DB13-T811-2006羊傳染性胸膜肺炎防治技術(shù)規(guī)程

1、B 41DB13河北省地方標(biāo)準(zhǔn)DB13/T 8112006羊傳染性胸膜肺炎防治技術(shù)規(guī)程2006-11-11 發(fā)布2006-11-20 實(shí)施河北省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局發(fā)布DB13/T 8112006前言本標(biāo)準(zhǔn)的附錄 A、附錄 B、附錄 C、附錄 D、附錄 E 為規(guī)范性附錄。本標(biāo)準(zhǔn)由河北省畜牧獸醫(yī)局提出。本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：河北農(nóng)業(yè)大學(xué)。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：汪恩強(qiáng)、袁萬哲、鐘秀會(huì)、孫繼國、史萬玉、黃會(huì)嶺、金東航、郝滿良、李鐵拴、徐豐勛、劉小寶。IDB13/T 8112006 PAGE 11羊傳染性胸膜肺炎防治技術(shù)規(guī)程范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了羊傳染性胸膜肺炎的診斷、預(yù)防和治療。本標(biāo)準(zhǔn)適用于養(yǎng)羊場（戶）和動(dòng)物疾病防治單位

2、對羊傳染性胸膜肺炎的診斷和防治。規(guī)范性引用文件下列文件中的條款通過本標(biāo)準(zhǔn)的引用而成為本標(biāo)準(zhǔn)的條款。凡是注日期的引用文件，其隨后所有的修改單（不包括勘誤的內(nèi)容）或修訂版均不適用于本標(biāo)準(zhǔn)，然而，鼓勵(lì)根據(jù)本標(biāo)準(zhǔn)達(dá)成協(xié)議的各方研究是否可使用這些文件的最新版本。凡是不注明日期的引用文件，其最新版本適用于本標(biāo)準(zhǔn)。GB 16548畜禽病害肉尸及其產(chǎn)品無害化處理規(guī)程GB 16549畜禽產(chǎn)地檢疫規(guī)范GB 16567種畜禽調(diào)運(yùn)檢疫技術(shù)規(guī)范NY/T 388畜禽場環(huán)境質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)NY 5027無公害食品畜禽飲用水水質(zhì)NY 5149無公害食品肉羊飼養(yǎng)獸醫(yī)防疫準(zhǔn)則NY/T 5151無公害食品肉羊飼養(yǎng)管理準(zhǔn)則術(shù)語和定義下列術(shù)語

3、和定義適用于本標(biāo)準(zhǔn)。羊傳染性胸膜肺炎Infectious pleuropneumonia of sheep and goats又稱羊支原體肺炎，是由支原體所引起的一種高度接觸性傳染病。診斷病原引起羊傳染性胸膜肺炎的病原體為絲狀支原體山羊亞種(Mycoplasma mycoides subsp.capri)和綿羊肺炎支原體(Mycoplasma ovipneumoniae)。絲狀支原體山羊亞種為細(xì)小、多變性的微生物，革蘭氏染色陰性， 用姬姆薩法、瑞氏法染色著色良好；綿羊肺炎支原體也呈細(xì)小而多形性，但在適宜培養(yǎng)基上生長的菌落很小，生長要求比絲狀支原體山羊亞種苛刻。在瓊脂濃度較低的培養(yǎng)基上生長時(shí)，可

4、呈現(xiàn)一般支原體都具有的“降落傘”狀菌落，但瓊脂濃度較高時(shí)則無此表現(xiàn)。綿羊肺炎支原體與絲狀支原體山羊亞種無交互免疫性。絲狀支原體山羊亞種對理化因素的抵抗力很弱。流行病學(xué)易感動(dòng)物不同品種、年齡、性別均會(huì)感染。在自然條件下，絲狀支原體山羊亞種只感染山羊，3 歲以下的山羊最易感染，而綿羊肺炎支原體則可感染山羊和綿羊。流行特點(diǎn)本病一年四季都可發(fā)生和流行，但在早春、秋末冬初最常見。常呈地方流行性，冬季流行期平均為 15d，夏季可維持 60 d 以上。傳播途徑本病接觸傳染性很強(qiáng)，發(fā)病后在羊群中傳播迅速，20 d 左右可波及全群。病羊是主要的傳染源，肺組織和胸腔滲出液中含有大量病原體，主要通過空氣飛沫經(jīng)呼吸道

