多因素復合造模法致肺陽虛大鼠模型的研究

1、多因素復合造模法致肺陽虛大鼠模型的研究【摘要】目的討論肺陽虛大鼠病理模型方法。方法采用煙熏(外邪犯肺)、冰水游泳(形寒勞倦)、常溫游泳(勞倦)、服用他吧唑冰水溶液(免疫抑制、內飲生冷)多因素復合造模法來制備肺陽虛證大鼠模型。觀測大鼠體征，測定血液流變學指標。結果造模后期，大鼠出現喘鳴、呼吸急促、畏寒少動、精神萎靡、毛發(fā)混亂無光澤、飲水量下降等病癥;模型大鼠體重、背部溫度、肛溫、抓力呈顯著性下降(P0.05);低切變率下的全血粘度、全血復原粘度、紅細胞剛性指數、電泳指數均顯著性升高(P0.05)。結論該造模方法能較好的與肺陽虛之臨床病癥相吻合，說明該方法是可行的?！娟P鍵詞】肺陽虛;大鼠;血流變1

2、實驗材料1.1材料檸檬酸鈉(分析純，上?；瘜W試劑公司，20220527)、甲巰咪唑薄膜衣片(他吧唑)，規(guī)格10g50，批號5728801，德國默克公司，購自浙江省中醫(yī)院，配制成0.1g/l溶液，冷藏;雄獅過濾嘴香煙(焦油量：10g、煙氣煙堿量：0.8g、煙氣一氧化碳量：12g)，浙江中煙工業(yè)有限責任公司)。2方法2.1造模方法SD大鼠20只，隨機分為2組：正常對照組、模型組，每組10只。模型組大鼠置于透明煙熏箱中香煙煙熏20in/d，使其外邪犯肺;接著常溫游泳30in/d，冰水(02)游泳10in/d，使其勞倦，耗傷陽氣;并飲用他吧唑冰水溶液(0.1g/l)，使其免疫低下。以上處理，每天一次，

3、連續(xù)35天，使其外感于寒、內傷于陽，內外合邪，從而使肺陽虛衰。2.2指標檢測每日定時稱量體重、進食量、飲水量，并觀察其一般體征是否有肺陽虛病癥(如咳聲低弱、皮毛潮濕、乏力少動等)。測定以下指標：體重：造模前后的體重差異。于造模第15、24、31天測定背溫;第16、25、32天測定肛溫。于溫慧萍，等:多因素復合造模法致肺陽虛大鼠模型的研究造模第5、20、34天測定抓力大校35天后，下腔靜脈取血，加肝素鈉抗凝，取血后4h內測其血液流變學指標。取全血約2l，測定全血粘度控制切液錐按高切變率(HS，150s-1)、中切變率(S，50s-1)和低切變率(LS，10s-1)旋轉，待轉速穩(wěn)定后測定該切變率下

4、全血粘度(BV);另取全血約1l，離心，測定血漿粘度(PV);取全血參加血沉管(不得有氣泡)，測定紅細胞壓積(HT)、血沉(ESR)、血沉方程K值(K);計算全血復原粘度(BRV)，根據BRV=(BV-PV)/HT，得出各切變率(HS、S、LS)下的BRV;計算紅細胞聚集指數(AI)、變形指數(DI)、剛性指數(RI)、電泳指數(EI)，RAI=LS/HS，DI=1-(PV/HS)0.4/HT，RI=(HS-PV)/(PVHT)，EI=RAI/HT。3結果3.1一般體征造模后期大鼠出現喘鳴、呼吸急促、畏寒少動、精神萎靡、毛發(fā)混亂無光澤、扎堆等病癥。造模第25與26天，各有只大鼠在造模過程中死亡

5、，解剖時發(fā)現腹腔積水，肉眼觀察其肺顏色偏暗，可能是因為肺呼吸衰落，嗆水導致死亡。3.2肺陽虛大鼠的體重變化表1顯示造模一個月后，模型組大鼠體重與正常對照組相比，顯著性下降(P0.05)。這與肺氣耗損肺氣，脾肺有相生關系，日久子盜母氣，殃及脾土，土不生金，以致肺脾兩虛，那么見哮喘氣促，面白體瘦，說明造模成功。表1實驗組鼠體重的比擬轉貼于論文聯盟.ll.3.3肺陽虛大鼠飲水變化趨勢由圖1可知，模型組大鼠與正常對照組比，后期模型組的大鼠飲水量明顯少于正常對照組大鼠。肺陽虛者肺寒氣化不行，那么通調水道之職失司，痰飲內停，從而不渴，表現為飲水量減少，說明模型的建立與臨床病癥相吻合，造模成功。圖1實驗動物

