水產(chǎn)微生物學(xué)與免疫學(xué)

1、水產(chǎn)微生物學(xué)與免疫學(xué)第一章 緒論第二章 細(xì)菌學(xué)根底第三章 病毒學(xué)根底第四章 其它類型微生物第五章 免疫學(xué)根底第六章 水生動物病原?水產(chǎn)微生物學(xué)與免疫學(xué)?教學(xué)內(nèi)容第五章 免疫學(xué)根底第一節(jié) 緒論第二節(jié) 抗原第三節(jié) 免疫系統(tǒng)第四節(jié) 抗體第五節(jié) 免疫應(yīng)答第六節(jié) 免疫學(xué)應(yīng)用第一節(jié) 緒論 基本概念 免疫基本特性 免疫基本功能 免疫學(xué)發(fā)展簡史 免疫學(xué)應(yīng)用一、根本概念1免疫immunity 免疫最早的概念可能來自18世紀(jì)中國醫(yī)書?免疫類方?，其意義是預(yù)防疾病或免除瘟疫。 在古代西方醫(yī)學(xué)上的免疫(immunity)一詞，源于拉丁文“immunitas，原系法律概念，意指免除奴役或免除捐稅，后用到醫(yī)學(xué)上意為免除感

2、染。 現(xiàn)代免疫學(xué)認(rèn)為：免疫是指生物機(jī)體在識別異己過程中，識別自我和排除異己，以維持機(jī)體內(nèi)環(huán)境平衡和穩(wěn)定的保護(hù)性生理反響。 2免疫學(xué)immunology 免疫學(xué)是研究生物體(動物、植物及微生物等)抗原性物質(zhì)、機(jī)體免疫系統(tǒng)(immune system)、免疫應(yīng)答(immune response)規(guī)律與產(chǎn)物、免疫調(diào)節(jié)(immunoregulation)及各種免疫現(xiàn)象的一門科學(xué)。 現(xiàn)代免疫學(xué)不僅成為了一門獨立的、富有生命力的學(xué)科，而且滲透到醫(yī)學(xué)科學(xué)的各個領(lǐng)域，并與許多學(xué)科交織在一起，開展成為免疫生物學(xué)、免疫生物化學(xué)、免疫生理學(xué)、免疫病理學(xué)、免疫藥理學(xué)、分子免疫學(xué)及臨床免疫學(xué)等。二、免疫根本特性 1識別

3、異己(recognition of self and nonself)：識別異己是動物機(jī)體產(chǎn)生免疫應(yīng)答的根底。動物機(jī)體內(nèi)含有很多免疫器官或免疫組織，其免疫細(xì)胞上的抗原受體antigenic receptor能識別自身與非自身的大分子物質(zhì)。 2特異性(specificity)：指動物機(jī)體對某種抗原性物質(zhì)產(chǎn)生的免疫應(yīng)答具有高度的特異性，如嗜水氣單胞菌疫苗刺激魚類產(chǎn)生的免疫保護(hù)，只對嗜水氣單胞菌有抵抗力，而對其他病原的侵襲那么無抵抗力。 3免疫記憶(immunologic memory)：指動物的免疫具有記憶功能，也就是指動物機(jī)體對初次刺激的抗原性物質(zhì)具有長久的記憶能力，假設(shè)當(dāng)同樣抗原性物質(zhì)再次刺沖

4、動物機(jī)體時，機(jī)體能迅速產(chǎn)生比初次更強(qiáng)的免疫應(yīng)答反響。三、免疫根本功能 1免疫防御immunologic defence：是指動物機(jī)體抵御病原微生物的感染和侵襲的功能。當(dāng)動物的免疫功能正常時，動物機(jī)體就能對由呼吸道、消化道、皮膚及粘膜等途徑侵犯動物體內(nèi)的各種病原微生物產(chǎn)生較強(qiáng)的抵抗力。 2自身穩(wěn)定immunologic homeostasis：是動物機(jī)體對在新陳代謝過程中產(chǎn)生的衰老細(xì)胞和受損細(xì)胞去除體外，從而維持機(jī)體的生理平衡的功能。 3免疫監(jiān)視immunologic surveillance：是指動物機(jī)體識別和去除在各種因素誘導(dǎo)產(chǎn)生的突變細(xì)胞，以維持機(jī)體內(nèi)細(xì)胞均一性的功能。 動物機(jī)體免疫的功能

5、功 能功能正常功能異常反應(yīng)性正常反應(yīng)性過高反應(yīng)性過低免疫防御自身穩(wěn)定免疫監(jiān)視消滅病原物，中和毒素清除體內(nèi)衰老和受損細(xì)胞識別和清除體內(nèi)突變細(xì)胞變態(tài)反應(yīng)自身免疫性疾病免疫缺陷癥腫瘤或癌癥變態(tài)反響性接觸性皮炎 惡性腫瘤(胃癌) 四、免疫學(xué)開展簡史1原始免疫學(xué)時期 也稱為經(jīng)歷免疫學(xué)時期11世紀(jì)到18世紀(jì)末，這是人類在長期實踐和與疾病作斗爭的過程中，積累出來的大量的樸素的免疫學(xué)知識。如約11世紀(jì)宋真宗時代，我國創(chuàng)立了天花患者枯燥痂皮制成粉末吹鼻預(yù)防天花的種痘法。18世紀(jì)末1798年英國醫(yī)生Edwaed Jenner受到擠奶工人大多不感染天花的啟示，創(chuàng)立了應(yīng)用牛痘膿瘡制備疫苗(Vaccine)接種預(yù)防天花

6、的接種方法即種痘法(Vaccination)，至此才正式宣告“免疫學(xué)的誕生。 2傳統(tǒng)免疫學(xué)時期 也稱為實驗免疫學(xué)時期18世紀(jì)末到20世紀(jì)初，這主要是由于微生物的病原學(xué)研究取得了重大突破，推動免疫學(xué)在免疫機(jī)制的實驗研究上也取得了大量的研究進(jìn)展。如Pasteur成功研制了雞霍亂、炭疽和狂犬病弱毒疫苗。Metchinikoff發(fā)現(xiàn)吞噬細(xì)胞的吞噬作用而提出了“細(xì)胞免疫學(xué)說；Ehrlich等發(fā)現(xiàn)抗毒素及抗體的抗菌作用，提出了“體液免疫學(xué)說。這兩個學(xué)派長期爭論不休，直到20世紀(jì)初1903年，Wright觀察到免疫血清能顯著地增強(qiáng)白細(xì)胞的吞噬作用，并將這種物質(zhì)稱為調(diào)理素，從而將細(xì)胞免疫與體液免疫有機(jī)地聯(lián)系在

