臨床基因擴(kuò)增檢驗實驗室質(zhì)量手冊

1、-目錄實驗室公正性說明修訂頁第 一 章 質(zhì)量方針分子生物實驗室組織結(jié)構(gòu)圖分子生物實驗室設(shè)置平面圖第 二 章 管理程序文件程序管理文件編碼目錄實驗室內(nèi)務(wù)管理程序?qū)嶒炇屹|(zhì)量控制管理程序 儀器設(shè)備管理程序臨床標(biāo)本的管理程序?qū)嶒炇椅募?、記錄的管理程?抱怨處理程序儀器設(shè)備校準(zhǔn)程序?qū)嶒炇覚z測結(jié)果報告程序檢驗過程中發(fā)生故障時的應(yīng)急處理程序?qū)嶒炇仪鍧嵪境绦蛭募薷某绦蚰[瘤分子檢測實驗室標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程文件編碼目錄石蠟包埋組織 DNA 提取標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程石蠟包埋組織樣本 RNA 提取標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程血液 DNA 提取標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程JS-LJ-SMP0000-000 JS-LJ-SMP0001-000 JS-LJ-SMP

2、0002-000 JS-LJ-SMP0003-000 JS-LJ-SMP0004-000 JS-LJ-SMP0005-000 JS-LJ-SMP0006-000 JS-LJ-SMP0007-000 JS-LJ-SMP0008-000 JS-LJ-SMP0009-000 JS-LJ-SMP0010-000 JS-LJ-SMP0011-000 JS-LJ-SMP0012-000 JS-LJ-SMP0013-000 JS-LJ-SMP0014-000 JS-LJ-SOP0000-000 JS-LJ-SOP0001-000 JS-LJ-SOP0002-000 JS-LJ-SOP0003-000.z.-

3、口腔拭子/唾液 DNA 提取標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程組織 DNA 提取標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程組織 RNA 提取標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程反轉(zhuǎn)錄標(biāo)準(zhǔn)操作流程基因 mRNA 表達(dá)檢測標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程EGFR 基因突變 Q-PCR 標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程KRAS 基因突變 Q-PCR 標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程BRAF 基因突變 Q-PCR 標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程PDGFRA 基因突變 Q-PCR 標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程葉酸基因多態(tài)性 Q-PCR 標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程基因 SNPQ-PCR 標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程1p19q LOH 標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程MGMT 甲基化標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程樣本脫包、分類、編號、登錄、發(fā)放標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程臨床標(biāo)本采集、驗收、拒收標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程臨床標(biāo)本保存標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程試劑質(zhì)檢標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程室內(nèi)質(zhì)

4、量控制標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程室間質(zhì)量評價標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程主要儀器使用、維護(hù)、校準(zhǔn)操作規(guī)程實驗室廢棄物處理程序申請單必須信息葉酸基因檢測樣本采集注意事項 檢測報告標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程JS-LJ-SOP0004-000 JS-LJ-SOP0005-000 JS-LJ-SOP0006-000 JS-LJ-SOP0007-000 JS-LJ-SOP0008-000 JS-LJ-SOP0009-000 JS-LJ-SOP0010-000 JS-LJ-SOP0011-000 JS-LJ-SOP0012-000 JS-LJ-SOP0013-000 JS-LJ-SOP0014-000 JS-LJ-SOP0015-000 JS-LJ

5、-SOP0016-000 JS-LJ-SOP0017-000 JS-LJ-SOP0018-000 JS-LJ-SOP0019-000 JS-LJ-SOP0020-000 JS-LJ-SOP0021-000 JS-LJ-SOP0022-000 JS-LJ-SOP0023-000 JS-LJ-SOP0024-000 JS-LJ-SOP0025-000 JS-LJ-SOP0026-000 JS-LJ-SOP0027-000 JS-LJ-SOP0028-000 JS-LJ-SOP0029-000.z.修訂修訂的序號章節(jié)條款-修訂頁簡要修訂內(nèi)容批準(zhǔn)人批準(zhǔn)日期第 一 章.z.-質(zhì)量方針質(zhì)量方針題目：質(zhì)量方

6、針題目：質(zhì)量方針編號：JS-LJ-ZLC0001-000頒發(fā)部門：技術(shù)部分發(fā)部門：技術(shù)部起草：生效日期：日期：臨床基因擴(kuò)增檢驗實驗室是嚴(yán)格按照衛(wèi)生部、*省臨床基因擴(kuò)增實驗室規(guī)范化、標(biāo)準(zhǔn)化要求進(jìn)行管理與操作，我中心的質(zhì)量方針為：公正、科學(xué)、準(zhǔn)確、高效我們的檢驗工作必須做到：行為公正 任何情況下，不被各種利益所驅(qū)動，客觀公正、獨(dú)立誠實地開展檢驗工作。方法科學(xué) 遵守國家有關(guān)法律、法規(guī)，依據(jù)有關(guān)檢驗標(biāo)準(zhǔn)規(guī)范。.z.-數(shù)據(jù)準(zhǔn)確 認(rèn)真執(zhí)行本中心工作程序，對檢驗工作進(jìn)行全過程質(zhì)量控制，確保檢驗數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性和可靠性。辦事高效 在規(guī)定的工作日內(nèi)接受客戶委托，出具檢驗報告。第 二 章分子實驗室組織結(jié)構(gòu)圖第 二 章

