化痰降氣膠囊對慢性阻塞性肺疾病治療作用的內在機理研究

1、化痰降氣膠囊對慢性阻塞性肺疾病治療作用的內在機理研究【關鍵詞】化痰降氣膠囊；,慢性阻塞性肺疾?。?腫瘤壞死因子；,白三烯；,大鼠摘要：目的：討論化痰降氣膠囊對實驗性慢性阻塞性肺疾病治療作用的內在機理。方法：采用經(jīng)鼻腔注入肺炎克雷伯桿菌反復感染復制慢性阻塞性肺疾病模型大鼠，實驗分為對照組、模型組和化痰降氣膠囊組。并用酶聯(lián)吸附實驗(ELISA)方法，測定各組大鼠支氣管灌洗液腫瘤壞死因子TNF、白三烯LTB4程度。結果：模型組支氣管灌洗液TNF，LTB4程度較正常組顯著升高(P0.01)；化痰降氣膠囊組支氣管灌洗液TNF，LTB4程度均明顯降低(P0.05)。結論：化痰降氣膠囊可降低TNF，LTB4

2、的含量，控制慢性炎癥反響。關鍵詞：化痰降氣膠囊；慢性阻塞性肺疾??；腫瘤壞死因子；白三烯；大鼠EffetntheLevelfTNF,LTB4inBrnhalvelarLavageFluidfdelRatsithhrnibstrutivePulnaryDiseasebyHuatanjiangqiapsuleAbstrat:bjetive:TbservetheeffetsfHuatanjiangqiapsule,abinatinftraditinalhineseedialherbsnthehangesfTNF,LTB4inBrnhalvelarLavageFluid,inrdertprvidebas

3、isfrtheexplanatinftheehanissfHuatanjiangqiapsuleanddisveritspathphysilgialharaters.ethds:Ardingtthepriniplefrand,36istarrats(ale)eredividedintntrlgrup,delgrupandHuatanjiangqiapsulegrup.delgrupasestablishedbyrepeatedlyintranasalinfetingfklebsiellapneuniaetieaeek.TNF，LTB4inbrnhalvlarlavagefluidfthreeg

4、rupsereeasuredbyELISA.Results:TNF,LTB4inbrnhalvelarlavagefluidfdelgruperesignifiantlyhigherthaninntrlgrup(P0.01),andthelevelfTNF,LTB4fHuatanjiangqiapsulegruperelerthanthsefthedelgrup(P0.05).nlusin:Huatanjiangqiapsuleuldrelievethelinialsyptsandajrinjuryflunginduedbysuperexretinfinflaeytkinethrughdere

5、asingthelevelsfTNF,LTB4intheratsithhrnibstrutivePulnaryDisease.Keyrds:Huatanjiangqiapsule;hrnibstrutivePulnaryDisease(PD);TurNersisFatralpha(TNF);LeuktrienesB4(LTB4);Rats化痰降氣膠囊系經(jīng)多年臨床理論挑選出的治療慢性支氣管炎驗方。腫瘤壞死因子TNF、白三烯LTB4是參與炎癥反響的主要細胞因子之一，在慢性阻塞性肺疾病(PD)的發(fā)病過程中起著關鍵作用1。為了進一步討論化痰降氣膠囊對慢性阻塞性肺疾病的作用機理，我們觀察了其對慢性阻塞性

6、肺疾病大鼠支氣管灌洗液(BALF)TNF，LTB4程度的影響。1材料和方法1.1細菌肺炎克雷伯桿菌由安徽醫(yī)科大學第一附屬醫(yī)院微生物室提供，是從PD患者痰液中別離、鑒定，使用前接種于普通牛肉湯培養(yǎng)基內，置37恒溫箱內增殖48h，用無菌生理鹽水稀釋適當濃度并計數(shù)為6108FU/l(經(jīng)預實驗確定)。1.2藥物化痰降氣膠囊由紫蘇子、白芥子、金沸草、白前等中藥組成，由安徽中醫(yī)學院第一附屬醫(yī)院制劑室提供。1.3實驗動物與分組清潔級雄性istar大鼠36只，質量為(20020)g，河南醫(yī)科大學實驗動物中心提供。動物飼養(yǎng)室為清潔級，控制溫度(222)，正常飼養(yǎng)7d后進展實驗。隨機分為正常對照組(對照組)、慢性

7、阻塞性肺疾病模型組(模型組)，化痰降氣膠囊組，每組12只。模型組：采用經(jīng)鼻腔注入肺炎克雷伯桿菌反復感染復制慢性阻塞性肺疾病模型，方法：經(jīng)鼻腔注入該菌菌液0.1l，2次/周，持續(xù)8周1；化痰降氣膠囊組：灌胃治療(劑量每鼠4粒/d，溶于1l生理鹽水中)，在大鼠經(jīng)鼻染菌滿4周時進展；對照組：正常飼養(yǎng)，大鼠經(jīng)鼻腔注入常規(guī)培養(yǎng)液0.1l(不含菌)，2次/周，持續(xù)8周。1.4觀察指標與測試1.4.1支氣管灌洗大鼠用3%戊巴比妥鈉(30g/kg)腹腔麻醉后，迅速用器械別離氣管，用10l生理鹽水進展在體肺泡灌洗，緩慢的經(jīng)氣道把液體注入肺臟，再回抽液體，如此反復進展3次，最終回收量為6l，41500r/in離心

