生物科學(xué)網(wǎng)-基因表達(dá)芯片分析乳腺癌患者唾液轉(zhuǎn)錄組

1、.PAGE . - 可修編生物科學(xué)網(wǎng).info-bioscience.個(gè)人論文設(shè)計(jì)題目：基因表達(dá)芯片分析乳腺癌患者唾液轉(zhuǎn)錄組學(xué)生：明輝*：20100*51專業(yè)：生物技術(shù)指導(dǎo)教師：*學(xué)院：生命科學(xué)學(xué)學(xué)院論文設(shè)計(jì)容介紹論文設(shè)計(jì)題目基因表達(dá)芯片分析乳腺癌患者唾液轉(zhuǎn)錄組 選題時(shí)間完成時(shí)間論文設(shè)計(jì)字?jǐn)?shù)7000關(guān)鍵詞唾液、生物標(biāo)志物、RNA、基因表達(dá)芯片、乳腺癌論文設(shè)計(jì)題目的來源、理論和實(shí)踐意義：隨著社會的進(jìn)步，文化生活水平的不斷提高，人們對醫(yī)學(xué)檢查的要求也越來越高，要求無創(chuàng)、簡便、快速的檢查診斷方法?？茖W(xué)技術(shù)的開展，為建立無創(chuàng)檢查的方法提供了可能。而唾液是一種復(fù)雜的混合物，不僅含有各種蛋白質(zhì)，還含有 D

2、NA、RNA、脂肪酸以及各種微生物等。研究發(fā)現(xiàn)，血液中的各種DNA成分同樣存在于唾液中，唾液能反映出血液中各種DNA水平的變化。因此，就有可能通過唾液的檢測來進(jìn)展疾病的診斷。近期，唾液標(biāo)本受到廣闊研究者的普遍關(guān)注。與血清標(biāo)本相比，唾液采集平安方便，無創(chuàng)傷，無血源性疾病傳播的危險(xiǎn)，患者無痛苦，易于承受。與尿液標(biāo)本相比，唾液具有可實(shí)時(shí)采樣的優(yōu)點(diǎn)。唾液檢測研究已經(jīng)引起了人們極大的興趣，并取得了一些初步成果，唾液檢測得到廣泛應(yīng)用。論文設(shè)計(jì)的主要容及創(chuàng)新點(diǎn)：1本實(shí)驗(yàn)首次應(yīng)用新一代測序技術(shù)對乳腺癌患者唾液提取的RNA基因表達(dá)芯片并用先進(jìn)的生物信息分析技術(shù)進(jìn)展分析得出結(jié)論； 2依據(jù)患者唾液中具有共性的基因變

3、異對乳腺癌進(jìn)展早期診斷和分期分型的整合分析，目前國外尚無相關(guān)報(bào)道； 3本實(shí)驗(yàn)的實(shí)施和完成將為唾液中RNA中的基因表達(dá)圖譜進(jìn)展乳腺癌早期診斷提供直接的理論和實(shí)驗(yàn)根據(jù)，為深入探討其作用機(jī)制和臨床廣泛應(yīng)用奠定良好的根底。附：論文設(shè)計(jì)本人簽名：年月日. 目錄 TOC o 1-3 h u HYPERLINK l _Toc19257 摘要： PAGEREF _Toc19257 3 HYPERLINK l _Toc29973 Abstract PAGEREF _Toc29973 4 HYPERLINK l _Toc10470 1.引言 PAGEREF _Toc10470 5 HYPERLINK l _Toc

4、11765 1.1 背景 PAGEREF _Toc11765 5 HYPERLINK l _Toc24377 1.2 Affymetri* GeneChip Human Gene 1.0 ST Array簡介 PAGEREF _Toc24377 6 HYPERLINK l _Toc25674 1.3 唾液檢測的意義及優(yōu)勢： PAGEREF _Toc25674 8 HYPERLINK l _Toc15341 1.4 唾液組學(xué) PAGEREF _Toc15341 10 HYPERLINK l _Toc11312 1.4.1唾液基因組學(xué) PAGEREF _Toc11312 10 HYPERLINK