7、題目：分子生物實驗室組織結(jié)構(gòu)圖起草：審核：日期：日期：編號：JS-LJ-ZLC0002-000批準(zhǔn)：日期：頒發(fā)部門：技術(shù)部生效日期：分發(fā)部門：技術(shù)部管理程序文件.z.-實驗室內(nèi)務(wù)管理程序題目：實驗室內(nèi)務(wù)管理程序起草：審核：日期：日期：編號：JS-LJ-SMP0001-000批準(zhǔn)：日期：頒發(fā)部門：技術(shù)部生效日期：分發(fā)部門：技術(shù)部目的：實驗人員的安全性。適用范圍：本制度適用于PCR作。程序?qū)嶒炇业脑O(shè)置和人流、物流管理本中心在二樓大實驗室內(nèi)設(shè)置臨床基因擴(kuò)增檢驗實驗室，即 PCR 實驗室。PCR 實驗室的設(shè)置分四個獨(dú)立工作區(qū)：PCR 試劑準(zhǔn)備區(qū)（一區(qū)）PCR處理區(qū)（二區(qū)）、PCR（三區(qū)）、PCR（四區(qū)

8、），各區(qū)設(shè)有專門的責(zé)任人。各區(qū)門前有醒目標(biāo)志，每個區(qū)都設(shè)置緩沖區(qū)，用于更換工作服、工作鞋及維持空氣流向。進(jìn)入各個工作區(qū)域工作時，必須嚴(yán)格遵守單一方向順序：即從第一區(qū)的試劑準(zhǔn)備區(qū)第二區(qū)的樣本處理區(qū)第三區(qū)的擴(kuò)增區(qū)第四區(qū)的產(chǎn)物分析區(qū)。嚴(yán)禁誤入和逆向進(jìn)入各工作區(qū)。一、二區(qū)通過排風(fēng)裝置保持正壓，三、四區(qū)通過抽風(fēng)裝置保持負(fù)壓。各區(qū)配備專用的儀器、設(shè)備、輔助設(shè)施、耗材、清潔用品、辦公和消毒用區(qū)為綠色標(biāo)簽，第三區(qū)為白色標(biāo)簽，第四區(qū)為粉色標(biāo)簽不得混用。第四區(qū)為粉色，進(jìn)入各區(qū)實驗室，必須更換本室有顏色標(biāo)識的工作服，換上專用鞋， 帶上手套。.z.-實驗室的物流同樣嚴(yán)格遵守上述唯一流向制度，并通過傳遞窗進(jìn)行傳遞。實驗

9、室清潔消毒管理毒。實驗結(jié)束后實驗人員必須立即對工作區(qū)進(jìn)行清潔消毒，操作完成后打開排氣扇。桌面在工作結(jié)束后，必須立即用消毒液（2g/L75%酒精等）可移動紫外燈調(diào)至實驗臺 60-90cm 內(nèi)照射消毒 30-60min，室內(nèi)空氣紫外燈消毒30-60min。各區(qū)配備專用清潔工具，并有明顯的區(qū)域標(biāo)示，不得混用。.z.-實驗室人員配置及培訓(xùn)程序題目：實驗室人員配置及培訓(xùn)程序起草：審核：日期：日期：編號：JS-LJ-SMP0002-000批準(zhǔn)：日期：頒發(fā)部門：技術(shù)部生效日期：分發(fā)部門：技術(shù)部目的：作任務(wù)。適用范圍：應(yīng)熟知并遵守該程序。程序人員要求中專以上學(xué)歷。實驗室工作人員應(yīng)參加衛(wèi)生部或市臨檢中心舉辦的

10、PCR格證。進(jìn)行實驗工作，實驗報告由有資格的本室工作人員出具，并應(yīng)在最短的時間內(nèi)取得上崗培訓(xùn)合格證。人員配置實驗室應(yīng)根據(jù)工作需要配備足夠的工作人員，目前實驗室操作人員 4中 2 人已獲得培訓(xùn)合格證，視工作量的增加和業(yè)務(wù)發(fā)展需要，適當(dāng)增加工作人員。各級技術(shù)人員履行相應(yīng)的工作職責(zé)。人員培訓(xùn)及考核實驗室負(fù)責(zé)人（或技術(shù)負(fù)責(zé)人）定期參加衛(wèi)生部 PCR 室間質(zhì)評總結(jié)會。.z.-實驗室工作人員定期參加相關(guān)學(xué)術(shù)交流會議。安排未取得上崗培訓(xùn)合格證的工作人員在合適的時間內(nèi)參加技術(shù)培訓(xùn)。人員管理研究成果、培訓(xùn)等相關(guān)材料復(fù)印件。技術(shù)檔案包括文本檔案和電子檔案，文本檔案每年更新 1 次。.z.-實驗室質(zhì)量控制管理程序題

