菌種制及保藏課件

1、概念 ：食用菌、大型真菌、蘑菇、蕈（菌）食用菌（edible fungi）：是指可供人類食用的大型真菌，通稱蘑（mushroom）。蕈菌：中國古代把生長在木上的蘑菇稱作“菌”，而把土中生長的稱作“蕈”。由于“蕈”在漢語里有泛指能產(chǎn)生子實體的大型真菌之義，故現(xiàn)在也常將蘑菇稱為“蕈菌”。日文漢字中則用“菌蕈”作為蘑菇的同義詞。第一節(jié) 引言一、菌種學(xué)研究的對象與任務(wù)菌種(Spawn )：經(jīng)人工培養(yǎng) 并進行擴大繁殖，可用于生產(chǎn)的菌絲體。在蘑菇（蕈菌）學(xué)英文文獻中，在談及菌種問題時，常用Spawn一詞。Spawn一詞在韋氏(Wabsters)大辭典中的定義為：“真菌的菌絲體，尤指食用蘑菇的用以進行繁殖的

2、菌絲體?！币虼耍⒐綄W(xué)中的所謂菌種，系指在適宜基質(zhì)上發(fā)育良好并已充分蔓延，可用作蘑菇生產(chǎn)的種源的菌絲體。從廣義上講: 菌種，顧名思義，就是微生物的可作進一步擴大繁殖之用的種子。根據(jù)各類微生物的特點，可以選用不同發(fā)育階段的菌體作為菌種。 例如：細菌是形態(tài)簡單，多以裂殖方式進行繁殖的微生物，常直接用營養(yǎng)體作為菌種，放線菌常用孢子作為菌種，而異宗結(jié)合蕈菌（大型真菌）的單核菌絲體一般不具備結(jié)實能力，所以必須采用具結(jié)實能力的雙核菌絲體作為生產(chǎn)用種。菌種學(xué)：食用菌菌種學(xué)是研究食用菌菌種生產(chǎn)、保藏及應(yīng)用的原理和技術(shù)的科學(xué)。 菌種學(xué)是一門實踐性很強的學(xué)科，其任務(wù)在于：1.探明在保持優(yōu)良菌種原有種性的條件下，擴

3、大繁育菌種的有效途徑和基本原理；2.探討并完善適合生產(chǎn)力發(fā)展需要的菌種制作、保藏及合理應(yīng)用的一系列技術(shù)與方法；3.指導(dǎo)制種實踐，不斷提高食用菌制種及栽培的技術(shù)水平和生產(chǎn)水平。二、菌種制作技術(shù)發(fā)展簡史 古代勞動人民在長期的生產(chǎn)實踐中。很早就開始在菌種保存和利用方面進行探索。在我國，一千四百多年前北魏賈思勰所著齊民要術(shù)中，已有關(guān)于制曲法的詳細記載。從微生物學(xué)觀點來看，曲既是發(fā)酵的種子或釀造的酶制劑，也是以干燥形式保藏釀造用的微生物制品。 我國是最早利用天然基質(zhì)上的食用菌菌絲體、子實體或空中散布的孢子作菌種進行半人工栽培的國家。 唐代韓鄂所著四時纂要中記載了“種菌子”的方法：“取爛構(gòu)木及葉，于地埋之

4、。常以泔澆令濕，兩三日即生?！边@是利用已長有構(gòu)菌即金針菇的菌絲體的構(gòu)木進行金針菇栽培的最早記載。 從法國路易十四(1683-1715）蘑菇栽培的初始階段到現(xiàn)在，雙孢蘑菇的栽培已達三個多世紀，在這漫長的歷史過程中，雙孢蘑菇菌種的制作技術(shù)經(jīng)歷了三個主要階段(郭德章，1994)。 1天然菌種階段 在蘑菇栽培的初期，法國菇農(nóng)采用從長過蘑菇的草地中挖取的土塊或廄肥作為菌種進行蘑菇栽培。這種天然菌種可靠性很差，因此這個時期的蘑菇生產(chǎn)常常面臨著失敗的威脅。2.粗放式菌種階段 這個階段曾出現(xiàn)過兩種較有代表性的蘑菇菌種。 其一是將雙孢蘑菇菌絲移植到發(fā)酵過的堆肥中，待堆肥長透菌絲后，將之風(fēng)干制成片狀，稱之為“片狀

5、菌種(flake spawn)。這種片狀菌種曾在法國盛行一時，又稱法國菌種”。 十八世紀，雙孢蘑菇栽培傳入英國，英國人發(fā)明了另一種形式的菌種即所謂“磚式菌”(brick spawn)。其制作方法是將濕的極細的廄肥放入模子中壓成塊狀，按入蘑菇菌絲，長透后將之壓成碎塊，撒于菇床上。磚式菌種又稱“英國菌種”。 雖然這兩種菌種能較可靠地用于接種，但因為它們是粗放的、非純培養(yǎng)技術(shù)的產(chǎn)物，所以難免遭受病蟲侵染，蘑菇的單產(chǎn)仍然很低。這種粗放式菌種一直沿用到十九世紀末期顆粒菌種(granular spawn)： 1980年代，世界各地出現(xiàn)了許多人工工藝制成的顆粒型菌種培養(yǎng)基，其共同特點是：采用木屑、秸稈、堆肥

6、、塘泥、腐殖土等適合蘑菇生長的材料，經(jīng)粉碎后用機器壓制成均勻的顆粒用于制種因此用此法制得的菌種被稱之為顆粒菌種(granular spawn)。顆粒菌種具有透播性好，比麥粒菌種的抗高溫、抗氨性能強，保存時間長等優(yōu)點，又適于機械化生產(chǎn)，具有廣闊的發(fā)展前景。 “種駒”：在香菇制種方面，在木屑種誕生之后，又陸續(xù)出現(xiàn)了便于段術(shù)接種且可長途郵寄的木質(zhì)或人工培養(yǎng)料壓制而成的圓柱形菌種，日本人稱之為“種駒”。伴隨著各種新的、便于工廠化生產(chǎn)的種型的出現(xiàn)，菌種制作的機械化以至自動化程度愈來愈高，生產(chǎn)規(guī)模也日益擴大。菌種公司：質(zhì)量高、信譽好、規(guī)模大、機械化 目前，在歐，美，日等發(fā)達國家，菌種制作的整個過程，從原料

7、準備到滅菌處理，從環(huán)境控制到產(chǎn)品包裝，原來靠手工進行的各項操作，幾乎已完全由各種精巧的機械及自動控制的儀表所取代。同時，一個大區(qū)域以至整個國家的菌種供應(yīng)，由為數(shù)不多的幾家質(zhì)量高、信譽好、規(guī)模大的菌種公司所承攬，已日益成為一種普遍的趨勢小結(jié)：食用菌菌種發(fā)明年鑒1、雙孢菇菌種 1894年（法國），純種問世； 1902年，組織分離法獲得純種； 美國人制得瓶式菌種。 1932年，辛登(Sinden)發(fā)明了谷粒菌種(grain spawn)。谷粒菌種亦稱麥粒菌種。 2、香菇菌種 1935年,日本人(森喜 作)開始研制香菇木屑種 1942年，獲得成功這種挖瓶制塊的栽培方式手續(xù)繁瑣，頗為費時費力。人們從改革

8、制種容器入手，將瓶裝菌種改為袋裝菌種，進而取消“制塊”程序，將培養(yǎng)至生理成熟的“菌種袋”直接置條件適宜的田間或室內(nèi)出菇，這就是香菇的“菌筒栽培”或“人造菇木”栽培。因此可以說，香菇菌筒栽培是在菌種制作技術(shù)作相應(yīng)改革的基礎(chǔ)上才得以確立并逐慚完善的。 又如，雙孢蘑菇麥粒菌種的出現(xiàn)，解決了長期困擾菇農(nóng)的糞草菌種無法“透播” 的問題，由于麥粒菌種發(fā)育點大為增加，菌絲“走菌”均勻，徹底，產(chǎn)量比使用糞草菌種顯著增加，使蘑菇的栽培技術(shù)水平上了一個新臺階。 透播：是指將菌種均勻地分布到培養(yǎng)料中的接種方法。 菌種學(xué)的發(fā)展不僅對相關(guān)分支學(xué)科以至整個蕈菌學(xué)（蘑菇學(xué)）的發(fā)展發(fā)揮了積極作用，而且，作為一門實踐性很強，直

