微生物檢驗(yàn)作業(yè)指導(dǎo)書

1、文件貞他第1頁共6頁文件名稱微生物檢驗(yàn)作業(yè)指導(dǎo)書文件版本A0文件編號(hào)發(fā)行日期2016-11微生物檢驗(yàn)作業(yè)指導(dǎo)書本程序適用于：編輯： 審核： 批準(zhǔn)：1.目的文件貞他第2頁共6頁文件名稱微生物檢驗(yàn)作業(yè)指導(dǎo)書文件版本A0文件編號(hào)發(fā)行日期2016-11規(guī)范化妝品菌落總數(shù)、霉菌 醉母菌檢驗(yàn)方法。2.適用范圍適用于我司的微生物檢驗(yàn)。3.引用標(biāo)準(zhǔn)化妝品安全技術(shù)規(guī)范2015年版中的微生物檢驗(yàn)方法總則、菌落總數(shù)檢驗(yàn)方法、霉 菌和酵母菌檢驗(yàn)方法。.儀器及所用器皿1高壓蒸汽滅菌鍋。2 電子稱。3酒精燈。4移液槍。5恒溫培養(yǎng)箱。6帶玻璃珠的三角瓶。7滅菌試管。8滅菌平皿：直徑9cmi9移液槍頭。0滅菌稱量勺。其中4.

2、 6至4. 10項(xiàng)，均需用121c高壓蒸汽滅菌20min。.試劑的制備生理鹽水的制備氯化鈉8.5g,純化水1000ml,溶解后分裝到加玻璃珠的錐形瓶內(nèi)（或試管內(nèi)）。每瓶90ml （試管9ml） ,121c （0.1-0.15 mpa ）高壓滅菌20min。冷卻后，在瓶外按順 序注明與樣品一致的編號(hào)。卵磷脂.吐溫80-營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基的制備稱取卵磷脂，吐溫80-營養(yǎng)瓊脂固體粉末51g,加入去離子水1000ml,攪拌加熱煮沸 至完全溶解后分裝三角瓶，121C （0.1-0.15 mp3高壓滅菌20min,冷卻至45 C -50 C 待用。孟加拉紅培養(yǎng)基的制備文件名稱文件編號(hào)微生物檢驗(yàn)作業(yè)指導(dǎo)書第3頁

3、共6頁文件版本A0發(fā)行日期2016-11文件頁碼稱取孟加拉紅培養(yǎng)基固體粉末 31.6g,加入去離子水1000ml,攪拌加熱煮沸至完全 溶解后分裝三角瓶，121 C (0.1-0.15 mpa )高壓滅菌20min,冷卻至45C-50 c待用。 5.4滅菌液體石蠟的制備用三角瓶分裝化學(xué)純液體石蠟,121 C (0.1-0.15 mpa )高壓滅菌20min。滅菌吐溫80的制備用三角瓶分裝化學(xué)純吐溫 80, 121 C (0.1-0.15 mpa )高壓滅菌20min。滅菌移液槍頭將移液槍頭置于帶孔盒內(nèi)，用牛皮包扎并用棉簽并用121c (0.1-0.15 mp3高壓滅菌20min。滅菌平皿用牛皮包

4、扎平皿,并用121c (0.1-0.15 mpa )高壓滅菌20min,棉純固定。.供檢樣品的制備制備原則處理樣品時(shí)應(yīng)嚴(yán)守?zé)o菌操作要求，需在無菌室或超凈工作臺(tái)進(jìn)行操作，所用試 液需無菌，所用器皿(如三角瓶、吸管、試管、稱量勺、平皿等)也均需滅菌 ，以免污 染樣品，導(dǎo)致影響試驗(yàn)結(jié)果。要使樣品充分混合均勻，樣品加到稀釋液中后，要充分振蕩混勻，以免由于染菌 的不均勻分布而影響檢出結(jié)果。盡量使樣品完全溶解，在不影響微生物生長的條件下可適當(dāng)加溫、加某些對(duì)微生物生長不產(chǎn)生影響的助溶劑(如滅菌液體石蠟、滅菌吐溫80)使樣品溶解在稀釋液中，其中的微生物分散到供檢試液中。不同類型樣品的檢樣制備方法液體樣品?水溶

5、性的液體產(chǎn)品，用移液槍吸取 1ml液體于滅菌后的平皿中。? 油性7體(如精油、提取液等原料)：取樣品10ml,先加5ml滅菌液體石蠟 混勻，再加10ml滅菌吐溫80在40C-44 c水浴中振蕩混合10min,最后加入75ml滅菌 生理鹽水，在40C-44 c水浴中乳化，制成1:10的懸液。膏、霜、乳化劑半固體及固體狀樣品文件貞他第4頁共6頁文件名稱微生物檢驗(yàn)作業(yè)指導(dǎo)書文件版本A0文件編號(hào)發(fā)行日期2016-11? 親水性的樣品：取10g加到90ml滅菌生理鹽水中，充分振蕩混勻，靜置15min 用其上精液做1:10的稀釋液。? 疏水性的樣品：稱取10g放到滅菌的研缽中，加10ml滅菌液體石蠟研磨成