7、一起，使免疫學(xué)的開展有了個質(zhì)的飛躍。 3現(xiàn)代免疫學(xué)時期 自20世紀(jì)初以來，免疫學(xué)取得了巨大成就，主要表現(xiàn)在：A在免疫生物學(xué)方面 提出了克隆選擇學(xué)說，合理地解釋了免疫特異性、免疫記憶、免疫識別和免疫耐受等核心問題。說明了免疫器官、免疫細(xì)胞及免疫分子等在免疫應(yīng)答中的國內(nèi)和地位。明確了免疫系統(tǒng)的調(diào)控機(jī)制，如免疫分子的調(diào)節(jié)作用；免疫細(xì)胞間調(diào)節(jié)；神經(jīng)與內(nèi)分泌的調(diào)節(jié)等。B在免疫血清學(xué)方面 建立了很多血清學(xué)技術(shù)，如凝集試驗、補(bǔ)體結(jié)合試驗、瓊脂擴(kuò)散試驗、免疫熒光技術(shù)、免疫酶標(biāo)技術(shù)、免疫放射技術(shù)等。C在免疫化學(xué)方面 利用DNA重組技術(shù)，研制了多種基因工程疫苗；利用蛋白質(zhì)技術(shù)研究了人工合成肽疫苗。D在免疫遺傳學(xué)方

8、面 明確免疫應(yīng)答是受到遺傳基因的控制，一是主要組織相容性復(fù)合體major histocompatibility complex, MHC基因，它編碼的I類和II類分子，與淋巴細(xì)胞對抗原的識別、抗原提呈過程、免疫細(xì)胞間相互作用、細(xì)胞毒性作用等有重要關(guān)系。二是免疫球蛋白的可變區(qū)基因，它決定抗體分子的特異性和多樣性。 另外，在腫瘤免疫、免疫病理、移植免疫、生殖免疫等也有了很大進(jìn)展。冠狀病毒模型冠狀病毒體所攜帶的抗原天花病毒 (Pox virus)每個噴嚏可產(chǎn)生100萬個泡沫微粒天花發(fā)病過程7天3天5天五、免疫學(xué)應(yīng)用1免疫學(xué)診斷 主要指利用抗原抗體特異性結(jié)合的血清學(xué)技術(shù)對疾病的診斷。2免疫預(yù)防 主要指

9、利用疫苗對疫病的預(yù)防和控制。3免疫治療 主要指利用抗血清對疫病的治療，特別是對一些毒素性疾病的治療。第一節(jié)復(fù)習(xí)思考題1. 免疫和免疫學(xué)的概念。2. 免疫的根本特性。3. 免疫的根本功能。4. 現(xiàn)代免疫學(xué)的特點。第二節(jié) 抗原antigen 抗原概念 構(gòu)成抗原條件 抗原特異性 抗原分類 醫(yī)學(xué)上重要抗原 免疫佐劑一、 抗原概念1抗原antigen 但凡能刺沖動物機(jī)體產(chǎn)生抗體和致敏淋巴細(xì)胞并能與之特異性結(jié)合的物質(zhì)。2抗原性antigenicity 包括免疫原性和反響原性兩個方面含義。 免疫原性(immunogenicity)：指抗原能刺沖動物機(jī)體產(chǎn)生抗體和致敏淋巴細(xì)胞的特性。 反響原性(reactio

10、ngenicity)：指抗原與相應(yīng)抗體或致敏淋巴細(xì)胞發(fā)生特異性結(jié)合特性。3完全抗原和半抗原 完全抗原(complete antigen)：指具有免疫原性和反響原性兩種特性的物質(zhì)。 半抗原(incomplete antigen or hapten)：指指具有反響原性而缺乏免疫原性的物質(zhì)。4免疫原(immunogen) 指完全抗原，既能刺激機(jī)體產(chǎn)生免疫應(yīng)答的物質(zhì)。 二、構(gòu)成抗原的條件 構(gòu)成抗原的物質(zhì)需具備三個條件，即異物性、一定理化性狀和完整性。1異物性(foreigness) 又稱為異質(zhì)性或異源性，包括以下幾種情況： 異種物質(zhì)：不同種之間 同種異體物質(zhì)：同種不同個體之間 自身抗原：自身組織成分通

11、常無抗原性，但在以下幾種情況下，可成為抗原物質(zhì)。自身成分成為抗原的情況： (1)隱蔽成分如眼晶體蛋白、甲狀腺蛋白、腦組織及精子蛋白等，因各種因素如外傷、感染等而進(jìn)入血液循環(huán)系統(tǒng)，可引起免疫反響。 (2)機(jī)體免疫系統(tǒng)識別功能紊亂，將自身物質(zhì)視為異物，發(fā)生自身免疫病。 (3)自身成分在燒傷、電離輻射、藥物或感染等因素作用下，其構(gòu)造發(fā)生改變而成為抗原物質(zhì)。2、一定理化性狀 抗原均為有機(jī)物，但有機(jī)物并非都是抗原。有機(jī)物成為抗原，必須具備幾個理化性狀，包括大分子膠體、一定化學(xué)組成和構(gòu)造、分子構(gòu)象和易接近性和一定物理性狀。 (1)大分子膠體 完全抗原的分子量一般在10kD以上；分子量在5kD以下，一般無抗

12、原性；分子量為510kD的物質(zhì)，一般為弱抗原。 (2)一定的化學(xué)組成和構(gòu)造 含支鏈氨基酸的蛋白質(zhì)，其抗原性較弱，如明膠10kD以上等；含芳香族氨基酸的蛋白質(zhì)，其抗原性較強(qiáng)，如細(xì)菌莢膜多糖等。 (3)良好的分子構(gòu)象和易接近性 分子構(gòu)象(conformation)：指抗原分子一些特殊化學(xué)基團(tuán)的三維構(gòu)造。 易接近性(accessibility): 指抗原分子化學(xué)基團(tuán)與淋巴細(xì)胞外表相應(yīng)抗原受體相互接觸的難易程度。 (4)一定的物理性狀 聚合體較單體的抗原性強(qiáng)；顆粒性物質(zhì)較可溶性物質(zhì)的抗原性強(qiáng)；在動物機(jī)體滯留時間長短，也能影響抗原引起的免疫應(yīng)答。3完整性 具備上述性狀的物質(zhì)，須經(jīng)非消化道途徑進(jìn)入機(jī)體(包