9、接為食用（蕈）菌業(yè)服務(wù)的學(xué)科，菌種學(xué)及菌種制作體系的發(fā)展也對蕈菌業(yè)的發(fā)展起著重要的推動作用。 食用（蕈）菌業(yè)能由數(shù)十年前很不起眼的農(nóng)村家庭副業(yè)發(fā)展成今天年總產(chǎn)值逾100億美元的全球性綜合產(chǎn)業(yè)，沒有規(guī)模日益增大，技術(shù)日臻完善的菌種制作體系，是不可想象的。 近20年來，我國的食用（蕈）菌栽培業(yè)發(fā)展十分迅速，在80年代初到80年代末的短短不到十年的時間里，迅速由一個在世界菇類總產(chǎn)中所占比重甚小的國家一躍而為占世界總產(chǎn)一半以上的頭號食用菌生產(chǎn)大國。這種突飛猛進的發(fā)展當然令人歡欣鼓舞。 但是，與此同時，我們還應(yīng)清醒地看到，如果就以單產(chǎn)為代表的栽培水平及以單價為代表的經(jīng)濟效益而論，我國與先進國家相比，還有

10、明顯差距。 例如： 荷蘭、法國的雙孢蘑單產(chǎn)達25-30公斤/m2，而我國的單產(chǎn)僅10公斤/m2左右。 香菇的國際市場售價，日本產(chǎn)品通?？杀戎袊a(chǎn)品高出二倍之多。 造成如此巨大的差距的原因固然很多，但我國的育種水平較低，制種質(zhì)量較差無疑是重要原因之一。為了使我國的食用菌生產(chǎn)在產(chǎn)量穩(wěn)居世界第一的條件下，在產(chǎn)品質(zhì)量、經(jīng)濟效益方面邁上一個新的臺階，努力推進包括菌種學(xué)在內(nèi)的各有關(guān)學(xué)科理論研究及實用技術(shù)水平的提高，是一個刻不容緩的任務(wù)四、菌種制作與食用菌栽培的關(guān)系 1、栽培需要菌種，從而促進制種技術(shù)的發(fā)展。 2、菌種技術(shù)的每一項革新都促進栽培的改進和提高。 3、提高EM育種水平和制種質(zhì)量，強化菌種生產(chǎn)與流

11、通管理，向更高、更新的目標邁進。第二節(jié) 生產(chǎn)場所及設(shè)備簡介一. 菌種廠的規(guī)劃與布局 菌種廠是從事蕈菌純培養(yǎng)菌種生產(chǎn)的場所。為了提高菌種的成品率，必須從籌建菌種廠起就注意到場地和建筑物規(guī)劃和布局的科學(xué)性。 菌種廠的規(guī)劃：所謂菌種廠的規(guī)劃指菌種廠籌建的規(guī)模大小，包括分期規(guī)模和最終規(guī)模，廠房位置的確定以及與建廠規(guī)模和制種工藝相適應(yīng)的投資設(shè)備，建筑物的設(shè)計及具體要求等。 菌種廠的布局：所謂布局是指根據(jù)所確定的生產(chǎn)規(guī)模和工藝流程，對廠房的各個部分及相應(yīng)的設(shè)備、配套設(shè)施等進行合理安排(一)、菌種廠規(guī)劃的基本原則 1 .以銷定產(chǎn)，設(shè)備配套 根據(jù)當?shù)剞耘嗟姆N類、資源及產(chǎn)品銷售行情確定菌種廠的規(guī)模，并按各季

12、菌種生產(chǎn)量規(guī)劃廠房各部分的面積，按各部分面積大小和生產(chǎn)量選擇適量的規(guī)格型號適宜的設(shè)備。 2 .有水有電，交通方便 菌種生產(chǎn)無菌操作的特點要求菌種廠有一個較為潔凈的周邊環(huán)鏡，因此菌種廠不宜設(shè)在人口稠密的居民區(qū)。但是，菌種廠也不宜設(shè)在過于偏僻的地方。無論是哪一級菌種廠，具備通水通電、交通方便這一基本條件，對于維持正常生產(chǎn)，擴大銷售，降低成本，都是必不可少的。1簡易菌種廠：這種菌種廠適宜建立在鄉(xiāng)鎮(zhèn)，年菌種生產(chǎn)量10萬瓶以內(nèi)。規(guī)劃時應(yīng)注意如下幾點：(1)每日菌種生產(chǎn)量應(yīng)與冷卻室、按種室，培養(yǎng)室的面積相適應(yīng)。沒有空調(diào)設(shè)備的鄉(xiāng)村菌種廠，其每日菌種生產(chǎn)量與冷卻室，接種室和培養(yǎng)室的適宜比例大約為500：5：l

13、：36。就是說，一個每日生產(chǎn)量為2000瓶(袋)的菌種廠，冷卻室約需日20m2，按種室約需4m2 ,培養(yǎng)室約需144m2。其中培養(yǎng)室內(nèi)需設(shè)置6層培養(yǎng)架，培養(yǎng)架占地面積為培養(yǎng)室總面積的65左右。(2)培養(yǎng)基制作、滅菌、冷卻、接種應(yīng)當一條龍流水作業(yè)。(3)冷卻室和接種室在條件不允許情況下可以兩室合用，冷卻后用塑料膜在室內(nèi)架起臨時接種室進行接種。(4)籌建菌種場時資金使用的重點應(yīng)放在滅菌、冷卻、接種三處的設(shè)備和室內(nèi)標準化設(shè)置上。(5)原料倉庫，特別是糧食類的原料倉庫應(yīng)當遠寓培養(yǎng)室、接種室和冷卻室，若有栽培場，也應(yīng)遠離以上各室，避免雜菌傳播。同時，倉庫曬場位置還應(yīng)選擇在接種、冷卻、培養(yǎng)室的東西方向。以

14、減少雜菌對以上各室的傳播機會。 2規(guī)范化菌種場： 所謂規(guī)范化菌種場是指嚴格地按微生物傳播規(guī)律建立起來的菌種場，它除了設(shè)備較齊全，人員素質(zhì)較好外，布局上嚴格按有菌區(qū)和無菌區(qū)劃分，無菌區(qū)又有高度無菌區(qū)和一般無菌區(qū)之分。其工藝特點是： (1)該工藝按培養(yǎng)基制作-滅菌-冷卻接種培養(yǎng)的程序流水作業(yè)。菌種場的建筑結(jié)構(gòu)：室內(nèi)要求水泥地面、四周墻壁潔凈，不易沾染霉菌孢子，不易吸濕。保持壁上干燥且便于沖洗?？諝膺^濾除菌設(shè)備是空氣凈化措施中采用的現(xiàn)代化設(shè)備，如實驗室常用的超靜工作臺、生物安全箱、無菌室等。即使空氣通過孔隙小于0.2m的高效過濾器，利用物理阻留、靜電吸附等原理除去介質(zhì)中的微生物，使無菌室或超靜工作臺

15、內(nèi)的空氣達到凈化的目的。(2)培養(yǎng)基制作室和其他倉庫實驗室為有菌區(qū)，冷卻室、按種室和培養(yǎng)室為無菌區(qū)，其中冷卻室、接種室為高度潔凈的無菌區(qū)，要求空氣凈化程度達到100級。不過，已有試驗表明，由于微生物的分生孢子、粉孢子、節(jié)孢子等的直徑比100級凈化所規(guī)定的塵埃粒子的直徑更小，所以即使達到了100級凈化標準，要進行有效的開放式接種，還需輔以其他設(shè)備（超凈工作臺）或者消毒措施。超凈工作臺潔凈度：00級按照國家標準，凡是達到0.5m的塵埃的量3.5粒/L時，空氣潔凈度為00級。表示環(huán)境中無塵無菌。在達到100級凈化標準的條件下，要進行有效的開放式接種，還需輔以其他設(shè)備（超凈工作臺、接種箱等） (3)滅

