檢測(cè)方法集(共61頁(yè))

1、文件名稱檢 測(cè) 方 法 集文件編號(hào)HNKL-QMS-C/xxx/00/nn編寫人 審核人 批準(zhǔn)人批準(zhǔn)日期2003/9/18目錄(ml)UVVIS檢測(cè)(jin c)方法（一）多酚總量分析(fnx)1、酒石酸鐵比色法2、FoLinD比色法測(cè)定速溶茶的多酚總量3、FoLinC測(cè)多酚（二）貫葉連翹中金絲桃素的測(cè)定（三）越橘中花青素的測(cè)定（四）分光光度法測(cè)定多糖含量（五）分光光度法檢測(cè)硫酸軟骨素含量（六）茶葉中游離氨基酸總量的測(cè)定茚三酮顯色法（七）黃酮類化合物分析三氯化鋁比色法（八）葡萄籽提取物中原花青素含量的測(cè)定(九)紅車軸草提取物中異黃酮的UV測(cè)定（十）云芝多糖含量的檢測(cè)方法（十一）人參皂甙的測(cè)定方

2、法（十二）蜂膠制成品中總黃酮含量的測(cè)定（十三）山楂葉黃酮類化合物提取工藝和測(cè)試方法十四）蛋白質(zhì)含量的測(cè)定-考馬斯亮藍(lán)法（十五）水溶性碳水化合物的檢測(cè)(jin c)-蒽酮比色法HPLC檢測(cè)(jin c)方法(一) HPLC法測(cè)定兒茶素（二）HPLC法測(cè)定延胡索乙素（三）HPLC法測(cè)定5-羥色胺（四） HPLC法測(cè)定白柳皮中的水楊甙含量(hnling)(五) HPLC法測(cè)定大豆異黃酮（六）HPLC法測(cè)定葛根中的葛根異黃酮含量（七）HPLC法測(cè)定紅景天（八）HPLC法測(cè)定厚樸中的厚樸酚和和厚樸酚含量（九）HPLC法測(cè)定卡瓦內(nèi)酯(十) HPLC法測(cè)定蛻皮激素（十一）HPLC法測(cè)定淫羊藿甙（十二）HPL

3、C法測(cè)定枳實(shí)多酚(十三) HPLC法測(cè)定枳實(shí)辛弗林(十四) HPLC法測(cè)定中藥復(fù)方(十五) HPLC法測(cè)定白藜蘆醇(十六) HPLC法測(cè)定葡萄籽中的原花青素(十七) HPLC法測(cè)定紅車軸草(十八) HPLC法測(cè)定苦瓜皂甙(十九) HPLC-ELSD法測(cè)定積雪草甙和羥基積雪草甙(二十) HPLC-ELSD法測(cè)定山藥中的薯蕷(shy)皂素（二十一） HPLC-ELSD法測(cè)定黃芪(hungq)甲甙（二十二） HPLC法測(cè)定茶氨酸（二十三）HPLC測(cè)定補(bǔ)骨子(g zi)中補(bǔ)骨素和異補(bǔ)骨素含量（二十四）HPLC測(cè)定當(dāng)歸中的阿魏酸（二十五）HPLC測(cè)定芍藥甙（二十六）HPLC測(cè)定丹參酮A、隱丹參酮原子吸收

4、檢測(cè)方法各類植物提取物及食品中鉛的測(cè)定（火焰法）微生物檢測(cè)方法一細(xì)菌總數(shù)的測(cè)定二霉菌總數(shù)的測(cè)定三大腸桿菌的測(cè)定GC氣相檢測(cè)方法一：甲胺磷和乙酰甲胺磷的測(cè)定二：乙酸乙酯的測(cè)定輔料的檢測(cè)方法一： 糊 精二：-環(huán)糊精三：淀 粉四：硬酯酸鎂五：氨水(n shu)(HG1-88-81)六： 鹽酸(yn sun)(GB320-93)七：酒 精八：乙酸乙酯UVVIS檢測(cè)(jin c)方法（一）多酚總量分析(fnx)一、酒石酸鐵比色法1.原理(yunl) 在一定pH條件下，酒石酸鐵與茶多酚類物質(zhì)形成藍(lán)紫色或紫紅色的絡(luò)合物，在波長(zhǎng)540nm處出現(xiàn)最大的吸收，在適當(dāng)?shù)臐舛确秶鷥?nèi)，茶多酚的量與呈色的深淺成正比，可用

5、分光光度法定量。2.試劑和主要儀器1) 酒石酸鐵溶液:稱取硫酸亞鐵(FeSO4.7H2O)1g，酒石酸鉀鈉(KNaC4H4O6.4H2O)5g加水溶解并稀釋至1升。2) pH7.5的索倫遜緩沖液A. 1/15M的Na2HPO4溶液:稱取磷酸氫二鈉(Na2HPO4.2H2O)11.876g或( Na2HPO4.12H2O)23.876g，加水溶解并稀釋至1升。B. 1/15M的KH2PO4溶液:稱取經(jīng)110烘干2h的KH2PO4 9.078g，加水溶解并稀釋至1升。 取(A)85ml和(B)15ml混勻，即為pH7.5的緩沖液。3. 測(cè)定方法1) 茶湯制備A茶葉樣品:準(zhǔn)確稱取磨碎試樣2g，加20

6、0ml沸水，在沸水浴中浸提45min，每隔10 min搖瓶一次，過(guò)濾（先用紗布初濾到250ml容量瓶中，冷卻后定容，再用濾紙過(guò)濾即可）。B速溶茶樣品:準(zhǔn)確稱取速溶茶80mg左右，兒茶素40mg左右，紅茶100 mg左右等，加水溶解定容至100ml。2) 測(cè)定:準(zhǔn)確吸取茶湯1ml，注入25ml容量瓶中，加水4ml，酒石酸鐵溶液5ml，用pH7.5的緩沖液定容至刻度，混勻。用10mm比色杯，以試劑空白作參比，于波長(zhǎng)540nm處測(cè)吸光度A。3)結(jié)果計(jì)算茶多酚(%)=(3.913A/1000)(L1/L2)(Mm)100A測(cè)試液測(cè)得的光密度3.913按上述條件操作，當(dāng)光密度等于1.0時(shí)，每ml試液中茶

7、多酚的量(mg)M試液量(g)m試液干物率(%) L1總試液(sh y)量(ml)L2所取試液(sh y)量(ml)二、FoLinD比色法測(cè)定(cdng)速溶茶的多酚總量1. FoLinD試劑750ml去離子水+100g鎢酸鈉(Na2WO4.2H2O)+20g磷鉬酸+50ml正磷酸(85%磷酸)，混合回流2小時(shí)，冷卻后定容至1升。2. 15%Na2CO3溶液稱取88g碳酸鈉，加水500ml溶解，即可。3.茶多酚標(biāo)準(zhǔn)曲線準(zhǔn)確稱取單寧酸25mg于250ml容量瓶中，蒸餾水定容。分別取該溶液1ml，2ml，3ml，4ml，5ml，6ml，7ml，8ml于100ml容量瓶中，加70ml水，再加5mlF

