廣西藤茶提取物TTF抗鴨乙型肝炎病毒的實(shí)驗(yàn)研究

1、廣西藤茶提取物TTF抗鴨乙型肝炎病毒的實(shí)行研究【摘要】目的不雅察從廣西藤茶中提取出的一有用部位TTF抗鴨乙型肝炎病毒的作用。要領(lǐng)選1日齡北京雛鴨，人工熏染鴨乙型肝炎病毒DHBV動(dòng)物模子，應(yīng)用斑點(diǎn)雜交法不雅察TTF對(duì)鴨血清鴨乙型肝炎病毒DNA(DHBV-DNA)的影響。結(jié)果DHBV熏染鴨在熏染后第7天口服TTF藥物治療，75150g/kg組2次/d，10d對(duì)鴨血清DHBV-DNA程度有必然的按捺結(jié)果；300g/kg組，對(duì)熏染鴨血清DHBV-DNA程度的按捺作用明顯，停藥3d未見顯著的反跳征象。結(jié)論TTF可顯著按捺DHBV-DNA復(fù)制，提示TTF有抗HBV的作用。【關(guān)鍵詞】藤茶鴨乙型肝炎病毒(DH

2、BV)鴨乙肝動(dòng)物模子Abstrat:bjetiveTinvestigatetheanti-HBVeffetfTTF.ethds1-dayldBEijingduklingsereusedasthehepatitisBanialdel.DHBVDNAasdetetedbydt-blthybridizatintest.ResultsAfterediatedithTTFfr5daysand10days,ptialdensityvalue(Dvalue)fDHBV-DNAinduklingsseraasbviuslylerthanthatbefretreatent,thereeredifferentin

3、fluenesindifferentgrupsandrebundphenenndidntappearinbthTTF-grups3daysafterstppingediatin.nlusinTTFiseffiientintreatingDHBV,hihindiatesthatTTFhasananti-HBVeffet.Keyrds:Tengha;DukhepatitisBvirus;Dukhepatitisdel藤茶系葡萄科蛇葡萄屬植物顯齒蛇葡萄ApelpsisgrssedentataHand-azz.T.ang的嫩莖葉，在廣西、廣東、云南、貴州、福建等均有漫衍，亦稱甜藤茶、田婆茶、烏蘞、紅五

4、爪金龍、大齒蛇葡萄。其味甘、淡，性涼，具有清熱解毒、祛風(fēng)濕、強(qiáng)筋骨、消腫止痛之成果。藤茶在民間傳播應(yīng)用已有數(shù)百年汗青，是瑤族群眾的家常備用藥。民間用于治療黃疸型肝炎，傷風(fēng)發(fā)熱，咽喉腫痛，急性結(jié)膜炎或水煎外洗治療癰瘡濕毒等13。藤茶重要身分是黃酮類化合物，含量約為45.52%4。鄭氏5研究結(jié)果表白藤茶總黃酮對(duì)2215細(xì)胞排泄的HBsAg按捺率為43.14%,半數(shù)有用劑量(I50)為40.21g/l,治療指數(shù)(SI)為3.11；對(duì)2215細(xì)胞排泄的HBeAg按捺率為33.76%；對(duì)HBV-DNA有必然按捺作用。為此，筆者對(duì)TTF舉行體內(nèi)抗鴨乙型肝炎病毒的實(shí)行研究。現(xiàn)報(bào)道如下。1質(zhì)料1.1受試藥物T

5、TF為淺黃色粉末結(jié)晶，由本校中藥化學(xué)教研室提供，含量90%以上。1.2病毒鴨乙型肝炎病毒DNA(DHBV-DNA)強(qiáng)陽性血清,采自上海麻鴨,-70保存。1.3試劑DSAR，廣州市新港化工；-32P-Dtp北京福瑞生物技能工程公司；缺口翻譯藥盒普洛麥格公司(Prega.)；SephadexG-50Fill；PVP瑞典Pharaia公司；SDS西德erk公司；魚精DNA，牛血明凈卵白均購自中國科學(xué)院生物物理所；硝酸纖維素膜0.45Aersha公司。1.4儀器BP211D萬分之一克電子天平德國賽多利斯；酶標(biāo)儀奧地利SUNRISE；微量加樣器法國Gilsn；BifugeStrats高速低溫離心機(jī)德國H