11、目：實驗室質(zhì)量控制管理程序起草：審核：日期：日期：編號：JS-LJ-SMP0003-000批準(zhǔn)：日期：頒發(fā)部門：技術(shù)部生效日期：分發(fā)部門：技術(shù)部目的：監(jiān)控本實驗室常規(guī)工作的可靠性和有效性，確定檢測結(jié)果能否報告。適用范圍：并遵守本程序，并逐步完善室內(nèi)質(zhì)控和室間質(zhì)評工作。程序室內(nèi)質(zhì)控由于核酸擴(kuò)增的高敏感性，為避免假陽性和假陰性，必須對 DNA 和 RNA析的各步進(jìn)行質(zhì)量控制，以保證測定結(jié)果的準(zhǔn)確性和重復(fù)性。室內(nèi)質(zhì)控包括標(biāo)本制備、逆轉(zhuǎn)錄、擴(kuò)增和產(chǎn)物分析中的每一步。用內(nèi)標(biāo)質(zhì)控方法也可采用外標(biāo)質(zhì)控方法。在測定血清/血漿病原體如 HBV-DNA、HCV-RNA統(tǒng)一發(fā)放的質(zhì)控品作為質(zhì)控樣本，與待測臨床標(biāo)本等

12、同處理提取核酸及擴(kuò)增，以判斷逆轉(zhuǎn)錄及擴(kuò)增檢測的效果。質(zhì)控樣本在擴(kuò)增時必須使用與患者的標(biāo)本相同的主反應(yīng)混合液。每一個 PCR 反應(yīng)都必須設(shè)外加陰性質(zhì)控（污染監(jiān)測質(zhì)控）。測定結(jié)果的評價：采用實時熒光定量 PCR號作出定性判斷，然后再進(jìn)行定量分析，避免一些非特異性熒光信號對結(jié)果分析的干擾。.z.-當(dāng)質(zhì)控標(biāo)本實驗數(shù)據(jù)在控時，方可發(fā)出臨床標(biāo)本的檢測報告。采取措施，并做記錄。室間質(zhì)評參加*省或衛(wèi)生部臨檢中心相關(guān)檢測的室間質(zhì)量評價。室間質(zhì)控樣本的接收和驗收參見室間質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程。質(zhì)控標(biāo)本的檢測按常規(guī)臨床標(biāo)本對待，檢測結(jié)果須在截止日期前上報。關(guān)試劑盒的使用效果。.z.-儀器設(shè)備管理程序題目：儀器設(shè)備管理程序

13、起草：審核：日期：日期：編號：JS-LJ-SMP0004-000批準(zhǔn)：日期：頒發(fā)部門：技術(shù)部生效日期：分發(fā)部門：技術(shù)部目的：用壽命。適用范圍：用、校正和維護(hù)管理。程序儀器購買原則：根據(jù)中心的有關(guān)規(guī)定本著“質(zhì)優(yōu)價廉”進(jìn)行，所購儀器必須三（生產(chǎn)許可證、產(chǎn)品注冊證、經(jīng)營執(zhí)照符外包裝：廠名廠址、檢測、批準(zhǔn)文號、批號和有效期等。儀器購買程序22（1 家亦可）試劑廠家的有關(guān)儀器信息，提交中心儀器審核組討論。儀器的購買：由物流部負(fù)責(zé)與供貨商聯(lián)系供貨，交儀器審核組討論決定。家的供貨清單上簽字。儀器的放置：根據(jù)儀器本身的要求及基因診斷實驗室各區(qū)的要求安放儀器?；蛟\斷實驗室的主要儀器設(shè)備均需建立檔案，檔案內(nèi)容包

14、括：設(shè)備的名稱及SOP常規(guī)儀器設(shè)備的操作使用程序.z.-儀器設(shè)備的使用授權(quán)僅有本實驗室工作人員有權(quán)使用實驗室的儀器設(shè)備。中心主任考核認(rèn)可。PCR統(tǒng)的建立，管理文件的撰寫工作。儀器的使用儀器設(shè)備的使用嚴(yán)格遵守分區(qū)使用管理。儀器設(shè)備的使用必須嚴(yán)格遵循儀器設(shè)備的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程。常規(guī)儀器設(shè)備的維護(hù)保養(yǎng)程序儀器設(shè)備應(yīng)定期校準(zhǔn)，具體參照“儀器設(shè)備校準(zhǔn)程序”。交儀器部設(shè)備維修人員或相關(guān)專門維修單位進(jìn)行處理。儀器應(yīng)有工作狀態(tài)標(biāo)識，正常運(yùn)行的各區(qū)儀器應(yīng)貼有相應(yīng)的標(biāo)簽（綠色）其狀態(tài)。待維護(hù)的儀器用黃色標(biāo)簽。有故障待修暫停儀器用紅色標(biāo)簽。需定期作校準(zhǔn)或檢定的儀器應(yīng)有校準(zhǔn)或檢定日期及下次校準(zhǔn)或檢定日期的記錄。3.10.

