推拿加功能訓(xùn)練對(duì)膝骨關(guān)節(jié)炎家兔模型關(guān)節(jié)液中自由基的影響

1、推拿加功能訓(xùn)練對(duì)膝骨關(guān)節(jié)炎家兔模型關(guān)節(jié)液中自由基的影響【摘要】目的觀察推拿加功能訓(xùn)練對(duì)膝骨關(guān)節(jié)炎家兔模型關(guān)節(jié)液中超氧化物歧化酶SD、丙二醛DA和一氧化氮N的影響，討論推拿加功能訓(xùn)練治療膝骨關(guān)節(jié)炎的機(jī)制。方法將新西蘭大白兔40只隨機(jī)分為空白對(duì)照組(A組)、模型對(duì)照組(B組)、電針治療組(組)、推拿加功能訓(xùn)練治療組D組。除A組外，B，D組動(dòng)物造模。造模后，A組和B組正常飼養(yǎng),不處理；組給予電針治療；D組采用手法加功能訓(xùn)練治療，連續(xù)治療21d。結(jié)果推拿加功能訓(xùn)練和電針治療組連續(xù)治療3周，均可以顯著降低關(guān)節(jié)液中DA和N的含量，升高SD的活性，與模型對(duì)照組比擬有顯著性差異(P0.05)；推拿加功能訓(xùn)練組

2、處理前后比擬有顯著性差異(P0.05)。結(jié)論推拿加功能訓(xùn)練和電針治療可通過降低膝骨關(guān)節(jié)炎關(guān)節(jié)液中DA和N的含量，升高SD活性，抑制了膝骨關(guān)節(jié)炎中過多的自由基對(duì)軟骨細(xì)胞的破壞，進(jìn)步了氧自由基的去除才能，從而發(fā)揮對(duì)骨關(guān)節(jié)炎的防治作用?！娟P(guān)鍵詞】膝骨關(guān)節(jié)炎推拿加功能訓(xùn)練自由基Keyrds：Kneestearthritis；assage；Freeradial膝骨關(guān)節(jié)炎(Kneestearthritis，KA)主要病變?yōu)橄リP(guān)節(jié)軟骨退行性變和繼發(fā)性骨質(zhì)增生,是臨床中常見的關(guān)節(jié)疾病，好發(fā)于中老年人。近年來(lái),臨床上不斷有報(bào)道針灸、推拿加功能訓(xùn)練及針刀等方法治療膝骨關(guān)節(jié)炎獲得較好療效1。許多研究說明，自由基參與

3、骨關(guān)節(jié)炎的發(fā)生和開展，為其重要病因之一。本實(shí)驗(yàn)觀察推拿加功能訓(xùn)練對(duì)膝骨關(guān)節(jié)炎家兔模型關(guān)節(jié)液中自由基SD，DA和N含量的變化,旨在證實(shí)推拿加功能訓(xùn)練治療膝骨關(guān)節(jié)炎的療效，討論膝骨關(guān)節(jié)炎的發(fā)病機(jī)理以及推拿加功能訓(xùn)練治療骨關(guān)節(jié)炎的機(jī)理。1材料與方法1.1動(dòng)物安康新西蘭大白兔40只(從重慶醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物中心購(gòu)置)，雌雄各半，雌無(wú)孕，體重2.02.5kg。隨機(jī)分為空白對(duì)照組A、模型組B、電針治療組和推拿加功能訓(xùn)練治療組D，每組10只。B，D組造模成功后，D兩組每只每日分別給予電針或推拿加功能訓(xùn)練治療1次。1.2藥品及試劑SD，DA和N試劑盒從南京建成生物工程研究所購(gòu)置。離心機(jī)(中佳公司,KD-2046型，