8、oLinD試劑，再加10ml15%Na2CO3，用水定容，在30條件下，反應(yīng)1h，用1cm比色杯于760nm處比色。測(cè)定A值后，計(jì)算出回歸方程。F-D(舊公式): TP%=(1.3466A0.0359)/0.98W10F-D(新公式): TP%=(1.09998A0.01829)/0.98W104.樣品制備同前5.測(cè)定稱取試樣及稀釋同前取1ml待測(cè)液(綠茶原料茶湯取0.25ml，紅茶原料茶湯取0.5ml)，加70ml蒸餾水，再加5mlFoLinD，再加10ml15% Na2CO3，用蒸餾水定容至100ml，在30條件下反應(yīng)1h。用空白作對(duì)照，1cm比色杯于760nm處比色，測(cè)其A值。6.計(jì)算：

9、將A代入線性回歸方程計(jì)算即可。三、FoLinC測(cè)多酚1. 試劑配制 在2升的磨口回流裝置中加入100g 鎢酸鈉(Na2WO4.2H2O)，25g鉬酸鈉(Na2MoO4.2H2O)，700ml水,再加50ml85%磷酸及100ml濃鹽酸，充分混勻后，以小火回流10h，再加入150g硫酸鋰(Li2SO4)，50ml水及數(shù)滴溴,然后開口繼續(xù)沸騰15min，以便驅(qū)除過(guò)量的溴，冷卻定容至1升。過(guò)濾置棕色試劑瓶中，存于冰箱，使用時(shí)用NaOH標(biāo)準(zhǔn)液滴定(實(shí)際上滴定是為了確定溶液的酸度，故取1015ml進(jìn)行滴定即可)，以酚酞為指示劑(滴定前溶液的濃度約為2M)，而后適當(dāng)稀釋(約1倍)，使最后濃度為1mol/L

10、 H+(1N酸)，此即為FoLinC試劑。貯于冰箱中可長(zhǎng)期使用，此試劑應(yīng)呈金黃色，如呈綠色則棄去。使用時(shí)根據(jù)滴定的結(jié)果適當(dāng)稀釋，使溶液中的H+=1N。 2. 20%碳酸鈉溶液(rngy)的配制 稱40g Na2CO3加水150ml充分(chngfn)溶解。3. 標(biāo)液配制(pizh) 精確稱取50mg沒(méi)食子酸于200ml容量瓶中，超聲溶解，冷卻定容得母液0.25mg/ml(因沒(méi)食子酸的水分為9.58%，故母液濃度實(shí)為0.226mg/ml),分別取母液0.2ml,0.4ml,0.6ml,0.8ml,1.0ml,1.2ml,1.4ml,1.6ml于100ml容量瓶中，加50ml水，再加5mlFoLi

11、nC試劑，搖勻后再加入15ml20% Na2CO3溶液，于30反應(yīng)2個(gè)小時(shí)。4. 測(cè)定：在760nm下，用1cm比色杯測(cè)定A值。5. 利用沒(méi)食子酸的A和C計(jì)算出線性回歸方程為 y=0.80791A-0.005956. 樣品測(cè)定： 樣品處理及稱量同酒法，測(cè)定步驟同標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制步驟，得樣品的A值，計(jì)算出y值。7. 計(jì)算TP%=(y/0.98/w)108. 1N NaOH標(biāo)準(zhǔn)液的標(biāo)定:精密稱取約3-4g已恒重的基準(zhǔn)物鄰苯二甲酸氫鉀，加80ml新煮沸的冷水，使之完全溶解，加3滴酚酞指示劑,用本溶液滴定至粉紅色,0.5min不退色。計(jì)算： N=W/(V1-V2)0.2040 V1 NaOH的體積 V2

12、空白時(shí)所耗NaOH的體積（二）貫葉連翹(lin qio)中金絲桃素的測(cè)定1.樣品(yngpn)的制備 準(zhǔn)確(zhnqu)稱取樣品40mg左右，置于25ml容量瓶中，加20ml甲醇，超聲7-10min溶解，冷卻后用甲醇定容至25ml，過(guò)濾，棄去前10ml濾液，余下的濾液進(jìn)行比色。2.測(cè)定 在590nm波長(zhǎng)下，用1cm比色杯，甲醇作試劑空白，測(cè)其吸光度A。3.計(jì)算 金絲桃素(%)=(A25)/(870W干物率)100%（三）越橘(yu j)中花青素的測(cè)定一、原理(yunl)茶葉中的花青素多以糖甙的形式存在，花青甙在酸性環(huán)境中，當(dāng)pH達(dá)1.0時(shí)，生成特有(t yu)的剛果紅色，且不受黃酮甙、兒茶素的

13、干擾。二、試劑 2%鹽酸甲醇的配制方法： 3638%鹽酸 比重1.18(按37%計(jì)算) 甲醇 比重0.7915(濃度99.5%) x+y=1000 x37%1.18=( x37%1.18+y99.5%0.7915)2% x=17.762 y=482.242 配制500ml時(shí)，鹽酸(濃)取17.76ml，甲醇取482.24ml 三、測(cè)定 國(guó)外花青素測(cè)定方法(含量25%以上) 稱大約10mg樣品(視含量多少而定)，加45ml2%鹽酸甲醇，在沸水浴中回流加熱30min，冷卻后，用2%鹽酸甲醇定容到50ml，在540nm下，用1cm的比色杯，用2%鹽酸甲醇作對(duì)照，測(cè)其吸光度A。四、計(jì)算 樣品中花青素(

14、M)=(A/1020)1000 (mg) 花青素%=(M/W0.98)100% 注： 1.以上回流過(guò)程,是為了讓花青甙水解成花青素進(jìn)行測(cè)定,水解時(shí),溫度(沸水浴)、酸度(2%H+)、時(shí)間(30min)對(duì)其均有影響. 2.金農(nóng)越橘應(yīng)稱量25mg左右. 3.有的樣品在制作過(guò)程中已水解,則只需稱量后,置于50ml容量瓶中,加45ml2%鹽酸甲醇,超聲10min溶解(rngji),然后測(cè)其吸光度A,計(jì)算同上.（四）分光(fn un)光度法測(cè)定多糖含量一：方法(fngf)原理 先用80%乙醇提取以除去單糖、低聚糖、甙類及生物堿等干擾成分，然后用蒸餾水提取其中所含的多糖成分。多糖在硫酸的作用下，水解成單糖

15、，并迅速脫水生成糠醛衍生物，與苯酚縮合成有色化合物，用分光光度法測(cè)定其枸杞子多糧的含量。本法簡(jiǎn)便，顯色穩(wěn)定，靈敏度高重現(xiàn)性好。二：儀器與試劑儀器：721型(或其他型)分光光度計(jì)試劑：葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液：精確稱取105干燥恒重的標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖10mg，置50ml的容量瓶中，加蒸餾水溶解并稀釋至刻度。苯酚試液：取苯酚100g，加鋁片0.1g，碳酸氫鈉0.05g，蒸餾收集182餾分，稱取此餾分10g，加蒸餾水150 g，置棕色瓶中備用。三：測(cè)定步驟1. 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備。吸取葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液0.00ml、0.05ml、0.1ml、0.15ml、0.2ml、0.3ml，分置于具塞試管中，各加蒸餾水使體積為2ml，再加

