艾滋病檢測原理與技術(shù)規(guī)范

1、關于艾滋病檢測原理和技術(shù)規(guī)范第一張，PPT共四十頁，創(chuàng)作于2022年6月2022/8/142一、艾滋病與艾滋病病毒第二張，PPT共四十頁，創(chuàng)作于2022年6月2022/8/143（有AE多個亞型）與一種感染灰身白臉猴的猴免疫缺陷病毒（SIV）相似。HIV-1HIV-2Human immunodeficiency virus HIV（有AJ，O1O4 多個亞型）與一種感染黑猩猩的猴免疫缺陷病毒（SIV）相似。第三張，PPT共四十頁，創(chuàng)作于2022年6月2022/8/144 艾滋病病毒感染后，可嚴重破壞人體的免疫系統(tǒng)，使人體喪失抵御各種疾病的能力，有利于各種病原體的侵入，從而導致各種嚴重的、難以治

2、愈的機會性感染或腫瘤，最終導致死亡，病死率可達100。第四張，PPT共四十頁，創(chuàng)作于2022年6月2022/8/145HIV-1 M組HIV-1 O組HIV-2非洲中部和東部美國、歐洲、南美洲、非洲和亞洲南美洲、印度、贊比亞、中國非洲中部和東部泰國、中非、印度巴西、羅馬尼亞、喀麥隆加蓬、蘇聯(lián)、尼日利亞、烏干達、塞內(nèi)加爾、贊比亞喀麥隆、扎伊爾、中非塞浦路斯扎伊爾喀麥隆、加蓬HIV型別和亞型的分類進化與地區(qū)分布：西非、印度HIVABCDEFGHIJO1O2O3O4ABCDE第五張，PPT共四十頁，創(chuàng)作于2022年6月2022/8/146基因亞型與感染途徑的關系第六張，PPT共四十頁，創(chuàng)作于2022

3、年6月2022/8/147感染分期臨床分期維持時間感染標志物傳染性原發(fā)感染潛伏期潛伏期2-4周 抗體陰性 (窗口期)傳染危險性高原發(fā)感染癥狀期急性HIV感染1-2周 傳染危險性高慢性感染潛伏期無癥狀HIV感染215年(平均 8-10 年)抗體陽性有傳染性臨床發(fā)病期艾滋病03年(平均 1-2 年)抗體陽性抗原陽性傳染性強艾滋病從感染到發(fā)病的一般過程第七張，PPT共四十頁，創(chuàng)作于2022年6月2022/8/148二、艾滋病檢測的原理及方法第八張，PPT共四十頁，創(chuàng)作于2022年6月2022/8/149臨床診斷感染監(jiān)測耐藥監(jiān)測治療評價干預評估抗體檢測抗體檢測核酸定性CD4檢測新感染檢測CD4檢測核酸

4、定量核酸定量病毒分離基因測序核酸定性核酸定量各種檢測技術(shù)為艾滋病防治工作提供廣泛的技術(shù)支持平臺第九張，PPT共四十頁，創(chuàng)作于2022年6月2022/8/1410檢驗標志物檢驗目的檢 驗 方 法HIV(1+2) 抗體篩查試驗金標法、硒標法 快速診斷試驗明膠顆粒凝集試驗(PA) 微孔板法酶聯(lián)免疫試驗（ELISA） 第三代：雙抗原夾心法 第四代：增加檢測P24抗原確證試驗蛋白印跡法(WB) 手工/儀器病毒抗原早期診斷酶聯(lián)免疫試驗 檢測P24抗原病毒核酸臨床診斷治療評價定性試驗 檢測DNA定量試驗 即病毒載量，檢測RNACD4流式細胞儀法 檢測CD4+T淋巴細胞艾滋病實驗診斷方法第十張，PPT共四十頁

5、，創(chuàng)作于2022年6月2022/8/1411診斷試劑窗口期特 點金標法、硒標法5周35天敏感性低，容易漏檢明膠顆粒凝集試驗(PA)5周35天特異性較好，敏感性不足ELISA（國產(chǎn)第三代）3周多2025天普及，穩(wěn)定性欠佳ELISA（進口第三代）3周1822天較為成熟，穩(wěn)定性好ELISA（進口第四代）2周多1617天假陽性率偏高核酸檢測1周多1012天不用于常規(guī)診斷各種診斷試劑特性第十一張，PPT共四十頁，創(chuàng)作于2022年6月2022/8/1412硒標法金標法HIV抗體篩查試驗第十二張，PPT共四十頁，創(chuàng)作于2022年6月2022/8/1413明膠顆粒凝集試驗（Particle agglutina

6、tion test，PA） 第十三張，PPT共四十頁，創(chuàng)作于2022年6月2022/8/1414PA的操作和結(jié)果判斷第十四張，PPT共四十頁，創(chuàng)作于2022年6月2022/8/14155 450/630nm下測定OD值混勻，加蓋，37溫育 洗板3 加入底物第二次特異性結(jié)合4 加入終止液1 加入樣品 洗板2 加入酶標記物 加蓋，37溫育 加蓋，37溫育第一次特異性結(jié)合酶聯(lián)免疫分析 ELISA（雙抗原夾心、兩步法）第十五張，PPT共四十頁，創(chuàng)作于2022年6月2022/8/1416快速法可否單獨使用？ 全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范（2004版）：將PA、dot-EIA、膠體硒法納入快速檢測規(guī)范方法，因此