4、35004000r/in，離心10in)和推拿加功能訓(xùn)練儀(廣東省汕頭市醫(yī)用設(shè)備廠,6805-)等。1.3動(dòng)物模型實(shí)驗(yàn)動(dòng)物同等條件下穩(wěn)定飼養(yǎng)7d后，B，D組按照膝關(guān)節(jié)石膏制動(dòng)法造模。先剪去所有動(dòng)物左后肢踝關(guān)節(jié)以上的兔毛，用管型石膏將其左后肢伸直位固定，石膏外以透明膠紙封好，以防兔撕咬，假設(shè)石膏松動(dòng)或脫落者及時(shí)重新固定2。1.4組織學(xué)檢查分別于造模成功后和治療完畢后隨機(jī)從B，D各組中抽出一只家兔處死，處死后立即切取家兔脛骨平臺(tái)內(nèi)側(cè)關(guān)節(jié)面的完好軟骨及軟骨下骨組織標(biāo)本，用10的甲醛溶液固定48h，脫鈣23d，石蠟縱向包埋固定，常規(guī)切片，HE染色。觀察滑膜與軟骨的病理變化3。1.5關(guān)節(jié)液中SD，DA和

5、N的測(cè)定分別于造模成功后和治療完畢后，采集A，B，D4組動(dòng)物的關(guān)節(jié)液，獲得4組動(dòng)物膝關(guān)節(jié)沖洗液，回收量0.40.6l，平均0.5l，經(jīng)離心后,取上清液于-20低溫冰箱中保存待測(cè)。詳細(xì)方法：施行膝關(guān)節(jié)穿刺，證實(shí)刺入關(guān)節(jié)腔后，注入0.9%的生理鹽水0.5l，反復(fù)回抽、注入3次后，再盡量抽出腔內(nèi)液體。抽取關(guān)節(jié)液后，每只兔肌注2萬(wàn)u慶大霉素，以防膝關(guān)節(jié)感染4。采集標(biāo)本后,用黃嘌呤氧化酶法(羥胺法)測(cè)定SD活力，硫代巴比妥(TBA)法在532n波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度以測(cè)定DA，用硝酸復(fù)原酶法測(cè)定N，操作分別按試劑盒說明書進(jìn)展。1.6針刺方法組于造模成功后，參照?實(shí)驗(yàn)針灸學(xué)?5與?動(dòng)物針灸學(xué)?6勸血海、梁丘、陽(yáng)

6、陵泉和足三里4個(gè)穴位，以30號(hào)、1寸毫針針刺，直刺或斜刺2030，得氣后，針柄接電針儀治療，每次留針25in，1次/d，連續(xù)治療21d。正常組、模型組正常飼養(yǎng)。推拿加功能訓(xùn)練治療組(D組)：每天用按摩、揉捏、點(diǎn)壓、分筋、理筋等手法以松解股四頭肌，順逆時(shí)針旋揉髕骨，再作內(nèi)旋內(nèi)收、外展外旋、屈伸髖和膝關(guān)節(jié)各5次，15in/次，最后平地趕跑100。1.7圖像分析將各組中動(dòng)物的病理切片，放在光學(xué)顯微鏡下進(jìn)展圖像分析。觀察軟骨和滑膜的病理改變。2結(jié)果2.1病理切片觀察造模后隨機(jī)從各組中取出一只動(dòng)物處死,解剖A組動(dòng)物,肉眼觀察膝關(guān)節(jié)面光滑呈淡藍(lán)色；B，D組動(dòng)物關(guān)節(jié)軟骨面粗糙呈黃色，邊緣骨質(zhì)破壞，有骨贅增生

7、。病理切片采用HE染色，觀察發(fā)現(xiàn)A組動(dòng)物關(guān)節(jié)滑膜無(wú)增厚，軟骨細(xì)胞排列均勻，無(wú)增生，軟骨邊緣光滑；B，D組關(guān)節(jié)滑膜增厚，有炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，軟骨細(xì)胞排列不均，邊緣破壞，粗糙不平，有軟骨細(xì)胞增生。見圖12。2.2處理前后各組關(guān)節(jié)液中SD，DA和N含量的測(cè)定結(jié)果見表13。表1治療前后各組關(guān)節(jié)液中SD的活性比擬從表1可以看出，造模后B，D組關(guān)節(jié)液中SD的活性均呈較低，與A組比擬有顯著性差異(P0.05)。，D組處理前后有顯著性差異(P0.05)。A，B組處理前后比擬無(wú)顯著性差異(P0.05)。治療后D組關(guān)節(jié)液中SD的活性升高，與B組比擬有顯著性差異(P0.05)，說明推拿加功能訓(xùn)練治療能升高骨關(guān)節(jié)炎關(guān)節(jié)液