16、菌鍋應(yīng)是雙門的，一門與有菌區(qū)(培養(yǎng)基制作室)相通，另一門與無菌區(qū)(冷卻室）相通，雙門不能同時開放。(4)冷卻室、接種室要求作 水磨石或油漆地面，四周 墻壁和天花板油漆防潮， 安裝空氣過濾裝置。冷卻室 配備除濕和強制冷卻裝置。接種室配備分離式空調(diào)機。 (5)培養(yǎng)室要有足夠的空調(diào)裝置，保證高溫季節(jié)能正常生產(chǎn)。(6)工作人員必須具有一定微生物常識，經(jīng)過嚴格無菌操作訓(xùn)練，進入無菌區(qū)前須淋浴更衣。(7)菌種滅菌后的運輸工具一經(jīng)運出接種室，必須滅菌或消毒后，方可進入無菌區(qū)使用，其他工具或用品也應(yīng)如此。冷卻室、接種室、培養(yǎng)室均采用拉門結(jié)構(gòu)，減少開關(guān)式門扇啟動過程的空氣流通。整個無菌區(qū)要求密閉性能良好圖11-

17、4 瓶栽金針菇(8)保持冷卻室、接種室的氣壓為正值，其中接種室氣壓又要大于冷卻室，冷卻室大于緩沖室和培養(yǎng)室。(9)原料、特別是糧食類原料是許多雜菌的主要菌源，因此，原料倉庫應(yīng)遠離冷卻室、接種室和培養(yǎng)室。(10)培養(yǎng)試驗場與制種場應(yīng)當分開，不能同在一處或處于相距很近的地方。否則栽培場雜菌易傳入制種場。二. 菌種廠的基本設(shè)備及常用物品 一個合格的菌種廠除應(yīng)有合理的布局之外，還要配置必要的生產(chǎn)設(shè)備。生產(chǎn)設(shè)備的選型配套將決定菌種廠的生產(chǎn)能力，并與菌種質(zhì)量有密切關(guān)系。此外，菌種廠在日常生產(chǎn)中，要消耗大量玻璃器皿、塑料袋、消毒藥品等低值易耗品，注意選用質(zhì)量合格、價格適宜的這類物品，對于維持生產(chǎn)的順利進行，

18、降低成本，都有一定的意義。(一)、基本設(shè)備 裝料設(shè)備 1拌料機 拌料機是將木屑等原料加以攪拌混合的機械。它不僅能提高生產(chǎn)效率，而且可減少干料人工攪拌中的塵量并減輕勞動強度。目前我國福建等地推廣應(yīng)用較多的MJ-70型拌料機的主要技術(shù)指標是： (1）生產(chǎn)率 800-1000kgh。 (2)配套動力 3KW電動機。 (3)傳動方式 三級A型三角皮帶傳動。 2裝料機 裝料機是將已拌勻的培養(yǎng)料裝入制種容器的機械，具有結(jié)構(gòu)筒單，操作方便、功效高等優(yōu)點。有的裝料機僅具裝袋功能，有的則可裝瓶裝袋兩用。目前推廣應(yīng)用較多的ZDP-3型裝瓶裝袋兩用機的主要技術(shù)指標是； (1)生產(chǎn)率 300-400瓶h或400-50

19、0袋h。 (2)配套動力 750W單相電動機 。 (3)規(guī)格、重量 800600400mm，50kg.拌料機裝料機消毒、滅菌設(shè)備 在菌種制作過程中，必須對培養(yǎng)基、接種工具及其他用品、接 神室、培養(yǎng)室等工作場所進行可靠的滅菌或消毒。消毒、滅菌設(shè)備就是利用熱力、射線等 殺菌手段進行消毒或滅菌的設(shè)備。目前，一般菌種廠常用的消毒滅菌設(shè)備主要是用于培 養(yǎng)基、玻璃器皿滅菌的蒸汽或干熱滅菌器以及用于工作場所消毒的紫外線殺菌燈。1蒸汽滅菌設(shè)備 蒸汽滅菌設(shè)備是利用其產(chǎn)生的濕熱蒸汽進行滅菌的設(shè)備。根據(jù)所產(chǎn)生的蒸汽壓力及工作性能可分為如下兩類： (1)高壓蒸汽滅菌鍋 高壓蒸汽滅菌鍋是利用鍋內(nèi)高壓高溫蒸汽進行滅菌的設(shè)

20、備。 電熱高壓蒸汽滅菌鍋高壓蒸汽滅菌鍋(2)常壓蒸汽滅菌灶 目前，在我國部分鄉(xiāng)村菌種廠，由于受到電力供應(yīng)、設(shè)備投資 等條件的限制，高效、可靠的高壓蒸汽滅菌設(shè)備的使用尚末完全普及，自制的、用煤、柴 等作能源產(chǎn)生蒸汽進行滅菌的常壓蒸汽滅菌灶的應(yīng)用還比較普遍。滅菌灶用磚和水泥構(gòu)筑，盛水容器為直徑80-100cm的鐵鍋。灶體體積大小不等，容量1.53m3，可裝600-1000瓶。蒸汽工作壓力與蒸汽溫度的關(guān)系 高壓蒸汽滅菌：15psi=1.05kgf/c=103.4kPa =0.10MPa，121；20psi=1.41kgf/c=137.9kPa=0.14MPa，126；25psi=1.76kgf/c=

21、172.6kPa =0.17MPa，130；30psi=2.11kgf/c=206.8kPa=0.21MPa ，135； 常壓蒸汽滅菌： 1atm ， 100 設(shè)計的主要技術(shù)要求是: 灶體大小依生產(chǎn)規(guī)模而定，視需要配置1-2口盛水鍋。灶倉砌墻范圍比鍋的直徑寬20cm左右，灶倉內(nèi)墻壁用水泥精細粉刷，灶頂圓拱形，以使蒸汽冷凝水沿倉壁下流，防止打濕滅菌物品。 灶倉內(nèi)要有層架，以便分層裝入滅菌物品。 具有濕度測試裝置，一般放在灶體中部小門中間。 具有加水裝置及觀察或測試灶內(nèi)水量的裝置。 2干熱滅菌箱 干熱滅菌箱是利用箱內(nèi)加熱產(chǎn)生灼熱空氣進行滅菌的設(shè)備，主要用于吸管、培養(yǎng)皿等不宜灼燒，用時需保持干燥狀態(tài)

22、的玻璃器皿的滅菌。干熱滅菌箱也配有自動控溫裝置。加熱溫度在200以上的電熱恒溫干燥箱均可供干熱滅菌之用。 3紫外線燈 紫外線燈是接種室、接種箱等場所常用的消毒設(shè)備，可單獨應(yīng)用，也可與化學(xué)消毒劑配合使用。與遺傳育種中用于誘變時常采用低功率(15瓦左右)紫外燈不同，用于消毒時需采用較高功率的紫外線燈。菌種廠消毒用紫外線燈的功率通常為30-40瓦。 X射線、射線等電離射線雖可用于滅菌，但因這類射線的產(chǎn)生需要昂貴的專用設(shè)備，無法在菌種生產(chǎn)中應(yīng)用。微波滅菌技術(shù) 近年，在蕈菌生產(chǎn)中，還出出了一些用新的方法進行滅菌的嘗試。 例如，波長1000 m1000 mm電磁波（微波）的電場對微生物細胞中的水分子能產(chǎn)生

23、極化作用，極化后的水分子會隨微波電場方向的改變而轉(zhuǎn)動，在轉(zhuǎn)動過程中分于之間的高速摩擦產(chǎn)生熱能，這種熱能不同于外部加熱，可在物體本身的溫度權(quán)略微增加的情況下使微生物細胞暴破，從而達到滅菌的目的。電子消毒、滅菌技術(shù) 以“高效臭氧發(fā)生管”為核心部件的所謂電子消毒、滅菌器，利用高壓放電原理，使空氣中的氧電離，生成游離的氧原于，并與空氣中的氧結(jié)合形成臭氧氣體。臭氧是一種強氧化劑，具有強烈的氧化作用的臭氧迅速擴散并深入摻透到微生物細胞壁內(nèi)之后，能使菌體蛋白變性并破壞菌體的酶系統(tǒng)，從而使微生物細胞失去活力。 從理論上講，上述滅菌方法均不無道理，但總的說來，這些新的消毒、滅菌方法尚處于試驗、探索階段。一系列實