7、可以使用。 有研究指出： 任何一種快速試劑可以篩查出99%以上的陰性樣本； 兩種快速試劑均為陽性時，可以篩查出98%以上的陽性樣本； 兩種快速試劑結(jié)果不一致時，可用ELISA復檢； 單獨使用或兩種同時使用時，特異性差別無顯著意義。第十六張，PPT共四十頁，創(chuàng)作于2022年6月2022/8/1417 針對各種病毒蛋白的特異抗體 區(qū)分ELISA真陽性與假陽性 檢測HIV-1和HIV-2HIV抗體確證試驗Western Blot 免疫印跡法第十七張，PPT共四十頁，創(chuàng)作于2022年6月2022/8/1418基因名稱代號功 能基因產(chǎn)物片段HIV-1HIV-2結(jié)構(gòu)基因外膜蛋白基因env合成外膜蛋白gp1

8、60 gp120 gp41gp140 gp105 gp36 核蛋白基因 gag合成核蛋白p55 p24 p18 p56 p26 p16 逆轉(zhuǎn)錄酶基因pol合成逆轉(zhuǎn)錄酶p65 p51 p31 p68 p53 p34 調(diào)節(jié)基因 反式激活因子tat加速病毒蛋白合成毒力蛋白 表達調(diào)節(jié)基因rev促進整合的病毒選擇性地產(chǎn)生調(diào)節(jié)蛋白或毒粒成份 負調(diào)節(jié)因子nef減緩基因轉(zhuǎn)錄，使停止繁殖而處于潛伏狀態(tài) 毒粒感染性因子vif促進病毒感染另一個細胞 HIV的主要基因及其產(chǎn)物 （HIV標志物）第十八張，PPT共四十頁，創(chuàng)作于2022年6月2022/8/1419ss-RNA第十九張，PPT共四十頁，創(chuàng)作于2022年6月

9、2022/8/1420全自動免疫印跡儀第二十張，PPT共四十頁，創(chuàng)作于2022年6月2022/8/1421HIV抗體陽性診斷標準： 2條env （gp160/gp120 + gp41） 1條env + p24p55p66p31p51gp120gp160gp41p17p24膜蛋白（env）核蛋白（gag）逆轉(zhuǎn)錄酶（pol）第二十一張，PPT共四十頁，創(chuàng)作于2022年6月2022/8/1422篩查試驗：診斷出陰性樣本， 并為陽性/可疑樣本排除非特異條帶。復檢1（試劑A）：對陽性/可疑樣本排除操作誤差。復檢2（試劑B）：對陽性/可疑樣本排除試劑誤差。確證試驗：診斷出陽性樣本。篩查試驗和確證試驗的作用

10、第二十二張，PPT共四十頁，創(chuàng)作于2022年6月2022/8/1423臨床分期流行病學臨床表現(xiàn)實驗室診斷潛伏期有明確感染史HIV進入血液未能檢出任何標記物急性 HIV感染有明確感染史上呼吸道感染癥狀頸、腋等淋巴結(jié)腫大頭疼、皮疹、肝脾腫大后期抗-HIV陽轉(zhuǎn)少數(shù)病例P24陽性CD4/CD81外周血WBC及淋巴細胞總數(shù)先降后回無癥狀 HIV感染有明確感染史呈潛伏感染狀態(tài)無任何癥狀及體征但免疫系統(tǒng)逐漸被破壞抗-HIV陽性，P24陰性CD4/CD81，CD4總數(shù)正常艾滋病有明確感染史全身淋巴結(jié)腫大持續(xù)低熱1個月慢性腹瀉4-5次/日3個月內(nèi)體重下降10%免疫功能低下多種機會性感染、腫瘤抗-HIV陽性，P2

11、4陽性CD4/CD81CD4總數(shù)正常1個月） 腦弓形體病 慢性腸道孢子球蟲?。ú〕?個月） HIV相關腦病 反復發(fā)生的沙門氏菌敗血癥 HIV相關的消瘦綜合征第二十四張，PPT共四十頁，創(chuàng)作于2022年6月2022/8/1425HIV ！HIV ？HIV感染母親所生嬰兒：分別于12個月、18個月追蹤檢測陰性者為陰性，18個月仍陽性者為陽性。第二十五張，PPT共四十頁，創(chuàng)作于2022年6月2022/8/1426三、艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范第二十六張，PPT共四十頁，創(chuàng)作于2022年6月2022/8/1427主要內(nèi)容： 樣品采集和處理 檢測方法 （HIV抗體、病毒核酸、 病毒載量、CD4、HIV抗原檢測）