8、自由基SD的活性，進(jìn)步了氧自由基的去除才能，抑制氧自由基對(duì)軟骨細(xì)胞的破壞，從而起到防治膝骨關(guān)節(jié)炎的作用。表2治療前后各組關(guān)節(jié)液中DA的含量比擬表3治療前后各組關(guān)節(jié)液中N的含量比擬與空白對(duì)照組比擬，P0.05；與模型對(duì)照組比擬，P0.05；與治療前后比擬，#P0.05；n=9從表23可以看出，造模后,B，D組動(dòng)物關(guān)節(jié)液中DA和N的含量明顯升高，與A組比擬有顯著性差異P0.05。，D組治療前后比擬有顯著性差異P0.05。治療后，D組關(guān)節(jié)液中DA和N的含量均降低，與B組比擬有顯著性差異(P0.05)，說明推拿加功能訓(xùn)練治療膝骨關(guān)節(jié)炎能降低關(guān)節(jié)液中自由基DA和N的含量，阻止了氧自由基對(duì)軟骨細(xì)胞的破壞，

9、從而起到防治膝骨關(guān)節(jié)炎的作用。3討論3.1關(guān)于動(dòng)物模型本實(shí)驗(yàn)采用膝關(guān)節(jié)石膏制動(dòng)造模方法，膝關(guān)節(jié)長(zhǎng)期固定，導(dǎo)致關(guān)節(jié)應(yīng)力改變。制動(dòng)建立的膝骨關(guān)節(jié)炎動(dòng)物模型，在組織學(xué)及生化改變等方面酷似臨床所見的膝骨關(guān)節(jié)炎，其機(jī)理主要在于7，兔膝關(guān)節(jié)伸直位固定時(shí)，由于限制了關(guān)節(jié)的運(yùn)動(dòng)，跨越關(guān)節(jié)的肌肉、關(guān)節(jié)囊持續(xù)收縮，使關(guān)節(jié)面的壓力增加，同時(shí)異常壓力狀態(tài)下粘蛋白、透明質(zhì)酸的成分減少，導(dǎo)致關(guān)節(jié)面的機(jī)械磨損；滑膜與軟骨的粘連影響了軟骨細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)的攝取，軟骨細(xì)胞發(fā)生退變；關(guān)節(jié)部分血流滯緩，骨內(nèi)壓增高。3.2自由基SD，DA和N與膝骨關(guān)節(jié)炎的關(guān)系國(guó)內(nèi)外學(xué)者認(rèn)為膝骨關(guān)節(jié)炎是一種以關(guān)節(jié)軟骨退變?yōu)橹行牡牟±砭C合征。關(guān)節(jié)軟骨是由維持功

10、能的基質(zhì)及軟骨細(xì)胞組成，軟骨基質(zhì)的合成與降解平衡受著多種因素的調(diào)控，其中SD，DA和N等活性分子起著重要作用。目前已有很多實(shí)驗(yàn)證實(shí)該類自由基是引起關(guān)節(jié)軟骨退變及關(guān)節(jié)滑液改變的重要原因8。SD是超氧陰離子的去除劑，DA為脂質(zhì)過氧化的產(chǎn)物，兩者是檢測(cè)機(jī)體血氧自由基程度的常用配對(duì)指標(biāo)。SD活力的上下間接反映機(jī)體去除氧自由基的才能，DA含量的上下又間接反映了機(jī)體細(xì)胞受自由基攻擊的嚴(yán)重程度，二者可作為動(dòng)態(tài)評(píng)價(jià)A防治效果的客觀指標(biāo)。A病理狀態(tài)下氧自由基含量增高，過量的氧自由基可抑制軟骨細(xì)胞的增殖，引起軟骨細(xì)胞死亡，抑制軟骨基質(zhì)蛋白多糖和膠原的合成，加速軟骨基質(zhì)的降解，導(dǎo)致軟骨損傷。N是一種較小的生物活性分

