復(fù)旦大學(xué)醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)實驗課件05遺傳病分析2:細(xì)胞內(nèi)微核的檢測_第1頁
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實驗(3)遺傳病分析2細(xì)胞內(nèi)微核的檢測細(xì)胞內(nèi)微核的檢測原 理 環(huán)境中有害物質(zhì)可導(dǎo)致細(xì)胞中染色體或紡錘體的損傷,產(chǎn)生的染色單體或無著絲粒染色體片斷在細(xì)胞分裂末期滯留于子細(xì)胞胞質(zhì)中,形成微核。原 理 本實驗選用培養(yǎng)細(xì)胞,用環(huán)磷酰胺作誘導(dǎo)劑(射線、順鉑等) ,促使細(xì)胞中染色體斷裂,產(chǎn)生微核。 微核經(jīng)Giemsa染色后呈紫紅色,胞質(zhì)被染成淡灰藍(lán)色。器材與試劑顯微鏡、載玻片、染色缸、滴管等培養(yǎng)細(xì)胞(小蓋片) 甲醇固定液PBS(pH7.4)Giemsa應(yīng)用液(臨用現(xiàn)配) Giemsa原液:PBS1:9混合而成。操 作 培養(yǎng)細(xì)胞(小蓋片)加環(huán)磷酰胺1mg/mlPBS洗滌3次甲醇固定5minGiemsa染色5min自來水沖洗顯微鏡下觀察計數(shù)24h微核的計算 先用低倍鏡粗檢,后用高倍鏡,選擇細(xì)胞分布均勻,細(xì)胞無損,著色適當(dāng)?shù)膮^(qū)域,計數(shù)。 每張玻片計數(shù)100-200個細(xì)胞,按“1”計算微核的出現(xiàn)率,微核計數(shù)以“細(xì)胞”為單位,即一個細(xì)胞中出現(xiàn)2個或2個以上微核時,只按“1”計算。結(jié) 果 微核大多數(shù)呈單個圓形,邊緣光滑整齊,嗜色性與核質(zhì)相一致,呈紫紅色或藍(lán)紫色。 注意事項正確掌握微核的形態(tài)特征,避免

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