13、括注射、吸入、混入傷口等)并接觸免疫細(xì)胞，才能成為良好抗原。 另外，還應(yīng)注意：抗原物質(zhì)的免疫原性，一方面取決于抗原本身的特性，另一方面也取決于機(jī)體的遺傳特性動物機(jī)體的免疫應(yīng)答能力。三、抗原特異性 特異性specificity，指物質(zhì)之間的相互吻合性或針對性?？乖奶禺愋员憩F(xiàn)在兩個方面，即免疫原性的特異性和反響原性的特異性。 特異性是免疫應(yīng)答中最重要的特點，是免疫學(xué)診斷和防治的理論依據(jù)。1抗原特異性的物質(zhì)根底抗原決定簇 抗原決定簇antigenic determinant, AD，又稱為表位epitope，是存在與抗原外表的特殊化學(xué)基團(tuán)，是免疫細(xì)胞識別的靶構(gòu)造，也是免疫反響具有特異性的物質(zhì)根底。

14、 抗原決定簇的大小相當(dāng)于相應(yīng)抗體的抗原結(jié)合部位。一般蛋白質(zhì)的抗原決定簇由56個氨基酸殘基組成?？乖奶禺愋允怯蛇@些氨基酸殘基所決定。 一個抗原分子可具有一種或幾種不同的抗原決定簇，每種決定簇只有一種抗原特異性。2抗原抗體反響的特異性 主要表現(xiàn)： 抗原抗體反響具有高度特異性； 特異性是由抗原決定簇所決定； 抗原決定簇的空間位置對抗原特異性十分重要：抗原決 定簇一樣，其位置不同，其特異性也不同； 抗原構(gòu)造旋光度與其特異性有關(guān)。3穿插反響cross reaction 是指抗原抗體出與其相應(yīng)抗體抗原發(fā)生特異性反響外，有時還能與其他抗體抗原發(fā)生反響。這是由于它們之間含有共同抗原commom antige

15、n。四、抗原分類1根據(jù)抗原的性能可分 完全抗原 半抗原 異種抗原2根據(jù)抗原的親緣關(guān)系可分 同種異體抗原 自身抗原3根據(jù)抗原來源可分 外源性抗原 內(nèi)源性抗原同種異體手移植 4根據(jù)抗原在免疫應(yīng)答中是否需要T細(xì)胞輔助，可分為 胸腺依賴性抗原(thymus dependent antigen, TD Ag)： 指其在巨噬細(xì)胞和T細(xì)胞參與下才能激活B細(xì)胞產(chǎn)生抗體，如血細(xì)胞、血 清蛋白、細(xì)菌等。 非胸腺依賴性抗原(thymus independent antigen, TI Ag)： 指其刺激機(jī)體B細(xì)胞產(chǎn)生不需要T細(xì)胞輔助。如細(xì)菌脂多糖、莢膜多糖等。五、醫(yī)學(xué)上重要抗原1微生物及其代謝產(chǎn)物 如細(xì)菌、病毒等，

16、還有其代謝產(chǎn)物如外毒素(類毒素)。2動物免疫血清 免疫血清，對本種動物具有治療疾病的作用；對另一種動物，那么是異種蛋白，具有抗原性。3同種異體抗原 在同種動物的不同個體之間，由于遺傳基因的不同，組織器官中存在著不同的抗原成分，即同種異體抗原。4自身抗原 5異嗜性抗原h(huán)eterophil antigen 指一類與種屬特異性無關(guān)的、存在于人、動物、植物及微生物中的共同抗原。這是引起自身免疫性疾病的原因之一。如A族溶血性鏈球菌與腎小球基底膜和心肌組織存在異嗜性抗原；大腸桿菌O14型脂多糖與人結(jié)腸粘膜具有異嗜性抗原。六、免疫佐劑1概念 免疫佐劑(immunoadjuvant)，簡稱佐劑(adjuvan

17、t)，是指先于抗原或與抗原一起注入動物機(jī)體，可增強(qiáng)機(jī)體對抗原的特異性免疫應(yīng)答或改變免疫應(yīng)答類型的一類物質(zhì)。2佐劑的種類 一般可分為： 無機(jī)佐劑，如氫氧化鋁、明礬等； 有機(jī)佐劑，如卡介苗、內(nèi)毒素等； 合成佐劑，如雙鏈多聚核苷酸、胞苷酸等； 油佐劑，如弗氏佐劑、植物油、礦物油等。 3佐劑的生物學(xué)作用 增強(qiáng)抗原的免疫原性； 提高初次應(yīng)答和再次應(yīng)答的抗體滴度； 改變抗體類型，由產(chǎn)生IgM轉(zhuǎn)變?yōu)楫a(chǎn)生IgG； 引起或增強(qiáng)遲發(fā)型超敏反響。4佐劑的作用機(jī)制 改變抗原物理性狀，利于抗原緩慢釋放，延長滯留時間； 利于抗原被巨噬細(xì)胞吞噬，促進(jìn)抗原提呈； 刺激淋巴細(xì)胞增殖和分化，增強(qiáng)和擴(kuò)大免疫應(yīng)答能力。5超抗原(su

18、pperantigen, SAg) 指某些物質(zhì)在極少濃度(110ng/mL)情況下就能誘發(fā)動物機(jī)體產(chǎn)生最大的免疫應(yīng)答效應(yīng)。如金黃色葡萄球菌AE腸毒素、A族鏈球菌M蛋白等。 1. 抗原的概念與分類 2. 構(gòu)成抗原的條件 3. 抗原特異性及其物質(zhì)根底 4. 佐劑概念、分類及作用機(jī)制 5. 異嗜性抗原與超抗原的概念 第二節(jié)復(fù)習(xí)思考題第三節(jié)免疫系統(tǒng)(Immune system) 指機(jī)體內(nèi)參與對抗原的免疫應(yīng)答，執(zhí)行免疫功能的一系列器官、細(xì)胞和分子。、免疫器官、免疫細(xì)胞、免疫分子、非特異性免疫因素一、免疫器官 中樞免疫器官(免疫細(xì)胞產(chǎn)生與成熟場所)骨髓(bone marrow) 胸腺(thymus)禽法氏

19、囊(bursa) 外周免疫器官(免疫細(xì)胞分布及應(yīng)答場所)脾臟(spleen )淋巴結(jié)(lymph node)淋巴樣組織(lymphoid tissue)免疫器官魚類免疫器官 主要包括提供T細(xì)胞分化環(huán)境的胸腺以及次級淋巴組織即腎臟和脾臟。1、胸腺： 起源于胚胎發(fā)育的咽上皮，但同其他四肢脊椎動物不同，大多數(shù)魚類的胸腺保存了和咽的聯(lián)系，由淋巴細(xì)胞和淋巴母細(xì)胞組成，在淋巴組織的起源中是最先獲得成熟淋巴細(xì)胞的器官。魚類的胸腺在免疫能力的個體發(fā)育中具有特別重要的作用；但隨著年齡的增長，其胸腺會退化。 2、腎臟： 成魚重要的淋巴組織，分為頭腎(Pronephros)和中腎(Mesonephros)。 成魚的

