實驗二 酶的底物專一性

1、實驗二 酶的底物專一性1實驗目的理解酶的專一性掌握檢查酶專一性的原理和方法學會排除干擾因素，設計酶學實驗2實驗內容 本實驗以唾液淀粉酶（內含淀粉酶及少量麥芽糖酶）、蔗糖酶對淀粉及蔗糖的催化作用，觀察淀粉酶、蔗糖酶的底物專一性。3 酶的專一性是指一種酶只能對一種底物或一類底物起催化作用，對其他底物無催化作用。酶的專一性程度分為：鍵專一性：只要求作用于一定類型的鍵，對鍵兩端基團無嚴格要求。如脂酶、核酶基團專一性：對鍵兩端或一端的基團要求嚴格，如-、-葡萄糖苷酶，轉移酶絕對專一性：只作用于一種底物，如某些核酸工具酶立體異構專一性：旋光異構專一性和幾何異構專一性實驗原理-酶的專一性4淀 粉直鏈淀粉:

2、由200-300個-葡萄糖以-1，4糖苷鍵相連成一直鏈支鏈淀粉:有-1，4糖苷鍵和-1，6糖苷鍵，在直鏈淀粉的基礎上形成分支5 直鏈淀粉的相對分子質量比支鏈淀粉小，直鏈淀粉的分子是由許多-D-葡萄糖經過-1，4-苷鍵反復連接而成的線狀聚合物。直鏈淀粉6 直鏈淀粉的形狀并不是伸展狀態(tài)的直鏈，而是有規(guī)律的卷曲成螺旋狀，每一螺旋圈約有 6個葡萄糖結構單位。 直鏈淀粉遇碘液顯藍色，加熱煮沸時顏色消失，冷卻后又重新顯色。這個反應很靈敏，常用來檢驗淀粉或碘的存在。7 支鏈淀粉比直鏈淀粉由更多的D-葡萄糖組成，其連接方式也有所不同。支鏈淀粉中D-葡萄糖之間以-1，4苷鍵連接成主鏈，每隔2025個葡萄糖單位便

3、分枝出1個支鏈，支鏈上還有分枝，而支鏈的連接點即分枝處為-l，6糖苷鍵。支鏈淀粉8半縮醛羥基在右邊，即與氧環(huán)同側-D-葡萄糖；半縮醛羥基在左邊，即與氧環(huán)異側-D-葡萄糖。 9 由-葡萄糖和-果糖以-1，2糖苷鍵相連而成的雙糖蔗 糖10Benedict反應 Benedict試劑是堿性硫酸銅溶液，具有一定的氧化能力，能與還原性糖的半縮醛羥基發(fā)生氧化還原反應，生成氧化亞銅（Cu2O）磚紅色沉淀。淀粉和蔗糖都不能反應，而它們的水解產物葡萄糖能夠發(fā)生Benedict反應，所以，用顏色反應來觀察淀粉酶、蔗糖酶對淀粉及蔗糖的水解作用。11試 劑淀粉酶溶液：唾液2mL 倒入10mL量筒中（不包括泡沫），用蒸餾

4、水稀釋到5mL，靜置10分鐘后，去掉上層泡沫和下層的沉淀。（自制）0.5%淀粉溶液（含0.3%NaCl） （取前搖勻）2%蔗糖溶液Benedict試劑12試 劑蔗糖酶溶液：干酵母1g置研缽中，加半勺石英沙及蒸餾水少許（約4mL），用力研磨10分鐘，轉移到50mL離心管中，另用30mL蒸餾水洗滌研缽，并將洗滌液一起轉移到離心管中，搖勻，靜置5分鐘，離心(離心前對稱放置的兩只離心管要等重配平，精確到0.01g)，小心取出上清液（含蔗糖酶）備用。 （自制）13Benedict試劑 在600mL蒸餾水中溶解173g檸檬酸鈉和100g無水碳酸鈉，冷卻后稀釋到850mL。在100mL熱蒸餾水中溶解17.4g無水硫酸銅。冷卻后稀釋到150mL。把硫酸銅溶液緩緩倒入檸檬酸鈉碳酸鈉溶液中，邊加邊攪拌，如產生沉淀。要過濾，班氏試劑配制后能長期使用。如存放較久而產生沉淀時，可取上層清液使用，不必重配。14實驗步驟-檢查試劑15實驗步驟-淀粉酶的專一性16實驗步驟-蔗糖酶的專一性17思