5、傳染。發(fā)病率和病死率易感羊群發(fā)病率可達(dá) 80100，病死率達(dá) 40以上，體質(zhì)弱者高達(dá) 90。臨床癥狀潛伏期潛伏期短者 56 d，長者 21 d28 d。最急性型最急性型可見如下臨床癥狀：發(fā)病急驟，體溫高達(dá) 4142，精神極度萎頓，食欲廢絕，呼吸急促而有痛苦呻吟；數(shù)小時(shí)后出現(xiàn)肺炎癥狀，呼吸困難，咳嗽，流漿液帶血鼻液，肺部叩診呈濁音，聽診肺泡呼吸音減弱、消失或呈捻發(fā)音；病羊臥地不起，四肢伸直，呼吸極度困難，隨著呼吸全身顫動(dòng)；黏膜高度充血，發(fā)紺；病程一般不超過 4 d5 d，有的僅 12 h24 h，有的在沒有任何征兆情況下突然倒地死亡；病死羊鼻孔中流出帶血泡沫或血水，耳、頸下、腹部皮膚大片紫紺。急

6、性型急性型可見如下臨床癥狀：患羊體溫升高，精神沉郁，采食量逐漸減少；繼之出現(xiàn)咳嗽，伴有漿液性鼻液，4 d5 d 后，咳嗽變干而痛苦，鼻液轉(zhuǎn)為黏液膿性并呈鐵銹色，黏附于鼻孔和上唇，結(jié)成干涸的棕色痂垢；眼瞼腫脹，流淚，眼有黏液-膿性分泌物；口半開張，流泡沫狀唾液；頭頸伸直，腰背拱起，腹肋緊縮，懷孕母羊大批發(fā)生流產(chǎn)；有的發(fā)生臌脹和腹瀉；唇、乳房等部皮膚出現(xiàn)丘疹；瀕死前體溫降至常溫以下。慢性型患羊全身癥狀輕微，體溫變化不明顯，間歇性咳嗽和腹瀉，鼻腔內(nèi)流出黏液性鼻液，采食量減少，生長發(fā)育遲緩，身體衰弱，被毛粗亂無光, 部分患羊有輕度瘤胃臌氣、慢性眼結(jié)膜炎等癥狀。病程長者，可持續(xù)數(shù)月之久。病理變化剖檢可見

7、如下病理變化：肺呈紫紅色，切面呈大理石樣，充血水腫，并有針尖狀出血點(diǎn)；胸腔常有淡黃色液體，有時(shí)多至 500 ml2 000 ml。胸膜變厚而粗糙，胸膜和肺表面有網(wǎng)狀或條狀的黃白色纖維素凝塊；心包積液、黏連，心肌松弛、變軟；急性病例還可見肝、腎、脾、膽囊腫脹。病原學(xué)診斷病料采集與保存無菌采集肺臟、胸腔滲出液、肺門淋巴結(jié)、心血等。肺病料剪成 3 cm5 cm 方塊，胸部淋巴結(jié)以整個(gè)淋巴結(jié)為好，胸腔滲出液用吸管吸入滅菌青霉素瓶內(nèi)。肺和淋巴結(jié)保存在用茶色廣口瓶盛裝的滅菌 50甘油緩沖溶液中，胸腔滲出液不加任何保存液。病料冰凍保存。顯微鏡檢查將病料直接涂片，瑞氏或姬姆薩氏染色，由鏡下按視野觀察，羊傳染性

8、胸膜肺炎病原為細(xì)小的多形性菌體，呈球狀、桿狀、絲狀等。革蘭氏染色陰性。病原分離培養(yǎng)取精氨酸支原體肉湯培養(yǎng)基 4.1 g，加 100 ml 蒸餾水，加熱溶解，分裝，每支試管 8 ml，121高壓滅菌 15 min，4保存，用前加入 20小牛血清及抑菌劑。取支原體半流體培養(yǎng)基 3.9 g，加 100 ml 蒸餾水，加熱溶解，分裝，每支試管 8 ml，121高壓滅菌 15min。使用前應(yīng)煮沸 10 min15 min，冷至 56 左右，每支試管內(nèi)加入 2 ml 滅活小牛血清，搖勻。分別取精氨酸支原體肉湯培養(yǎng)基和支原體半流體培養(yǎng)基各 4 支，每支培養(yǎng)基接種胸腔滲出液或病料乳化液 0.5 ml1.0 m