20、頭腎已失去排泄的功能，卻保存了造血和內(nèi)分泌的功能。受抗原刺激，頭腎和中腎細(xì)胞會出現(xiàn)增生。 利用溶血空斑和免疫酶技術(shù)已證實頭腎和中腎都存在抗體產(chǎn)生細(xì)胞，說明腎臟是硬骨魚類重要的抗體產(chǎn)生器官。 3、脾臟： 在某些魚類，特別是在軟骨魚類可分為紅區(qū)(Red pulp)、白區(qū)(White pulp)即淋巴區(qū)(Lymphoid area)。 然而，硬骨魚類的脾臟無此分化，是淋巴系統(tǒng)組織發(fā)生中最后一個發(fā)生的器官。 象腎臟一樣，脾臟在造血和免疫反響方面都起著重要的作用。 此外、腎臟和脾臟都有色素含有細(xì)胞(Pigment-containing cells)，即黑色素吞噬細(xì)胞(Melano-macrophages

21、)。 4、其他淋巴組織 魚類還有分散的淋巴細(xì)胞生發(fā)中心，它們存在于粘液組織，如皮膚、腸道和鰓，但不具備完整的淋巴構(gòu)造。 這些分散的淋巴組織在免疫原的攝取方面有著重要的作用，因而在養(yǎng)殖魚類的免疫保護(hù)方面有著重要的意義，成為研究的焦點。 病毒侵染人體淋巴組織 二、免疫細(xì)胞 凡參與免疫應(yīng)答或與免疫應(yīng)答有關(guān)的細(xì)胞，統(tǒng)稱為免疫細(xì)胞。免疫細(xì)胞免疫活性細(xì)胞免疫輔助細(xì)胞T淋巴細(xì)胞B淋巴細(xì)胞抗原提呈細(xì)胞單核吞噬細(xì)胞樹突狀細(xì)胞B淋巴細(xì)胞NK細(xì)胞K細(xì)胞粒細(xì)胞肥大細(xì)胞(一)畜禽免疫細(xì)胞NK細(xì)胞中性粒細(xì)胞嗜酸性粒細(xì)胞單核巨噬細(xì)胞 單核細(xì)胞體積較大，蹄狀核左，普通光鏡。透射電鏡顯示其高爾基體興旺、線粒體豐富、胞漿顆粒明顯

22、(中。掃描電鏡顯示腹腔巨噬細(xì)胞粘附于玻璃外表右。肥大細(xì)胞和嗜堿粒細(xì)胞1、 T淋巴細(xì)胞和B淋巴細(xì)胞 T淋巴細(xì)胞和B淋巴細(xì)胞是兩種淋巴細(xì)胞亞群。 T淋巴細(xì)胞具有直接殺傷細(xì)胞的作用以及通過分泌細(xì)胞因子調(diào)節(jié)免疫反響的作用。 B淋巴細(xì)胞分泌抗體且在細(xì)胞外表有抗體受體存在。 發(fā)現(xiàn)魚類具有這兩種淋巴細(xì)胞的功能已有多年，但近幾年才利用抗IgM單克隆抗體明確地證明硬骨魚類有獨立的淋巴細(xì)胞種群，即相對于哺乳動物的T和B淋巴細(xì)胞。 Graham及Clem等利用單克隆抗體可以區(qū)分細(xì)胞外表抗體受體陽性或陰性的B淋巴細(xì)胞及其生物活性。(二)魚類免疫細(xì)胞T淋巴細(xì)胞(紫色) B淋巴細(xì)胞2、 非特異性的細(xì)胞毒性細(xì)胞 非特異性的

23、細(xì)胞毒性細(xì)胞是一類與哺乳動物的自然殺傷細(xì)胞相等的免疫細(xì)胞。這類細(xì)胞在細(xì)胞與細(xì)胞接觸之后，通過壞死或主動死亡可以溶解靶細(xì)胞。在腎臟和腹腔中的這類細(xì)胞最多，血中較少。魚類的這類細(xì)胞與哺乳動物的自然殺傷細(xì)胞相比，小且無顆粒，它的靶細(xì)胞包括腫瘤細(xì)胞系、寄生原生動物等。3、吞噬細(xì)胞 吞噬細(xì)胞在免疫應(yīng)答中起著重要的作用。吞噬細(xì)胞受病原或宿主產(chǎn)生的趨化因子的作用而接近抗原。宿主產(chǎn)生的化學(xué)引誘因子包括補(bǔ)體成分和二十碳酸如三烯酸和脂素。魚類的粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和單核細(xì)胞都具有吞噬功能。 依據(jù)染色特征，魚類的粒細(xì)胞可分為嗜堿性、嗜酸性和中性粒細(xì)胞。但并不是所有的魚類都具有這三種粒細(xì)胞，如鮭鱒魚類循環(huán)系統(tǒng)中只有中性細(xì)

24、胞，但有的鮭鱒類組織中的一種可被曙紅染色的粒細(xì)胞被稱作嗜酸性顆粒細(xì)胞，是一種與哺乳動物肥大細(xì)胞相似的免疫細(xì)胞。在炎癥反響中，通常表現(xiàn)為雙相反響，即粒細(xì)胞先于巨噬細(xì)胞接近病原。三、免疫分子 指機(jī)體內(nèi)參與調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答的各種蛋白分子。(一)畜禽免疫分子免疫細(xì)胞膜上分子體液中免疫分子 免疫球蛋白 補(bǔ)體系統(tǒng) 細(xì)胞因子TCRBCR(如SmIgM)白細(xì)胞分化抗原MHC分子機(jī)體各種細(xì)胞分化不同群時在成熟不同階段、活化不同時期時出現(xiàn)于膜上的蛋白質(zhì)分子不同，以cluster of differtiation,CD命名，例如成熟T細(xì)胞都有CD2、CD3，分化成TH則有CD4，Tc有CD8等，CD分子在細(xì)胞發(fā)揮功能時

25、起作用 其中補(bǔ)體系統(tǒng)complement是由存在于人和脊椎動物血清及組織液中的一組經(jīng)活化后具有酶樣活性的蛋白質(zhì)，以及其調(diào)節(jié)蛋白和相關(guān)膜蛋白(受體)共同組成。 補(bǔ)體包含： 1固有成分：C1(C1q，C1r，C1s)C9、B、 D、 P 因子、MBL、絲氨酸蛋白酶。 2調(diào)節(jié)分子： 可溶性調(diào)節(jié)因子。 膜結(jié)合性調(diào)節(jié)分子。 3受體成分：C1qR, CR1, CR2, CR3, C3aR, C5aR等。(二)魚類免疫分子 存在于魚類血液或粘液中的具有非特異性抵抗作用的分子包括溶菌酶、抗蛋白酶如-巨球蛋白)、轉(zhuǎn)移因子、補(bǔ)休、C-反響性蛋白、幾丁質(zhì)酶和型干擾素等。這些物質(zhì)可以直接分解細(xì)菌(如溶菌酶、補(bǔ)體)或真