8、5in，提取上清液，20凍存待檢。離心細胞再用生理鹽水洗滌后，用血細胞計數(shù)板做細胞計數(shù)。1.4.2指標測定TNF，LTB4試劑來自TPI.IN。TNF，LTB4測定采用ELISA法，均按說明書操作。1.5統(tǒng)計方法實驗數(shù)據(jù)以均數(shù)(s)表示，組間比擬用t檢驗。應用SPSS11.0軟件進展處理。2結果2.1支氣管灌洗液白細胞總數(shù)和分數(shù)計數(shù)見表1。模型組BALF白細胞計數(shù)明顯高于對照組(P0.01)，模型組BALF中巨噬細胞百分比雖低于對照組，但其絕對值(41.2107L)明顯高于對照組(15.1107L)；化痰降氣膠囊組BALF白細胞計數(shù)同對照組相比也有明顯差異，但其值同模型組相比那么明顯下降。2.

9、2支氣管灌洗液LTB4,TNF的含量見表2。模型組BALF中LTB4，TNF含量明顯高于對照組(P0.01)；而化痰降氣膠囊組LTB4，TNF含量同模型組相比明顯下降，但與對照組比擬仍有差異(P0.05)。表1各組大鼠支氣管灌洗液白細胞計數(shù)及分類比擬略與對照組比擬，*P0.05，*P0.01；：單核局噬細胞，N：中性粒細胞，L：淋巴細胞表2各組大鼠支氣管灌洗液LTB4、TNF的含量比擬略與對照組比擬，*P0.05，*P0.013討論目前普遍認為，PD是以氣道、肺本質和肺血管的慢性炎癥為特征，在肺的不同部位有肺泡巨噬細胞、T淋巴細胞和中性粒細胞增加，激活的炎癥細胞釋放多種介質，這些介質破壞肺的構

10、造和促進中性粒細胞炎癥反響。PD的各種危險因素都可以產(chǎn)生類似的炎癥過程，從而導致PD的發(fā)生2。PD是存在不完全可逆性的氣流受限性疾病，其氣流受限存在進展性開展和伴肺部炎癥的特性。近年來的研究提示PD亦是一種慢性氣道非特異性炎性疾病，部分患者具有氣道高反響性3。轉貼于論文聯(lián)盟.ll.許多研究已證實，TNF在PD患者血液、痰液、支氣管肺泡灌洗液及肺組織中是升高的，且與PD患者的靜息能量消耗增加，惡液質形成和預后不良有關。中性粒細胞、巨噬細胞和T淋細胞是PD肺組織、支氣管肺泡灌洗液和痰中的主要炎癥細胞，可能在機體部分防御反響中起重要作用，但它們亦產(chǎn)生包括TNF在內的多種炎癥介質，當其大量產(chǎn)生時，產(chǎn)生

11、對機體有害的反響。TNF具有多種前炎癥介質的功能，包括促進中性粒細胞顆粒伴蛋白水解酶釋放和呼吸爆發(fā)。吸煙等多種PD危險因素導致支氣管上皮細胞受損，組織或肺泡在巨噬細胞和上皮細胞分泌TNF，促進炎癥細胞趨化和活化，導致氣道構造破壞。在動物實驗中，TNF可誘導氣道粘液細胞化生和分泌過多，導致大鼠肺氣腫性損害和肺泡壁膠原沉積4。故TNF可誘導細胞死亡和肺氣腫，破壞去除功能(杯狀細胞代替纖毛細胞)，與臨床PD所見有關。目前認為氣道炎癥在PD急性發(fā)作期起重要作用，在致病因素作用下，炎癥細胞在氣管壁和肺泡大量聚積，其中肺巨噬細胞釋放TNF、IL1等，誘發(fā)上皮細胞釋放大量炎性介質，造成病理損害5。前炎性細胞

12、因子(TNF、IL1等)與抑炎性細胞因子(IL10等)共同參與炎癥反響的過程。TNF在疾病早期可促進IL10RNA的產(chǎn)生，導致IL10濃度升高，以減少組織損傷，起到抗炎作用。白三烯(LTs)是一組炎性遞質，它是由花生四烯酸(AA)經(jīng)5脂氧酶代謝生成的一簇產(chǎn)物，人的肺臟細胞及炎癥細胞含有豐富的脂氧酶，是LT的重要組織來源。LTs包括LTB4和ysLT(LT4、LTD4、LTE4)，這類炎癥遞質與許多炎性疾病如支氣管哮喘、PD等親密相關6。LTB4為最強的細胞趨化劑，可引起炎癥細胞包括中性粒細胞、巨噬細胞、嗜酸性粒細胞和淋巴細胞等聚集和激活，所以血清LTB4含量在一定程度上也反映了氣道炎癥反響的程