24、際問題，例如，其實際使用效果及適合范圍究竟如何，設(shè)備的結(jié)構(gòu)及功能應(yīng)作哪些改進等等，都有待在今后的實踐中研究解決。接種室及接種設(shè)備 1接種室 接種室是用于接種的無菌操作室 2接種箱 接種箱是一種由木質(zhì)箱體及可以啟閉的玻璃窗構(gòu)成的接種裝置制作筒便，造價低廉，由于體積較小，相同條件下空氣消毒的效果優(yōu)于接種室。 3超凈工作臺 超凈工作臺是一種通過過濾除去空氣中的塵埃使空氣凈化的裝置。超凈工作臺接種室與接種箱培養(yǎng)室及培養(yǎng)設(shè)備1培養(yǎng)室 培養(yǎng)室是對菌種進行保溫培養(yǎng)的房間。2. 培養(yǎng)箱 培養(yǎng)箱是培養(yǎng)試管菌種及其他供試驗研究用的少量菌種的常用設(shè)備. (二)、常用物品 除需上述基本設(shè)備外，菌種生產(chǎn)還需耗費大量多屬

25、低質(zhì)易耗類的物品。主要有如下幾種： 1制種容器 一級斜面菌種多用18180mm的試管，雙孢蘑菇、草菇菌種所用試管通常略微大些，20mm200mm即可. 二、三級菌種過去均采用750ml玻璃菌種瓶，由于玻璃菌種瓶有容易破損、運輸不便等缺點，直接供應(yīng)菇農(nóng)的三級栽培種有日慚改用塑料袋的趨勢. 2.消毒藥劑 3.接種工具第三節(jié) 生產(chǎn)流程與菌種類型一 .菌種生產(chǎn)流程 (一)、菌種生產(chǎn)的一般工藝流程 到目前為止，無論國內(nèi)還是國外，真正具有商業(yè)意義的各種菌種，基本上都是采用固體基質(zhì)培養(yǎng)制作的。由于將用一級斜面菌種擴制而得的二級菌種直接用于生產(chǎn)，通常在數(shù)量上難以滿足實際需要，所以往往需再行擴制一次，固此菌種生

26、產(chǎn)一般分三級進行。 1. 試管種的制作流程PDA分裝加棉塞滅菌(121 30min)擺斜面接種培養(yǎng)質(zhì)檢保藏冷卻至60 木屑(78%)麩皮(20%)石膏(1%)蔗糖(1%) 水適量(55%-65%) 裝瓶(袋)加棉塞滅菌冷卻接種培養(yǎng)質(zhì)檢二(三)級種的制作流程三、各級菌種的培養(yǎng)時間 1、試管種 7-10天 2、二級種 30-60天 3、三級種 30-60天枝條種裝瓶二(三)級種裝瓶利用周轉(zhuǎn)筐裝載菌種瓶（袋）滅菌(二)、全年菌種生產(chǎn)的分期安排 一般說來，歐美各國菌種生產(chǎn)廠家在制種所涉及的菇類、生產(chǎn)條件等方面，情況都比較相似，這是因為： 1 .歐美各國的菌種生產(chǎn)基本上是以雙孢蘑菇為單一對象的. 2無論

27、是蘑菇的栽培還是制種，機械化及環(huán)境條件自動控制的水平都日益提高，已很少受季節(jié)、氣候條件的制約。 3菌種生產(chǎn)不由成百上千的中小廠家分散生產(chǎn)，而由少數(shù)大公司集中壟斷。 相比之下，我國的菌種生產(chǎn)狀況要復(fù)雜得多，從而與上述歐美各國的情況形成了巨大的反差；1我國是世界上栽培食用菌的種類最多的國家。2 .我國的食用菌（蕈菌）栽培還處于以依靠自然氣溫為主的狀態(tài)，即使是菌種生產(chǎn)也在很大程度上無法完全擺脫氣侯條件的影響。3我國幅員遼闊，加之栽培主要依靠自然氣溫，使得同一菇類的接種期在不同地方可能相差頗大。 4我國的菌種生產(chǎn)尚處于大、中、小并存，以小型廠家為主的局面。不同地區(qū)以至同一地區(qū)不同檔次廠家之間，生產(chǎn)條件

28、相差很大。 在制定分期及全年的生產(chǎn)計劃時，應(yīng)注意如下幾點： 1. 及時制種,不違農(nóng)時. 2. 突出重點,統(tǒng)籌安排. 3. 忙閑有序,均衡生產(chǎn).全年菌種生產(chǎn)時間安排時間香菇2-4月8-9月木耳3-4月2-3月(春) 8-9月(秋)銀耳3-4月3-4月(春) 9-10月(秋)金針菇11-1月側(cè)耳類2-4月(春) 8-10月(秋)猴頭菇3-4月(春) 8-9月(秋)雙孢菇9-10月草菇6-8月 (華中) 4-10月(華南)名稱段木袋料二.菌種的分級與種型 (一)、菌種的分級 在中國的蕈菌生產(chǎn)中，菌種制作通常分三步進行。用自行分離或外購的試管菌種擴大繁殖而成的瓊脂斜面菌種稱為一級菌種。用一級種在木屑、

29、糞草等天然固體培養(yǎng)料上擴大繁殖而成的瓶(袋)裝菌種稱為二級菌種。用二級種擴大繁殖而成的直接用作栽培基質(zhì)的菌種體的菌種稱為三級菌種。由于歷史原因，在我國不少地方，習(xí)慣于將以上一、二、三級菌種分別稱為“母種”、 “原種”、 “栽培種”。與上述習(xí)慣稱謂不同，在中國食用菌栽培學(xué)(1988)等著作中，將上述一、二、三級菌種分別稱為“原種”、“母種”及“栽培種”。(二)、固體菌種與液體菌種 在菌種制作及栽培過程中都離不開各種各樣的培養(yǎng)基。培養(yǎng)基是人工配制的適合菌體生長繁殖的營養(yǎng)基質(zhì)。按照培養(yǎng)基制成后的物理狀態(tài)，可將其分為液體培養(yǎng)基和固體培養(yǎng)基。罐的清洗 斜面種子 培養(yǎng)基 空氣 一級種子 空氣壓縮機 空罐滅

30、菌 二級種子 滅菌 除水器 濾菌器無菌水洗 無菌空罐 發(fā)酵過程監(jiān)測 發(fā)酵 無菌空氣 放罐圖5-2 食用菌深層發(fā)酵的工藝流程 液體培養(yǎng)基是將營養(yǎng)成分加適量水配制成的培養(yǎng)基。液體培養(yǎng)基加一定量的凝固劑便成為固體培養(yǎng)基。在一級種生產(chǎn)過程中，在液體培養(yǎng)基中加入2的瓊脂做凝固劑制得的培養(yǎng)基即是一種常用的固體培養(yǎng)基。 除了加凝固劑的固體培養(yǎng)基外，一些天然固體基質(zhì)制成的培養(yǎng)基，通常也稱為固體培養(yǎng)基。例如培養(yǎng)香菇菌種用的木屑培養(yǎng)基就是這種類型的固體培養(yǎng)基。 用固體培養(yǎng)基和液體培養(yǎng)基制得的菌種相應(yīng)地分別稱之為固體菌種和液體菌種。 中國是產(chǎn)量位居世界第一的蕈菌生產(chǎn)大國，每年所需菌種及制作菌種的原料的數(shù)量都十分龐大