12、 安全防護、職業(yè)暴露 質(zhì)量管理 （質(zhì)量保證、質(zhì)量控制、質(zhì)量評價） 實驗室質(zhì)量考評 HIV診斷試劑質(zhì)量評估第二十七張，PPT共四十頁，創(chuàng)作于2022年6月2022/8/1428篩查試驗（試劑A）陽性可疑均陰性均陽性陰 性重復檢測（試劑A+B）陰 性陽 性確證試驗篩查實驗室一陰一陽確證實驗室復核檢測（試劑A/B/C）陽性可疑陰 性篩查報告（陰性）確認報告（陰性）確認報告（陽性）第二十八張，PPT共四十頁，創(chuàng)作于2022年6月2022/8/1429檢測方法檢測結(jié)果檢驗報告處理篩查試驗陰性HIV抗體陰性陰性告知陽性HIV抗體待復查上送確證確證試驗陰性HIV抗體陰性（-）陰性告知陽性HIV抗體陽性（+）

13、陽性告知，個案調(diào)查不確定HIV抗體不確定（）告知，3個月后復查共2次HIV抗體檢測結(jié)果處理規(guī)范第二十九張，PPT共四十頁，創(chuàng)作于2022年6月2022/8/1430HIV待確證樣品HIV陽性確證報告原件感染者確認報告原件確認報告復印件備案篩查實驗室所在單位篩查實驗室所在單位確證實驗室篩查實驗室艾滋病樣本確證、報告流程：第三十張，PPT共四十頁，創(chuàng)作于2022年6月2022/8/1431認真填寫各類表格（最好能打印），及時上報。第三十一張，PPT共四十頁，創(chuàng)作于2022年6月2022/8/1432各篩查實驗室每月5日前上報上月檢測數(shù)據(jù)：第三十二張，PPT共四十頁，創(chuàng)作于2022年6月2022/8

14、/1433四、艾滋病檢測的質(zhì)量控制第三十三張，PPT共四十頁，創(chuàng)作于2022年6月2022/8/1434 行政支持 重視、投入、理解 實驗室規(guī)范化建設 規(guī)范、制度、程序 人員要求 資質(zhì)條件、培訓和輪訓質(zhì)量保證（QA）質(zhì)量控制（QC） 室內(nèi)質(zhì)控 質(zhì)控圖的建立和應用 檢驗期間核查 試劑對照、外部質(zhì)控品對照、平行雙樣 結(jié)果關聯(lián)性（不同方法、不同實驗室結(jié)果、人群特征等）可實時校驗：樣品、試劑、儀器、操作等環(huán)節(jié)。質(zhì)量評價（EQA） 實驗室室間質(zhì)量考評第三十四張，PPT共四十頁，創(chuàng)作于2022年6月2022/8/1435 建立各項規(guī)章制度和操作程序，定期檢查； 人員定期接受培訓和復訓，培養(yǎng)良好的業(yè)務素質(zhì)；

15、對HIV實驗室的10項基本要求第三十五張，PPT共四十頁，創(chuàng)作于2022年6月2022/8/1436 儀器設備運作正常，定期檢定和校準，妥善維護； 樣品流轉(zhuǎn)有序，記錄詳細，保存規(guī)范； 采用合格試劑，經(jīng)常核查試劑質(zhì)量，正確保存和使用； 環(huán)境條件符合要求，有監(jiān)控有記錄； 嚴格按照規(guī)范和試劑說明書操作； 建立各類質(zhì)量記錄表格，資料保存完整，溯源性強； 堅持開展室內(nèi)質(zhì)控，參加室間比對和能力驗證； 安全防護、廢物處理措施落實，建立人員健康監(jiān)護檔案。第三十六張，PPT共四十頁，創(chuàng)作于2022年6月2022/8/1437 每個實驗室必須配備至少2種不同原理/不同廠家的試劑，其中一種必須是ELISA（第三代、

16、雙抗原夾心、兩步法）。 第一次篩查試驗推薦使用高敏感性的ELISA法，快速法可用于應急試驗或復核試驗。 按政府招標目錄采購，保存供應商的資質(zhì)證明文件，試劑批批檢報告。 登記試劑采購和使用情況，注意保存條件并實行監(jiān)控。 試劑和樣品應分開存放，過期試劑必須及時處理。 不同品牌、不同批號的試劑不能混用（包括陽性對照）。使用診斷試劑注意事項第三十七張，PPT共四十頁，創(chuàng)作于2022年6月2022/8/1438 嚴格按照說明書操作和判斷。 實驗室環(huán)境條件（溫度、濕度）的控制。 試劑使用前室溫平衡的重要性。 正確使用恒溫設備（校準溫度、放置方式、放置位置）。 固定樣品排列方式，固定對照品位置。 統(tǒng)一加樣的方式方法（加樣器使用習慣、樣品加樣順序）。 加樣過程避免污染（氣溶膠、加樣器移動路線）。 按加樣順序加入各種試劑，加入質(zhì)控對照前必須搖勻。 嚴格控制反應溫度和時間。實驗操作注意事項第三十八張，PPT共四十頁，創(chuàng)作于2022年6月2022/8/1439 每次實驗必須設立內(nèi)部質(zhì)控對照和外部質(zhì)控對照。 內(nèi)部對照質(zhì)控血清