16、入苯酚試液1.0ml,搖勻，迅速加濃硫酸5.0ml，搖勻后放置5min，置沸水浴中加熱15min，取出冷卻至室溫。于490nm處測(cè)吸收值，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。2. 樣品溶液的制備。精確稱取樣品粉未0.2g,置于圓底燒瓶中，加80%乙醇100ml回流提取勝1hr，趁熱過(guò)濾，殘?jiān)?0乙醇洗滌（10ml3）。殘?jiān)B同濾紙置于燒瓶中，加蒸餾水100ml，加熱提取1hr，趁熱過(guò)濾，殘?jiān)脽崴礈欤?0ml3）。洗液并入濾液，放冷后移入250ml量瓶中，稀釋至刻度，備用。3. 樣品中多糖的測(cè)定(cdng)。吸取適量樣溶液（若為提取物，稱取30mg到50ml,取0.1ml）,加蒸餾水使體積(tj)為2ml，再加

17、入苯酚(bn fn)試液1.0ml,搖勻，迅速加濃硫酸5.0ml，搖勻后放置5min，置沸水浴中加熱15min，取出冷卻至室溫。于490nm處測(cè)吸收值。四：結(jié)果計(jì)算Cu%（Cs%AuWs）/（WuAs）Cu樣品中的多糖含量Cs標(biāo)樣中的多糖含量As標(biāo)樣的吸光值（max）Au樣品的吸光值（max）Wu樣品重量（mg） Ws標(biāo)樣重量（mg） （五）分光光度法檢測(cè)硫酸軟骨素含量一：原理： 在濃硫酸條件下水解反應(yīng)二：適用范圍：原材料三：儀器設(shè)備：離心管、40ml帶蓋管形瓶、150mm17mm帶蓋、25ml移液管、可調(diào)移液槍及一次性管尖、漏斗、分析天平、離心機(jī)、濾紙、計(jì)時(shí)器、分光光度計(jì)四：試劑與標(biāo)樣：無(wú)水

18、醋酸鈉、無(wú)水硫酸鈉、硫酸軟骨素A（或：葡糖醛酸）、咔唑、無(wú)水乙醇（色譜級(jí)）、濃硫酸五：操作程序：1. 0.125%咔唑溶液的配制準(zhǔn)確稱取25.0mg咔唑，溶于20ml無(wú)水乙醇，經(jīng)無(wú)水醋酸鈉過(guò)濾后置于40ml帶蓋管型瓶中，如有必要，可振蕩或加溫促溶。 2. 樣品配制. 準(zhǔn)確稱取50.0mg硫酸軟骨素或相應(yīng)物溶于25ml超純水，放置于50ml離心管中，如有必要可輕微加溫或振蕩。. 以4000rpm的速度離心5mins，取上清液進(jìn)行分析。3. 標(biāo)樣配制準(zhǔn)確稱取50.0mg硫酸軟骨素溶于25ml超純水，放置于50ml離心管中，如有必要可輕微加溫或振蕩。4. 咔唑反應(yīng). 取5個(gè)帶蓋管形瓶，分別標(biāo)記為空白

19、(kngbi)、標(biāo)樣（2個(gè)）和樣品（2個(gè)）。. 稱重(chn zhn)與記錄A. 空白(kngbi)，加入1ml純水。B. 標(biāo)樣，加入100ul標(biāo)準(zhǔn)溶液，記錄重量，再加入900ul超純水（配制雙份）。C. 樣品, 加入100ul樣品上清液，記錄重量，再加入900ul超純水（每個(gè)樣品配制雙份）。. 沿管壁加5ml濃硫酸至每個(gè)管形瓶中，加蓋振搖，注意盡量避免與蓋接觸。. 將所有管形瓶置于沸水浴中加熱30mins，水面至少要高于液面1cm。. 取出管形瓶放置冷水中冷卻1min。. 每管中加入200ul咔唑溶液，加蓋振搖，注意盡量避免與蓋接觸。. 置于沸水浴中再加熱20mins，然后冷水冷卻至室溫再進(jìn)

20、行分析。六：分析紫外可見分光光度計(jì)檢測(cè)波長(zhǎng)設(shè)定在522nm區(qū)間。1. 用空白試劑調(diào)零。2. 掃描確定樣品與標(biāo)樣的最大吸收波長(zhǎng)（max），記錄該處吸收值。七：質(zhì)量控制確保每次標(biāo)準(zhǔn)樣、檢測(cè)樣與其對(duì)應(yīng)的重復(fù)樣之間相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差不超過(guò)5.0%。八：計(jì)算：1Cu（CsAu）/As2Cs%（Cu25Gu100）/（WuGx）Cs硫酸軟骨素Cu樣品中的硫酸軟骨素濃度Cs標(biāo)樣中的硫酸軟骨素濃度As標(biāo)樣的吸光值（max）Au樣品的吸光值（max）Wu樣品重量（mg）（六）茶葉(chy)中游離氨基酸總量的測(cè)定茚三酮顯色(xin s)法一：原理(yunl)氨基酸是水溶性物質(zhì)，在索倫遜緩沖溶液中與茚三酮同時(shí)加熱，形成紫色

21、的絡(luò)合物。二：試劑的配制1. 2%茚三酮溶液：稱取茚三酮1g，溶于25ml水中，加氯化亞錫(SnCl2.2H2O) 40mg，溶解冷卻后加水定容至50ml，置于暗處。24h后搖勻，過(guò)濾。溶液置于暗處，可用數(shù)月。2. 索倫遜緩沖溶液：pH=8.0 取測(cè)多酚的緩沖溶液A95ml，加B溶液5ml，混勻。1/15M的Na2HPO4溶液:稱取磷酸氫二鈉(Na2HPO4.2H2O)11.876g或(Na2HPO4.12H2O)23.876g，加水溶解并稀釋至1升。B. 1/15M的KH2PO4溶液(rngy):稱取經(jīng)110烘干(hn n)2h的KH2PO4 9.078g，加水溶解(rngji)并稀釋至1升

22、。三：測(cè)定方法試液制備(1) 原料樣的處理同多酚測(cè)定(2) 速溶茶樣品：稱取速溶綠茶1g左右，紅茶0.8g左右，普洱茶1.1g左右，加水溶解定容至100ml。2. 取1ml試液，注入25ml容量瓶中，加索倫遜緩沖溶液0.5ml，2%茚三酮溶液0.5ml，于沸水浴中加熱反應(yīng)15min，冷卻后加水定容，放置10-15min，于570nm波長(zhǎng)處，用0.5cm比色杯，試劑空白作對(duì)照，測(cè)其吸光度A。四：計(jì)算氨基酸(mg/100g)=(0.57AL1/L2)/(Mm)100A光密度M試液量(g)m試液干物率(%) L1總試液量(ml) L2所取試液量(ml)（七）黃酮類化合物分析三氯化鋁比色法一：原理三氯

