房顫病人心房肌漿網(wǎng) RyR2 受體 mRNA 表達(dá)變化的研究

1、房顫病民氣房肌漿網(wǎng) RyR2 受體 mRNA 表達(dá)變革的研究周炯峰夏小杰陳怡粵【摘要】目的：研究心房顫抖房顫患者肌漿網(wǎng)鈣開釋通道ryandine受體ryandinereeptrtype2,RyR2RNA表達(dá)的改變，探究房顫電重構(gòu)與布局重構(gòu)的產(chǎn)生氣制。要領(lǐng)：38例風(fēng)心病二尖瓣局促擔(dān)當(dāng)外科手術(shù)者，手術(shù)時(shí)取右心房及右心耳各約100g，通過逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反響技能，以GAPDH為內(nèi)參照，丈量肌漿網(wǎng)RyR2受體的RNA的變革。效果：房顫者肌漿網(wǎng)RyR2受體RNA較竇性心律者上調(diào)，心房差異部位無差異。結(jié)論：房顫患者RyR2受體RNA上調(diào)，說明肌漿網(wǎng)a2+超負(fù)荷與肌漿網(wǎng)鈣庫的開釋增長有關(guān)?！娟P(guān)鍵詞】心房顫抖

2、；鈣調(diào)卵白；肌漿網(wǎng)KeyrdsAtrialfibrillatin;aldulin;Sarplasiretiulu心房顫抖房顫是臨床上最常見的心律變態(tài)，房顫的發(fā)病機(jī)制非常龐大，如今大多數(shù)學(xué)者以為與電重構(gòu)有關(guān)，電重構(gòu)機(jī)制還不太清楚。比來研究以為與細(xì)胞內(nèi)鈣離子的超負(fù)荷有關(guān)1，本研究不雅察房顫患者心房肌漿網(wǎng)ryandine受體RyR2RNA表達(dá)的改變，探究房顫引起心房電重構(gòu)的機(jī)制。1質(zhì)料與要領(lǐng)1.1一樣平常資料1999年9月-2000年6月住院并擔(dān)當(dāng)開胸?fù)Q瓣手術(shù)患者的風(fēng)心病二尖瓣局促38例此中33例泉源于南京醫(yī)科大學(xué)第一隸屬病院胸外科，男16例，女22例，年事277048.60511.732歲。A組：

3、竇性心律13例；B組：陣發(fā)性房顫2例，連續(xù)性房顫小于6個(gè)月6例；組：為房顫連續(xù)時(shí)間凌駕6個(gè)月者17例。術(shù)前通例行EG、UG等查抄，部門患者行冠脈造影術(shù)去除冠心病大概；術(shù)中全部患者都行中央靜脈壓右心房壓、部門患者行肺動(dòng)脈契壓監(jiān)測。全部患者心成效均在級NYHA尺度且近1月內(nèi)未服用過鈣離子拮抗劑。1.2要領(lǐng)外科手術(shù)時(shí)切取右心耳和右心房各100g構(gòu)造用TrizlGib公司消費(fèi)法提取構(gòu)造總RNA，經(jīng)紫外分光光度儀闡發(fā)A260/A280，全部標(biāo)本均1.8。取5g總RNA逆轉(zhuǎn)錄試劑盒由美國Prega公司消費(fèi)，DNA產(chǎn)物作GAPDH及RyR2RNA模板的濃度和循環(huán)梯度周期曲線，確定各自反響體系?？偡错戵w系50

4、L，包羅10Buffer5L，10l/LdNTP4L，25l/Lgl23L，Taq酶2.5U，另含模板及上卑劣引物。反響條件：RyR2：943in、941in、6130s、721in，38個(gè)循環(huán)，725in；IP3R1：945in、9430s、5530s、721in，35個(gè)循環(huán)，725in；GAPDH：9445s、5945s、721in，32個(gè)循環(huán)，725in。取擴(kuò)增物各10L在1.5%瓊脂糖上電泳，電壓80V/，電流40A，時(shí)間60in，然后在Gel1000凝膠成像體系Bi-Rad公司產(chǎn)物上掃描，測SEAA、RyR2和GAPDH條帶的A值比。電泳條帶接納、純化后送DNA序列闡發(fā)。1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)