26、菌(如幾丁質(zhì)酶)，或抑制細(xì)菌(如轉(zhuǎn)移因子)或病毒(如干擾素)的復(fù)制，或作為調(diào)理素增加吞噬細(xì)胞的吞噬量(C-反響性蛋白、補(bǔ)休)，乃至中和細(xì)菌(如-巨球蛋白)。具有非特異性抵抗作用的分子具有特異性抵抗作用的分子：抗體溶菌酶四、魚類非特異性免疫因素 一魚類皮膚保護(hù)性屏障 粘液和表皮是魚類防御第一線，這些屏障的保護(hù)作用是極為有效的。有表皮粘液細(xì)胞產(chǎn)生的粘液、碎屑易與微生物粘結(jié)在一起而將微生物去除。鱗片、表皮和真皮對于物理性侵襲，也起著象保護(hù)盾一樣的作用，以阻止暴露創(chuàng)傷和防止可能導(dǎo)致的感染。 (1) 粘液： 粘液是魚最外的防御線，含有能抑制寄生物在外表區(qū)生長和寄生的一些因子。雖對粘液的抗病原體活性機(jī)理的

27、研究不多，但對表皮粘液細(xì)胞產(chǎn)物的重要性是普遍成認(rèn)。 從魚類粘液與其他高等動物分泌物的比較研究，獲得了相類似之處。 人的眼淚、鼻分泌物和唾液含有溶菌酶和能破壞許多細(xì)菌細(xì)胞壁中粘肽層(mucopeptide layer)(即肽聚糖層)的一些酶。這些因子也可能存在于魚的粘液中。粘液的不斷脫落和補(bǔ)充，可能對阻止細(xì)菌的增殖有了穩(wěn)定的根底，從而給予魚體以一定的保護(hù)作用。魚粘液中自動非特異性防御機(jī)制的另一些可能性，包括存在的蛋白水解酶proteolytic enzyme)和對病原體生長不利的pH值。 2鱗：魚類鱗片的基部下達(dá)真皮結(jié)締組織并伸出于皮膚外表外。有些魚的鱗片穿透粘液層，而另一些魚類的鱗片，仍保持著

28、為表皮和真皮所覆蓋。外表的擦傷，有時鱗片脫落，都能使魚體留下易受病原體侵襲的創(chuàng)傷。在這些情況下，無例外地出現(xiàn)炎癥和外表感染。在池塘孵化場，已證明一個傷口是多么易受侵襲性病原體的攻擊。 3真皮：真皮位于基底膜下，是皮膚的另一保護(hù)屏障，這層的皮膚是由散布著黑色素細(xì)胞melanocyte即黑色素細(xì)胞的纖維結(jié)締組織所組成。有血管的真皮組織，散布著毛細(xì)血管，這些對體液防御系統(tǒng)是有用的。真皮或經(jīng)由骨膜固定于骨，或與肌肉組織相連。 4表皮： 皮膚橫切片的顯微觀察，顯示表皮層位于粘液層下。外層是由扁平的鱗狀上皮細(xì)胞所組成；第二層由紡錘形細(xì)胞組成；這兩層都散布著球形的粘液分泌細(xì)胞。第三層細(xì)胞較圓，而第四層是由基

29、底膜上伸長的柱形細(xì)胞所組成。貫穿整個表皮，有時見有游走的嗜中性白細(xì)胞。魚的表皮區(qū)別于哺乳動物的一個特點是，魚表皮通常是在較下層中可見到有絲分裂。這是因為哺乳動物需要堅硬的皮膚層，以防止脫水作用，而魚在水環(huán)境中，不需要這樣的保護(hù)作用。(二)魚類炎癥反響 無論是由刨傷引起的損害或由某種侵襲性病原體引起的損害，都在損害部位產(chǎn)生一種速發(fā)型反響或炎癥應(yīng)答。人類急性炎癥典型特征包括紅、腫、熱、痛。 前節(jié)中所述的皮膚保護(hù)性系統(tǒng)是靜止的，如鱗片是常備的不活動的屏障。而炎癥應(yīng)答那么可說成是一種警報系統(tǒng)。當(dāng)侵害發(fā)生后，機(jī)體為了要修復(fù)開場的損傷和防止進(jìn)一步損害，炎癥即為此而起作用。 1.免疫系統(tǒng)的構(gòu)成。 2.魚類免

30、疫系統(tǒng)的特點。 3.魚類免疫器官的組成。 4.魚類免疫細(xì)胞的組成。 5.魚類免疫分子的特點。 6.魚類的非特異性免疫因素。 第三節(jié)復(fù)習(xí)思考題第四節(jié)抗體(antibody) 根本概念 免疫球蛋白構(gòu)造 免疫球蛋白生物活性 五類免疫球蛋白特性 魚類免疫球蛋白特點一、根本概念1、免疫球蛋白(Immunoglobulin, Ig) 是指存在于人和動物血液(血清)、組織液及其它外分泌液中的一類具有抗體活性或與抗體具有相似構(gòu)造的球蛋白。2、抗體(Antibody) 是指人和動物受到抗原物質(zhì)刺激后，由B淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化為漿細(xì)胞后產(chǎn)生的，能與相應(yīng)抗原發(fā)生特異性結(jié)合反響的免疫球蛋白。 抗體是動物機(jī)體對抗原物質(zhì)產(chǎn)生免疫

31、應(yīng)答的重要物質(zhì)，主要存在于人和動物血液(血清)、組織液及其它外分泌液中，因此將抗體介導(dǎo)的免疫稱為體液免疫(humoral immunity)。3、免疫球蛋白與抗體的關(guān)系 抗體是免疫學(xué)和功能上的概念，是抗原的對立面，是具有針對性，其本質(zhì)就是免疫球蛋白。而免疫球蛋白是構(gòu)造和化學(xué)本質(zhì)上的概念，它們并不都具有抗體活性。 也就是說抗體一定是免疫球蛋白，而免疫球蛋白不一定是抗體。 另外，從分子多樣性上看，抗體具有多樣性，即動物機(jī)體可產(chǎn)生針對各種抗原物質(zhì)的抗體；而免疫球蛋白就其化學(xué)構(gòu)造的差異，只可分為IgG、IgA、IgM、IgD和IgE。二、免疫球蛋白構(gòu)造1、根本構(gòu)造(1) 四肽鏈構(gòu)造 兩條重鏈(heav