15、本實驗室所有儀器、設(shè)備均為專用不外借。.z.-臨床標(biāo)本的管理程序題目：臨床標(biāo)本的管理程序起草：審核：日期：日期：編號：JS-LJ-SMP0005-000批準(zhǔn)：日期：頒發(fā)部門：技術(shù)部生效日期：分發(fā)部門：技術(shù)部目的：性。適用范圍：本程序適用于各類臨床標(biāo)本的管理。程序標(biāo)本的唯一性標(biāo)識：標(biāo)識構(gòu)成中心代碼、病人*、標(biāo)本采集日期、檢測、該檢測批次的標(biāo)本序號，無間隔符號。標(biāo)本的唯一性標(biāo)識須字跡清晰明了，不得隨意作任何涂改；必須時，在舊標(biāo)識上劃雙線更改，更改后應(yīng)保持舊標(biāo)識可辨識。具體見“標(biāo)本唯一標(biāo)識編號操作規(guī)程”。外包裝：廠名廠址、檢測、批準(zhǔn)文號、批號和有效期等。血液標(biāo)本；接收標(biāo)本時應(yīng)核對標(biāo)本與檢驗申請單的一

16、致性。標(biāo)本接受人須檢查標(biāo)本狀態(tài)：標(biāo)本合乎要求，須在標(biāo)本記錄上注明合格，作進(jìn)一步處理；標(biāo)本不合格，工作人員有權(quán)拒受標(biāo)本，其它后續(xù)處理過程中發(fā)現(xiàn)的不合格，應(yīng)記錄其狀態(tài)并通知相關(guān)醫(yī)院重新送檢。具體見“臨床標(biāo)本采集、驗收、拒收操作規(guī)程”。臨床標(biāo)本的保存：當(dāng)天不檢測的標(biāo)本可經(jīng)離心后吸取血清及時放置于-20存。具體見“臨床標(biāo)本保存操作規(guī)程”。度的有效氯消毒液中，然后再作相應(yīng)的處理。所有標(biāo)本均可能具有傳染性，須嚴(yán)格遵守檢驗中心有關(guān)院內(nèi)感染及醫(yī)用垃圾的管理和處理規(guī)定，工作人員須注意保持并隨時.z.-檢查容器的完整和無標(biāo)本外泄發(fā)生。具體見“實驗室廢棄物處理程序”和“實驗室生物防護(hù)和安全管理程序”。.z.-實驗室

17、生物防護(hù)與安全管理程序題目：實驗室生物防護(hù)與安全管理程序起草：審核：日期：日期：編號：JS-LJ-SMP0006-000批準(zhǔn)：日期：頒發(fā)部門：技術(shù)部生效日期：分發(fā)部門：技術(shù)部目的：保證實驗室、實驗人員和外部環(huán)境的安全。適用范圍：本程序適用于整個臨床基因診斷實驗室。程序：*國傳染病防治法，參照微生物和生物醫(yī)學(xué)實驗室生物安全通用準(zhǔn)則以及*省臨床檢驗中心下發(fā)的*省臨床檢驗專業(yè)質(zhì)控督查基本內(nèi)容和對實驗室、實驗人員和環(huán)境的污染，具體內(nèi)容詳見中心文件“生物安全手冊”。人生物安全防護(hù)，實驗中嚴(yán)格按照各種標(biāo)準(zhǔn)操作程序操作外包裝：廠名廠址、檢測、批準(zhǔn)文號、批號和有效期等。每天更換廢液缸的2g/L2g/L1/5過

18、空白對照、陰性對照、陽性對照和弱陽性（低拷貝數(shù)）對照進(jìn)行質(zhì)控。實驗臺面日常清潔時使用 75的酒精擦拭。每區(qū)每天實驗前后紫外燈照射 min，如有需要可延長照射時間，對工作臺面實驗前后也要用紫外燈照射 3060 min， 并作好記錄。75%的酒精清潔桌面。照實驗室廢棄物處理制度處理。.z.-皂、工作服可能同時被大量細(xì)菌污染者。消毒劑可用 2g/L 有效氯含量消毒液。其它安全措施：得入內(nèi)。與實驗無關(guān)的任何私人物品嚴(yán)禁入內(nèi)。法。禁止裸手接觸任何物質(zhì)，不要戴著手套觸摸皮膚。實驗使用后的廢物按照不同的處理要求進(jìn)行處理。實驗人員進(jìn)入 PCR的工作服，并掛在指定的地方。工作結(jié)束后，立即洗手才可離開。實驗結(jié)束后