31、。固體菌種具有原料廉價易得、生產(chǎn)規(guī)模可靈活調(diào)整、菌絲體生產(chǎn)健壯、便于用戶對菌種質(zhì)量進行目測、貯存及長途運輸均較為方便等優(yōu)點，同時，各級菌種生產(chǎn)單位在長期實踐中，在固體菌種制作過程中的質(zhì)量控制及生產(chǎn)管理方面已積累了較豐富的經(jīng)驗。 因此，迄今為止，中國常見栽培蕈菌所使用的菌種基本上都是固體菌種。(三)菌種的種型1木屑種 指以含木質(zhì)素、纖維素較多的木屑為主要原料制作的菌種2糞草種 指以發(fā)酵或不發(fā)酵的糞草為主要原料生產(chǎn)的苗種。3谷粒種 指用大麥、小麥和黑麥等谷類作物籽粒作培養(yǎng)基生產(chǎn)的菌種。4木塊種 指用圓形、鍥形等形狀的小木塊為培養(yǎng)基制作的菌種，這種種型的菌種通常僅用于香菇、木耳等木腐菌的段木栽培。5

32、顆粒種 指以木屑、秸稈、堆肥等適宜材料用人工工藝制成顆粒型基質(zhì)后生產(chǎn)的菌種。近些年來顆粒種的生產(chǎn)工藝正日益完善，雖然目前尚未成為種主要的種型，但具有較廣闊的發(fā)展前景。第四節(jié) 培養(yǎng)基微生物在生長發(fā)育過程中，時刻都離不開吸收和利用各種必需的養(yǎng)料。培養(yǎng)基就是人工配制的適于某種菌類生長發(fā)育或代謝產(chǎn)物積累的營養(yǎng)基質(zhì)。營養(yǎng)生理特性不同的菌類，對培養(yǎng)基的要求也有所不同。只有根據(jù)培養(yǎng)對象的特性配制相應(yīng)的培養(yǎng)基，才能充分滿足其生長發(fā)育的需要。 同時，在菌種分離純化、接種培養(yǎng)的各個環(huán)節(jié)中，都經(jīng)常面臨著雜菌侵染的威脅。因此，對培養(yǎng)基、接種工具、接種場所、培養(yǎng)場所等進行有效的滅菌或消毒十分重要。 總之，配制營養(yǎng)豐富、

33、養(yǎng)分平衡，適合菌類生長發(fā)育的培養(yǎng)基，正確掌握并合理應(yīng)用消毒滅菌技術(shù)，都是菌種生產(chǎn)得以順利進行的不可缺少的條件。一、培養(yǎng)基的種類和配制原則 （一） 培養(yǎng)基的營養(yǎng)成分 像培養(yǎng)其他微生物的培養(yǎng)基一樣，蕈菌培養(yǎng)基中也含有維持其生長發(fā)育所必需的碳源、氮源、礦質(zhì)元素、生長因素等營養(yǎng)成分。不過在對各種不同營養(yǎng)物質(zhì)需要的數(shù)量和所能利用的程度上，蕈菌有自己的特性。1、碳源 碳源是蕈菌最重要的營養(yǎng)來源，它不僅是蕈菌合成菌體細胞必不可少的原料，而且是其生命活動的能量來源。 蕈菌不能利用單質(zhì)碳及二氧化碳、碳酸鹽等無機碳，而只能利用纖維素、半纖維素、淀粉、寡糖、單糖、果膠、有機酸、醇類等有機碳化物。在常見碳源中，單糖、

34、低分子的有機酸、醇等可直接利用，而纖維素、半纖維素、木質(zhì)素、淀粉、果膠等大分子化合物則必須經(jīng)相應(yīng)的酶分解為葡萄糖、阿拉伯糖、木糖、半乳糖、果糖等簡單糖類后，才能被吸收利用。 在蕈菌制種及栽培中，除有時直接用少量葡萄糖、蔗糖等簡單糖類外，碳源主要來自各種富含淀粉，纖維素，半纖維素、木質(zhì)素的植物性原料及農(nóng)、林副產(chǎn)晶，如馬鈴薯、秸稈、木屑、甘蔗渣等。 2、氮源 氮源是合成蛋白質(zhì)及核酸的重要原料。蕈菌不能直接利用氮氣。蛋白質(zhì)、氨基酸、尿素等有機氮化物是蕈菌的良好氮源，但蛋白質(zhì)這類高分子合氮化合物，需經(jīng)蛋白酶分解為氨基酸后方可利用。蕈菌也可利用氨、銨鹽等無機氮，但對硝酸鹽的利用通常較差，有些菇類如雙孢蘑

35、菇甚至完全不能利用。 對食用菌（蕈菌）而言，完全用無機氮作氮源是不適當?shù)摹Ｓ捎谵毎痪邆浜铣勺陨硭匦璧娜堪被岬哪芰?，某些必需氨基酸幾乎或完全不能由無機氮合成；有的即使能夠合成，也不能滿足菇類生長發(fā)育所必需的量。因此對蕈菌而言，完全用無機氮作氮源是不適當?shù)摹?不僅不同食用菌（蕈菌）對氮源的需要量可能有所不同，而且同一種蕈菌在營養(yǎng)生長(菌絲體階段)及生殖生長(子實體階段)所需氮量也不相同。一般食用菌（蕈菌）菌絲體階段對氮素的需要量高于子實體階段，在子實體階段，基質(zhì)中氮素含量過高，反而有礙子實體發(fā)育。碳、氮兩種元素的比例(C/N)要恰當為了使食用菌（蕈菌）能正常生長發(fā)育，培養(yǎng)基中除必須有充

36、足的碳、氮營養(yǎng)外，碳、氮兩種元素的比例(C/N)也要恰當。 例如，草菇營養(yǎng)生長階段適宜碳氮比約20：1,而生殖生長階段約為30-40：1。雙孢蘑菇堆肥的初始碳氮比以30-33：1為好。有利于于實體分化發(fā)育的碳氮比約為17：1。3.礦質(zhì)元素 蕈菌在生長發(fā)育過程中需要一定的礦質(zhì)營養(yǎng)。其中，磷、鉀、硫、鈣、鎂等“大量元素”的需要量較多，一般通過加入適量磷酸二氫鉀、磷酸氫二鉀、硫酸鈣(石膏)、硫酸鎂等無機鹽予以提供；而鐵、鈷、錳、鋅，硼籌“微量元素”的需要量甚微，由于自來水及作為培養(yǎng)基原料的農(nóng)副產(chǎn)品中通常含有足量的微量元素，一般不必另行添加。4.生長因素（維生素類物質(zhì)）食用菌（蕈菌）生長發(fā)育過程中，還

37、需要一些維生素、核酸、生長激素等具有特殊生理活性的復(fù)雜有機物。這類被稱作“生長因素”的物質(zhì)，雖需量甚微，但如果缺乏，會對蕈菌正常生長發(fā)育產(chǎn)生嚴重影響。請注意“生長因素”與“生物因素”的區(qū)別：雙孢蘑菇、銀耳等食用菌（蕈菌）生長發(fā)育過程中，還需要某些/某種“生物因素”（微生物）。 食用菌（蕈菌）所需的生長因素，以屬于B族維生素的硫胺素(維生素B1)、核黃素(維生素B2)以及吡哆醇(維生素B6的一種)以及生物素(維生素H)等較為重要。一般而言，蕈菌所需生長因素在馬鈴薯、酵母、麥芽、麥麩、米糠等植物性原料中含量比較豐富，配制培養(yǎng)基時通常不必另行添加。(二) 培養(yǎng)基的種類 為了適應(yīng)不同微生物或不同研究目

38、的的需要，人們發(fā)明、研制了多種多樣的培養(yǎng)基。不過，雖然不同配方的培養(yǎng)基為數(shù)眾多，但依據(jù)其成分、形態(tài)或用途，我們可以將數(shù)以百計的培養(yǎng)基歸結(jié)為幾種特定的類型。1 、按照對于培養(yǎng)基的組成物質(zhì)的化學(xué)成分是否完全了解，可將培養(yǎng)基分為合成培養(yǎng)基與天然培養(yǎng)基。 合成培養(yǎng)基是用化學(xué)成分完全了解的物質(zhì)制成的，如微生物實驗室中常用于培養(yǎng)一般真菌的查氏培養(yǎng)基就是一種合成培養(yǎng)基。合成培養(yǎng)基成分精確，試驗結(jié)果的重復(fù)性強，但價格昂貴，且菌類在這種培養(yǎng)基上生長緩慢。所以一般只適于在實驗室范圍內(nèi)做有關(guān)營養(yǎng)、代謝，菌種鑒定等工作時應(yīng)用。 天然培養(yǎng)基是指用化學(xué)成分還不清楚或化學(xué)成分不恒定的天然有機物制成的培養(yǎng)基。由于天然培養(yǎng)基取