6、 粘稠狀，再加10ml滅菌吐溫80,研磨待溶解后加70ml滅菌生理鹽水在40C-44 c水浴 中充分混合，制成1:10稀釋液。.菌落總數(shù)測定操作前的準(zhǔn)備工作微生物室消毒：檢驗(yàn)前打開紫外線燈或者臭氧發(fā)生器對(duì)微生物檢驗(yàn)室進(jìn)行消毒 30min,關(guān)閉臭氧發(fā)生器或紫外線燈后1h方可入內(nèi)。將編寫好檢驗(yàn)序號(hào)的待檢樣品進(jìn)行登記后，經(jīng)紫外線燈或臭氧消毒表面后方可 從傳遞窗，傳送入微檢室。操作人員進(jìn)入微檢室需穿上經(jīng)紫外線燈消毒潔凈服，戴好口罩、手套 ，用75% 酒精消毒手部。檢驗(yàn)步驟消毒樣品瓶蓋（過三次火焰消毒），若為液體樣品在開蓋前將瓶內(nèi)樣品振蕩混勻。打開蓋子后將樣品瓶口過三次火焰消毒。再稱取10g樣品加入90

7、ml生理鹽水的三角瓶中制成1:10稀釋液，并做好與樣品一致的編號(hào)。不同類型產(chǎn)品稀釋方法見6.2.1及 6.2.2 。用滅菌吸管吸取上述7.2.1中1:10檢檢液1ml,注入到對(duì)應(yīng)稀釋液編號(hào)一致的 滅菌平皿內(nèi)，每個(gè)樣品兩個(gè)平皿。（若含菌量較高的樣品可制1:10、1:1000的稀釋液， 方法如：取1ml1:10檢驗(yàn)液注入到含9ml滅菌生理鹽水試管中（注意勿使吸管接觸液 面）并充分混勻，制成1:100稀釋檢液。更換一支吸管，再從1:100稀釋檢7中取1ml 注入到含9ml滅菌生理鹽水試管中（注意勿使吸管接觸液面）并充分混勻，制成1:1000 稀釋檢液。）將冷卻至45C-50 c的卵磷脂，吐溫80-培

8、養(yǎng)基注入7.2.2平皿內(nèi)。每皿約15ml, 隨即轉(zhuǎn)動(dòng)平皿，使平皿內(nèi)的檢樣與培養(yǎng)基混勻。另傾注一個(gè)不加樣品的滅菌空平皿，作空白實(shí)驗(yàn)。待培養(yǎng)基完全冷卻至凝固后，翻轉(zhuǎn)平皿，倒置放入36C 1 C恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培 養(yǎng)48小時(shí)。文件貞他第5頁共6頁文件名稱微生物檢驗(yàn)作業(yè)指導(dǎo)書文件版本A0文件編號(hào)發(fā)行日期2016-11菌落計(jì)數(shù)方法若菌落總數(shù)較少，可采用肉眼觀察方式，若菌落總數(shù)較多，可用菌落計(jì)數(shù)器 計(jì)數(shù)。.霉菌及酵母菌總數(shù)的測定操作前準(zhǔn)備工作見7.1檢驗(yàn)步驟消毒樣品瓶蓋（過三次火焰消毒），若為液體樣品在開蓋前將瓶內(nèi)樣品振蕩混勻。打開蓋子后將樣品瓶口過三次火焰消毒。再稱取10g樣品加入90ml生理鹽水的三角瓶中

9、制成1:10稀釋液，并做好與樣品一致的編號(hào)。不同類型產(chǎn)品稀釋方法見6.2.1及 6.2.2 。用滅菌吸管吸取上述7.2.1中1:10檢檢液1ml,注入到對(duì)應(yīng)稀釋液編號(hào)一致的 滅菌平皿內(nèi)，每個(gè)樣品兩個(gè)平皿。（若含菌量較高的樣品可制1:10、1:1000的稀釋液， 方法如：取1ml1:10檢驗(yàn)液注入到含9ml滅菌生理鹽水試管中（注意勿使吸管接觸液 面）并充分混勻，制成1:100稀釋檢液。更換一支吸管，再從1:100稀釋檢7中取1ml 注入到含9ml滅菌生理鹽水試管中（注意勿使吸管接觸液面）并充分混勻，制成1:1000 稀釋檢液。）將冷卻至45C-50c的孟加拉紅培養(yǎng)基傾注入 8.2.2中裝稀釋檢液的平皿內(nèi)。 每皿約15ml,隨即轉(zhuǎn)動(dòng)平皿，使平皿內(nèi)的檢樣與培養(yǎng)基混勻。另傾注一個(gè)不加樣品的滅 菌空平皿，作空白實(shí)驗(yàn)。待培養(yǎng)基完全冷卻至凝固后，翻轉(zhuǎn)平皿，倒置放入28。叵溫培養(yǎng)