19、必須立即對工作區(qū)進(jìn)行清潔消毒。桌面在工作結(jié)束后，必須立即（2g/L75%酒精等臺 60-90cm 內(nèi)照射消毒 30-60min。保證實驗室所用的實驗消耗品均經(jīng)過高壓滅菌處理。防盜措施：設(shè)內(nèi)保安全機(jī)制，由 PCR 室工作人員為安全員，負(fù)責(zé)工作完畢后檢查門窗。查。如調(diào)查不合格，對相應(yīng)責(zé)任人進(jìn)行處罰，并限期整改。應(yīng)急措施：告上級，并暫時關(guān)閉實驗室，進(jìn)行嚴(yán)格的消毒，并根據(jù)實際情況，采取相應(yīng)有效措施避免感染的發(fā)生或蔓延。如遇實驗中手指被劃破，應(yīng)立即用水沖洗、消毒包扎傷口，.z.-如此標(biāo)本為陽性，應(yīng)立即接種疫苗，同時上報*省臨檢中心，提請再次審核實驗室消毒隔離情況。測。.z.-實驗室文件、記錄的管理程序題

20、目：實驗室文件、記錄的管理程序起草：審核：日期：日期：編號：JS-LJ-SMP0007-000批準(zhǔn)：日期：頒發(fā)部門：技術(shù)部生效日期：分發(fā)部門：技術(shù)部目的：確保資料的記錄、保存狀態(tài)在控。適用范圍：單和出具的檢測報告單、儀器使用記錄等。程序病人和標(biāo)本信息：接收標(biāo)本后，在標(biāo)本登記表中登記病人和標(biāo)本信息，包 括：病人*、性別、年齡、檢測、標(biāo)本類型、標(biāo)本狀態(tài)、送檢日期、標(biāo)本接收人等， 批號和有效期等。檢測過程中的實驗記錄：在專用實驗記錄簿上記載，不同實驗區(qū)的記錄簿不得混用。試劑準(zhǔn)備和貯存區(qū)應(yīng)記錄檢測所用的試劑盒情況（名稱、批號、數(shù)量控結(jié)果和分析。PCR保持唯一性，前面英文字母為實驗,后面六位數(shù)字為實驗日

21、期，如 HBV 020710。將病例資料、樣品資料、檢測結(jié)果錄入報告系統(tǒng)，產(chǎn)生結(jié)果報告單，經(jīng)實驗室主任審核簽名；檢驗申請單、檢驗結(jié)果記錄（包括病例資料）工作臺抽屜里，統(tǒng)一建檔封存，至少保存 2 年以上。.z.-紅線，填上新內(nèi)容，說明更改原因并簽名。實驗記錄須妥善保存，涉及醫(yī)療糾紛及特殊情況外，本室無義務(wù)提供給他人借閱或復(fù)印通過空白對照、陰性對照、陽性對照和弱陽性（低拷貝數(shù)）控。.z.-實驗耗材購買、驗收、儲放程序題目：實驗耗材購買、驗收、儲放程序起草：審核：日期：日期：編號：JS-LJ-SMP0008-000批準(zhǔn)：日期：頒發(fā)部門：技術(shù)部生效日期：分發(fā)部門：技術(shù)部目的：規(guī)定試劑購買原則、驗收的程

22、序和試劑的正確貯存。適用范圍：本程序適用于實驗室所購的診斷試劑盒、實驗耗材。程序試劑的購買和管理試劑購買原則：PCR 檢測試劑選用原則“質(zhì)優(yōu)價廉”并與ABI 7500套，所購試劑必須三證齊全。（三證包括：）試劑購買程序試劑廠家的確定：先由具體檢測人員提供 2 家或 2 家以上（特殊情況 1 家亦可供貨商，將申請單交物流部與供貨商確定試劑價格。試劑的購買：操作人員提前 1供貨。生產(chǎn)廠商，如在使用過程中發(fā)現(xiàn)質(zhì)量問題，操作人員及時向?qū)嶒炇邑?fù)責(zé)人匯報，必要時提出更換試劑生產(chǎn)廠家的要求，交試劑審核組討論決定。試劑驗收：物流部專門人員負(fù)責(zé)核對試劑品名、數(shù)量和價格，并在供貨清單上簽字。操作人員負(fù)責(zé)試劑質(zhì)量驗

23、收（內(nèi)外包裝驗收）：.z.-（產(chǎn)日期、效期）、所購試劑需保證至少仍有三個月以上效期；貨清單由試劑管理人員保管，試劑驗收后登記存儲。試劑儲存：試劑盒保存按照說明書規(guī)定進(jìn)行。PCR反應(yīng)體系試劑保存于試劑儲存區(qū)；對照品、定量校準(zhǔn)品、核酸提取試劑儲存于樣品處理區(qū)。試劑質(zhì)檢：按照試劑質(zhì)檢標(biāo)準(zhǔn)操作程序操作。通知物流部辦理退換貨手續(xù)。實驗耗材的購買和管理量，由實驗室負(fù)責(zé)人簽字同意后交物流部購買。損，如發(fā)生破損或其它質(zhì)量問題，給予退回。由實驗室工作人員負(fù)責(zé)進(jìn)行質(zhì)量驗收。試劑，并杜絕浪費(fèi)現(xiàn)象。試劑外借必須征得實驗室負(fù)責(zé)人員同意，并履行中心有關(guān)借出手續(xù)。.z.-抱怨處理程序題目：抱怨處理程序起草：審核：日期：日期