9、l，于 361培養(yǎng) 21 d。設(shè)生理鹽水培養(yǎng)基作對照。在接種后的第七天，從 4 支中取 2 支進(jìn)行次代培養(yǎng)，分別接種 2 支精氨酸支原體肉湯培養(yǎng)基和支原體半流體培養(yǎng)基，于 361培養(yǎng) 21d。若在支原體半流體培養(yǎng)基內(nèi)見到“降落傘”樣白色菌落； 精氨酸支原體肉湯培養(yǎng)基由黃色變?yōu)榉奂t色，管底有顆粒沉淀，表明有羊傳染性胸膜肺炎支原體。取精氨酸支原體肉湯培養(yǎng)物或支原體半流體培養(yǎng)基上的典型菌落涂片，瑞氏、姬姆薩和革蘭氏染色鏡檢，結(jié)果同4.5.2。動(dòng)物回歸試驗(yàn)取精氨酸支原體肉湯培養(yǎng)物和生理鹽水作 1:1 稀釋，分別注射到健康羊、家兔氣管內(nèi)，羊多在 1d7d 發(fā)病，表現(xiàn)與自然病例相同的癥狀和病理變化，而人工

10、感染兔不發(fā)病。血清學(xué)檢測微量間接血凝試驗(yàn)按附錄B 規(guī)定的方法執(zhí)行。生長抑制試驗(yàn)按附錄 C 規(guī)定的方法執(zhí)行。代謝抑制試驗(yàn)按附錄 D 規(guī)定的方法執(zhí)行。直接免疫熒光抗體試驗(yàn)按附錄 E 規(guī)定的方法執(zhí)行。預(yù)防加強(qiáng)羊群飼養(yǎng)加強(qiáng)飼養(yǎng)管理，增強(qiáng)羊群的抵抗力。飼料要求按照 NY 5150 的規(guī)定執(zhí)行；飲水要求按照 NY 5027 的規(guī)定執(zhí)行；飼養(yǎng)管理按照 NY/T 5151 的規(guī)定執(zhí)行；環(huán)境控制應(yīng)符合 NY/T 388 的規(guī)定。嚴(yán)格羊群檢疫建立基礎(chǔ)母羊群，自繁自養(yǎng)。品種調(diào)整或補(bǔ)充種源，應(yīng)按照 GB 16549 和 GB 16567 的規(guī)定，加強(qiáng)檢疫。隔離、封鎖和消毒發(fā)現(xiàn)疫情及時(shí)上報(bào)，對發(fā)病羊群按 NY 5149

11、 的規(guī)定進(jìn)行隔離、封鎖，并做好消毒工作。消毒劑的使用應(yīng)符合 NY 5148 的規(guī)定。對病死、剖檢羊尸體應(yīng)按 GB 16548 的規(guī)定，進(jìn)行無害化處理。免疫接種根據(jù)病原體分離結(jié)果選用適當(dāng)?shù)囊呙?，?NY 5149 的規(guī)定進(jìn)行免疫接種。平時(shí)預(yù)防接種對健康羊群每年春季或秋季預(yù)防接種一次。山羊傳染性胸膜肺炎氫氧化鋁滅活疫苗，預(yù)防由絲狀支原體山羊亞種引起的山羊傳染性胸膜肺炎，6 月齡以下山羊頸側(cè)皮下注射 3 ml，6 月齡以上山羊 5 ml，注射后 14 d 產(chǎn)生免疫力，免疫期為 1 年。羊肺炎支原體氫氧化鋁滅活疫苗，預(yù)防綿羊、山羊由綿羊肺炎支原體引起的傳染性胸膜肺炎，成年羊頸側(cè)皮下注射 3 ml，半歲

12、以下幼羊 2 ml，免疫期可達(dá) 1 年半以上。對身體瘦弱、體溫升高或有慢性疾病的羊，不宜注射。對懷孕母羊、新生羔羊和從異地引進(jìn)的羊應(yīng)及時(shí)補(bǔ)注射。緊急免疫接種一旦發(fā)病，立即對未出現(xiàn)癥狀、體溫低于 40的假定健康羊全部注射山羊傳染性胸膜肺炎氫氧化鋁菌苗或羊肺炎支原體氫氧化鋁滅活疫苗，疫區(qū)內(nèi)或疫區(qū)周圍的羊也應(yīng)進(jìn)行疫苗注射。待發(fā)病羊和可疑羊病情穩(wěn)定后，再緊急注射疫苗。治療抗菌消炎可采用下列藥物進(jìn)行治療：大環(huán)內(nèi)脂類: 乳糖酸紅霉素注射劑 3 mg/kg5 mg/kg 體重，靜脈注射，每天 2 次，連用 2 d3 d。泰樂菌素注射液 5 mg/kg13 mg/kg 體重，肌肉注射，每日 2 次，連用 5

