藥敏試驗方法

1、藥敏試驗方法:默認分類 2009-05-06 22:37 閱讀285 評論0字號：大中小K-B 法：1從孵育了 16-24小時的瓊脂平板上（血平板），挑出單個菌落，直接用生理鹽水制成0.5麥氏單 位。2在15分鐘內，用無菌棉拭子蘸取調好的菌液，在液面上方管壁處旋轉并用力擠壓幾次，以從中擠 出過多的菌液。3用棉拭子在無菌的M-H培養(yǎng)基表面化線接種，再重復操作兩次，每次將平板轉動60度，每次接 種都應保證接種物均勻分布，最后用棉拭子涂抹平板的邊緣。4將確定好的藥敏紙片分貼到平板表面。每個紙片都應壓一下，以保證與平板表面完全接觸。每個 紙片中心間距24mm。紙片一旦與平板接觸，不應再移動。5貼完紙片

2、后，應在15分鐘內放入35度孵箱。嗜血桿菌屬，鏈球菌屬放入3%-5%的CO2燭缸。6孵育24小時以后，測量各藥敏紙片抑菌圈直徑，與NCCLS手冊比較，作出結果判斷。說明：細菌藥敏結果的判斷以NCCLS為標準，所以藥敏試驗的每一步都應嚴格按照NCCLS操作， 否則將失去意義。鏈球菌、奈瑟菌屬、流感嗜血桿菌、除銅綠假單孢菌和不動桿菌外的假單孢菌屬不用K- B法.肺炎鏈球菌膠乳凝集測定法1在一干凈玻片上分別滴兩滴生理鹽水。2從冰箱取出鑒定試劑（Slidex pneumo-kit）于室溫。 3在其中一滴生理鹽水上滴加R1試劑，在另外一滴上滴加R2試劑，用攪拌棒混勻。4輕輕晃動玻片2分鐘，觀察結果。5

3、2分鐘內，如R1出現(xiàn)凝集為陽性；如R1和R2均未出現(xiàn)凝集為陰性。注：R3為陽性對照。藥敏紙片的選擇1、革蘭陰性桿菌（腸桿菌科）頭孢噻肟（CTX）頭孢唑林（CZ）頭孢他定（CAZ） 氨芐西林（AM）哌拉西林（PIP）阿米卡星（AN）頭孢噻吩（CF）環(huán)丙沙星（CIP）頭孢呋辛（CXM）慶大霉素（GM）頭孢噻肟/棒酸（CTX/CA）頭孢他定/克拉維酸（CAZ/CA）羧芐青霉素（CB）奧格門T（AMX/CA ）哌拉西林/三唑巴坦（PIP/TZ）亞安培南頭孢匹肟（FEP）頭孢克羅（CEC）2、銅綠假單孢菌/不動桿菌妥布霉素（TM）阿米卡星（AN）安曲南（AZT）頭孢哌酮（CFP）哌拉西林（PIP ）頭孢

4、匹肟頭孢噻肟（CTX）環(huán)丙沙星（CIP）頭孢他定（CAZ）左旋氧氟沙星（OFL）亞安培南哌拉西林/三唑巴坦3、金黃色葡萄球菌苯唑西林（OX）青霉素G（P）頭孢唑林（CZ）阿米卡星（AN）紅霉素（E）頭孢噻肟（CTX）環(huán)丙沙星（CIP）萬古霉素 奧格門?。ˋMX/CA）哌拉西林/三唑巴坦頭孢噻吩（CF）4、腸球菌氨芐西林（AM）萬古霉素環(huán)丙沙星（CIP）慶大霉素（GM）紅霉素（E）氧氟沙星（OFL）5、除肺炎鏈球菌外鏈球菌氨芐西林（AM）頭孢噻肟（CTX）萬古霉素紅霉素（E）氧氟沙星（OFL）克林霉素（CM）肺炎克雷伯菌產(chǎn)酸克雷伯菌和大腸桿菌ESBLs的檢測MH培養(yǎng)基上貼頭孢他定，頭孢他定/克拉