6、飲水變化趨勢圖3.4肺陽虛大鼠的背部體表溫度的變化表2顯示，與正常對照組相比，模型對照組的背部溫度有降低趨勢，造模前期無差異。造模后期模型組體表溫度低于正常對照組，呈顯著性差異(P0.05)。肺陽虛因陽虛陰盛，肺失溫煦，肌膚失溫，故形寒肢冷，其臨床的主癥之一就是背部畏寒，背部體表溫度下降，說明造模成功。表2實驗組鼠體表背部溫度的比擬3.5肺陽虛大鼠的肛溫的變化表3顯示，與正常對照組相比，模型組大鼠肛溫降低(P0.05)。肺陽虛肺陽缺乏，陰寒內盛，寒性凝滯，故造模后，大鼠肛溫降低，說明機體陽虛，造模成功3.6肺陽虛大鼠抓力的變化表4顯示，與正常對照組相比，模型組大鼠抓力降低(P0.05)。提示可

7、能與肺陽虛者衛(wèi)陽缺乏，肺寒胸陽不展，溫煦無力，肺氣無化而更加衰弱有關。表4對肺陽虛大鼠抓力的影響3.7對血流變的影響3.7.1對全血粘度的影響表5顯示：與正常對照組比擬，模型對照組低切變率(LS，10s-1)下的全血粘度顯著升高(P0.05);中、高切變率下的全血粘度呈上升趨勢。表5對肺陽虛大鼠三個切變率下全血粘度的影響與正常對照組比擬，P0.05，P0.013.7.2對全血復原粘度的影響表6顯示：與正常對照組比擬，模型對照組低切變率(LS，10s-1)下的全血復原粘度顯著升高(P0.01);中、高切變率下的全血復原粘度呈上升趨勢。表6對肺陽虛大鼠低、中、高切全血復原粘度的影響與正常對照組比擬

8、，P0.05，P0.013.7.3對血漿粘度、紅細胞壓積、血沉、血沉方程K值的影響表7顯示與正常對照組比擬，模型對照組的血漿粘度有升高趨勢，紅細胞壓積、血沉、血沉方程K值差異不大。表7對肺陽虛大鼠血漿粘度、紅細胞壓積、血沉、血沉方程K值的影響3.7.4對全血聚集指數、剛性指數、變形指數、電泳指數的影響表8顯示與正常對照組比擬，模型對照組的剛性指數、變形指數、電泳指數呈顯著性升高(P0.01)。表8對肺陽虛大鼠全血聚集指數、剛性指數、變形指數、電泳指數的影響肺朝百脈，主治節(jié)，血的運行有賴于肺氣的敷布與調節(jié)。肺陽虛者，溫煦無力，致心血不運，使血液“濃、粘、凝、聚。從血流變學的研究結果可以看出肺陽虛

9、組大鼠全血比粘度、全血復原粘度、剛性指數、紅細胞變形指教比正常組高，有顯著性差異(P0.01)，說明造模成功。4討論為進一步觀察多因素復合造模方法致肺陽虛模型在大鼠上的重現性，我們采用煙熏+冰泳+服他吧唑復合因素造模，觀察其對相關指標的影響。本實驗在經典的煙熏與寒冷結合的方法上加以改良，常溫游泳30in使其勞倦，耗其陽氣;立即予以冰水中游泳10in，給予“形寒勞倦刺激;在此根底上，我們給予模型組大鼠飲用免疫抑制劑他吧唑冰水溶液(0.1g/l)，造成免疫功能低下，脾土虛弱，母病及子(土藏金)，肺陽虛衰。觀察指標盡可能符合肺陽虛中醫(yī)臨床：肺陽虛者，肺氣虛冷，陰寒內盛，寒性凝滯，無力溫煦機體，故考察大鼠肛溫。陽虛陰盛，肺失溫煦，肌膚失溫，故形寒肢冷，故考察了其背部溫度。肺陽虛者衛(wèi)陽不布，倦怠無力，故考察了大鼠抓力。肺朝百脈，主治節(jié)。?醫(yī)學真?zhèn)鳉庋?曰：“人之一身之氣，皆氣血之所循。肺陽虛衰，必然導致氣血失調，肺陽虛者多寒邪犯肺，導致肺失溫煦，寒性凝滯，表現出“血瘀，故測定血流變。實驗結果說明模型組大鼠毛色無光、喘鳴、尿量減少、飲水減少、體重增長緩慢;其背部溫度、肛溫、抓力顯著性降低(P0.05);其血液低切變率下的全血黏度、全血復原粘度、紅細胞剛性指數、電泳指數均顯著性升高(P0.05)。說明該模型符合臨床診斷標準主證3：喘息氣短、背畏寒、四肢不溫，