間測定【臨床意義】PT縮短或PTR降低見于先天性因子V 增多癥、口服避孕藥、高凝狀態(tài)和血栓病等。監(jiān)測口服抗凝劑的用量一般人INR以1

34、.82.5s為宜，不超過3.0s。上一頁下一頁返回七、血漿凝血酶時間測定上一頁下一頁返回七、血漿凝血酶時間測定【原理】于待檢血漿中加入標(biāo)準(zhǔn)化的凝血酶溶液后， 在凝血酶的作用下，使纖維蛋白原形成纖維 蛋白，使血漿凝固所需的時間為凝血酶時間（TT）。當(dāng)待檢血漿中抗凝物質(zhì)增多時，TT 延長。上一頁下一頁返回七、血漿凝血酶時間測定【試劑】10.109mol/L枸櫞酸鈉2凝血酶溶液上一頁下一頁返回七、血漿凝血酶時間測定【操作】制備乏血小板血漿(同APTT)。取待檢血漿0.1ml置于小試管內(nèi)，于37水浴 中溫育5min。加入凝血酶溶液0.1ml，同時開動秒表，直至 血漿凝固為止。重復(fù)上述操作23次，取均值

35、。同時作正常血漿對照。上一頁下一頁返回七、血漿凝血酶時間測定【注意事項(xiàng)】分離血漿后最好立即測定，室溫下放置不 得超過3h。不宜用EDTA鹽和肝素作抗凝劑。加凝血酶溶液前要充分混勻。上一頁下一頁返回七、血漿凝血酶時間測定【參考值】參考值1618s，比正常對照延長3s以上 為異常。上一頁下一頁返回七、血漿凝血酶時間測定【臨床意義】凝血酶時間延長見于血中AT-活性明顯增高或 血中有肝素和類肝素物質(zhì)存在。DIC纖溶亢進(jìn)期、低（無）纖維蛋白原血癥及異 常纖維蛋白原血癥時，亦均可有TT結(jié)果延長。TT亦可用于粗略監(jiān)測肝素抗凝治療患者血漿中 的肝素用量。上一頁下一頁返回小結(jié)在待檢血漿中加入過量的組織凝血活酶和

36、Ca2+，觀察血 漿凝固所需時間即血漿凝血酶原時間（PT）。該試驗(yàn)是外源 性凝血系統(tǒng)的篩選試驗(yàn)。測定時要注意抗凝劑的選擇及用量、 抽血要順利、采血及時測定、水浴溫度應(yīng)穩(wěn)定控制在（371）。PT延長或PTR增加見于、缺乏 癥和低（無）纖維蛋白原血癥。于待檢血漿中加入標(biāo)準(zhǔn)化的凝血酶溶液后，在凝血酶的 作用下，使纖維蛋白原形成纖維蛋白，使血漿凝固所需的時 間為凝血酶時間（TT）。當(dāng)待檢血漿中抗凝物質(zhì)增多時， TT延長。上一頁下一頁返回目標(biāo)形成性測試上一頁下一頁返回血漿凝血酶原時間測定的原理是怎樣的?在待檢血漿中加入過量的組織凝血活酶和 Ca2+，使凝血酶原轉(zhuǎn)變?yōu)槟?，后者使纖 維蛋白原轉(zhuǎn)變?yōu)槔w維蛋

37、白。觀察血漿凝固所 需時間即血漿凝血酶原時間（PT）。該試驗(yàn) 是外源性凝血系統(tǒng)的篩選試驗(yàn)。上一頁下一頁返回A凝血因子、 B凝血因子、II C凝血因子、 D凝血因子、 E凝血因子、血漿凝血酶原時間檢測的凝血因子 為：（A ）上一頁下一頁返回于待檢血漿中加入標(biāo)準(zhǔn)化的凝血酶溶液 后，在凝血酶的作用下，使纖維蛋白原形成 纖維蛋白，使血漿凝固所需的時間為凝血酶 時間（TT）。什么是凝血酶時間?上一頁下一頁返回凝血酶時間延長，可因FDP增多或纖維蛋白 原減少凝血酶時間延長，做糾正試驗(yàn)時間并不縮短,表 示存在肝素抗凝物質(zhì)凝血酶時間延長，見于AT-活性明顯增高:C增高主要見于高凝狀態(tài)和血栓性疾病肝病時凝血酶時