5、l _Toc13015 1.4.2 唾液轉(zhuǎn)錄組學(xué) PAGEREF _Toc13015 10 HYPERLINK l _Toc8640 1.5市場需求及產(chǎn)業(yè)化前景： PAGEREF _Toc8640 11 HYPERLINK l _Toc28889 1.6主要?jiǎng)?chuàng)新點(diǎn)、先進(jìn)性： PAGEREF _Toc28889 11 HYPERLINK l _Toc703 2.實(shí)驗(yàn)原理 PAGEREF _Toc703 12 HYPERLINK l _Toc5995 3. 實(shí)驗(yàn)步驟 PAGEREF _Toc5995 12 HYPERLINK l _Toc25218 3.1 唾液收集的標(biāo)準(zhǔn)操作程序 PAGEREF

6、_Toc25218 12 HYPERLINK l _Toc27995 3.2 D-chip軟件的使用 PAGEREF _Toc27995 13 HYPERLINK l _Toc12836 4.實(shí)驗(yàn)結(jié)果 PAGEREF _Toc12836 13 HYPERLINK l _Toc30397 4.1 D-chip結(jié)果： PAGEREF _Toc30397 13 HYPERLINK l _Toc26439 4.2 討論及分析： PAGEREF _Toc26439 14 HYPERLINK l _Toc13596 參考文獻(xiàn)： PAGEREF _Toc13596 14基因表達(dá)芯片分析乳腺癌患者唾液轉(zhuǎn)錄組摘

7、要：前期動物模型和臨床研究均顯示了乳腺癌與唾液基因表達(dá)圖譜的相關(guān)性。本研究利用試劑盒提取唾液樣品中的總RNA，通過全外顯子表達(dá)芯片Affymetri* GeneChip HumanE*on1.0 STArray首次對我國乳腺癌患者唾液轉(zhuǎn)錄組進(jìn)展分析，并與安康對照樣本進(jìn)展比較，運(yùn)用生物信息學(xué)軟件進(jìn)展分析dChip，篩選乳腺癌患者特異的基因表達(dá)圖譜，為進(jìn)一步的臨床獨(dú)立樣本驗(yàn)證提供候選基因。關(guān)鍵詞：唾液、生物標(biāo)志物、RNA、基因表達(dá)芯片、乳腺癌AbstractPrevious mouse model studies and clinical studies have shown the correl

8、ations between breast cancer onset and salivary gene e*pression profiles. In the current study, we e*tracted whole RNA from saliva and analyzed the transcriptomic variations in breast cancer patients and healthy controls using Affymetri* GeneChip Human E*on 1.0 ST Array. We analyzed the array data u

9、sing dChip software and discovered a panel of genes with significantly altered e*pression level. The results of our study provided candidate gene biomarkers and paves the way for large cohort clinical validations.1.引言1.1 背景乳腺癌是女性最常見的惡性腫瘤疾病之一，嚴(yán)重威脅著女性的生命和安康。中國2013年腫瘤登記年報(bào)顯示我國女性惡性腫瘤發(fā)病前十位中乳腺癌16.97%高居榜首，而

10、女性惡性腫瘤致死前十位中乳腺癌8.35%則列第五位，遠(yuǎn)低于肺癌23.89%。乳腺癌的高發(fā)凸顯目前早期診斷生物標(biāo)志物的潛力尚未完全發(fā)揮。乳腺癌發(fā)現(xiàn)得越早，治療得越早，其治愈率就越高。研究乳腺癌及其相關(guān)因素，目的是尋找發(fā)病原因，提示高危因素，監(jiān)護(hù)高危人群，以期作到三早(早發(fā)現(xiàn)、早診斷、早治療)和干預(yù)控制，為乳腺癌的預(yù)防和治療開辟新的途徑?，F(xiàn)階段，乳腺癌的檢測、診斷和分期分型主要依賴臨床和病理組織學(xué)評價(jià)。臨床評價(jià)包括臨床觸診和影像學(xué)測量。臨床觸診受施診醫(yī)師臨床經(jīng)歷等主觀因素影響，評估容易出現(xiàn)偏差，且對較深病灶不易估計(jì)。乳腺*線鉬靶mammography，MG是乳腺疾病篩查和乳腺癌早期發(fā)現(xiàn)和診斷的首選