23、化鋁與黃酮類化合物作用后，生成黃酮的鋁絡(luò)合物為黃色，黃色的深淺與黃酮的含量呈一定比例關(guān)系。二：試劑1%三氯化鋁：稱取三氯化鋁(AlCl3.6H2O)1.7567g或AlCl30.9709g，加水溶解并稀釋至100ml。三：測(cè)定方法1. 試液制備(zhbi)：原料樣同前，速溶產(chǎn)品如蒲公英稱取約1g，用水溶解并定容至100ml。2. 測(cè)定(cdng)：吸取試液0.5ml，加1%三氯化鋁溶液至10ml，搖勻，靜置10min后比色，以試劑空白(kngbi)作參比，用1cm比色杯，于420nm波長(zhǎng)處測(cè)其吸光度A。四：結(jié)果計(jì)算黃酮甙(mg/g)=(A320L1/L2)/(Mm)/1000A光密度M試液量(

24、g)m試液干物率(%) L1總試液量(ml) L2所取試液量(ml)（八）葡萄籽提取物中原花青素含量的測(cè)定一：測(cè)定步驟1. 精確稱取葡萄籽提取物50mg左右，用甲醇溶解至50ml。2. 取上述溶液1.0ml，用甲醇稀釋至10ml，即得檢測(cè)液。3. 試劑甲的配制：正丁醇/鹽酸38%=95：5(V/V)，將95ml正丁醇與5ml38%的濃鹽酸混合即可。4. 試劑乙的配制：2%的NH4Fe(SO4)2.12H2O/2NHCl溶液(W/V)，溶解2g NH4Fe(SO4)2.12H2O至100ml2NHCl溶液中。2NHCl的配制：取38%的濃鹽酸1.67ml，用水定容至10ml。5. 在10ml帶塞

25、離心管，精確加入1ml檢測(cè)液，6ml試劑甲和0.2ml試劑乙，然后塞上塞子，在沸水中加熱40min。6.待測(cè)試液冷卻后，在546nm處用1cm比色杯測(cè)定吸光度A。二：計(jì)算原花青素(%)=A/(0.013890.366W)(九)紅車軸草提取物中異黃酮的UV測(cè)定一：測(cè)定步驟1. 準(zhǔn)確稱取對(duì)照品和樣品100mg置于100ml容量瓶中，加乙醇溶解，冷卻定容至刻度。準(zhǔn)確(zhnqu)吸取上述溶液0.5ml置于25ml容量瓶中，加無(wú)水乙醇(或95%乙醇(y chn)稀釋(xsh)至刻度，搖勻。以乙醇為空白，在250nm波長(zhǎng)處，用1cm石英比色杯測(cè)其吸光度A。比較樣品吸光度與對(duì)照樣吸光度的大小。（十）云芝多

26、糖含量的檢測(cè)方法取云芝提取物0.2克，加30ml濃鹽酸水解，水解液用20%NaOH中和至PH=7，加水定容至100ml，取5ml加入堿式酒石酸銅溶液，放置2分鐘，加水定容至50ml，于625nm處測(cè)定吸光度，由標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算云芝多糖的含量。以靈芝多糖作為標(biāo)準(zhǔn)品按上述方法制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。注：該方法由田杰提供（十一）人參皂甙的測(cè)定方法試劑1.1 甲醇、冰醋酸、高氯酸1.2 5%香草醛-冰醋酸溶液(rngy)1.3 人參(rnshn)皂甙Re對(duì)照品2. 操作步驟2.1 對(duì)照品的制備(zhbi) 精密稱取人參皂甙Re對(duì)照品20mg置10ml容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，作為對(duì)照品溶液（每1ml中含人參皂甙

27、Re對(duì)照品2 mg）2.2 供試品溶液的制備 取樣品適量（約相當(dāng)于人參皂甙20mg）精密稱定置10ml容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，作為待測(cè)液。2.3 測(cè)定方法 精密吸取待測(cè)溶液與對(duì)照品溶液各25l，分別置10ml具塞試管內(nèi)，在水浴中揮盡溶劑，立即取出，精密加入5%香草醛-冰醋酸溶液0.2ml、高氯酸0.8ml，搖勻，置600C水浴中加熱15分鐘，取出，立即以流水冷卻2分鐘，精密加冰醋酸5ml，搖勻，以相應(yīng)的試劑為空白，在550nm處測(cè)定吸光度。3計(jì)算花旗參皂甙含量（%）：A樣*C標(biāo)*100A標(biāo)*W樣*1000式中：A樣樣品溶液的吸光度；A標(biāo)對(duì)照品溶液的吸光度；C標(biāo)對(duì)照品取樣量；W樣樣品取樣量

28、（g）。（十二）蜂膠制成品中總黃酮含量的測(cè)定一、方法(fngf)：以乙醇超聲溶解(rngji)提取蜂膠中的總黃酮，Al3+為顯色劑，蘆丁為標(biāo)準(zhǔn)(biozhn)樣，采用分光光度法測(cè)定蜂膠中總黃酮含量。二、步驟：試劑的配制：(1) 0.1mol/lAlCl3溶液：稱取13.4g三氯化鋁（AlCl36H2O）試劑，加水溶解并稀釋1000ml，混勻，備用。(2) 1.0mol/l乙酸鉀溶液：稱取98.4g乙酸鉀試劑，加水溶解并稀釋1000ml，混勻，備用。(3) 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液：精密稱取105干燥至恒重的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品0.1000g，用乙醇溶解，并定容至100ml，混勻后置棕色瓶中，吸取5.0ml，置于10

29、0ml容量瓶中，加乙醇稀釋至刻度，混勻。此溶液含蘆丁50.0g/ml標(biāo)準(zhǔn)曲線制作：精密稱取0.00、1.00、4.00、6.00、8.00、10.00ml蘆丁標(biāo)準(zhǔn)液，分別置于25ml比色管中，在各比色管中分別加入3ml0.1mol/lAlCl3溶液，5ml1.0mol/l乙酸鉀溶液，再加乙醇至刻度，混勻后室溫放置40min。在分光光度計(jì)415nm處以0#管作參比溶液，用1cm比色皿測(cè)定吸光值，得出吸光度值-蘆丁含水量量標(biāo)準(zhǔn)曲線。樣品測(cè)定：精密稱取適量樣品置于50 ml容量瓶中，加入70%乙醇溶液20 ml，水浴上回流1小時(shí)后，冷卻至室溫，用70%乙醇定容至50 ml，搖勻，過(guò)濾（濾去初濾液）。

30、取1 ml濾液于25 ml比色管中，并各加入3ml0.1mol/lAlCl3溶液及5ml1.0mol/l乙酸鉀溶液，再加乙醇至刻度。取1 ml濾液于25 ml比色管中，加8 ml去離子水，再加乙醇至刻度，用作參比液。均在室溫下放置40min，在415nm處用1cm比色皿測(cè)定吸光值。代入線性回歸方程中計(jì)算結(jié)果。（十三）山楂葉黃酮類化合物提取(tq)工藝和測(cè)試方法1. 材料(cilio)和方法 材料(cilio)與儀器山楂葉：65烘干，粉碎后過(guò)60-80目備用。蘆丁生物試劑，上海試劑一廠。甲醇、乙醇、丙酮、Al(NO3)3、NaOH、NaNO2均為分析純。儀器：超級(jí)恒溫槽、721分光光度計(jì)、電動(dòng)攪