39、材方便、價格低廉，所以除實驗室經(jīng)常應(yīng)用外，更適于在生產(chǎn)上大規(guī)模培養(yǎng)菌類時使用。半合成培養(yǎng)基是指在合成培養(yǎng)基中加入某種天然成分配制的培養(yǎng)基。斜面菌種培養(yǎng)中常用的馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)基（PDA）就是一種半合成培養(yǎng)基。2 按照培養(yǎng)基制成后的物理狀態(tài)，可將其分為液體培養(yǎng)基、固體培養(yǎng)基和半固體培養(yǎng)基。 液體培養(yǎng)基廣泛應(yīng)用于微生物的大規(guī)模工業(yè)化生產(chǎn)以及代謝生理等基礎(chǔ)研究。近些年來，雖然國內(nèi)外對液體培養(yǎng)在蕈菌制種中的應(yīng)用作過大量研究，進行了一些有益的嘗試，但由于存在若干有待解決的問題，至今尚未投入實際應(yīng)用。 液體培養(yǎng)基加一定量凝固劑便成為固定培養(yǎng)基。 比較理想的凝固劑應(yīng)具備如下條件： 不被微生物液化、分解和利用

40、 在菌類生長的溫度范圍內(nèi)保持固體狀態(tài) 凝固點的溫度對菌類無害 不因滅菌而被破壞，失去凝固性 配制方便，價格低廉 透明度好，粘著力強 與微生物實驗室中也有應(yīng)用的明膠、硅膠等凝固劑相比，瓊脂是最符合上述條件的凝固劑。在蕈菌斜面菌種生產(chǎn)中，通常都用瓊脂作凝固劑。 除了加凝固劑的固體培養(yǎng)基以外，一些天然固體基質(zhì)制成的培養(yǎng)基，通常也稱為固體培養(yǎng)基，例如，培養(yǎng)香菇菌種的木屑培養(yǎng)基，培養(yǎng)雙孢蘑菇菌種的麥粒培養(yǎng)基都屬于這種類型的固體培養(yǎng)基。半固體培養(yǎng)基：含較少量瓊脂(0.1%0.5%)的培養(yǎng)基稱為半固體培養(yǎng)基。半固體培養(yǎng)基在細菌運動觀察一類研究中應(yīng)用較多。在蜜環(huán)菌（天麻的伴生菌）菌種制作中也常用半固體培養(yǎng)基。

41、3 、 按照培養(yǎng)基的用途，可將培養(yǎng)基分為：基礎(chǔ)培養(yǎng)基、加富培養(yǎng)基、鑒別培養(yǎng)基、選擇性培養(yǎng)基等。 基礎(chǔ)培養(yǎng)基是指合某一類微生物所需基本營養(yǎng)成分的培養(yǎng)基，它常常作為其他特殊用途培養(yǎng)基的基礎(chǔ)成分，如PDA 。 加富培養(yǎng)基是指加有某些動、植物組織提取液等高營養(yǎng)成分的培養(yǎng)基，常用于培養(yǎng)某些營養(yǎng)需求比較特殊的微生物，也常用于富集混合的微生物群體中的某一種微生物，如PDA+VB1。 鑒別培養(yǎng)基在培養(yǎng)基中加入某種試劑或化學(xué)藥品，使不同微生物產(chǎn)生不同的反應(yīng)，借以將它們區(qū)別開來，這樣的培養(yǎng)基叫做鑒別培養(yǎng)基。 總的說來，在常規(guī)菌種生產(chǎn)中，與普通制種用培養(yǎng)基相比，上述三類特殊用途培養(yǎng)基的應(yīng)用較少，其中，鑒別培養(yǎng)基尤為

42、少用。鑒別培養(yǎng)基 麥芽提取物25g牛肉膏5g 25、21天每7天查一次，退色的瓊脂20g 為白腐不退色的褐腐 純凈水1000mL （白腐菌、褐腐菌鑒別培養(yǎng)基）加入0.007%龍膽紫由于某些擔(dān)子菌的活動，木材纖維素、木質(zhì)素因酶均被降解，導(dǎo)致木材的白色海綿狀外貌，如松栓菌導(dǎo)致白腐。由于某些擔(dān)子菌的活動，纖維素被降解,而褐色木質(zhì)素保留，木材易粉碎。如香菇、茯苓導(dǎo)致褐腐褐腐白腐 選擇性培養(yǎng)基是根據(jù)某一種或某一類微生物的特殊營養(yǎng)要求，或?qū)ξ锢怼⒒瘜W(xué)因素的抗性而設(shè)計的對特定對象具有選擇作用的培養(yǎng)基，如PDA+青霉素。 選擇性培養(yǎng)基在菌種分離、純化等工作中應(yīng)用較多。例如，青霉素、鏈霉素等抗菌素對細菌有抑制作

43、用，但對食用菌的生長發(fā)育并無妨礙。因此，在單孢分離或進行某些研究工作時，可加入青霉素、鏈霉素等抗菌素制成選擇性培養(yǎng)基，以排除細菌污染對工作的干擾。（三） 配制培養(yǎng)基的原則 要根據(jù)不同菇類的營養(yǎng)需要配制相應(yīng)的培養(yǎng)基 各種營養(yǎng)物質(zhì)要有適宜的濃度和配比 要使培養(yǎng)基能保持適宜的酸堿度 根據(jù)不同的培養(yǎng)目的選用相應(yīng)的培養(yǎng)基 此外，配制用于苗種生產(chǎn)或栽培的培養(yǎng)基，由于用量大，所用原料除應(yīng)能滿足菌類生長發(fā)育的需要外，還必須價廉易得，以便降低成本，提高經(jīng)濟效益。二、制種用培養(yǎng)基的制作 總的說來，就一級菌種所用的瓊脂斜面培養(yǎng)基的制作而言，蕈菌中所采用的方法與其他微生物中所采用的方法是基本相同的。但是，在其后的擴大

44、培養(yǎng)中，蕈菌菌種生產(chǎn)采用固體培養(yǎng)方式，而微生物工業(yè)發(fā)酵則采用液體培養(yǎng)途徑。生產(chǎn)方式的不同，導(dǎo)致培養(yǎng)基制作的技術(shù)和方法也不相同。下面將著重討論菌種生產(chǎn)中二、三級種培養(yǎng)基即母種、栽培種培養(yǎng)基制作中值得注意的一些問題。（一）常用培養(yǎng)基的配方 在菌種的分離純化、擴大繁殖及雜菌鑒定等工作中，需使用多種多樣成分、用途各不相同的培養(yǎng)基。（二）原料的選擇 母種、栽培種培養(yǎng)基多以植物性的農(nóng)、林、副產(chǎn)品為主要原料。在原料的選擇上應(yīng)注意如下幾點； 1、原料要新鮮、干燥 陳舊、潮濕的原料不僅容易滋生雜菌、螨類等有害生物，而且某些養(yǎng)分的含量也大為減少。例如，新鮮米糠含有大量維生素B1和煙酸，但陳舊的米糠中煙酸幾乎不再存