24、：編號：JS-LJ-SMP0009-000批準(zhǔn)：日期：頒發(fā)部門：技術(shù)部生效日期：分發(fā)部門：技術(shù)部目的：“抱怨”，鞏固和完善實驗室質(zhì)量體系，特制訂本程序。適用范圍：人處理。程序接到抱怨記錄抱怨提出針對具體抱怨的處理方法將不在常見抱怨處理方式范圍內(nèi)的處理方法交室負(fù)責(zé)人審核征求抱怨方對處理方法的意見執(zhí)行解決方案記錄最后的處理結(jié)果處理措施：針對客戶對服務(wù)態(tài)度抱怨的處理措施4.1.1.4.1.2.4.1.3.接到抱怨后，由室負(fù)責(zé)人責(zé)成相關(guān)人員向客戶致歉。對患者提出的合理要求及時進(jìn)行處理。調(diào)查事情原委，根據(jù)調(diào)查結(jié)果對相關(guān)責(zé)任人進(jìn)行處罰。.z.-4.1.4.記錄抱怨及其處理結(jié)果。針對客戶對結(jié)果準(zhǔn)確性抱怨的處

25、理措施4.2.1.4.2.2.4.2.3.為客戶展示原始實驗數(shù)據(jù)。向客戶解釋相關(guān)實驗程序和可能臨床情況，幫助客戶解除疑慮。如確有實驗結(jié)果不符合有效性要求或出現(xiàn)錯誤，則應(yīng)及時糾正錯誤，重新實驗以得到準(zhǔn)確結(jié)果。同時由室負(fù)責(zé)人向客戶致歉以爭取得到其諒解，按有關(guān)條例對責(zé)任人進(jìn)行相應(yīng)處罰，并記錄。針對客戶對檢測結(jié)果和臨床診斷的符合率抱怨的處理措施結(jié)果的因素，并形成書面報告。解釋。就調(diào)查發(fā)現(xiàn)的問題進(jìn)行針對性解決。與客戶建立定期交流機(jī)制，定期了解臨床使用情況和對臨床作出針對客戶對結(jié)果發(fā)放時效性抱怨的處理措施4.4.1.4.4.2.嚴(yán)格按承諾時間發(fā)放臨床報告。在與客戶交流會上就報告發(fā)放過程及時間作出解釋，獲取

26、臨床對結(jié)果報告時效性的理解。抱怨解決的原則怨，對提出抱怨的人員要做到語言文明，熱情接待。理，實驗室所有工作人員均有責(zé)任接待申訴者。理者、聯(lián)系方式等。.z.-申訴者。如抱怨涉及到實驗室操作程序是否符合臨床基因擴(kuò)增實驗室管理暫行辦法、室的操作程序確實不符合有關(guān)規(guī)定，應(yīng)重新修訂操作規(guī)程后執(zhí)行。當(dāng)實驗室負(fù)責(zé)人無法滿意解決報怨時，應(yīng)將有關(guān)材料遞交中心，由中心處理。.z.-儀器設(shè)備校準(zhǔn)程序題目：儀器設(shè)備校準(zhǔn)程序編號：JS-LJ-SMP0010-000批準(zhǔn)：日期：頒發(fā)部門：技術(shù)部分發(fā)部門：技術(shù)部生效日期：目的：確保實驗室儀器設(shè)備得到妥善的管理，確保檢測質(zhì)量。適用范圍：本程序適用于適用于實驗室所有的儀器設(shè)備。

27、程序校準(zhǔn)方法：定量擴(kuò)增儀、生物安全柜、冷凍高速離心機(jī)功能性儀器由各生產(chǎn)廠家每年進(jìn)行一次維修檢測，并將此作為校準(zhǔn)依據(jù)。各儀器的校準(zhǔn)單位（即生產(chǎn)廠家）一覽表。準(zhǔn)。移液器校準(zhǔn)外送專業(yè)機(jī)構(gòu)專業(yè)人員進(jìn)行校準(zhǔn)。干式恒溫器使用經(jīng)質(zhì)量檢定的溫度計進(jìn)行自行校準(zhǔn)。溫濕度計校準(zhǔn)以經(jīng)過質(zhì)量計量監(jiān)督局校準(zhǔn)過的其他溫度計和濕度計進(jìn)行校進(jìn)行測試。新燈管要求紫外線強(qiáng)度大于或等于 90UW/cm2, 舊燈管紫外線強(qiáng)度大于或等于 70 UW/cm2。每年聯(lián)系生產(chǎn)廠家進(jìn)行一次維護(hù)和檢測，并將此作為校準(zhǔn)依據(jù)。校準(zhǔn)計劃3.2.1.3.2.2.3.2.3.啟用校準(zhǔn)：設(shè)備在投入使用時實施啟用校準(zhǔn)。周期校準(zhǔn)：設(shè)備在投入使用后，每年實施一次校