31、拌機(jī)、旋片式真空泵。1.2 實(shí)驗(yàn)方法1.2.1由山楂葉總黃酮的提取 準(zhǔn)確稱取5.0g山楂枝葉粉末置于磨口三頸瓶中，按要求加入一定量的提取劑，在一定溫度下回流3h，趁熱減壓抽濾，濾渣加適量水洗滌，過(guò)濾，合并清液后減壓蒸餾，回收溶劑至近干，加水約80ml溶解，加入20ml石油醚脫色兩次，棄去醚層，加水定容于100ml容量瓶中待用。1.2.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制和標(biāo)準(zhǔn)曲線將蘆丁于120下干燥至恒重，準(zhǔn)確稱取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品0.0146g，用30%乙醇溶解，定容于50ml，得濃度為0.292mg/ml蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液。準(zhǔn)確吸取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液0、0.25、0.5、1.5、2.0、2.5ml于10ml容量瓶中，加入5% N

32、aNO2溶液0.3ml，搖勻，放置6min加入4% NaOH溶液4.0ml，30%乙醇定容，搖勻，10min后于510nm處測(cè)定吸光度A，得蘆丁含量g(g/ml)與吸光度A之間的回歸方程：y=559.157A+1.73722(r=0.9997)1.2.3 山楂葉總黃酮測(cè)定取1.2.1是待測(cè)液5.0ml于50ml容量瓶中，用30%乙醇定容，取2.0ml于10ml容量瓶中，以下操作同1.2.2標(biāo)準(zhǔn)曲線，測(cè)定其在510nm處吸光度A，從山楂葉中提取的總共同酮含量可按下列公式計(jì)算：總黃酮含量（%）=y100/550/210-3/w100式中：（100/5）和（50/2）為稀釋倍數(shù)；w為山楂葉重(g)注

33、明：Al(NO3)3溶液每次測(cè)樣時(shí)配制：稱取1.76g Al(NO3)39H2O10mlNaOH溶液每次測(cè)樣時(shí)配制：稱取2gNaOH10mNaNO2溶液每次測(cè)樣時(shí)配制：稱取0.5gNaNO210m（十四）蛋白質(zhì)含量(hnling)的測(cè)定 -考馬斯亮藍(lán)法試劑(shj) 考馬斯亮藍(lán)：50mg(G-250)+25ml95%乙醇(y chn)+50ml85%（W/L）-用水定容至500ml. 標(biāo)準(zhǔn)蛋白溶液(100ug/ml) 牛血清蛋白50mg，用水溶解，并定容至50ml，取10ml用水定容至100ml.2. 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 取200、400、600、800、1000ug的牛血清蛋白標(biāo)準(zhǔn)溶液0.1ml

34、，分別放入10ml試管中，加入5ml考馬斯亮藍(lán)，混勻，2分鐘后于595nm處比色測(cè)吸光度，空白以蒸餾水代替標(biāo)準(zhǔn)液。3. 測(cè)定 取0.1ml 試液，加入5ml(G-250)試劑，充分混勻，放置2分鐘，用1cm比色杯于595nm處比色測(cè)吸光度，查標(biāo)準(zhǔn)曲線的蛋白質(zhì)含量為Aug。4. 計(jì)算 蛋白質(zhì)(ug/50ml)=A*50（十五）水溶性碳水化合物的檢測(cè)(jin c) -蒽酮比色法試劑(shj)：蒽酮試劑(shj)：0.6g蒽酮100ml濃硫酸，混勻（現(xiàn)用現(xiàn)配）。標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制無(wú)水葡萄糖（分析純）配制200、150、100、50、25ug/ml的標(biāo)準(zhǔn)液分別取1ml于8ml蒽酮時(shí)試劑的試管中，邊滴邊搖沸

35、水浴3分鐘冷卻620nm處比色（蒸餾水作對(duì)照）。測(cè)定取1ml試液逐滴加入至有8ml蒽酮試劑的試管中，沸水浴3分鐘，冷卻，620nm處比色測(cè)吸光值，查標(biāo)準(zhǔn)曲線得葡萄糖的含量Aug。計(jì)算碳水化合物(ug/50ml)=A*50HPLC檢測(cè)(jin c)方法(一) HPLC法測(cè)定兒茶素1)試劑(shj)a. 甲醇(ji chn)（色譜純） b. 冰醋酸（分析純） c.甲酰胺（分析純） b. 重蒸水 2)儀器高效液相色譜儀（島津） 分析天平（1/10000） 超聲波清洗儀 0.45 m 微孔過(guò)濾器 50 ml 容量瓶 帶塞小玻璃瓶3)色譜條件色譜柱 Hypersil ODS C18 5 m 4.6200

36、mm波長(zhǎng) 278nm流動(dòng)相 A: 水 B: 甲酰胺:甲醇:冰醋酸=40:2:1.5流速 1.1 ml/min進(jìn)樣量 10 l4)樣品制備（1）待測(cè)樣品 精確稱取30mg提取物于50ml容量瓶中，用水超聲溶解，冷卻定容，0.45 m微孔濾膜過(guò)濾為供試液。標(biāo)樣制備 精密稱取混合標(biāo)樣用水溶解，使其濃度為0.6mg/ml，過(guò)0.45m濾膜，置冰箱貯存。5)計(jì)算根據(jù)各峰峰面積利用外標(biāo)法計(jì)算各種成份的含量。 樣品中各組分的含量%=A1CV A2W（二）HPLC法測(cè)定延胡索乙素1)試劑(shj)a. 甲醇(ji chn)（色譜純） b. 重蒸水 c. Na2HPO4、NaH2PO4(分析(fnx)純)2)儀

37、器高效液相色譜儀（Beckman） 分析天平（1/10000） 超聲波清洗儀 0.45 m微孔過(guò)濾器 50ml 容量瓶 帶塞小玻璃瓶3)色譜條件色譜柱 Hypersil ODS C18 5 m 4.6200mm波長(zhǎng) 280nm流動(dòng)相 緩沖液:甲醇:水=1.8:65:35 緩沖液：0.98g NaH2PO4+2.24g Na2HPO4于100ml水中流速 1.0 ml/min進(jìn)樣量 10 l4)樣品制備(1)待測(cè)樣品 精確稱取25mg提取物于50ml容量瓶中，用甲醇超聲溶解冷卻定容，0.45 m微孔濾膜過(guò)濾為供試液。(2)標(biāo)樣制備 精密稱取標(biāo)樣用甲醇溶解，使其濃度為0.5mg/ml，過(guò)0.45m

