細(xì)菌革蘭氏染色

1、實(shí)驗(yàn)二 細(xì)菌革蘭氏染色法及細(xì)菌形態(tài)和特殊結(jié)構(gòu)特征1一、目的要求 掌握革蘭氏染色的技術(shù)，了解革蘭氏染色的原理及其在細(xì)菌分類學(xué)上的意義。掌握芽孢、莢膜和鞭毛染色技術(shù)，了解芽孢、莢膜和鞭毛染色的原理。二、基本原理 革蘭氏染色法是一種鑒別性的染色方法，基本步驟為；先用初染劑結(jié)晶紫進(jìn)行染色，再用碘液媒染，然后用乙醇（或丙酮）脫色，最后用復(fù)染劑（如番紅）復(fù)染。結(jié)果細(xì)胞保留初染劑籃紫色的細(xì)菌為革蘭氏陽(yáng)性菌；如果細(xì)胞為復(fù)染劑的顏色（紅色），則為革蘭氏陰性菌。其機(jī)理是由于細(xì)菌細(xì)胞壁的化學(xué)組成及結(jié)構(gòu)不同和通透性不同的緣故。 細(xì)菌的革蘭氏染色受菌齡、培養(yǎng)基pH值和染色技術(shù)等因素的影響，并非固定不變。2 芽孢具有厚而

2、致密的壁，透性差，含水量低，折光性強(qiáng)，不易著色。在加熱條件下加入著色力強(qiáng)的染料，讓芽孢、菌體與染料作用較長(zhǎng)時(shí)間，使芽孢染上顏色，再使菌體的顏色脫去；然后再用另一種與前者顏色不同的對(duì)比度強(qiáng)的染料對(duì)菌體復(fù)染，使芽孢和菌體分別呈現(xiàn)出不同的顏色，因而能更明顯地襯托出芽孢，以便觀察。 莢膜是一層覆蓋在某些細(xì)菌細(xì)胞壁表面的粘性物質(zhì)，主要成分是多糖類。莢膜與染料的親合力較差，不易著色。莢膜的通透性好，某些染料可透過莢膜而使菌體著色。因此，常采用負(fù)染色法將菌體和背景著色而莢膜不著色，因而莢膜在菌體周圍呈一透明無色圈。 細(xì)菌鞭毛非常纖細(xì)，直徑10-20nm，只能在電子顯微鏡下才能觀察到。但采用特殊的染色法在光學(xué)

3、顯微鏡下也能見到。其原理是：在染色前先用媒染劑處理，使媒染劑沉積在鞭毛上，將鞭毛加粗，然后再進(jìn)行染色，便能在油鏡下看見鞭毛的形狀和著生方式。 3三、器具材料 1.器材：顯微鏡、擦鏡紙、二甲苯、香柏油、接種環(huán)、酒 精燈、火柴、吸水紙、載破片、蓋玻片。 2.染色液及試劑: 結(jié)晶紫染色液、路戈氏碘液、 95%的酒 精、番紅染 色液、蒸餾水。 堿性復(fù)紅染色液、5%孔雀綠染色液。 3.菌種；培養(yǎng)18小時(shí)至20小時(shí)的枯草芽孢桿菌、蘇云金桿 菌、大腸桿菌的新鮮斜面菌種。 培養(yǎng)24小時(shí)至36小時(shí)的枯草桿菌或蘇云金桿菌、 巨大芽孢桿菌。4四、操作方法干燥涂片火焰固定結(jié)晶紫染色立即水洗碘液媒染95%酒精脫色番紅復(fù)染干燥鏡檢.視頻革蘭氏染色2.flv水洗水洗革蘭氏染色的步驟陽(yáng)性菌陰性菌水洗5Schaeffer與FuLton氏染色法加孔雀綠染料加熱制片復(fù)染脫色干燥鏡檢水洗染色B 近中央 C 末端 A 中央6觀察莢膜和鞭毛標(biāo)本片周生一端生一束莢膜7五、作業(yè)與思考題 1. 繪制細(xì)菌形態(tài)圖并說明染色結(jié)果。 2. 革蘭氏染色成敗的關(guān)鍵在哪？為什么？