13、d7 d。廣譜抗菌藥類: 長效土霉素注射液 10 mg/kg20 mg/kg 體重，肌肉注射，每天 1 次，連用 5d。土霉素片劑 10 mg/kg25 mg/kg 體重，內(nèi)服，每日 1 次，連用 2 d3 d。喹諾酮類: 恩諾沙星注射液 2.5 mg/kg 體重，肌肉或靜脈注射，每天 2 次，連用 5 d7 d。氟苯尼考：20 mg/kg 體重，肌肉注射，每天 1 次。新砷礬納明(914)：12 mg/kg 體重，以無菌生理鹽水或葡萄糖生理鹽水稀釋為 5溶液（現(xiàn)配現(xiàn)用），一次緩慢靜脈注射，3 d5 d 后對逐漸康復(fù)羊再注射一次，劑量減半。注意防治砷中毒?？敲顾?、丁胺卡那霉素、林可霉素、先鋒

14、霉素、磺胺制劑，用法及用量應(yīng)符合中華人民共和國獸藥典的規(guī)定。支原體易產(chǎn)生耐藥性，治療時(shí)要注意藥物交替使用和較長時(shí)間用藥。制止?jié)B出510氯化鈣或葡萄糖酸鈣注射液 50 ml100 ml、維生素 C2 g4 g，靜脈注射。止咳平喘氯化銨片 1 g5 g、氨茶堿片 0.2 g0.4 g 或復(fù)方甘草合劑 10ml20ml，內(nèi)服。對癥治療減輕炎癥反應(yīng)和緩解中毒，可靜脈或肌肉注射地塞米松，每次 4 mg12 mg。增強(qiáng)心臟活動(dòng)，可靜脈注射 10安鈉咖 0.5 g2 g 或樟腦磺酸鈉 0.2 g1 g，每天 2 次，連用 2 d。呼吸困難者，肌肉注射鹽酸麻黃堿注射液 0.02 g0.05 g。體溫升高者肌肉

15、注射安乃近注射液 1 g2 g。建立并保存治療記錄，并應(yīng)在清群后繼續(xù)保存 2 年。附錄 A（規(guī)范性附錄） 培養(yǎng)基改良 Hartley 氏消化湯培養(yǎng)基（液體培養(yǎng)基）胰蛋白胨 8 g，滅菌Hartley氏消化湯 600 ml，滅菌 0.5水解乳蛋白Hanks液 1000 ml，0.4酚紅20 ml，混勻，加青霉素至 200 IU/ml，用 3.5NaHCO3調(diào)節(jié)pH至 7.6，用單板式濾器過濾除菌后，加入無菌滅能的豬血清 400 ml，分裝于 10 ml玻璃瓶中，放入 37普通溫箱做雜菌檢驗(yàn)，待無菌生長便可使用。改良 Hartley 氏瓊脂培養(yǎng)基（固體培養(yǎng)基）改良 Hartley 氏消化湯培養(yǎng)基中

16、加入瓊脂，使其含量達(dá) 1.31.5，經(jīng) 121kPa 高壓滅菌 30 min即成。增菌培養(yǎng)基馬丁肉湯加 20馬血清和 3 g/100 ml 酵母浸膏。選擇性培養(yǎng)基系增菌培養(yǎng)基內(nèi)加 80:1 的 1醋酸鉈和青霉素 200 IU/ml；制作平板時(shí)加 1國產(chǎn)瓊脂。附錄 B(規(guī)范性附錄) 微量間接血凝試驗(yàn)方法提要微量間接血凝試驗(yàn)可用于羊傳染性胸膜肺炎的診斷和監(jiān)測。其原理是利用結(jié)合在紅細(xì)胞上的羊傳染性胸膜肺炎抗原在與血清中的抗體反應(yīng)后，出現(xiàn)肉眼可見的凝集現(xiàn)象，據(jù)此便可判斷被檢者血清中是否含有羊傳染性胸膜肺炎抗體。試劑羊傳染性胸膜肺炎間接血凝試驗(yàn)抗原、Na2HPO4、KH2PO4、NaCl、迭氮鈉（分析純