38、間也延長以下哪項(xiàng)不正確:( C)上一頁下一頁返回本小節(jié)結(jié)束！上一頁下一頁返回纖維蛋白原纖維蛋白原（Fg）是由肝臟合成，是血漿濃度最 高的凝血因子。Fg濃度或功能異常均可導(dǎo)致凝血障礙。 因此，F(xiàn)g是出血性疾病與血栓性疾病診治中常用的篩 檢指標(biāo)之一。Fg檢測方法有多種，有的準(zhǔn)確性較差， 已趨向淘汰。目前常用的方法有Clauss法、PT衍生法 等?！緳z測原理】Clauss法、PT衍生法等方法的檢測 原理見表2-75?！痉椒▽W(xué)評價】Fg檢測的方法學(xué)評價見表2-76?！举|(zhì)量保證】【參考區(qū)間】成人：2.004.00g/L。新生兒：1.253.00g/L?！九R床意義】八、血漿纖維蛋白（原）降解產(chǎn)物 測定（一

39、）血漿硫酸魚精蛋白副凝固試驗(yàn)（3P試 驗(yàn)，凝固法）（二）FDP膠乳顆粒凝集試驗(yàn)（FDP膠乳凝 集法）（三）D-二聚體定性試驗(yàn)上一頁下一頁返回八、血漿纖維蛋白（原）降解產(chǎn)物 測定（一）血漿硫酸魚精蛋白副凝固試驗(yàn)（3P試驗(yàn)）【 原理】在凝血酶的作用下，纖維蛋白原釋放出肽A肽B 后轉(zhuǎn)變?yōu)槔w維蛋白單體（FM），F(xiàn)M與纖維蛋白降 解產(chǎn)物（FDP）形成可溶性復(fù)合物。硫酸魚精蛋白 可使該復(fù)合物中的FM游離出來，后者又自行聚合呈 肉眼可見的纖維狀、絮狀或膠凍狀。上一頁下一頁返回八、血漿纖維蛋白（原）降解產(chǎn)物 測定（一）血漿硫酸魚精蛋白副凝固試驗(yàn)（3P試 驗(yàn)）【原理】這種不需要凝血酶而發(fā)生凝固的現(xiàn)象，稱 為血漿

40、魚精蛋白副凝固試驗(yàn)，簡稱3P試驗(yàn)。 本試驗(yàn)是對纖溶的簡易篩選試驗(yàn)。上一頁下一頁返回八、血漿纖維蛋白（原）降解產(chǎn)物 測定（一）血漿硫酸魚精蛋白副凝固試驗(yàn)（3P試 驗(yàn)）【試劑】10.109mol/L枸櫞酸鈉溶液。2. 10g/L硫酸魚精蛋白溶液（pH6.5）上一頁下一頁返回八、血漿纖維蛋白（原）降解產(chǎn)物 測定（一）血漿硫酸魚精蛋白副凝固試驗(yàn)（3P試驗(yàn)）【操作】制備乏血小板血漿(同APTT)。取O.5ml乏血小板的枸櫞酸鈉抗凝血漿（PPP） 放人試管中，置37水浴中3min。檢查血漿確系完全清晰時，加10g/L硫酸魚精蛋 白溶液O.05ml混勻，置37水浴中15min。準(zhǔn)確15min時，立即在光亮處

41、傾斜試管，觀察結(jié) 果。上一頁下一頁返回八、血漿纖維蛋白（原）降解產(chǎn)物 測定（一）血漿硫酸魚精蛋白副凝固試驗(yàn)（3P試 驗(yàn)）【結(jié)果判斷】強(qiáng)陽性 有明顯的纖維蛋白絲或絮狀或呈 膠凍狀。陽性 血漿中有細(xì)或粗顆粒狀沉淀出現(xiàn)。陰性 血漿清晰不變，無不溶解物產(chǎn)生。上一頁下一頁返回八、血漿纖維蛋白（原）降解產(chǎn)物 測定（一）血漿硫酸魚精蛋白副凝固試驗(yàn)（3P試 驗(yàn)）【參考值】正常人為陰性。上一頁下一頁返回八、血漿纖維蛋白（原）降解產(chǎn)物 測定（一）血漿硫酸魚精蛋白副凝固試驗(yàn)（3P試驗(yàn)）【注意事項(xiàng)】本試驗(yàn)只能用檸檬酸鈉抗凝。抽血不順利、抗凝不完全、嚴(yán)重貧血、標(biāo)本保存 于冰箱、到時未立即觀察結(jié)果等均會導(dǎo)致假陽性結(jié) 果。