32、vy chain, H鏈) 兩條輕鏈(Light chain, L鏈) 每條重鏈和輕鏈都有氨基端(N端)和羧基端(C端)。 在N端，含輕鏈1/2和重鏈1/4的區(qū)域，其氨基酸排列順序隨抗體特異性不同而有所變化，故稱為可變區(qū)(variable region, V區(qū))；而C端，含輕鏈1/2和重鏈3/4的區(qū)域，其氨基酸較穩(wěn)定，稱為恒定區(qū)(constant region, C區(qū))。(2)接合鏈Joining chain, J鏈 使Ig單體結(jié)合在一起的多肽鏈，起穩(wěn)定多聚體的作用。(3)分泌片secretory piece, SP 是IgA分子上的一條分子量為60-70kD的多肽鏈，其功能是保護(hù)IgA不受環(huán)

33、境中酶破壞，并介導(dǎo)IgA轉(zhuǎn)運。2、Ig的功能區(qū)(1) 抗原結(jié)合部位：VH和VL；(2) 遺傳標(biāo)記區(qū)域：CH1；(3) 補(bǔ)體結(jié)合位點：CH2；(4) Fc受體結(jié)合位點：CH3。3、Ig水解片段木瓜水解酶可將Ig水解成2個Fab段和1個Fc段 胃蛋白酶可將Ig水解成一個含雙價抗體活性的F(ab)段和假設(shè)干小分子多肽碎片。三、Ig生物學(xué)活性1、與抗原特異性結(jié)合2、激活補(bǔ)體3、結(jié)合Fc受體4、免疫調(diào)節(jié)作用5、抗體的免疫原性四、Ig分類2、Ig構(gòu)造 IgG、IgD和IgE為單體構(gòu)造； IgA為二聚體； IgM為五聚體。1、Ig類別(class) 根據(jù)Ig重鏈恒定區(qū)的構(gòu)造差異(、及)，可將Ig分為IgG、

34、IgA、IgM、IgD和IgE五類。五、魚類免疫球蛋白特點1、魚類產(chǎn)生的抗體主要是IgM；2、軟骨魚類IgM為五倍體，而硬骨魚為四倍體；3、其特性與哺乳動物相似，但比哺乳動物多一條J鏈；4、抗體除存在于血液外，還存在于皮膚粘膜、腸道黏液和膽汁中。影響魚類抗體產(chǎn)生的因素A、魚種B、抗原物質(zhì)C、溫度：Cushing于加利福尼亞工藝研究所工作期間，曾用干的海膽精液接種養(yǎng)在不同溫度下的鯉魚和鯽魚，隨后在血清中相繼產(chǎn)生凝集抗體。養(yǎng)在28的魚證明比15的魚，至少提早4天產(chǎn)生特異性凝集效價。 D、水質(zhì)：蘇聯(lián)Goncharov和Mikryakov用斑點氣單胞菌苗免疫了的鯉魚，養(yǎng)在每天固定含酚的濃度12.5毫克

35、/升的水中2個月，結(jié)果說明抗體的形成比起養(yǎng)在未污染水中的對照魚要弱得多。 1抗體與免疫球蛋白的概念; 2圖解Ig單體的分子構(gòu)造。 3免疫球蛋白分子的特殊構(gòu)造； 4Ig的種類? 5魚類Ig特點及其產(chǎn)生的影響因素？第四節(jié)復(fù)習(xí)思考題第五節(jié) 免疫應(yīng)答(immune response) 動物機(jī)體對抗原物質(zhì)的免疫應(yīng)答表現(xiàn)： (1)正常免疫應(yīng)答、(2)變態(tài)反響和 (3)免疫耐受 。 免疫應(yīng)答 變態(tài)反響 免疫耐受一、免疫應(yīng)答1、免疫應(yīng)答的概念 免疫應(yīng)答(immune response, Ir)，是指機(jī)體受到抗原刺激后，體內(nèi)特異性淋巴細(xì)胞對抗原分子的識別、活化、增殖、分化或失去活性潛能，并表現(xiàn)出一定生物學(xué)校應(yīng)的

36、過程，包括： (1) 遞呈細(xì)胞(巨噬細(xì)胞等)對抗原的處理、加工和遞呈； (2) 特異性淋巴細(xì)胞(T/B淋巴細(xì)胞)對抗原的識別、活化、增殖分化，并產(chǎn)生免疫效應(yīng)分子(抗體與細(xì)胞因子等)及免疫效應(yīng)細(xì)胞(細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞和遲發(fā)型變態(tài)反響性T細(xì)胞等)； (3) 對抗原物質(zhì)和再次進(jìn)入的抗原物質(zhì)產(chǎn)生去除效應(yīng)。(一)概述2、免疫應(yīng)答的特點 (1) 參與細(xì)胞： T/B淋巴細(xì)胞: 參與免疫應(yīng)答的核心細(xì)胞 巨噬細(xì)胞 等: 參與免疫應(yīng)答的輔佐細(xì)胞 (2) 表現(xiàn)形式： B細(xì)胞介導(dǎo)的體液免疫應(yīng)答 T細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞免疫應(yīng)答 (3) 基本特征： 特異性: 針對某種抗原產(chǎn)生的抗體/效應(yīng)細(xì)胞 具有一定免疫期: 這與抗原性質(zhì)、免

37、疫次數(shù)和機(jī)體反應(yīng)性等有關(guān) 具有免疫記憶: 初次接觸抗原后，機(jī)體可保留對該抗原的“記憶性”3、免疫應(yīng)答的類型 由于抗原的質(zhì)量/數(shù)量、機(jī)體免疫狀態(tài)/反響性的不同，機(jī)體對抗原物質(zhì)產(chǎn)生的免疫應(yīng)答類型不同。生理性應(yīng)答(免疫保護(hù))免疫應(yīng)答類型對非己抗原正應(yīng)答，免受外源抗原侵害(免疫保護(hù))病理性應(yīng)答(免疫損傷)對自身抗原負(fù)應(yīng)答，保護(hù)自身組織不損傷(免疫耐受)對非己抗原過高應(yīng)答，引起變態(tài)反應(yīng)對非己抗原低應(yīng)答或負(fù)應(yīng)答，導(dǎo)致感染擴(kuò)散或腫瘤發(fā)生對自身抗原過應(yīng)答，引起自身免疫性疾病(二)免疫應(yīng)答的一般規(guī)律1、免疫應(yīng)答的場所 抗原遞呈細(xì)胞和淋巴細(xì)胞的協(xié)作，是特異性免疫應(yīng)答的物質(zhì)根底。 前腎、脾臟和淋巴樣組織，是機(jī)體免疫