45、在。新鮮米糠含有相當數(shù)量的粗脂肪，在高溫。高濕條件下，存放一個月之后，即可分解，損失60%以上因此，除木屑有時可選用較陳舊的(如用于金針菇制種)之外，要力求選用新鮮、干燥的原料。 2、原料的質(zhì)量要符合要求 隨著加工方式及程度的不同，所得米糠及麥麩的質(zhì)量也不盡相同。米糠要用細糠，三七糠、統(tǒng)糠所含養(yǎng)分不足，不宜供配制培養(yǎng)基之用。麥麩有所謂紅、白麥麩之分，宜選用營養(yǎng)成分較豐富的紅麥麩。 3、原料的質(zhì)地、粒徑要適宜 原料的質(zhì)地及顆粒的粗細對培養(yǎng)基的質(zhì)量也有較大影響，應(yīng)根據(jù)實際情況合理選用。例如，在用糞草培養(yǎng)基培養(yǎng)蘑菇菌種時，宜用質(zhì)地較軟的大麥草。如用質(zhì)地堅硬、不易軟化、折斷的小麥草，菌絲長勢較差。分解

46、力較強的香菇、木耳，制種時可選用硬質(zhì)雜木屑，分解力較弱的餌耳，制種時宜選用易分解的軟質(zhì)闊葉樹木屑。木屑的顆粒不宜過細，以免通氣不良，影響菌絲生長。糞草培養(yǎng)基中，草料不宜過長，一般以切成3cm長的短草為宜。4、原料中應(yīng)不含有害物質(zhì) 松、杉，柏等針葉樹及樟樹、楠樹等闊葉樹木屑含有芳香油、醚等殺菌物質(zhì)，不宜使用。含有過多機油的木屑有礙菌絲生長，應(yīng)予剔除。（三）拌料與分裝 1、分類處理，攪拌均勻 2、控制水量，務(wù)求適宜 3、松緊適宜，裝量適度 (四) 培養(yǎng)基的滅菌 1、迅速裝料滅菌，減少雜菌自繁 2、分層放置，均勻透氣 3、旺火升溫。高溫足時 4、小心搬運，減少破損小結(jié)：培養(yǎng)基的類型及應(yīng)用 (一)、按

47、培養(yǎng)基的物理狀態(tài)分液體培養(yǎng)基、固化培養(yǎng)基和固體培養(yǎng)基 (二)、按營養(yǎng)物質(zhì)的成分；可分為天然培養(yǎng)基、半合成培養(yǎng)基和合成培養(yǎng)基 (三)、根據(jù)培養(yǎng)基的主料，可分為馬鈴薯培養(yǎng)基、玉米粉培養(yǎng)基、胡蘿卜培養(yǎng)基、果汁培養(yǎng)基、棉籽殼培養(yǎng)基、麥粒培養(yǎng)基、木屑培養(yǎng)基、木塊培養(yǎng)基、糞草培養(yǎng)基等。 幾個容易混淆的概念1.滅菌 ：采用物理或化學(xué)的方法，徹底殺滅一定范圍內(nèi)的物料及其容器中的一切微生物的過程，叫做滅菌。2.消毒：采用物理或化學(xué)的方法，消滅物體表面或環(huán)境中一部分微生物（有害微生物）的過程，叫做消毒。消毒也稱簡易非徹底的滅菌。在醫(yī)學(xué)上泛指對病原微生物的殺滅。3.殺菌：用物理或化學(xué)的方法殺死一定范圍內(nèi)（例如罐頭中

48、）的致病菌、產(chǎn)毒菌的過程，叫做殺菌。4.防腐：采取一定的措施，使處理對象保存更長的時間的過程，叫做防腐。 三、滅菌方法：(一)、常用的滅菌方法有物理滅菌和化學(xué)滅菌兩大類。 1、物理滅菌： 指用高熱、輻射、過濾等物理手滅除微生物的方法。 在食用菌科學(xué)研究和生產(chǎn)中，對培養(yǎng)基、工作衣等常用高壓蒸氣滅菌；金屬接種工具采用灼燒滅菌；玻璃器皿采用干熱滅菌。而對一些不耐溫、體積龐大的培養(yǎng)基和物品，常采用射線和紫外線等輻射滅菌。對熱不穩(wěn)定的生化藥品如酶制劑、維生素的水溶液等，則采用過濾除菌。 2、化學(xué)滅菌 ： 是采用酸、堿、酚、醇、重金屬、氧化還原劑、表面活性劑、染化學(xué)藥品，器皿進行浸泡滅菌對空間進行熏蒸滅菌

49、。 (二)、 培養(yǎng)基滅菌法：用熱力或其他方法，使培養(yǎng)基達到無菌狀態(tài)的方法。 經(jīng)過滅菌的培養(yǎng)基，要求養(yǎng)分不受破壞，并徹底滅菌。 這就要根據(jù)其物理形態(tài)、容器和設(shè)備的不同，選用相應(yīng)的方法滅菌。 根據(jù)培養(yǎng)基的物理形態(tài)、容器和設(shè)備的不同，選用相應(yīng)的方法滅菌。 1、固體培養(yǎng)基：可采用高壓蒸汽或常壓蒸汽滅菌。2、固化培養(yǎng)基：應(yīng)采用高壓蒸汽滅菌。3、液體培養(yǎng)基：瓶裝液體培養(yǎng)基的滅菌方法與固化類型培養(yǎng)基相同；發(fā)酵罐的液體培養(yǎng)基是采用通高壓蒸汽在罐內(nèi)直接滅菌；含熱不穩(wěn)定物質(zhì)的液體培養(yǎng)基，可采用過濾除菌法。（三）消毒劑：具有殺菌能力的化學(xué)藥物叫做消毒劑，亦稱殺菌劑。食用菌生產(chǎn)中常用的消毒劑如下：乙醇(酒精) 常用濃

50、度：70 福爾馬林(40的甲醛水溶液)苯酚(石炭酸) 5 煤酚皂溶液(來蘇爾)13 新潔爾滅0.25 波爾多液漂白粉(次氯酸鈣) 25 消毒劑一般只對細菌的繁殖體有效，而對于芽孢很少有殺死作用。 硫磺高錳酸鉀 0.1過氧化氫(雙氧水）過氧乙酸(過氧醋酸) 0.20.5（噴霧），5ml/m（熏蒸） 常用消毒劑使用方法消毒劑名稱用途用量和使用方法注意事項甲醛溶液（HCHO）Formalin空間或表面消毒熏蒸810ml/m3噴霧2%溶液1有白色沉淀時加幾滴硫酸溶解2注意皮膚和眼睛的防護3先用來蘇爾溶液空間噴霧再用甲醛熏蒸效果更好硫磺（S）sulphur空間消毒1520 g/m3燃燒熏蒸1消毒空間時先

51、噴水預(yù)濕2金屬用具易銹蝕應(yīng)防護酒精（C2H5OH）Alcohol手及器皿表面消毒70%75%易燃，注意按實驗室操作方法使用高錳酸鉀（KMnO4）potassium permanganate1甲醛熏蒸助蒸劑2用品器具表面消毒15 ml/m320.1%0.2%水溶液隨用隨取隨配來蘇爾（C6H4CH3OH）lysol手和器皿表面消毒，空間噴霧1浸泡容器用3%水溶液時間1h2洗手和空間噴霧用2%水溶液亦稱煤酚皂新潔爾滅（C22H40BrN）Bromo-geraminum皮膚和不耐熱的器皿表面消毒0.1%0.25%水溶液亦稱苯扎溴銨，系陽離子表面活性劑。避免與陰離子表面活性劑（如肥皂、合成洗滌劑等）合用

52、洗必泰（C12H30Cl2N10）chlorhexidin皮膚和不耐熱的器皿表面消毒0.5%1.0%水溶液亦稱氯已定，系陽離子表面活性劑。避免與陰離子表面活性劑（如肥皂、合成洗滌劑等）合用石碳酸（C6H5OH）phenol空間和表面消毒5%水溶液亦稱苯酚，對皮膚有腐蝕作用過氧乙酸（CH3COOOH）Peracetic Acid1手和器械表面消毒2空間消毒（優(yōu)于甲醛）1表面消毒0.2%0.5的水溶液浸洗2空間消毒，先用0.5%水溶液噴霧增濕，再用20%藥液5 ml/m3熏蒸1勿與堿性藥品混合2其它注意事項，詳見產(chǎn)品說明書煙霧消毒劑smogdisinfeltor（含氯量48%）空間消毒34g/ m