5、闡發(fā)各組數(shù)據(jù)以xs表現(xiàn)，組間比力用t查驗(yàn)，P0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，利用exel統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件。2效果以100bpPlusLadder為arker，在540bp見清楚的擴(kuò)增條帶，DNA測序證明為RyR2的編碼基因片斷。房顫者RyR2程度上調(diào)，與房顫連續(xù)時(shí)間無關(guān)，心房差異部位差異無明顯性。肌漿網(wǎng)鈣開釋基因RNA表達(dá)與年事、性別、左/右房大孝右心房壓力、肺動(dòng)脈契壓、二尖瓣的面積等參數(shù)無關(guān)相干性查驗(yàn)P值均大于0.05，見表1。3討論房顫能引起心房肌L型a2+通道基因RNA表達(dá)改變。有資料表白2，房顫能引起心房肌漿網(wǎng)a2+-ATP酶RNA表達(dá)變革落落，但肌漿網(wǎng)RyR2受體RNA變革效果不同等。Lai等研究創(chuàng)

6、造，房顫者RyR2受體無改變，而hkusa3等卻創(chuàng)造房顫連續(xù)6個(gè)月以上者，RyR2RNA和RyR2的a2+最大結(jié)合量均低落，本研究創(chuàng)造房顫者RyR2RNA表達(dá)上調(diào)。差異學(xué)者的研究效果不同等，大概與選擇病例的臨床特性如底子心臟并血活動(dòng)力學(xué)狀態(tài)以及患者的術(shù)前用藥差異有關(guān)。有人以為心房機(jī)器擴(kuò)張能引起心機(jī)電生理特性改變。房顫的連續(xù)存在能引起原發(fā)病的加重、血活動(dòng)力學(xué)的不不變和心房擴(kuò)張。但本研究創(chuàng)造RyR2RNA表達(dá)與年事、性別、右心房大孝中央靜脈壓力、肺動(dòng)脈楔壓、二尖瓣口面積等臨床參數(shù)無關(guān)。房顫不但改變心房有用不該期ERP的絕對值，并且通過某種機(jī)制改變ERP在空間布局上的離散能引起心房傳導(dǎo)和去極化的不勻

7、稱，促使心房電重構(gòu)，因此是房顫產(chǎn)生和維持的緊張因素4。但本研究創(chuàng)造房顫患者心房差異部位RyR2的RNA表達(dá)程度無顯著差異。細(xì)胞內(nèi)游離a2+重要貯存于肌漿網(wǎng)中，別離由IP3R體系和RyR2體系操縱a2+開釋。RyR2受體有三個(gè)亞型，存在于心肌的重要是RyR2，當(dāng)細(xì)胞膜上電壓依從性鈣通道開放，少量a2+內(nèi)流，a2+與RyR2上的a2+結(jié)合點(diǎn)位結(jié)合，而觸發(fā)肌漿網(wǎng)開釋a2+，這種a2+誘發(fā)IR的正反響機(jī)制是RyR2體系觸發(fā)a2+開釋的特性。比來外洋有報(bào)道血管告急素轉(zhuǎn)化酶按捺劑AEi及At1受體拮抗劑等能逆轉(zhuǎn)房顫模子的電重構(gòu)和布局重構(gòu)，但其機(jī)制尚不清楚，本課題的下一步將進(jìn)一步舉行探究?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】1AusaJ,ijffels,ThneF,etal.StruturalhangesfatrialyardiuduetsustainedatrialfibrillatininthegatJ.irulatin,1997,96:3157-31632,NattelS,etal.Ipprtanefrefratrinesshetergeneityint