17、）；羊傳染性胸膜肺炎標(biāo)準(zhǔn)陽性血清、羊傳染性胸膜肺炎標(biāo)準(zhǔn)陰性血清、健康兔血清、蒸餾水。設(shè)備和儀器恒溫培養(yǎng)箱；離心機(jī)；微型振蕩器；分析天平；移液器；96 孔 V 型（90 度孔底）微量血凝反應(yīng)板；100 ml 磨口錐形瓶；1 000 ml 容量瓶。操作步驟材料準(zhǔn)備稀釋液取NaCl4.25 g、Na2HPO419.34 g、KH2PO42.86 g、迭氮鈉 1.00 g放入 1 000 ml容量瓶中，加蒸餾水完全溶解后定容，過濾分裝，10 磅 15 min高壓滅菌，即成0.1迭氮鈉的 0.15 mol/l磷酸鹽緩沖液（PBS）。取上述溶液 98 ml 和健康兔血清 2 ml 放入 100 ml 磨口

18、錐形瓶中，混合，無菌分裝，04保存?zhèn)溆?。被檢血清無菌采集待檢羊血液并分離血清，檢驗(yàn)前 56滅能 30 min。正式試驗(yàn)加稀釋液取一潔凈 96 孔 V 型血凝板，每個(gè)樣品為一組，每組 15 孔加入稀釋液 30 l。稀釋血清于第 1 孔加入待檢血清 30 l，用移液器逐孔稀釋至第 5 孔，棄 30 l，此時(shí) 15 孔待檢血清的稀釋度依次為：1:2（1），1:4(2)，1:8(3)，1:16(4)，1:32(5)。同法稀釋陽性及陰性血清，陰性血清組稀釋至第四孔，預(yù)留第五孔作為稀釋液對照。加間接血凝抗原被檢血清各孔、陰性血清各孔、陽性血清各孔、稀釋液對照各孔均加間接血凝抗原 30l。加完后， 振蕩混勻

19、，室溫靜置 2 h，判定結(jié)果。結(jié)果判定判定標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞呈細(xì)沙粒樣均勻鋪于孔底者為+，即 100凝集；紅細(xì)胞均勻鋪于孔底，但邊緣不整齊且稍向孔底集中者為+，即 75凝集；紅細(xì)胞于孔底形成一個(gè)環(huán)狀，四周有小凝集塊者為+，即 50凝集；紅細(xì)胞于孔底形成圓團(tuán)狀，但邊緣不夠光滑，且四周稍有凝集塊者為+，即 25凝集；紅細(xì)胞于孔底形成圓團(tuán)狀，且邊緣光滑整齊者為-，即無凝集。判定方法在陽性對照、陰性對照血清，稀釋液對照為（-）的前提下，對被檢血清進(jìn)行判定。被檢血清 1:8 稀釋度，凝集值+以上判定為陽性，1:4 稀釋度凝集價(jià)+判為可凝，1:4 以下者為陰性。附 錄 C (規(guī)范性附錄) 生長抑制試驗(yàn)材料液體培養(yǎng)

20、基：配制方法見附錄 A.1；不同支原體陽性血清：Mccp、絲狀支原體絲狀亞種、絲狀支原體山羊亞種、山羊支原體山羊亞種以及綿羊肺支原體；濾紙。操作步驟將鑒定菌株 24 h 培養(yǎng)液搖勻，取 0.25 ml 滴于平板上，用 L 型玻棒將其均勻涂抹于培養(yǎng)平板表面后， 用分別浸取了 4 倍稀釋的不同支原體陽性血清、直徑 7mm 的定性濾紙片分別貼附于平板表面，每塊平板貼 34 片，37培養(yǎng) 24 h48 h。觀察并記錄抑菌圈大小。每株待檢菌株作 3 次，求平均值。結(jié)果判定抑菌圈直徑 2 mm 或以上者判為陽性。附 錄 D (規(guī)范性附錄) 代謝抑制試驗(yàn)材料選擇性培養(yǎng)基：配制方法見附錄 A.4；葡萄糖；酚紅；標(biāo)準(zhǔn)陽性血清；陰性血清。步驟將含葡萄糖和酚紅指示劑，pH值為 7.6 的支原體選擇性培養(yǎng)基分裝為每支試管 1 ml，在第 1 管中加入陽性血清 1ml，充分混勻后取