28、準(zhǔn)。維修后校準(zhǔn)：設(shè)備在維修后須經(jīng)校準(zhǔn)方可重新投入使用。.z.-校準(zhǔn)計劃外的校準(zhǔn)：如在檢測及EQA，IQC及其它可疑情況時，通過分析對可疑設(shè)備及時實施校準(zhǔn)。區(qū)，然后依次為樣本處理區(qū)和 PCR 擴(kuò)增區(qū)。每校準(zhǔn)完一個區(qū)的移液器，將其放回原處后，再取下一個區(qū)的移液器進(jìn)行校準(zhǔn)。校準(zhǔn)安排在不進(jìn)行樣本檢測的日期完成。校準(zhǔn)的有效標(biāo)識：經(jīng)校準(zhǔn)的設(shè)備加貼綠色標(biāo)簽，標(biāo)簽上應(yīng)標(biāo)明本次校準(zhǔn)的日期和結(jié)果及下次校準(zhǔn)的計劃預(yù)定日期。批準(zhǔn)后由各儀器設(shè)備責(zé)任人按計劃實施。字。校準(zhǔn)記錄須妥善保存于 PCR 實驗室三區(qū)直至設(shè)備報廢。.z.-實驗室檢測結(jié)果報告程序題目：實驗室檢測結(jié)果報告程序起草：審核：日期：日期：編號：JS-LJ-S

29、MP0011-000批準(zhǔn)：日期：頒發(fā)部門：技術(shù)部生效日期：分發(fā)部門：技術(shù)部目的：序。適用范圍：本程序適用于本基因擴(kuò)增檢驗實驗室所有臨床檢測的結(jié)果報告，只有經(jīng)培訓(xùn)并獲得上崗證的工作人員才有權(quán)審核和簽發(fā)報告單。程序檢測結(jié)果的報告應(yīng)準(zhǔn)確、清晰、明確、客觀和及時，杜絕虛假報告。PCR 測定時，其檢測數(shù)據(jù)要經(jīng)過分析，避免因非特異性熒光而造成假陽性結(jié)果。根據(jù)質(zhì)控品判斷PCR則應(yīng)重新測定。（拷貝數(shù)/ml則對樣本稀釋后再測，結(jié)果乘上稀釋倍數(shù)；如結(jié)果低于方法的線性范圍下限，則報告小于檢測下限。病人檔案及測定結(jié)果及病人檔案一并登記到實驗結(jié)果記錄表中，由室負(fù)責(zé)人管理所有病人資料。每份報告均應(yīng)由我實驗室出具；報告內(nèi)容

30、至少應(yīng)包括：病人*、性別、年齡、樣本存 2 年以上。報告單應(yīng)及時發(fā)出。由送化驗單人員負(fù)責(zé)送往各送檢醫(yī)院。打印當(dāng)日檢測報告匯總表，存檔，妥善保存 2 年以上.z.-當(dāng)臨床科室醫(yī)生要求報告結(jié)果時，應(yīng)先確認(rèn)對方身份，核對其所查詢的病人*床號等情況，方可報告，并明確告知對方，實驗的最終結(jié)果以檢測報告單為準(zhǔn)。知對方其檢測結(jié)果，并需明確告知對方，實驗的最終結(jié)果以檢測報告單為準(zhǔn)。.z.-檢驗過程中發(fā)生故障時的應(yīng)急處理程序題目：檢驗過程中發(fā)生故障時的應(yīng)急處理程序起草：審核：日期：日期：編號：JS-LJ-SMP0012-000批準(zhǔn)：日期：頒發(fā)部門：技術(shù)部生效日期：分發(fā)部門：技術(shù)部目的：及時性和準(zhǔn)確性，特制定本程

31、序。適用范圍：本程序適用于可能影響到檢測報告發(fā)出的儀器設(shè)備和試劑等，對于潛在應(yīng)的應(yīng)急處理程序，室負(fù)責(zé)人有責(zé)任組織并直接監(jiān)督本程序的實施。程序程度。序見儀器設(shè)備管理程序。對于發(fā)生故障的儀器設(shè)備，及時維修的同時，采取以下處理辦法。有滿足使用要求的替用設(shè)備的，啟用替用設(shè)備。可借用其他部門儀器設(shè)備時，核實該設(shè)備的使用狀態(tài)良好后可借用。措施（特別是防污染）的要求。先作質(zhì)量檢測，合格后方可使用。.z.-當(dāng)有樣本或反應(yīng)管破裂，并泄露于離心機(jī)內(nèi)或擴(kuò)增儀時，應(yīng)停止工作，立即用浸75%的乙醇消毒液的棉簽檫拭離心機(jī)或擴(kuò)增儀，然后紫外燈照射 30 min；始標(biāo)本按要求保存好與下一批標(biāo)本一起檢測。2g/L液的毛巾覆蓋