5、維酸，頭孢噻肟/棒酸，安曲南。如頭孢他定的抑菌圈22mm，安曲南27mm，頭孢噻肟27mm，意味可能有ESBLS產(chǎn)生。如頭孢他定/克拉維酸與頭孢他定，頭孢噻肟/棒酸與頭孢噻肟的差值5mm，則確證ESBLS產(chǎn)生。耐藥機制。一代頭孢對普通變形桿菌、枸櫞酸桿菌、腸球菌、假單孢菌屬、沙雷氏菌屬、擬桿菌屬無效。第二 代頭孢對假單孢菌屬、不動桿菌屬、沙雷氏菌屬、腸球菌無效；腸球菌對頭孢類天然耐藥。氨基糖甙類抗 生素阿米卡星與慶大霉素不完全交叉耐藥。紅霉素類、四環(huán)素類等抗生素內部有相互交叉耐藥。金黃色葡萄球菌耐萬古霉素、無乳鏈球菌耐青霉素和氨芐青霉素、無乳鏈球菌和D群鏈球菌耐萬古 霉素和替拉考寧為不可能的表

6、型。洋蔥伯克霍德菌對氨基糖甙類、亞安培南天然耐藥。除表皮葡萄球菌和溶血葡萄球菌外，替拉考寧耐藥的凝固酶陰性的葡萄球菌不常見。金黃色葡萄球菌對復方新諾明耐藥為罕見表型。氨芐青霉素對非發(fā)酵類不宜應用。對于葡萄球菌，苯唑西林耐藥，青霉素敏感是不可能的。NCCLS關于細菌藥敏實驗的說明總評論：1、頭孢噻吩可以代表頭孢噻吩、頭孢匹林、頭孢拉定、頭孢氨芐、頭孢克洛、和頭孢羥氨 芐。但是，頭孢唑林、頭孢呋辛、頭孢泊肟、頭孢丙烯應單獨測試，因為某些對這些藥物敏感的菌株對頭孢噻吩是耐藥的。2、利福平不能單獨用于化療。腸桿菌科1對于沙門菌屬和志賀菌屬只有氨芐西林、喹諾酮、和甲氧芐啶磺胺甲惡唑可用于常規(guī)試驗與報告。

7、 初此之外，對于沙門菌屬和志賀菌屬的腸道外分離株，應測試并報告氯霉素和一種三代頭孢菌素。2、克雷伯菌屬和大腸艾希菌的產(chǎn)ESBLS株對青霉素、頭孢菌素類或安曲南臨床治療可顯耐藥性， 盡管在體外藥敏試驗對其中某些抗生素敏感。對于所有產(chǎn)ESBLs株，應報告為耐所有青霉素類、頭孢菌素及安曲南。3、隨著3代頭孢菌素的治療，腸桿菌屬、枸櫞酸菌屬和沙雷菌屬可發(fā)展其耐藥性。最易敏感的菌株在開始治療3-4天就可變?yōu)槟退帲虼艘磸蜏y試這些菌株。葡萄球菌1、青霉素敏感的葡萄球菌對FDA批準的用于葡萄球菌感染的其他青霉素類、頭孢菌素和碳青烯類 也是敏感的。青霉素耐藥而苯唑西林敏感的菌株對伊內酰胺酶不穩(wěn)定的青霉素是耐

8、藥的，但對其他伊內酰 胺酶穩(wěn)定的青霉素、伊內酰胺酶抑制劑復合藥、相關的頭孢類和卡巴陪南是敏感的。苯唑西林耐藥的葡萄 球菌對現(xiàn)在可用的所有伊內酰胺類抗生素是耐藥的。因此僅測試青霉素和苯唑西林就可以推知一大批P- 內酰胺類抗生素的敏感性與耐藥性，不必常規(guī)測試其他青霉素類、伊內酰胺類抑制劑復合藥、頭孢類和卡巴陪南類。2、絕大多數(shù)的MRS對多種抗生素耐藥。包括伊內酰胺類、氨基糖甙類、大環(huán)內酯類、克林霉素和四環(huán)素。觀察到多重耐藥應該是對甲氧西林可能耐藥的線索。3、長期應用喹諾酮類治療的過程中葡萄球菌可發(fā)展其耐藥性，因此應重復測試耐藥性。腸球菌1、對于腸球菌屬，頭孢菌素、氨基糖甙類（除了篩選高水平耐藥性）