38、應(yīng)答的主要場所。 皮膚 淋巴循環(huán) 淋巴組織 抗原 靜脈 脾 口服或吸入 粘膜局部 粘膜下淋巴細(xì)胞 小膠質(zhì)細(xì)胞 腦2、免疫應(yīng)答的根本過程 免疫應(yīng)答(immune response, Ir)是一個復(fù)雜過程，有多種免疫細(xì)胞和免疫分子的參與，并在遺傳基因的調(diào)控下進(jìn)行，包括B淋巴細(xì)胞介導(dǎo)的體液免疫應(yīng)答和T淋巴細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞免疫應(yīng)答。免疫應(yīng)答過程可人為地分為三個階段： 致敏階段 反應(yīng)階段 效應(yīng)階段 這三階段緊密相聯(lián)不可分割，且目前還有很多環(huán)節(jié)尚未清楚。(1) 致敏階段 又稱感應(yīng)階段，是抗原物質(zhì)進(jìn)入體內(nèi)，抗原遞呈細(xì)胞對其識別、捕獲、加工處理和提呈，以及抗原特異性淋巴細(xì)胞(T、B淋巴細(xì)胞)對抗原的識別階段。(

39、2)反響階段 又稱增殖與分化階段，此階段是抗原特異性淋巴細(xì)胞識別抗原后活化，進(jìn)展增殖與分化，以及產(chǎn)生效應(yīng)性淋巴細(xì)胞和效應(yīng)分子的過程。T淋巴細(xì)胞增殖分化為淋巴母細(xì)胞，最終成為效應(yīng)性淋巴細(xì)胞，并產(chǎn)生多種淋巴因子；B細(xì)胞增殖分化為漿細(xì)胞，合成并分泌抗體。一局部T、B淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞在分化的過程中變?yōu)橛洃浶约?xì)胞(Tm和Bm)。這個階段有多種細(xì)胞間的協(xié)作和多種細(xì)胞因子的參加。 3效應(yīng)階段 此階段是由活化的效應(yīng)性細(xì)胞CTL細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞與TD細(xì)胞遲發(fā)型變態(tài)反響性T淋巴細(xì)胞和效應(yīng)分子抗體與淋巴因子發(fā)揮體液免疫效應(yīng)和效應(yīng)細(xì)胞免疫的過程，這些效應(yīng)細(xì)胞和效應(yīng)分子共同作用去除抗原物質(zhì)。二、變態(tài)反響1. 變態(tài)反響

40、的概念 變態(tài)反響(allergy)，又稱為過敏反響(anaphyaxis)或超敏反響(hypersensitiveity reaction)，是動物機(jī)體免疫系統(tǒng)受到再次進(jìn)入機(jī)體的同一抗原刺激而產(chǎn)生的一種過于強(qiáng)烈或不適當(dāng)免疫應(yīng)答、導(dǎo)致機(jī)體組織器官損傷的異?；虿±硇悦庖叻错?。 參與變態(tài)反響的抗原稱為變應(yīng)原，變應(yīng)原有完全變應(yīng)原和不完全變應(yīng)原。 完全變應(yīng)原：如異種血清、蛋白質(zhì)、花粉、微生物、寄生蟲等不完全變應(yīng)原：如藥物、青霉素等2. 變態(tài)反應(yīng)的發(fā)生過程 (1)致敏階段：變應(yīng)原初次進(jìn)入機(jī)體 初次免疫應(yīng)答， 產(chǎn)生免疫物質(zhì)(Ab或TDTH) 機(jī)體致敏狀態(tài) (2)發(fā)敏階段：變應(yīng)原再次進(jìn)入機(jī)體 作用到Ab或TD

41、TH 發(fā)生癥狀3.變態(tài)反應(yīng)的類型 根據(jù)變態(tài)反應(yīng)發(fā)生的機(jī)理和臨床特點，可分為4個類型： 型變態(tài)反應(yīng) (過敏反應(yīng)) 型變態(tài)反應(yīng) (細(xì)胞溶解型或細(xì)胞毒型) 型變態(tài)反應(yīng) (免疫復(fù)合物型或血管炎型) 型變態(tài)反應(yīng) (遲發(fā)型超敏反應(yīng))4. 變態(tài)反響的特點： A. 四型變態(tài)反響的發(fā)生比較快，可由抗體介導(dǎo)，并通過血清中的抗體被動轉(zhuǎn)移給正常動物。I型須有肥大細(xì)胞、嗜堿細(xì)胞和IgE的參與； 型須有靶細(xì)胞外表抗原結(jié)合的IgG、IgM參與；型須有IgG或IgM與抗原形成一定大小的免疫復(fù)合物，且沉積之后致??；型是由T細(xì)胞介導(dǎo)。B. 補(bǔ)體參與型、型變態(tài)反響，但須依賴補(bǔ)體才能致病的只有型變態(tài)反響。C. 同一變應(yīng)原在不同個體或

42、同一個體可引起不同型變態(tài)反響。D. 在同一個體可能同時存在兩種或兩種以上的變態(tài)反響。E. 有時同一疾病也可由不同型變態(tài)反響參與。三、免疫耐受 1. 免疫耐受的概念 免疫耐受(immune tolerance)，是機(jī)體免疫系統(tǒng)在接觸某種抗原后產(chǎn)生的特異性免疫無反響狀態(tài)，或稱為負(fù)免疫應(yīng)答，表現(xiàn)在當(dāng)再次接觸同一抗原時不發(fā)生可查反響，但對其他抗原的免疫應(yīng)答仍正常存在。2. 免疫耐受的一般特性 A. 免疫耐受是由抗原特異的T和/或B細(xì)胞被排斥、滅活或抑制所致； B. 未成熟淋巴細(xì)胞較成熟淋巴細(xì)胞更容易誘導(dǎo)免疫耐受； C. 機(jī)體耐受性的維持需要耐受原的存在，并與未成熟淋巴細(xì)胞相互作用； D. 某種條件下成