53、3，燃燒熏蒸1.消毒空間先噴水預(yù)濕2.用火星點燃本品，密閉20分鐘即可3.本品應(yīng)貯存于陰涼干燥處，慎防水火侵襲漂白粉Chloriole of lime在水溶液中放出有效氯，破壞細菌酶的活性而致死亡。能殺滅各種致病菌 病毒芽胞1%3%澄清液噴灑（100300 ml/m3）消毒30 min后通風(fēng)；0.5%1%的漂白粉溶液能在15分鐘內(nèi)殺死大部分細菌配制的澄清液性質(zhì)不穩(wěn)定 密封保存時間不可超過1周；有腐蝕及退色作用 不宜用于金屬制品、有色衣物及油漆家具、布類消毒后應(yīng)立即清洗、以防被腐蝕消毒法的舉例： 1.對飲水煮沸消毒毒，可在幾分鐘內(nèi)殺死不耐高溫的微生物營養(yǎng)體； 2.對牛奶、酒類的巴氏消毒在6070

54、下浸燙30分鐘，能殺死大部分致病微生物，而不會使養(yǎng)分受到嚴重破壞，還可提高產(chǎn)品質(zhì)量和延長保藏時間； 3.對蘑菇培養(yǎng)料后期的巴氏消毒，在6062下維持47小時，不僅能殺死培養(yǎng)料中大部分有害的蟲卵和雜菌，而且可提高蘑菇對培養(yǎng)料的選擇性。 第五節(jié) 純種分離 菌種分離：菌種純化的基本方法。用無菌操作技術(shù)，把某一菌種從混雜的微生物群中分離出來。 通常采用的分離方法有：孢子分離、組織分離和菇(耳)木分離3種。 對那些與特種植物的根系形成菌根的菌類(如紅菇和松菇等)和要在有小動物(如螞蟻)存在的條件下才能形成子實體的菌類(如雞樅)，因營養(yǎng)要求較為復(fù)雜，在目前的實驗條件下尚難以分離獲得純種。 大多數(shù)食用菌在生

55、殖階段能形成子實體，因此在子實體發(fā)生季節(jié)最有利于進行菌種分離。一、目的：獲得純培養(yǎng)二、方法 (一)、 孢子分離法 1、多孢分離法：整菇播種法、鉤懸法、粘附法、菌褶上抹取孢子法、孢子印分離法、空中孢子捕捉法、簡易收集法 2、單孢分離法：平板稀釋法、連續(xù)稀釋法、毛細血管法(二)、組織分離法 1、菌核分離法 2、菌索分離法 3、子實體分離法(三)、 基內(nèi)菌絲分離法(四)、土中菌絲分離法 第六節(jié) 菌種的培養(yǎng)、檢驗及保藏一、菌種培養(yǎng)1、母種培養(yǎng)： 接種后的試管種（母種），置于25左右的恒溫箱中培養(yǎng)。經(jīng)23天后，必須逐管檢查移植的菌種體是否定植、是否開始萌發(fā)，同時檢查試管內(nèi)有無雜菌污染。若在接種塊上或斜面

56、培養(yǎng)基表面產(chǎn)生獨立小菌落油狀小點的細菌或者各種霉菌（多有顏色反應(yīng)），均應(yīng)立即剔除。純凈的菌種經(jīng)過7一15天的培養(yǎng)，母種菌絲即可長滿斜面培養(yǎng)基。2、原種及栽培種培養(yǎng) ： 原種及栽培種接種后置于25左右培養(yǎng)室內(nèi)培養(yǎng)。為了充分利用空間，菌種瓶或菌種袋宜放在培養(yǎng)架上，擺放層數(shù)和擺放方式可根據(jù)室溫而定。低溫季節(jié)擺放層次可多，數(shù)量多時，每4天左右須將菌種瓶上下調(diào)換一次，以保持勻勻一致。高溫季節(jié)，菌種瓶(或袋）最好單層擺放，以利瓶(袋)間通風(fēng)降溫。 培養(yǎng)期間，必須每23天嚴格檢查一次，發(fā)現(xiàn)異?，F(xiàn)象，進行正確的分析判斷并及時處理。二、質(zhì)量檢驗 菌種質(zhì)量的優(yōu)劣是食用菌生產(chǎn)成敗的關(guān)鍵，必須通過鑒定后方可投入生產(chǎn)。

57、菌種鑒定必須從形態(tài)、生理、栽培和經(jīng)濟效益等方面進行綜合評價。生產(chǎn)上認為最可靠的方法是進行目測和鏡檢，通過實際觀察，主要鑒定菌種的種性、菌絲狀態(tài)、雜菌、害蟲、積水和菌絲自溶等六項檢驗項目，檢驗結(jié)果全部符合質(zhì)量標準的，為合格品。若其中有一項或多項不符合質(zhì)量標準者，為劣等品或不合格品。出售的菌種必須貼有菌種質(zhì)量合格標簽，注明菌種種類、級別、品種、生產(chǎn)單位和接種日期。菌種變異退化的表現(xiàn)如果香菇雙核菌絲生產(chǎn)緩慢，有人稱為角形菌落；在木屑培養(yǎng)基表面菌絲白色濃密，但生產(chǎn)緩慢形成扇形菌落，這也是菌種變異退化的表現(xiàn)，這些菌種均不能應(yīng)用于生產(chǎn)。老化菌種或其他不能應(yīng)用于生產(chǎn)的菌種如菌絲生產(chǎn)緩慢。菌絲不濃白而稀疏，如

58、適當延長培養(yǎng)時間仍是稀疏菌絲，這可能是培養(yǎng)料缺氮等營養(yǎng)源，亦不是健壯良好的菌絲。如菌種出現(xiàn)脫壁、萎縮，為老化菌種，不能應(yīng)用于生產(chǎn)菌種質(zhì)量應(yīng)注意如下指標1呼吸強度 香菇用來產(chǎn)生能量（ATP）的主要方式是呼吸，呼吸作用強，說明菌種生長旺盛，反之說明菌種生活力衰落。因此，可用呼吸強度來間接判斷菌種質(zhì)量好壞。菌種的呼吸強度通?？刹捎猛卟獧z壓計測定氧與二氧化碳排出量來測量；也可以用測量溶液中氧張力的儀器測定。2. 酶的活性香菇在生長發(fā)育中約有30多種酶參與，比較重要的酶有：（1）木質(zhì)素酶與蟲漆酶 香菇系白腐菌，主要利用纖維素、半纖維素及木質(zhì)素等作為營養(yǎng)源。因此，香菇分泌胞外酶、纖維素酶可分解木材為纖維素

59、， 把纖維素連續(xù)降解為-葡萄糖。木質(zhì)素酶與蟲漆酶石川（1981）發(fā)現(xiàn)，香菇菌絲生長初期，蟲漆酶活性高，隨后減弱。子實體形成時，蟲漆酶活性急劇減弱，而木質(zhì)素酶活性迅速增強。這說明木質(zhì)素酶與蟲漆酶對香菇菌絲生長發(fā)育有很大作用，可作為指示菌種活力強弱的主要酶測定。（2）多酚氧化酶多酚氧化酶是主要的酶，多酚氧化酶與菌種質(zhì)量、菇的產(chǎn)量相關(guān)，它參與菇體色素形成，并能強化細胞壁，調(diào)節(jié)生長發(fā)育。石川（1981）發(fā)現(xiàn)，菇木與木屑培養(yǎng)基中的香菇菌絲初期多酚氧化酶活性高，而后逐漸減弱。出菇前，多酚氧化酶活性減弱，產(chǎn)菇結(jié)束后，酶原來活性逐漸恢復(fù)。這說明多酚氧化酶是香菇活力的重要標記。（3）纖維素酶與半纖維素酶香菇菌絲的纖維素酶與半纖維素酶是胞外酶，對于分解纖維素類物質(zhì)以滿足香菇菌絲的營養(yǎng)需要是非常重要的。香菇菌絲的纖維素酶與半纖維素酶活性強弱，可視為菌種質(zhì)量的好壞的標準之一。試