13、度，炎癥反響越強，白細胞和巨噬細胞釋放的蛋白分解酶也越多7。LTB4是引起氣道變應性炎癥的主要介質，是目前最強的中性粒細胞催化因子和活化因子之一8。LTB4亦介導內皮細胞和多型核白細胞外表粘附蛋白的表達，促進炎性細胞的滲出及遷移。自1984年Drisll等9發(fā)現(xiàn)PD患者痰中LTB4濃度增高以后，許多研究人員得出了與此一樣的結論。Seggev等10發(fā)現(xiàn)PD患者痰中LTB4濃度不僅高于正常人，亦高于哮喘患者。最近的文獻報道說明，PD急發(fā)期和緩解期患者痰中LTB4均增高11，12，上述研究結果提示白三烯與PD有親密的關系。為進一步證明LTs與PD的關系，itsunbu等3對PD患者外周血白細胞產(chǎn)生L

14、TB4和LT4的情況進展研究，不僅發(fā)現(xiàn)PD患者外周白細胞產(chǎn)生LTB4和LT4明顯增多，且LTB4和LT4程度的增多與患者FEV1的下降呈明顯負相關關系，特別是與體內存在IgE抗體的PD患者的FEV1降低有關，提示外周血白細胞產(chǎn)生LTs量和氣道阻塞有顯著的相關關系。PD患者緩解期、急發(fā)期痰中中性粒細胞增高，中性粒細胞激活時產(chǎn)生大量LTB4，LTB4是強有力的中性粒細胞和嗜酸粒細胞的趨化劑和激活劑，而且中性粒細胞外表有高濃度的LTB4受體，這些特點導致中性粒細胞通過產(chǎn)生LTB4形成自分泌刺激，從而引起炎癥擴大，炎癥持續(xù)。慢性氣道炎癥是PD重要的發(fā)病機制之一，白三烯作為強有力的炎癥介質與PD的發(fā)生開

15、展有著親密的關系?；到禋饽z囊具有化痰降氣，止咳平喘等成效，該方由白芥子、紫蘇子、白前、金沸草等組成，適用于慢性阻塞性肺疾病急性發(fā)作期和緩解期。紫蘇子降肺中逆氣，為降氣平喘要藥，而紫蘇子和白芥子具有抗炎殺菌作用；金沸草、紫蘇子、白前三味，皆具“溫而不燥，潤而不膩之性，功擅溫潤肺氣，止咳化痰，為治療久咳久喘之良藥。諸藥合用，共收化痰降氣、宣肺止咳平喘抗炎之效?；到禋饽z囊能減輕PD炎癥和改善支氣管病理損傷，其治療DPD的部分機制是否與調低PD氣道TNF和LTB4，從而減輕支氣管炎癥是本次實驗的重點。本實驗的結果顯示，化痰降氣膠囊確能降低PD模型大鼠支氣管肺泡灌洗液中TNF、LTB4，從而減少中性

16、粒細胞向氣道中趨化，減輕氣道炎癥及其所造成的支氣管肺組織損傷。目前尚無治療PD氣道炎癥的特效藥物，因此，研究相關制劑，進步PD氣道炎癥防治程度，具有重要意義。本實驗的結果為研究治療PD等氣道炎癥疾病有效中藥復方制劑提供了一定的實驗根據(jù)。參考文獻：1許滸，熊密，車東媛，等.中藥814對肺炎克雷伯桿菌誘發(fā)大鼠慢性阻塞性肺疾病的影響J.同濟醫(yī)科大學學報，1999，28(5)：375380.2中華醫(yī)學會呼吸病學分會慢性阻塞性肺疾病學組.PD診斷標準J.中華內科雜志，2002，41(9)：640646.3itsunbuF，ifuneT,HsakiY，etal.Enhanedprdutinfleuktri

17、enesbyperipheralleukytesandspeifiIgEantibdiesinpatientsithhrnibstrutivepulnarydiseaseJ.JAllergylinIunl,2001，107：492498.4Sulkska，SulkskiS，TerlikshiS，etal.Turersisfatrinduesephysealidepulnarytissuerebuilding：hangesintypealvelarepithelialellJ.PlJPathal，1997，48：179182.5JiangJX，ZhangXH，LiJ，etal.Expressin

18、fTNFandrelatinshipithendtxinJ.linedSiene，1997，2：45.6BirkeF，eadeJ，AnderskeilzR，etal.InvitrandinvivpharalgialharaterizatinfBIIL284，anvelandptentleuktrieneB4reeptrantagnistJ.JPharalExpTher，2001，297：458466.7俞小衛(wèi)，韋國楨，林亞媛，等.慢性阻塞性肺疾病患者血清白三烯和1抗胰蛋白酶的變化J.南京醫(yī)科大學學報，2022，24(2)：182184.8SapsnSE，stellJF，SapsnAP.TheeffetfinhaledleuktrieneB4innralandinasthatisubjetsJ.AJRespirritareed，1997，155(5)：17891792.9DrisllBR，rell，KayAB.SputuleuktrienesinbstrutiveairaysdiseaseJ.linExpIunl，1984，55：397404.10SeggevJS，ThrntnHJr，EdesTE.SeruleuktrientB4levelsinpatientsithbstru