11、檢查方法，但檢查過程中難以防止導(dǎo)致局部患者產(chǎn)生疼痛，增加受試者的輻射，對腺體致密型患者敏感性較低；乳腺超聲對大于7mm 的剩余癌檢測的靈敏度達(dá)100%6，與MG聯(lián)合檢查更提高了準(zhǔn)確性，但一定程度上增加了假陽性率。病理學(xué)檢查是臨床診斷的金標(biāo)準(zhǔn)，但術(shù)前無法準(zhǔn)確判斷淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移狀況, 粗針穿刺結(jié)果可能沒有代表性, 也無法判斷脈管瘤栓情況，同時(shí)難以對疾病的變化過程進(jìn)展實(shí)時(shí)監(jiān)控。因此，尋找一種有效的生物標(biāo)志物作為早期診斷、分期分型、藥物靶點(diǎn)篩查及腫瘤預(yù)后的指標(biāo)是當(dāng)前研究的熱點(diǎn)。乳腺癌是應(yīng)用高通量基因表達(dá)分析和蛋白質(zhì)組分析最深入的腫瘤之一。這些研究所確定的分子圖譜已逐步提醒了乳腺癌的分子特征，并提供了可用于

12、疾病預(yù)測和診斷預(yù)后的基因標(biāo)志物。前期動物模型和臨床研究均顯示了乳腺癌與唾液基因表達(dá)圖譜的相關(guān)性。這些研究不僅探討了唾液分子標(biāo)志物與乳腺癌發(fā)生、開展的關(guān)系和潛在機(jī)理，還通過歐美臨床樣本尋找和驗(yàn)證了早期乳腺癌檢測的基因表達(dá)圖譜。然而應(yīng)用基因表達(dá)芯片對中國人乳腺癌患者來源的唾液樣本進(jìn)展轉(zhuǎn)錄組學(xué)分析的研究尚未有文獻(xiàn)報(bào)道。本研究選取了12對乳腺癌和安康對照唾液樣本，利用試劑盒提取出樣品唾液中的RNA，利用基因表達(dá)芯片技術(shù)對樣本轉(zhuǎn)錄組進(jìn)展分析其中有一個(gè)乳腺癌患者的基因芯片由于操作原因未出結(jié)果，并運(yùn)用生物信息學(xué)軟件進(jìn)展比較，分析乳腺癌患者唾液樣本的基因表達(dá)圖譜與正常對照的異同，進(jìn)而篩選可用于早期檢測的生物標(biāo)

13、志物。1.2 Affymetri* GeneChip Human Gene 1.0 ST Array簡介本次試驗(yàn)是國首次運(yùn)用Affymetri*公司的GeneChip Human Gene 1.0 ST Array基因表達(dá)芯片技術(shù)，GeneChip Human Gene 1.0 ST是最精簡、同時(shí)也是最強(qiáng)有力的全轉(zhuǎn)錄組研究工具，其具備常規(guī)基因表達(dá)譜芯片無法比較的優(yōu)勢，其優(yōu)勢在于：真正的基因全長轉(zhuǎn)錄水平測定，而非常規(guī)基因表達(dá)譜芯片僅以3端序列表達(dá)量為基因表達(dá)量，檢測的準(zhǔn)確性非常高；不會遺漏3端外顯子喪失的轉(zhuǎn)錄本，假設(shè)基因產(chǎn)物的3端被剪切(這樣的轉(zhuǎn)錄本在身體到達(dá)了30%)，則用常規(guī)基因表達(dá)譜芯片無

14、法檢測，而本芯片將全面的展示該局部容。不會遺漏新增加的3端外顯子，有些基因在特定疾病狀態(tài)或生理狀態(tài)下，會在原有轉(zhuǎn)錄本的3端出現(xiàn)新的外顯子，這預(yù)示新的基因產(chǎn)物產(chǎn)生；可以測定無poly-A尾的轉(zhuǎn)錄本，無poly-A尾的的基因轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物將在常規(guī)基因表達(dá)譜芯片的檢測策略下會喪失；可檢測RNA降解樣本中的基因轉(zhuǎn)錄水平，這是任何一種常規(guī)基因表達(dá)譜芯片的無法檢測的；哺乳動物中數(shù)萬個(gè)基因可以表達(dá)出上千萬的不同形式的蛋白，基因與其產(chǎn)物數(shù)量的嚴(yán)重偏差主要來源于基因轉(zhuǎn)錄時(shí)的可變剪切。一樣的基因，在不同組織中經(jīng)過可變剪切將產(chǎn)生完全不同構(gòu)造的蛋白，這些蛋白發(fā)揮完全不同的功能，有完全不同的活性，從而決定組織和器官的功能；一