42、若水浴溫度太低或纖維蛋白原的含量過低都會造 成假陰性結(jié)果。上一頁下一頁返回八、血漿纖維蛋白（原）降解產(chǎn)物 測定（一）血漿硫酸魚精蛋白副凝固試驗(yàn)（3P試驗(yàn)）【臨床意義】13P陽性見于DIC早期或中期。但在大出血，如創(chuàng) 傷、手術(shù)、咯血時，或樣本置冰箱后可呈假陽性， 敗血癥、惡性腫瘤等也可出現(xiàn)陽性。23P陰性見于DIC晚期和原發(fā)性纖維蛋白溶解癥上一頁下一頁返回八、血漿纖維蛋白（原）降解產(chǎn)物 測定（二）FDP膠乳顆粒凝集試驗(yàn)【原理】用特異性纖維蛋白（原）的D、E碎片抗體 標(biāo)記膠乳顆粒，此抗體-膠乳顆粒結(jié)合物與待 檢血清混合，如血清中含有纖維蛋白（原） 降解產(chǎn)物，特別是D碎片、E碎片，則發(fā)生抗 原抗體反

43、應(yīng)，導(dǎo)致膠乳顆粒凝集。上一頁下一頁返回八、血漿纖維蛋白（原）降解產(chǎn)物 測定（二）FDP膠乳顆粒凝集試驗(yàn)【試劑】110 U/ml凝血酶 210萬U/ml抑肽酶 3膠乳懸液FDP陰性對照液。FDP陽性對照液。樣本稀釋液上一頁下一頁返回八、血漿纖維蛋白（原）降解產(chǎn)物 測定（二）FDP膠乳顆粒凝集試驗(yàn)【操作】1靜脈血lml + 抑肽酶5l + 凝血酶 10l37水浴1h3000r/min離心8min分離 血清。2用樣本稀釋液分別將待檢血清作l:4和1:10稀釋。上一頁下一頁返回八、血漿纖維蛋白（原）降解產(chǎn)物 測定（二）FDP膠乳顆粒凝集試驗(yàn)【操作】取上述稀釋血清各100l于載玻片上，滴 加膠乳懸液10

44、0l，充分混合，2min后觀察結(jié) 果。膠乳凝集成塊為陽性，無任何凝集塊分布 均勻?yàn)殛幮?。上一頁下一頁返回八、血漿纖維蛋白（原）降解產(chǎn)物 測定（二）FDP膠乳顆粒凝集試驗(yàn)【參考值】血清含量10mg/L；尿液含量為0。上一頁下一頁返回八、血漿纖維蛋白（原）降解產(chǎn)物 測定（二）FDP膠乳顆粒凝集試驗(yàn)【臨床意義】原發(fā)性纖溶亢進(jìn)時，F(xiàn)DP含量可明顯增高。高凝狀態(tài)、彌散性血管內(nèi)凝血、肺栓塞、器官移植的排異反應(yīng)、妊娠高血壓綜合征、惡性腫瘤， 心、肝、腎疾病及靜脈血栓、溶栓治療等所致的繼發(fā)性纖溶亢進(jìn)時，F(xiàn)DP含量升高。上一頁下一頁返回八、血漿纖維蛋白（原）降解產(chǎn)物 測定（三）D-二聚體定性試驗(yàn)D-二聚體（D-

45、Dimer）是交聯(lián)纖維蛋白分 子降解的碎片，具有抗原性。其包括膠乳凝 集試驗(yàn)和酶聯(lián)免疫分析方法。上一頁下一頁返回八、血漿纖維蛋白（原）降解產(chǎn)物 測定（三）D-二聚體定性試驗(yàn) 膠乳凝集試驗(yàn)【原理】以抗D-二聚體單克隆抗體標(biāo)記固相載體膠 乳顆粒，在此膠乳顆?？贵w結(jié)合物中加入 待檢血漿，如血漿中的D-二聚體含量 O.5g/ml，則膠乳顆粒發(fā)生凝集反應(yīng)。上一頁下一頁返回八、血漿纖維蛋白（原）降解產(chǎn)物 測定（三）D-二聚體定性試驗(yàn)【試劑】市售D-二聚體膠乳抗體試劑盒上一頁下一頁返回八、血漿纖維蛋白（原）降解產(chǎn)物 測定（三）D-二聚體定性試驗(yàn)【 操作】1靜脈血1.8ml + 0.2ml 0.109mol/L枸櫞酸鈉1600g（3000r/min）離心5min分離血漿。2按說明書將待檢血漿1:5稀釋，分別取稀釋標(biāo) 本和未稀釋標(biāo)本20l，加入抗D-二聚體膠乳顆粒 結(jié)合物中，迅速混勻，置室溫2min觀察結(jié)果。上一頁下一頁返回八、血漿纖維蛋白（原）降解產(chǎn)物 測定（三）D-二聚體定性試驗(yàn)【參考區(qū)間】0.4g/ml上一頁下一頁返回九、自動血凝儀的應(yīng)用上一頁下一頁返回九、自動