38、濾膜，置冰箱貯存。5)計(jì)算根據(jù)各峰峰面積利用外標(biāo)法計(jì)算各種成份的含量。（三）HPLC法測(cè)定5-羥色胺1)試劑(shj)a. 甲醇(ji chn)（色譜純） b. 重蒸水 2)儀器(yq)高效液相色譜儀（Beckman） 分析天平（1/10000） 超聲波清洗儀 0.45 m微孔過(guò)濾器 50 ml 容量瓶 帶塞小玻璃瓶3)色譜條件色譜柱 Hypersil ODS C18 5 m 4.6200mm波長(zhǎng) 278nm流動(dòng)相 A:水 B: 甲醇流速 1.0 ml/min進(jìn)樣量 10 l4)樣品制備（1）待測(cè)樣品 精確稱取20mg提取物于50ml容量瓶中，用5%甲醇超聲溶解，冷卻定容，0.45 m微孔濾膜

39、過(guò)濾為供試液。標(biāo)樣制備 精密稱取標(biāo)樣用5%甲醇溶解，使其濃度為0.4mg/ml，過(guò)0.45m濾膜，置冰箱貯存。5)計(jì)算根據(jù)各峰峰面積利用外標(biāo)法計(jì)算(j sun)各種成份的含量。（四） HPLC法測(cè)定白柳皮中的水楊甙含量(hnling)1)試劑(shj)a. 甲醇（色譜純） b. 重蒸水 c.乙腈（色譜純） d.磷酸（分析純）2)儀器高效液相色譜儀（Beckman） 分析天平（1/10000） 超聲波清洗儀 0.45 m 微孔過(guò)濾器 25 ml 容量瓶 帶塞小玻璃瓶3)色譜條件色譜柱 Hypersil ODS C18 5 m 4.6200mm波長(zhǎng) 269nm流動(dòng)相 A: 0.01%磷酸 B: 甲

40、醇：乙腈=1:1流速 0.8ml/min進(jìn)樣量 10 l4)樣品制備（1） 待測(cè)樣品 精確稱取60mg提取物于25ml容量瓶中，用水：甲醇=1:1(超聲溶解，冷卻定容，0.45 m微孔濾膜過(guò)濾為供試液。（2）標(biāo)樣制備(zhbi) 精密(jngm)稱取標(biāo)樣用水:甲醇(ji chn)=1:1(V/V)溶解，使其濃度為0.6mg/ml，過(guò)0.45m濾膜，置冰箱貯存。5)計(jì)算根據(jù)各峰峰面積利用外標(biāo)法計(jì)算各種成份的含量。(五) HPLC法測(cè)定大豆異黃酮1)試劑a. 甲醇（色譜純） b. 重蒸水 2)儀器高效液相色譜儀（SHIMADZU） 分析天平（1/10000） 超聲波清洗儀 0.45 m微孔過(guò)濾器

41、50 ml 容量瓶 帶塞小玻璃瓶3)色譜條件色譜柱 Shim-pack VP-ODS C18 5 m 4.6150mm波長(zhǎng) 260nm流動(dòng)相 A:水 B: 甲醇流速 1.1ml/min進(jìn)樣量 10 l4)樣品制備（1）待測(cè)樣品(yngpn) 精確(jngqu)稱取25mg提取物于50ml容量瓶中，用甲醇(ji chn)超聲溶解，冷卻定容，0.45 m微孔濾膜過(guò)濾為供試液。（2）標(biāo)樣制備 精密稱取混合標(biāo)樣用甲醇溶解，使其濃度為0.5mg/ml，過(guò)0.45m濾膜，置冰箱貯存。5)計(jì)算根據(jù)各峰峰面積利用外標(biāo)法計(jì)算各種成份的含量。（六）HPLC法測(cè)定葛根中的葛根異黃酮含量1)試劑a. 甲醇（色譜純）

42、b. 重蒸水 2)儀器高效液相色譜儀（Beckman） 分析天平（1/10000） 超聲波清洗儀 0.45 m微孔過(guò)濾器 50 ml 容量瓶 帶塞小玻璃瓶3)色譜條件色譜柱 Hypersil ODS C18 5 m 4.6200mm波長(zhǎng) 260nm流動(dòng)相 A:水 B: 甲醇流速 1.0 ml/min進(jìn)樣量 10 l4)樣品制備（1） 待測(cè)樣品(yngpn) 精確(jngqu)稱取25mg提取物于50ml容量瓶中，用甲醇超聲溶解(rngji)，冷卻定容，0.45 m微孔濾膜過(guò)濾為供試液。標(biāo)樣制備 精密稱取混合標(biāo)樣用甲醇溶解，使其濃度為0.5mg/ml，過(guò)0.45m濾膜，置冰箱貯存。5)計(jì)算根據(jù)各

43、峰峰面積利用外標(biāo)法計(jì)算各種成份的含量。（七）HPLC法測(cè)定紅景天1)試劑a. 甲醇（色譜純） b. 重蒸水 c. 醋酸銨(分析純) 2)儀器高效液相色譜儀（shimadzu） 分析天平（1/10000） 超聲波清洗儀 0.45 m微孔過(guò)濾器 25ml 容量瓶 帶塞小玻璃瓶3)色譜條件色譜柱 Hypersil ODS C18 5 m 4.6200mm波長(zhǎng) 276nm流動(dòng)相 A: 0.16mol/l醋酸銨 B: 甲醇流速 0.8ml/min進(jìn)樣量 10 l4)樣品(yngpn)制備（1）待測(cè)樣品(yngpn) 精確(jngqu)稱取60mg提取物于25ml容量瓶中，用甲醇超聲溶解，冷卻定容，0.4

44、5 m微孔濾膜過(guò)濾為供試液。（2）標(biāo)樣制備 精密稱取標(biāo)樣用甲醇溶解，使其濃度為0.5mg/ml，過(guò)0.45m濾膜，置冰箱貯存。5)計(jì)算根據(jù)各峰峰面積利用外標(biāo)法計(jì)算各種成份的含量。（八）HPLC法測(cè)定厚樸中的厚樸酚和和厚樸酚含量1)試劑 a. 重蒸水 b. 甲醇（色譜純） 2)儀器 高效液相色譜儀（Beckman） 分析天平（1/10000） 超聲波清洗儀 0.45m微孔過(guò)濾器 50ml容量瓶 帶塞小玻璃瓶3)色譜條件 色譜柱 Hypersil ODS C18 5m 4.620mm 波長(zhǎng)(bchng) 294nm 流動(dòng)(lidng)相 A: 水 B: 甲醇(ji chn) 進(jìn)樣量 10l 流速

45、1.0ml/min4)樣品的制備（1）待測(cè)樣品：精確稱取30mg提取物于50ml容量瓶中，用甲醇溶解，超聲定容，0.45m微孔濾膜過(guò)濾即為供試液。（2）標(biāo)準(zhǔn)樣品: 精確稱取厚樸酚、和厚樸酚標(biāo)準(zhǔn)品用甲醇溶解,使其濃度為0.2mg/ml, 0.45m微孔濾膜過(guò)濾。5)計(jì)算根據(jù)各峰峰面積利用外標(biāo)法計(jì)算各種成份的含量。（九）HPLC法測(cè)定卡瓦內(nèi)酯1)試劑a. 甲醇（色譜純） b. 重蒸水 c.乙腈（色譜純） d. 磷酸（分析純）2)儀器高效液相色譜儀（Beckman） 分析天平（1/10000） 超聲波清洗儀 0.45 m 微孔過(guò)濾器 50 ml 容量瓶 帶塞小玻璃瓶3)色譜條件色譜(s p)柱 Hy