15、樣的基因，在同一組織中的不同時(shí)期，也會經(jīng)過可變剪切，產(chǎn)生構(gòu)造不同的蛋白，影響不同的生物進(jìn)程；一樣的基因，在不同的疾病狀態(tài)下，可通過可變剪切，產(chǎn)生構(gòu)造和功能差異很大的蛋白，導(dǎo)致信號通路的激活狀態(tài)差異，從而導(dǎo)致疾病發(fā)生；一樣的基因，被不同類型的環(huán)境因素作用，或者被同種環(huán)境因素的不同劑量作用，同樣可以通過可變剪切，產(chǎn)生構(gòu)造差異很大蛋白，從而導(dǎo)致個(gè)體對環(huán)境的易感性不同；為此，利用GeneChip Human Gene 1.0 ST才可以真正研究基因在所有狀態(tài)下不同產(chǎn)物的真正性質(zhì)和數(shù)量，從而為深入研究疾病形成機(jī)制、個(gè)體與環(huán)境交互作用、疾病診斷、以及治療靶點(diǎn)提供全面的轉(zhuǎn)錄水平景象。設(shè)計(jì)思想：該款芯片中覆蓋

16、了76萬個(gè)探針，其中包括當(dāng)前所有已研究透徹的2.9萬基因，平均每個(gè)基因被26個(gè)探針覆蓋，芯片探針序列覆蓋99%的NCBI基因標(biāo)準(zhǔn)序列數(shù)據(jù)庫(Refseq)。所有探針的信息來源為：基因組信息來源：UCSC hg18, NCBI Build 36轉(zhuǎn)錄本信息來源：RefSeq, Ensembl and putative plete CDS GenBank transcripts GeneChip Human Gene 1.0 ST的探針包含在GeneChip Human E*on 1.0 ST 探針集中，主要為其中的基因局部。該芯片不但可以進(jìn)展全基因表達(dá)分析，還可以最大化地分析出樣本的基因剪切形式，

17、以及基因的新剪切變異體。GeneChip Human Gene 1.0 ST可對全轉(zhuǎn)錄本進(jìn)展如下兩個(gè)水平分析：基因水平：定量基因表達(dá)程度。芯片上每個(gè)基因從5至3端平均覆蓋26個(gè)探針，與全球任何一種基于常規(guī)基因。表達(dá)譜芯片相比，基因全長覆蓋探針的芯片策略，可以為基因表達(dá)水平提供更加靈敏的檢測能力和統(tǒng)計(jì)學(xué)上更加穩(wěn)定的檢測結(jié)果?；虮磉_(dá)水平定量根據(jù)基因多個(gè)轉(zhuǎn)錄本累計(jì)表達(dá)量確定。1.3 唾液檢測的意義及優(yōu)勢：隨著社會的進(jìn)步，文化生活水平的不斷提高，人們對醫(yī)學(xué)檢查的要求也越來越高，要求無創(chuàng)、簡便、快速的檢查診斷方法?？茖W(xué)技術(shù)的開展，為建立無創(chuàng)檢查的方法提供了可能。而唾液是一種復(fù)雜的混合物，不僅含有各種蛋

18、白質(zhì)，還含有 DNA、RNA、脂肪酸以及各種微生物等。研究發(fā)現(xiàn)，血液中的各種DNA成分同樣存在于唾液中，唾液能反映出血液中各種DNA水平的變化。因此，就有可能通過唾液的檢測來進(jìn)展疾病的診斷。近期，唾液標(biāo)本受到廣闊研究者的普遍關(guān)注。與血清標(biāo)本相比，唾液采集平安方便，無創(chuàng)傷，無血源性疾病傳播的危險(xiǎn)，患者無痛苦，易于承受。與尿液標(biāo)本相比，唾液具有可實(shí)時(shí)采樣的優(yōu)點(diǎn)。唾液檢測研究已經(jīng)引起了人們極大的興趣，并取得了一些初步成果，唾液檢測得到廣泛應(yīng)用。 唾液是齦溝液、黏膜滲出液、唾液腺腺泡超滲液的混合體，儲存了大量的人類和口腔微生物的基因信息，是系統(tǒng)性檢測mRNA和蛋白質(zhì)變化的重要物質(zhì)。唾液中還含有口腔局部