9、、克林霉素和甲氧芐啶/磺胺甲惡唑在體外可能有活性，但臨床無效，因此不能報告細菌對這些藥物敏感。2、青霉素敏感性可以用于不產(chǎn)伊內酰胺酶的腸球菌對氨芐西林、阿莫西林、酰基氨芐西林、氨芐西林/舒巴坦、阿莫西林/克拉維酸、哌拉西林以及哌拉西林/三唑巴坦的敏感性3、氨芐西林是氨芐西林和阿莫西林類的代表藥。氨芐西林的結果可用來判斷不產(chǎn)伊內酰胺酶的腸球菌對阿莫西林/克拉維酸和氨芐西林/舒巴坦的敏感性。4、青霉素的結果可預測不產(chǎn)伊內酰胺酶的腸球菌對氨芐西林、阿莫西林、氨芐西林/舒巴坦、阿莫西林/克拉維酸、哌拉西林/三唑巴坦的敏感性。5、對于血和腦脊液分離株需用頭孢硝噻吩伊內酰胺酶試驗，陽性提示對青霉素耐藥，同

10、時對酰胺基、羧基和脲基青霉素耐藥。細菌鑒別要點1、革蘭陽性球菌所有革蘭陽性球菌第一步為觸酶試驗。通常觸酶陽性為葡萄球菌和微球菌，陰性為鏈球菌科。但不排除例外，氣球菌為弱陽性。糞腸球菌 偶有陽性。操作觸酶試驗應盡量避免用鉑金取菌環(huán)（針）在H2O2上涂菌，而應先涂菌，在滴H2O2,步 驟不能顛倒。因為鉑金可以和H2O2產(chǎn)生假陽性反應。H2O2必須新鮮，若放置過久或暴露于光線下容易 分解，必須保存于4C冰箱。實驗所用菌須大量，不可挑到瓊脂，會產(chǎn)生假陽性。對觸酶陽性的革蘭陽性球菌，應繼續(xù)做玻片法血漿凝固酶試驗，此為檢出葡萄球菌，如陽性一般為 金黃色葡萄球菌；如陰性應做試管法凝固酶實驗確證，玻片法僅為篩

11、選實驗。血漿凝固酶實驗用血漿須用 兔或豬血漿，新鮮血漿不穩(wěn)定，可能發(fā)生自我凝集或形成顆粒產(chǎn)生渾濁或產(chǎn)生沉淀而導致判度錯誤；不可 使用人血漿，其含有抑制物質回干擾實驗結果。觸酶陰性為鏈球菌科，根據(jù)菌落溶血進行下一步鑒定。a溶血：草綠色鏈球菌；肺炎鏈球菌；腸球菌b溶血：A群鏈球菌；B群鏈球菌，部分D群鏈球菌腸球菌也有不溶血菌落，不能根據(jù)溶血判斷腸球菌。鏈球菌主要實驗：膽汁七葉苷，七葉苷，菊糖， CAMP，桿菌肽，高鹽，奧樸托辛，膽鹽溶解。腸球菌為致病菌，且腸球菌與非腸球菌耐藥機制不同，應進行鑒別，腸球菌分為糞腸球菌和屎腸球 菌；非腸球菌分為牛鏈球菌和馬鏈球菌。腸球菌對青霉素耐藥，非腸球菌對青霉素敏感。腸球菌的藥敏注 意高耐氨基糖甙的細菌，如高耐氨基糖甙則意味氨基糖甙與b內酰胺類藥物合用無協(xié)同作用。肺炎鏈球菌與草綠色鏈球菌鑒別：肺炎鏈球菌奧樸托辛、菊糖、膽鹽溶解實驗皆為陽性。但這3個 實驗都非特異，需聯(lián)合應用方為最佳。肺炎鏈球菌的青霉素藥敏實驗應注意，當青霉素（K-B法）的抑菌 圈直徑大于或等于19mm時為敏感，當小于19mm時不能確定是否中敏或耐藥，應做MIC稀釋確證。2、革蘭陰性桿菌包括腸桿菌科、非發(fā)酵菌和弧菌科。第一步實驗為氧化酶實驗。氧化酶陰性為腸桿菌科；陽性