46、persil ODS C18 5 m 4.6200mm波長(zhǎng)(bchng) 260nm流動(dòng)(lidng)相 A: 0.1%磷酸 B: 甲醇:乙腈=1:1流速 1.2ml/min進(jìn)樣量 10 l4)樣品制備（1）待測(cè)樣品 精確稱取20mg提取物于50ml容量瓶中，用5%甲醇超聲溶解，冷卻定容，0.45 m微孔濾膜過(guò)濾為供試液。標(biāo)樣制備 精密稱取混合標(biāo)樣用5%甲醇溶解，使其濃度為 0.6mg/ml，過(guò)0.45m濾膜，置冰箱貯存。5)計(jì)算根據(jù)各峰峰面積利用外標(biāo)法計(jì)算各種成份的含量。(十) HPLC法測(cè)定蛻皮激素1)試劑a. 甲醇（色譜純） b. 乙腈（色譜純） c. 重蒸水2)儀器高效液相色譜儀（Be

47、ckman） 分析天平（1/10000） 超聲波清洗儀 0.45 m 微孔過(guò)濾器 50 ml 容量瓶 帶塞小玻璃瓶3)色譜(s p)條件色譜(s p)柱 Hypersil ODS C18 5 m 4.6200mm波長(zhǎng)(bchng) 247nm流動(dòng)相 A: 水 B: 乙腈流速 1.0ml/min進(jìn)樣量 5 l4)樣品制備（1）待測(cè)樣品 精確稱取20mg提取物于50ml容量瓶中，用甲醇:水=1:1超聲溶解，冷卻定容，0.45 m微孔濾膜過(guò)濾為供試液。（2）標(biāo)樣制備 精密稱取蛻皮激素標(biāo)樣用甲醇:水=1:1溶解，使其濃度為0.1mg/ml，過(guò)0.45m濾膜，置冰箱貯存。5)計(jì)算根據(jù)各峰峰面積利用外標(biāo)法

48、計(jì)算各種成份的含量。（十一）HPLC法測(cè)定淫羊藿甙1)試劑 a. 重蒸水 b. 乙腈（色譜純） c. 冰醋酸（分析純）2)儀器 高效(o xio)液相色譜儀（Beckman） 分析天平(fn x tin pn)（1/10000） 超聲波清洗(qngx)儀 0.45m微孔過(guò)濾器 50ml容量瓶 帶塞小玻璃瓶3)色譜條件 色譜柱 Hypersil ODS C18 5m 4.620mm 波長(zhǎng) 270nm 流動(dòng)相 A: 水:冰醋酸=50:1 B:乙腈 進(jìn)樣量 10l 流速 0.7ml/min4)樣品的制備（1）待測(cè)樣品：精確稱取20mg提取物于50ml容量瓶中，用甲醇溶解，超聲定容，0.45m微孔濾膜

49、過(guò)濾即為供試液。（2）標(biāo)樣制備 精密稱取淫羊藿甙標(biāo)樣用甲醇溶解，使其濃度為0.1mg/ml,過(guò)過(guò)0.45m濾膜，置冰箱貯存。5)計(jì)算 根據(jù)各峰峰面積利用外標(biāo)法計(jì)算各種成份的含量。 （十二）HPLC法測(cè)定枳實(shí)多酚1)試劑a. 甲醇（色譜純） b. 重蒸水 c. 磷酸(分析純)2)儀器高效(o xio)液相色譜儀（Beckman） 分析天平(fn x tin pn)（1/10000） 超聲波清洗(qngx)儀 0.45 m 微孔過(guò)濾器 50 ml 容量瓶 帶塞小玻璃瓶3)色譜條件色譜柱 Hypersil ODS C18 5 m 4.6200mm波長(zhǎng) 280nm流動(dòng)相 A: 0.1%磷酸 B: 甲醇

50、流速 0.8 ml/min進(jìn)樣量 10 l4)樣品制備（1）待測(cè)樣品 精確稱取30mg提取物于50ml容量瓶中，用甲醇超聲溶解，冷卻定容，0.45m微孔濾膜過(guò)濾為供試液。（2）標(biāo)樣制備 精密稱取標(biāo)樣用甲醇溶解，使其濃度為0.6mg/ml，過(guò)0.45m濾膜，置冰箱貯存。5)計(jì)算根據(jù)各峰峰面積利用外標(biāo)法計(jì)算各種成份的含量。(十三) HPLC法測(cè)定枳實(shí)辛弗林1)試劑a. 乙腈（分析(fnx)純） b. 重蒸水 c. 磷酸(ln sun)（分析純） d.十二(sh r)烷基磺酸鈉（SDS）2)儀器高效液相色譜儀（Shimadzu） 分析天平（1/10000） 超聲波清洗儀 0.45 m 微孔過(guò)濾器 5

51、0 ml 容量瓶 帶塞小玻璃瓶3)色譜條件色譜柱 Hypersil ODS C18 5 m 4.6200mm波長(zhǎng) 230nm流動(dòng)相 A:水（含0.02%mol/L磷酸、0.2%十二烷基磺酸鈉） B: 乙腈流速 0.8ml/min進(jìn)樣量 10 m4)樣品制備（1）待測(cè)樣品 精確稱取30mg提取物于50ml容量瓶中，用0.1mol/L磷酸超聲溶解，冷卻定容，0.45 m微孔濾膜過(guò)濾為供試液。（2）標(biāo)樣制備 精密稱取標(biāo)樣用0.1mol/L磷酸溶解，使其濃度為0.6mg/ml，過(guò)0.45m濾膜，置冰箱貯存。5)計(jì)算根據(jù)各峰峰面積利用外標(biāo)法計(jì)算各種成份的含量。(十四) HPLC法測(cè)定中藥復(fù)方1)試劑(s

52、hj)a. 甲醇(ji chn)（色譜純） b. 重蒸水 c. 磷酸(ln sun)（分析純）2)儀器高效液相色譜儀（Beckman） 分析天平（1/10000） 超聲波清洗儀 0.45 m 微孔過(guò)濾器 25 ml 容量瓶 帶塞小玻璃瓶3)色譜條件色譜柱 Hypersil ODS C18 5 m 4.6200mm波長(zhǎng) 274nm流動(dòng)相 A: 0.1%磷酸 B: 甲醇流速 0.8ml/min進(jìn)樣量 10 l4)樣品制備（1）待測(cè)樣品 精確稱取120mg提取物于25ml容量瓶中，用甲醇超聲溶解，冷卻定容，0.45 m微孔濾膜過(guò)濾為供試液。（2）對(duì)照樣制備 精密稱取對(duì)照樣用甲醇溶解，使其濃度為120

