萊克多巴胺Rac定量檢測試劑盒ELISA

1、萊克多巴胺（Rac）定量檢測試劑盒（ELISA）利用說明書一、概要P興奮劑是一種人和獸醫(yī)作為醫(yī)治哮喘的藥物。在家畜中超劑量利用能夠脂肪組織轉(zhuǎn)化為肌肉組織，由于能夠顯著改善脂肪率和生產(chǎn)效率，B興奮劑往往被濫用于畜牧養(yǎng)殖生產(chǎn)中。已經(jīng)有克倫特羅或其他。興奮劑中毒的病例報導(dǎo)，近來乂有一些非法利用萊克多巴胺（Rac）來替代克倫特羅作為飼料添加，并存在濫用現(xiàn)象。通常情形下，HPLC或GC-MS是克倫特羅殘留檢測的確證方式，可是其前處置步驟繁瑣、費用昂貴。酶聯(lián)免疫快速檢測試劑盒具有本錢低廉、操作簡便、一次處置樣本量大等優(yōu)勢，已成為常規(guī)的初步篩查方式。本試劑盒是應(yīng)用ELISA技術(shù)研發(fā)的新一代藥物殘留檢測產(chǎn)品，

2、與儀器分析技術(shù)相較具有快速、簡便、準(zhǔn)確和靈敏度高等特點，能最大限度地減少操作誤差和工作強(qiáng)度。二、用途定量檢測動物尿液中萊克多巴胺（Rac）的殘留。三、檢測原理本試劑盒采納競爭酶聯(lián)免疫實驗。檢測的基礎(chǔ)是抗原抗體反映，微孔板預(yù)包被羊抗鼠IgG捕捉抗體，加入鼠抗萊克多巴胺抗體后，會與捕捉抗體連接。通過孵育及洗板后，加入標(biāo)準(zhǔn)品、樣品及萊克多巴胺酶標(biāo)記物（Rac-HRP）,游離的萊克多巴胺（Rac）與萊克多巴胺酶標(biāo)記物（Rac-HRP）競爭萊克多巴胺抗體結(jié)合位點。通過孵育及洗板后，加入底物并孵育。結(jié)合的酶連接物將底物轉(zhuǎn)化為藍(lán)色的產(chǎn)物。加入反映終止液后使顏色由藍(lán)轉(zhuǎn)變成黃色。在450nm處測量，吸光度值與樣

3、品中的萊克多巴胺濃度成反比，與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較再乘以其對應(yīng)的稀釋倍數(shù)即可得出樣品中萊克多巴胺的含量。四、檢測限檢測限:ml（）五、特異性交叉物交叉率（）DobutamineRitodrineRactopamineRactopamineGlueB384(IS,3S)-Ractopamine(1R,3S)-RactopamineIsoxsuprineSalmeterolFenoterolClenbuterolSalbutamol六、試劑盒組成每一個盒中的試劑足夠進(jìn)行96個實驗(包括標(biāo)準(zhǔn)測定)，試劑盒中的組份如下：一、96孔酶標(biāo)板1塊(12孔義8條)：預(yù)包被羊抗鼠IgG二、標(biāo)準(zhǔn)液X6瓶(1ml/瓶)：O

4、ng/mL、mL、mL、mL、mL、mL3、酶連接物(6mL)：辣根過氧化物酶標(biāo)記的萊克多巴胺工作液4、萊克多巴胺抗體(6mL)：鼠抗萊克多巴胺單克隆抗體工作液五、底物液A(6mL)：過氧化肥6、底物液B(6mL)：四中基聯(lián)苯胺(TMB)7、終止液(6mL)：2NH2SO,8、濃縮洗滌液(25X)(25mL)：含Tween-20的磷酸鹽緩沖液(PBST)9、其他：封板膜3張，自封袋1個，說明書1份七、樣本處置處置任何樣本，必需利用一次性吸頭，在吸取不同的試劑時要改換吸頭。取50UL清亮尿樣直接測定，如尿樣渾濁3000轉(zhuǎn)離心lOmin,取上層清亮尿液測定，暫不利用的樣本應(yīng)于-20冷凍保留。八、檢