11、子，在人體內(nèi)以相對(duì)特異的方式控制多種細(xì)胞功能。研究證明，在某些炎性因子如白介素1IL-1和腫瘤壞死因子TNF-等刺激下關(guān)節(jié)內(nèi)更易產(chǎn)生大量的N，抑制軟骨基質(zhì)蛋白聚糖的合成，促進(jìn)軟骨基質(zhì)中蛋白聚糖和膠原蛋白降解，抑制軟骨基質(zhì)的合成才能，通過N依賴通路和促凋亡基因Fas介導(dǎo)的非N依賴通路誘導(dǎo)軟骨細(xì)胞凋亡9。3.3推拿治療膝骨關(guān)節(jié)炎的機(jī)理討論膝關(guān)節(jié)骨關(guān)節(jié)炎屬于中醫(yī)“痹證范疇，為本虛標(biāo)實(shí)之證。中醫(yī)推拿著眼于骨運(yùn)動(dòng)與軟組織松解，以骨運(yùn)動(dòng)為主，側(cè)重于松解膝關(guān)節(jié)周圍軟組織的粘連。推拿患部可使毛細(xì)血管擴(kuò)張開放，改善部分血液循環(huán)促進(jìn)淋巴循環(huán)和水腫增加肌肉神經(jīng)的營(yíng)養(yǎng)供應(yīng)，加強(qiáng)軟骨組織自身的吸收泵作用，緩解肌肉痙攣，

12、消炎鎮(zhèn)痛，從而進(jìn)一步改善膝關(guān)節(jié)功能和關(guān)節(jié)積液的逐漸吸收。推拿手法功能訓(xùn)練可以驅(qū)邪止痛、益氣行血、疏經(jīng)通絡(luò)，通過對(duì)髕骨抱揉和膝關(guān)節(jié)被動(dòng)屈伸可以起到松解粘連、擴(kuò)大關(guān)節(jié)間隙和滑利關(guān)節(jié)的作用10。實(shí)驗(yàn)說明，模型對(duì)照組動(dòng)物治療前后氧自由基去除劑SD活性降低，而DA的含量升高，說明整個(gè)KA病變過程中始終存在著氧自由基對(duì)模型動(dòng)物的損害。推拿加功能訓(xùn)練組，治療后自由基去除劑SD的活性顯著進(jìn)步，DA的含量顯著降低，從而防止了氧自由基及其代謝產(chǎn)物對(duì)部分的損害，說明推拿加功能訓(xùn)練和手法治療可在一定程度上降低骨關(guān)節(jié)炎關(guān)節(jié)液中氧自由基含量，間接對(duì)關(guān)節(jié)組織起到保護(hù)作用，為該推拿加功能訓(xùn)練應(yīng)用于A的防治提供可靠的實(shí)驗(yàn)根據(jù)。

13、【參考文獻(xiàn)】1俞杰,明順培.針灸治療膝骨性關(guān)節(jié)炎近況J.針灸臨床雜志,2001,17(3)：55.2汪青春，沈培芝，王海彬.骨關(guān)節(jié)炎動(dòng)物模型的建立與選擇J.中醫(yī)正骨，1998，10(3)：93.3江中潮，何洪陽(yáng)，劉罡，等.骨生注射液對(duì)實(shí)驗(yàn)性骨性關(guān)節(jié)炎家兔血漿SD和DA的影響J.中國(guó)骨傷,2022，1710：593.4龔權(quán)，程傳國(guó).藥物針刀療法對(duì)兔膝骨性關(guān)節(jié)炎軟骨細(xì)胞凋亡的影響J.中華實(shí)用中西醫(yī)雜志,2022,174:3722.5李忠仁.實(shí)驗(yàn)針灸學(xué).北京:中國(guó)中醫(yī)藥出版社,2022：314.6胡元亮.實(shí)用動(dòng)物針灸手冊(cè).北京:中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社,2022：288.7聶林，張學(xué)義，陳因瑞，等.骨關(guān)節(jié)炎的動(dòng)物