53、mg/25ml，過(guò)0.45m濾膜，置冰箱貯存。5)計(jì)算根據(jù)樣品與對(duì)照樣各峰峰面積之比比較各種成份的含量。(十五) HPLC法測(cè)定白藜蘆醇)試劑(shj)a. 乙腈（色譜(s p)純） b. 重蒸水 c. 磷酸(ln sun)（分析純）2)儀器高效液相色譜儀（Shimadzu） 分析天平（1/10000） 超聲波清洗儀 0.45 m微孔過(guò)濾器 50 ml 容量瓶 帶塞小玻璃瓶3)色譜條件色譜柱 Shim-pack VP-ODS C18 5 m 4.6150mm波長(zhǎng) 302nm流動(dòng)相 A: 水 B: 乙腈流速 1.0ml/min進(jìn)樣量 10 l4)樣品制備（1）待測(cè)樣品 精確稱取15mg提取物于5

54、0ml容量瓶中，用甲醇超聲溶解，冷卻定容，0.45 m微孔濾膜過(guò)濾為供試液。（2）標(biāo)樣制備 精密稱取標(biāo)樣用甲醇溶解，使其濃度為0.2mg/ml，過(guò)0.45m濾膜，置冰箱貯存。5)計(jì)算根據(jù)各峰峰面積利用外標(biāo)法計(jì)算各種成份的含量。(十六) HPLC法測(cè)定葡萄籽中的原花青素1)試劑(shj)a. 甲醇(ji chn)（色譜純） b. 乙腈（色譜(s p)純） c. 冰醋酸（分析純）2)儀器高效液相色譜儀（Waters） 分析天平（1/10000） 超聲波清洗儀 0.45 m 微孔過(guò)濾器 50 ml 容量瓶 帶塞小玻璃瓶3)色譜條件色譜柱 Hypersil ODS C18 5 m 4.6200mm波長(zhǎng)

55、 280nm流動(dòng)相 A: 1%磷酸 B: 1%醋酸乙腈流速 1.0ml/min進(jìn)樣量 10 l4)樣品制備（1）待測(cè)樣品 精確稱取60mg提取物于50ml容量瓶中，用甲醇超聲溶解，冷卻定容，0.45 m微孔濾膜過(guò)濾為供試液。（2）對(duì)照樣制備 精密稱取對(duì)照樣用甲醇溶解，使其濃度為1.2mg/ml，過(guò)0.45m濾膜，置冰箱貯存。5)計(jì)算根據(jù)樣品與對(duì)照樣各峰峰面積之比比較各種成份的含量。(十七(sh q) HPLC法測(cè)定紅車軸(chzhu)草1)試劑(shj)a. 甲醇（色譜純） b. 重蒸水2)儀器高效液相色譜儀（SHIMADZU） 分析天平（1/10000） 超聲波清洗儀 0.45 m 微孔過(guò)濾

56、器 50 ml 容量瓶 帶塞小玻璃瓶3)色譜條件色譜柱 Hypersil ODS C18 5 m 4.6200mm波長(zhǎng) 260nm流動(dòng)相 A: 水 B: 甲醇流速 1.1ml/min進(jìn)樣量 10l4)樣品制備（1）待測(cè)樣品 精確稱取30mg提取物于50ml容量瓶中，用甲醇超聲溶解，冷卻定容，0.45 m微孔濾膜過(guò)濾為供試液。（2）對(duì)照樣制備 精密稱取紅車軸草對(duì)照樣用甲醇溶解，使其濃度為0.6mg/ml，過(guò)0.45m濾膜，置冰箱貯存。5)計(jì)算根據(jù)樣品與對(duì)照樣各峰峰面積之比比較各種成份的含量。(十八) HPLC法測(cè)定苦瓜(kgu)皂甙1)試劑(shj)a. 甲醇(ji chn)（色譜純） b. 重

57、蒸水 c.乙腈2)儀器高效液相色譜儀（SHIMADZU） 分析天平（1/10000） 超聲波清洗儀 0.45 m 微孔過(guò)濾器 50 ml 容量瓶 帶塞小玻璃瓶3)色譜條件色譜柱 Kromasil ODS C18 5 m 4.6150mm波長(zhǎng) 208nm流動(dòng)相 A: 水 B: 甲醇:乙腈=1:1流速 0.8ml/min進(jìn)樣量 10l4)樣品制備（1）待測(cè)樣品 精確稱取120mg提取物于50ml容量瓶中，用甲醇超聲溶解，冷卻定容，0.45 m微孔濾膜過(guò)濾為供試液。（2）對(duì)照樣制備 精密稱取對(duì)照樣用甲醇溶解，使其濃度為120mg/50ml，過(guò)0.45m濾膜，置冰箱貯存。5)計(jì)算根據(jù)樣品與對(duì)照樣各峰峰

58、面積之比比較各種成份的含量。(十九(sh ji) HPLC-ELSD法測(cè)定積雪草甙和羥基(qingj)積雪草甙1)試劑(shj) a. 重蒸水 b.乙腈(色譜純)2)儀器高效液相色譜儀（SHIMADZU） 分析天平（1/10000） 超聲波清洗儀 0.45 m 微孔過(guò)濾器 50 ml 容量瓶 帶塞小玻璃瓶ELSD檢測(cè)儀3)色譜條件色譜柱 Shimpack VP-ODS C18 5 m 4.6150mm流動(dòng)相 A: 水 B: 乙腈流速 0.7ml/min進(jìn)樣量 10l漂移管溫度：101.5氣體流速：2.8l/min4)樣品制備（1）待測(cè)樣品 精確稱取30mg提取物于50ml容量瓶中，用甲醇超聲溶

59、解，冷卻定容，0.45 m微孔濾膜過(guò)濾為供試液。（2）對(duì)照樣制備 精密稱取對(duì)照樣用甲醇溶解，使其濃度為0.2mg/ml，過(guò)0.45m濾膜，置冰箱貯存。5)計(jì)算根據(jù)樣品與對(duì)照樣各峰峰面積之對(duì)數(shù)比比較各種成份的含量。(二十) HPLC-ELSD法測(cè)定山藥中的薯蕷(shy)皂素1)試劑(shj) a. 重蒸水 b.乙腈(色譜(s p)純)2)儀器高效液相色譜儀（SHIMADZU） 分析天平（1/10000） 超聲波清洗儀 0.45 m 微孔過(guò)濾器 50 ml 容量瓶 帶塞小玻璃瓶ELSD檢測(cè)儀（Alltech）3)色譜條件色譜柱 Shimpack VP-ODS C18 5 m 4.6150mm流動(dòng)相

60、 A: 水 B: 乙腈流速 1.0ml/min進(jìn)樣量 10l漂移管溫度：74.5氣體流速：1.9l/min4)樣品制備（1）待測(cè)樣品 精確稱取250mg提取物于50ml容量瓶中，用甲醇超聲溶解，冷卻定容，離心，0.45 m微孔濾膜過(guò)濾為供試液。（2）對(duì)照樣制備 精密稱取對(duì)照樣用甲醇溶解，使其濃度為0.2mg/ml，過(guò)0.45m濾膜，置冰箱貯存。5)計(jì)算根據(jù)樣品與對(duì)照樣各峰峰面積之對(duì)數(shù)比比較(bjio)各種成份的含量。（二十一） HPLC-ELSD法測(cè)定黃芪(hungq)甲甙1)試劑(shj) a. 重蒸水 b.乙腈(色譜純)2)儀器高效液相色譜儀（SHIMADZU） 分析天平（1/10000）