19、組織和身體其他部位感染微生物和病毒的RNA和DNA。唾液來源的DNA質(zhì)量中等，大局部樣本可檢測到基因型，可被擴(kuò)增和測序。唾液成分較血液相對簡單，且唾液在口腔中經(jīng)唾液腺不斷分泌、更新，口腔黏膜細(xì)胞、唾液腺和口微生物的變化都可通過唾液mRNA和蛋白質(zhì)的分析檢測到，從而反映*一階段口腔或身體其他部位的相關(guān)變化。 通過非侵襲性的方式來評估安康狀況以及早期診斷口腔和系統(tǒng)性疾病一直是國家安康促進(jìn)組織和醫(yī)療機(jī)構(gòu)追求的目標(biāo)。唾液作為監(jiān)測安康和疾病的新興遞質(zhì)，近年來得到了越來越多的關(guān)注，在疾病早期診斷中具有明顯的作用。唾液較易操控，不易凝結(jié)，消除了抗凝處理對檢驗(yàn)結(jié)果的影響。同時(shí)，唾液采集具有非侵襲性，受試者根本

20、無痛苦和不適，具有較高的可重復(fù)性，平安而廉價(jià)。 唾液可以作為人體安康狀況的一面鏡子，目前以唾液作為診斷用介質(zhì)正引起越來越多學(xué)者的關(guān)注。唾液檢測可以在多種環(huán)境下包括在路邊進(jìn)展并提供有價(jià)值的診斷信息。唾液已經(jīng)用于HIV、HBV病毒 ，以及各種藥物如可卡因、酒精的檢測。唾液檢測的研究剛剛起步，有關(guān)檢測的靈敏性、特異性、重復(fù)性以及與現(xiàn)有診斷標(biāo)準(zhǔn)的相關(guān)性還有待進(jìn)一步完善。盡管如此，唾液仍是具有極大科研和臨床潛力的生物液。隨著唾液檢測的研究工作的不斷深入，其應(yīng)用將會實(shí)現(xiàn)由疾病診斷到安康監(jiān)控的轉(zhuǎn)變。1.4 唾液組學(xué)1.4.1唾液基因組學(xué)人類的唾液DNA總質(zhì)量為1.8128.4 mgL1，平均為21.6 mg

21、L13。唾液DNA約有68%來自于宿主細(xì)胞，32%來自于口腔微生物或者病毒?？谇恢忻撀涞酿つど掀ぜ?xì)胞是唾液中人類DNA的主要來源。唾液DNA的質(zhì)量較高，研究發(fā)現(xiàn)，72%96%的唾液樣本可進(jìn)展基因分型，84%的基因可被擴(kuò)增，67%的基因可被測序。有人利用TaqMan探針技術(shù)測定出唾液中人類DNA的質(zhì)量約為11.4 mgL-1，并于37 溫度下保存了30多天的唾液樣本中將線粒體DNA、Y-染色體單核苷酸多態(tài)性和染色體微衛(wèi)星灶三種不同的基因標(biāo)志物準(zhǔn)確歸類。這就說明，唾液DNA具有一定的穩(wěn)定性，儲存性能好，適于遠(yuǎn)程運(yùn)輸。有研究者發(fā)現(xiàn)，以適當(dāng)?shù)木彌_液保存唾液樣本，即使在室溫條件下保存1年以上，其DNA提

22、取量也不會受到明顯影響。這就說明，唾液可為基因組學(xué)研究提供良好的DNA來源。1.4.2 唾液轉(zhuǎn)錄組學(xué) 唾液RNA的總質(zhì)量為0.1080.023 mgL-16.63.6mgL-1圍，其局部是人類mRNA4。目前，在安康人群的唾液中可以檢出3 0006 400種mRNA，約占人類蛋白編碼基因的28%。其中，約200種mRNA由不同個(gè)體所共有，構(gòu)成了人類唾液轉(zhuǎn)錄組的核心；個(gè)體mRNA存在較多的重疊局部，約419和570個(gè)一樣的轉(zhuǎn)錄本分別出現(xiàn)在90%和80%的個(gè)體中。單純的腮腺唾液中也存在較高質(zhì)量的RNA3.61.5 mgL-1，但僅僅含有4 778個(gè)轉(zhuǎn)錄本，較全唾液少；在舌下腺、頜下腺、齦溝液和口腔