43、熟淋巴細(xì)胞也可被誘導(dǎo)產(chǎn)生耐受性。 3. 免疫耐受產(chǎn)生的條件 (1) 抗原方面 A. 抗原理化性狀：一般而言，小分子、可溶性的非聚合單體物質(zhì)常為耐受原； B. 抗原劑量： 一般抗原量越大或動物年齡越小，越容易誘導(dǎo)產(chǎn)生免疫耐受； C. 抗原注射途徑：靜脈注射易誘導(dǎo)免疫耐受，皮下和肌肉注射最難產(chǎn)生耐受性； D. 有無免疫佐劑： 不加免疫佐劑的抗原較易誘生免疫耐受 (2) 機(jī)體方面 A. 機(jī)體發(fā)育程度或年齡：胚胎期最易誘導(dǎo)耐受性 B. 動物品種或品系： 一般在胚胎期易誘導(dǎo)耐受性。 C. 免疫抑制措施的影響：抗免疫細(xì)胞等生物制品、環(huán)磷酰胺等免疫抑制劑等可誘生耐受。 4. 研究免疫耐受的意義 在免疫理論上

44、，可以解釋動物機(jī)體為何能夠識別“自己 和“非己，這是免疫學(xué)理論的核心問題。 在醫(yī)學(xué)實踐上，抗原通過免疫耐受的誘導(dǎo)或終止來防治某些疾病，如自身免疫性疾病、器官移植排斥反響、腫瘤性疾病等。 1免疫應(yīng)答的概念、特點與類型。 2免疫應(yīng)答的一般過程與效應(yīng)。 3變態(tài)反響的概念、類型與特點。 4免疫耐受的概念及特性。第五節(jié)復(fù)習(xí)思考題一、免疫學(xué)診斷二、免疫預(yù)防三、免疫治療第六節(jié) 免疫學(xué)應(yīng)用一、免疫學(xué)診斷(一)免疫診斷試劑 免疫學(xué)診斷是應(yīng)用診斷試劑(抗體或抗原)，對患病動物進(jìn)展抗原或抗體的測定，從而診斷疾病。 診斷抗原：是利用細(xì)菌或病毒經(jīng)過培養(yǎng)后，將菌體(病毒)滅活(或?qū)⒕w裂解)后制成。 診斷血清：是用抗原免

45、疫動物而制成的，一般采用給動物屢次注射抗原，然后采集免疫動物血液，別離血清，參加一定防腐劑而制成。 免疫血清經(jīng)過提純后得到IgG，再用酶、熒光染料、放射性同位素標(biāo)記，制成標(biāo)記抗體。(二)常用免疫血清學(xué)診斷技術(shù) 1、常用免疫血清學(xué)診斷技術(shù)的類型 1凝聚性反響：凝集試驗和沉淀試驗 2標(biāo)記抗體技術(shù)：熒光抗體技術(shù)、酶標(biāo)抗體技術(shù)等 3有補(bǔ)體參與的反響：如補(bǔ)體結(jié)合反響 4中和反響：如病毒中和試驗、毒素中和試驗 凝集試驗酶標(biāo)抗體技術(shù)A. 凝集反響 當(dāng)顆粒性抗原與其相應(yīng)抗血清混合時，在一定濃度的電解質(zhì)環(huán)境中，抗原凝集成大小不等的凝集塊，叫凝集反響。 凝集反響廣泛地應(yīng)用于疾病的診斷和各種抗原性質(zhì)的分析。即可用免

46、疫血清來檢查未知抗原，亦可用抗原檢測特異性抗體。 凝集試驗的種類 1直接凝集試驗： 顆粒性抗原 2間接凝集試驗： 可溶性抗原 3病毒的血凝與血凝抑制試驗 4乳膠凝集試驗 可溶性抗原與相應(yīng)抗體混合，在電解質(zhì)存在下，兩者比例適合，即可有沉淀物出現(xiàn)，叫沉淀反響(Precipitation)。 由于沉淀反響抗原多系膠體溶液。沉淀物主要是由抗體蛋白所組成。 為了求得抗原與抗體的適宜比例，保證有足夠的抗體，而且抗原分子小，具有較大的反響面積，因此操作上通常是稀釋抗原，不稀釋抗體。 沉淀反響的種類有環(huán)狀沉淀試驗、絮狀沉淀試驗、瓊脂擴(kuò)散試驗及免疫電泳試驗等。B. 沉淀試驗C. 酶標(biāo)抗體技術(shù)(Enzyme-la

47、belled antibody technique) 是根據(jù)抗原抗體反響的特異性和酶催化反響的高敏感性而建立起來的免疫檢測技術(shù)。 原理：酶標(biāo)記抗體，既不影響抗體的免疫反響性，也不改變酶的催化活性；參加酶底物后，酶可使其供氫體由無色的復(fù)原型轉(zhuǎn)化為有色的氧化型。這種有色反響的顏色變化與樣本中抗原或抗體的量成正比，且能用分光光度計進(jìn)展測定。 最常用的是： 辣根過氧化物酶和堿性磷酸酶D. 熒光抗體標(biāo)記技術(shù)(Fluoresent-labelled antibody technique 是應(yīng)用熒光素對抗體或抗原進(jìn)展標(biāo)記，然后用熒光顯微鏡觀察所標(biāo)記的熒光以分析相應(yīng)抗原或抗體的一種方法。原理: 熒光素在超低濃

48、度時可被短波光源激發(fā)，在熒光顯微鏡下可觀察到熒光。 熒光素: 能產(chǎn)生明顯熒光并作染料用的有機(jī)化學(xué)物質(zhì)，稱為熒光素，如異硫氰酸熒光素(FITC)、四乙基羅丹明(RB200)和四甲基異硫氰酸羅丹明(TMRITC)。 操作過程： 1標(biāo)本制備：涂片、壓片；冰凍切片、石蠟切片等 2熒光抗體染色：有直接法和間接法 3熒光顯微鏡觀察：光源為高壓汞燈；要滴加緩沖甘油2、免疫血清型學(xué)診斷技術(shù)的特點 (1) 特異性與穿插性 (2) 可逆性，分子外表結(jié)合 (3) 比例適當(dāng)性 (4) 存在二階段性， 即結(jié)合階段和可見階段(三)免疫診斷技術(shù)的應(yīng)用 1.用于傳染病的診斷：利用抗原抗體反響的特異性和敏感性來診斷疾病。用抗原診斷液，檢查患病動物血清中是否存在有相應(yīng)的特異性抗體，借以診斷傳染病。亦可用診斷血清或標(biāo)記抗體，檢查動物體內(nèi)及排泄物中是否存在特異性抗原，用以檢查病原體的存在。 2.用于病原的分型與鑒定：用抗血清或不同型的單因子血清，對別離的病原菌進(jìn)展鑒定，以確診該病原。用單因子血清分析細(xì)菌的抗原組分，確定細(xì)菌的類型，如用沙門氏菌的單因子血清分析待檢沙門氏菌的菌體抗原及鞭毛抗原的種類，從而確定該菌屬何種沙門氏菌。二免疫預(yù)防 1. 生物制品：利用微生物、寄生蟲或其代謝產(chǎn)物制成的用于