血清乙型肝炎病毒e抗原檢測ELISA-檢驗科免疫室作業(yè)指導書

1、【實用】檢驗科SOP文件藥海無涯學無止境專注醫(yī)學領域血清乙型肝炎病毒e抗原檢測ELISA.原理在微孔條上預包被被純化乙肝 e抗體（HBeAb）,配以酶標記抗原（HBeAb-HRP及TMB等其它試劑，采用夾心法原理檢測人血清（或 血漿）中乙肝e抗原（HBeAg）。.標本采集采集前病人準備：受檢者應空腹標本種類：血清或血漿標本要求：采集病人靜脈血 3ml （可用EDT砒凝），室溫放置 不超過4小時，分離血清備用。.標本儲存：2-8 C保存不應超過1周，-20 C不應超過3個月，-70 C 長期保存，應避免反復凍融。.標本運輸：密封，室溫運輸。.標本拒收標準：污染、標本量不足、嚴重溶血或脂血標本不宜

2、作 此項檢測。.試劑試劑名稱：乙型肝炎病毒e抗原診斷試劑盒試劑生產(chǎn)廠家：英科新創(chuàng)（廈門）科技有限公司。包裝規(guī)格：96Test/Kit試劑盒組成：HBeAg微孔板，HBeAg酶標記抗原，HBeAg陽性對照血清，HBeAg 陰性對照血清，濃縮洗滌液，底物 A,底物B,終止液，封口膜，自封袋。試劑儲存條件及有效期：2-8C避光保存，有效期9個月。.儀器設備儀器名稱：自動酶標儀儀器廠家：Rayto儀器型號：RT-2100C.操作步驟平衡：將試劑盒各組分取出，平衡至室溫（18-25C）,微孔板 開封后，余者及時以自封袋封存。配液：濃縮洗滌液配制前充分搖勻 （如有晶體應充分溶解），濃 縮洗滌液和蒸儲水或去

3、離子水按1:19稀釋后使用。編號：將微孔條固定于支架，按序編號。加樣：分別用加樣器在對照孔中加入陰、陽性對照血清各50 l于相應孔中。力口酶：分別在每孔中加入酶標記抗體 50 1,輕拍混勻。溫育：置37c溫育60分鐘，室溫平衡5分鐘。洗滌：用洗滌液充分洗滌5次，洗滌完扣干（每次應保持30-60 秒的浸泡時間）。顯色：每孔加入底物 A、B各50 l,輕拍混勻，置37c暗處15 分鐘。終止：每孔加終止液50 l,混勻。測定：用酶標儀單波長 450nm或雙波長450/630nm測定各孔OD值（用單波長測定時需設空白對照一孔，30分鐘內(nèi)完成測定，并錄結果）。.結果判斷與分析臨界值（C.O.）的計算：臨

4、界值=陰性對照孔OD值NX 2.1,陰 性對照OD均值大于0.1時應重新試驗，小于0.05時以0.05計算。結果判定：樣品OD值S/C.O=1者為HBeAg陽性樣品OD值S/C.O1者為HBeAg陰性.質(zhì)量控制:每次試驗用含量為2NCU/ml的HBeAg質(zhì)控血清同步檢測，S/CO值 應在控制范圍內(nèi)；如失控，則要檢查試劑效期、儲藏溫度、試驗溫度 是否正常、操作步驟是否正確，直至重新試驗使其在控。.參考范圍：陰性或陽性.臨床意義：HBeAg陽性可作為體內(nèi)HBV處在復制狀態(tài)及血清具 有傳染性的一個標志；持續(xù)陽性則揭示轉(zhuǎn)為慢性。.操作性能：靈敏度高，特異性好。.方法局限性：樣品顯色深淺與樣品中抗原的含

5、量沒有一定正相 關。.注意事項每板建議設陰陽性對照血清各兩孔， 設空白對照時，不加樣品 及酶標記抗體，其余各步相同。洗滌時各孔均須加滿，防止孔口內(nèi)有游離酶未能洗凈。加試劑前應將試劑瓶翻轉(zhuǎn)數(shù)次，使液體混勻。如果滴加，滴加 前應棄去12滴。滴加時瓶身應保持垂直，以使滴量準確。注意勿將試劑滴在孔壁上。所有樣品都應按傳染源處理。封口膜使用說明微孔板拆封后，在取出當天所需的微孔條后，其余微孔條可 以封口膜封存以避免受潮。在封存時，注意勿把封口膜粘貼到微孔條底部，以免 影響其透光性。微孔板溫育時，以封口膜覆蓋孔口，可避免其他因素對實驗 帶來的非預期的影響。不同品名、不同批號的試劑不可混用，以免產(chǎn)生錯誤結果。.當檢測系統(tǒng)（儀器）不能工作時，所采取的補救措施：應保證 所有操作步驟正確無誤；可以比對陰陽對照，肉眼判讀；無法準確判 讀者，應留樣待系統(tǒng)正常后復查。.參考文獻：