6、eraeus；座式主動(dòng)電熱壓力蒸汽滅菌器上海申安醫(yī)療東西廠。1.5陽性比較藥拉米夫定3T，葛蘭素威康制藥公司，B008923。1.6動(dòng)物1日齡北京鴨,購自北京進(jìn)步種鴨動(dòng)物豢養(yǎng)常2要領(lǐng)及結(jié)果2.1TTF抗鴨乙肝病毒實(shí)行取上述待檢鴨血清，每批同時(shí)點(diǎn)膜，測(cè)定鴨血清中DHBV-DNA程度的動(dòng)態(tài)。按缺口翻譯試劑盒說明書要領(lǐng)，用32P標(biāo)識(shí)表記標(biāo)幟DHBV-DNA探針，并作鴨血清斑點(diǎn)雜交，放射自顯影膜片斑點(diǎn)，在酶標(biāo)檢測(cè)儀測(cè)定D值(濾光片為490n)，盤算血清DHBV-DNA密度，以雜交斑點(diǎn)D值作為標(biāo)本DHBV-DNA程度值。將每組鴨用藥后差異時(shí)間(T5、T10)和停藥后第3天(P3)血清DHBV-DNA程度

7、與同組給藥前(T0)D值比力，接納配對(duì)t查驗(yàn)，闡發(fā)差異的明顯性，斷定藥物對(duì)病毒熏染的按捺結(jié)果。按公式盤算每組鴨用藥后差異時(shí)間(T5，T10)和停藥第3天(P3)血清DHBV-DNA的按捺率%,并作圖,比力各組鴨血清DHBV-DNA按捺率的動(dòng)態(tài)。DNA按捺率%給藥前T0D值-給藥后T5，T10，P3D值給藥前T0D值100%將給藥治療組差異時(shí)間DHBV-DNA按捺率別離與病毒比較組雷同時(shí)間DHBV-DNA按捺率比力，接納成組t查驗(yàn)，作統(tǒng)計(jì)學(xué)處置懲罰，盤算t、P值，闡發(fā)差異的明顯性，斷定藥效。2.2結(jié)果3討論國表里學(xué)者如今普及接納DHBV熏染13日齡雛鴨創(chuàng)立乙型肝炎動(dòng)物模子,其病毒血癥連續(xù)時(shí)間較長

8、且較不變,無顯著的天然轉(zhuǎn)陰征象,是研究人類乙型肝炎發(fā)病機(jī)制,病毒復(fù)制歷程及挑選有用治療藥物的抱負(fù)動(dòng)物模子。鄭氏5研究了藤茶總黃酮體外抗乙型肝炎病毒HBV作用，結(jié)果表白體外對(duì)HBsAg、HBeAg和HBV-DNA有顯著的按捺結(jié)果。筆者應(yīng)用1日齡北京雛鴨經(jīng)腿脛靜脈注射DHBV-DNA陽性血清的要領(lǐng)來創(chuàng)立乙型肝炎動(dòng)物模子,不雅察從藤茶中提取出TTF的抗病毒作用,結(jié)果表現(xiàn)TTF低、中、高劑量組給藥后均有必然的按捺鴨血清DHBV-DNA程度的作用P0.050.01，且停藥后3d檢測(cè)結(jié)果表白TTF沒有反跳征象。為開拓TTF為治療乙型肝炎的新藥提供實(shí)行根據(jù)。【參考文獻(xiàn)】1中國科學(xué)院植物研究所中國高等植物圖譜補(bǔ)編，第2冊(cè).北京:科學(xué)出書社,1983:342.2廣西壯族自治區(qū)中醫(yī)藥研究所廣西藥用植物名錄.南寧:廣西人民出書社,1986:300.3天下中草藥匯編編寫班.天下中草藥匯編，下冊(cè).北京:人民衛(wèi)生出書