23、脫落上皮細(xì)胞中也有一定質(zhì)量的mRNA，轉(zhuǎn)錄本分別為1 831、1 543、2 689和3 142個(gè)，即mRNA存在于各種來源的唾液中。唾液微生物DNA約占唾液總DNA質(zhì)量的32%，即在未經(jīng)離心的唾液中存在著一定質(zhì)量的非人類基因。目前唾液RNA主要來源于微生物，但關(guān)于非人類RNA總質(zhì)量的信息還有待研究。最近一項(xiàng)利用大規(guī)模平行測序的研究5，獲取了人非刺激性唾液所有的基因序列信息。其中，20%25%的序列片段與人類的基因一致，約30%的序列片段與人類口腔微生物組數(shù)據(jù)庫一致。研究還發(fā)現(xiàn)了4 000多個(gè)基因的表達(dá)，不同位點(diǎn)的基因表達(dá)提醒了唾液中轉(zhuǎn)錄本構(gòu)造上的完整性。該研究說明，唾液轉(zhuǎn)錄組是一個(gè)很復(fù)雜的R

24、NA網(wǎng)絡(luò)構(gòu)造。 核糖體RNArRNA和轉(zhuǎn)移RNAtRNA雖然在細(xì)胞中相當(dāng)穩(wěn)定，但mRNA卻可能在數(shù)分鐘迅速降解。唾液中的mRNA主要來源于唾液腺、口腔黏膜上皮細(xì)胞和齦溝液等。唾液RNA通過與*些未知的大分子相互作用，可在室溫下保持穩(wěn)定；但當(dāng)參加Triton *外表活性劑后，其RNA會迅速降解。這些發(fā)現(xiàn)與當(dāng)前的一些假說吻合，即由脂質(zhì)包被的微囊為唾液mRNA從疾病位點(diǎn)到達(dá)口腔提供了重要保護(hù)。唾液中的脂質(zhì)微囊包含了諸多未受侵襲的功能性mRNA，后者甚至可改變口腔細(xì)胞角質(zhì)蛋白的表達(dá)模式，且扮演了物質(zhì)運(yùn)輸?shù)闹匾巧?。上述研究提醒了功能性唾液組學(xué)研究的全新方向。1.5市場需求及產(chǎn)業(yè)化前景： 早期診斷對乳腺

25、癌的積極有效治療和長效預(yù)后至關(guān)重要，可以減少病人的痛苦和疾病相關(guān)的社會本錢。中國人群在遺傳、環(huán)境和生活方式等方面與歐美乳腺癌高發(fā)地區(qū)有顯著的差異，開展以中國女性為研究對象的乳腺癌病因研究和生物標(biāo)志物研究，不僅能為中國女性乳腺癌危險(xiǎn)因素的明確和預(yù)防控制提供科學(xué)依據(jù)，而且也能為解釋乳腺癌人種分布的差異、更深入提醒乳腺癌的病因提供證據(jù)。1.6主要?jiǎng)?chuàng)新點(diǎn)、先進(jìn)性： 1本實(shí)驗(yàn)首次應(yīng)用新一代測序技術(shù)對乳腺癌患者唾液提取的RNA基因表達(dá)芯片并用先進(jìn)的生物信息分析技術(shù)進(jìn)展分析得出結(jié)論； 2依據(jù)患者唾液中具有共性的基因變異對乳腺癌進(jìn)展早期診斷和分期分型的整合分析，目前國外尚無相關(guān)報(bào)道； 3本實(shí)驗(yàn)的實(shí)施和完成將為

26、唾液中RNA中的基因表達(dá)圖譜進(jìn)展乳腺癌早期診斷提供直接的理論和實(shí)驗(yàn)根據(jù)，為深入探討其作用機(jī)制和臨床廣泛應(yīng)用奠定良好的根底。2.實(shí)驗(yàn)原理我們用Affymetri*公司的HG U133加2.0陣列分析12例乳腺癌患者唾液轉(zhuǎn)錄和12組對照樣本的比較。實(shí)驗(yàn)組和對照組在年齡、吸煙史、絕經(jīng)期狀態(tài)及激素的分泌情況都盡量保持一致。對唾液轉(zhuǎn)錄組進(jìn)展分析，看相對于安康對照組n =12， P 2倍上調(diào)，多少個(gè)基因表現(xiàn) 2倍下調(diào).。因?yàn)榧訇栃月蔖 0.05 ，所以這些轉(zhuǎn)錄鑒定不太可能歸因于巧合2檢驗(yàn)，P 2倍，P值 2倍，P值 0.01的轉(zhuǎn)錄組，這些轉(zhuǎn)錄組就是我們要找的與乳腺癌相關(guān)的候選基因。參考文獻(xiàn)：1. Hine

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