5、測步驟認(rèn)真的洗滌超級重要。幸免在操作進(jìn)程中微孔顯現(xiàn)干燥。1、將所需試劑從冷藏環(huán)境中掏出，置于室溫(20-25)平穩(wěn)30min以上。2、預(yù)備：掏出需要數(shù)量的微孔板，將用剩的微孔板放入自封袋，保留于2-8。將微孔板條插入微孔架，標(biāo)準(zhǔn)品和樣品做兩個平行實驗，記錄下標(biāo)準(zhǔn)品和樣品的位置。3、加抗體：每孔加入100UL稀釋后的抗體溶液，37c恒溫箱孵育30分鐘。4、洗板：倒出孔中的液體，將微孔架倒置在干凈吸水紙上拍打，以保證完全除去孔中的液體。每孔加滿稀釋后的洗滌工作液，靜置20秒鐘，甩去液體，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次。5、加標(biāo)準(zhǔn)品/樣品：加入50UL標(biāo)準(zhǔn)品或處置好的樣品到各自的微孔中，標(biāo)準(zhǔn)品和樣品

6、做兩個平行實驗，然后加入50UL稀釋后的酶連接物到微孔，警惕地充分混合，37c恒溫箱孵育30分鐘。6、重復(fù)3的操作。7、顯色:每孔先加入底物液A50UL,再加入底物液B50UL,37c避光孵育15min（若是顯色過淺，可適當(dāng)延長孵育時刻，反之亦然）。8、測定：每孔加入終止液50UL,設(shè)定酶標(biāo)儀于450nm處，測定每孔0D值。九、結(jié)果判定（1）仃分吸光率的計算，標(biāo)準(zhǔn)品或樣本的仃分吸光率等于標(biāo)準(zhǔn)品或樣本的仃分吸光度值的平均值（雙孔）除以第一個標(biāo)準(zhǔn)（0標(biāo)準(zhǔn)）的吸光度值，再乘以100%,即百分吸光度值BX100%（%）=B0B一標(biāo)準(zhǔn)溶液或樣本溶液的平均吸光度值Bo-Oppb標(biāo)準(zhǔn)溶液的平均吸光度值（2）

7、標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制與計算以標(biāo)準(zhǔn)品百分吸光率為縱坐標(biāo)，以萊克多巴胺標(biāo)準(zhǔn)品濃度（ppb）的半對數(shù)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。將樣本的仃分吸光率代入標(biāo)準(zhǔn)曲線中，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出樣本所對應(yīng)的濃度，乘以其對應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中萊克多巴胺的實際濃度。假設(shè)利用試劑盒專業(yè)分析軟件進(jìn)行計算，更便于大量樣本的準(zhǔn)確、快速分析。（歡迎來電索取）十、注意事項一、嚴(yán)格依照說明書操作時刻，每加一種試劑前需要將其搖勻，各操作步驟緊湊進(jìn)行。二、室溫低于20c或試劑及樣本沒有回到室溫（20-25C）會致使所有標(biāo)準(zhǔn)的0D值偏低。3、在洗板進(jìn)程中若是顯現(xiàn)板孔干燥的情形，那么會顯現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)曲線不成線性，重復(fù)性不行的現(xiàn)象。因此洗板拍干后應(yīng)當(dāng)即進(jìn)行下一步操作。4、試劑變質(zhì)的跡象底物有任何顏色說明變質(zhì)，應(yīng)當(dāng)棄之。0標(biāo)準(zhǔn)的吸光度（450/630nm）值小于（A450nm）時，表示試劑可能變質(zhì)。五、不要利用過了有效日期的試劑盒；也不要利用過了有效期的試劑盒中的任何試劑，摻雜利用過了有效期的試劑盒會引發(fā)靈敏度的降低；不要互換利用不同批號試劑盒中的試劑。6、在加入底物液A液和底物液B液后，一樣顯色20min即可