32、30 min 后，清水擦干再用紫外線燈照射 30 min。若質(zhì)控品出現(xiàn)問題，應(yīng)更換其他批次的質(zhì)控品。如果試劑配制與標(biāo)本處理過程中遇到停電狀況，把試劑、標(biāo)本先保存在冰箱里， 等待電源來時再繼續(xù)操作。如果在擴(kuò)增過程中遇到停電，實驗室內(nèi)部UPS電，使 PCR 實驗操作完成。儀器設(shè)備故障或試劑質(zhì)量問題不能得到解決，預(yù)期將會影響到檢測報告的及時發(fā)出，可將標(biāo)本送至其它實驗室檢查（該實驗室同樣應(yīng)為獲同類認(rèn)準(zhǔn)的PCR 檢測實驗室如已影響到報告的及時發(fā)出，應(yīng)向相關(guān)醫(yī)院公告，取得病人和醫(yī)生的諒解。影響到檢測報告發(fā)出的情況，應(yīng)在“應(yīng)急處理登記表”作記錄。.z.-實驗室清潔消毒程序題目：實驗室清潔消毒程序編號：JS-

33、LJ-SMP0013-000批準(zhǔn)：日期：頒發(fā)部門：技術(shù)部分發(fā)部門：技術(shù)部生效日期：目的：保證實驗室環(huán)境的整潔，防止污染。適用范圍：適于實驗室工作環(huán)境、實驗臺面、工作服、移液器等的清潔消毒工操作程序消毒液配制配制 2g/L 有效氯消毒液：參照消毒劑說明書配制終濃度為 2g/L液。使用，隔夜如使用時應(yīng)根據(jù)本 SOP紫外消毒紫外消毒須根據(jù)需要設(shè)定時間，通常為 30 min，根據(jù)需要適當(dāng)延長時間。消毒結(jié)束后，關(guān)閉電源開關(guān)。實驗室消毒清潔程序窗、地板。實驗過程中如發(fā)生標(biāo)本或試劑外濺，應(yīng)立即用含2g/L30 min，再進(jìn)行擦拭，隨后用清水擦洗，并作記錄。實驗結(jié)束后用含 2g/L 有效氯消毒液對臺面進(jìn)行清潔

34、，紫外燈照射 30 min。.z.-實驗結(jié)束后，用移動紫外消毒車對工作臺面進(jìn)行紫外照射 30 min30 min。實驗結(jié)束后，開啟室內(nèi)紫外燈對實驗室進(jìn)行紫外照射消毒至少 30 min。實驗結(jié)束后，用含 2g/L 有效氯消毒液對各區(qū)所有儀器設(shè)備進(jìn)行擦拭清潔。每次對使用過的移液器、鑷子用 75%酒精棉球進(jìn)行擦拭。每周將待清潔工作服高壓滅菌后洗滌消毒，不同實驗區(qū)的工作服隔天洗滌。.z.-文件修改程序題目：文件修改程序起草：審核：日期：日期：編號：JS-LJ-SMP0014-000批準(zhǔn)：日期：頒發(fā)部門：技術(shù)部生效日期：分發(fā)部門：技術(shù)部目的：保證文件完整性和有效性。適用范圍：本實驗室管理體系的所有文件。

35、程序：*出申請。申請在中心會議上通過，文件即可修改。文件修改由原撰寫人執(zhí)行。1、2、3、4 順序遞增，標(biāo)示在版號后。發(fā)布，并同時生效執(zhí)行，原文件同時作廢。文件修改內(nèi)容的相關(guān)記錄由實驗室負(fù)責(zé)人保存。.z.-石蠟包埋組織 DNA 提取標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程題目：石蠟包埋組織 DNA 提取標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程起草：審核：日期：日期：編號：JS-LJ-SOP0001-001批準(zhǔn)：日期：頒發(fā)部門：技術(shù)部生效日期：分發(fā)部門：技術(shù)部目的：/DNADNA ，以從石蠟包埋組織中提取高質(zhì)量的基因組 DNA。適用范圍：本程序適用于所有石蠟包埋組織樣品的DNA方法原理：利用細(xì)胞裂解液裂解細(xì)胞核釋放基因組DNA，組 DNA，經(jīng)蛋白酶消化

36、、漂洗液清洗除去蛋白質(zhì)、脂質(zhì)以及多糖等雜質(zhì)后，用純化液DNA。實驗準(zhǔn)備:儀器和試劑：/離心柱）（百泰克1.5 ml，20200l，1001000l預(yù)備：實驗前 10 min56；另一水浴鍋調(diào)制 90；過程在抽提專用實驗臺進(jìn)行，穿實驗服，戴乳膠手套及口罩。漂洗液 WB 使用前確認(rèn)加入無水乙醇，用記號筆在瓶上標(biāo)記。其余溶液 TL 或 CB37水浴重新溶解，并混勻。樣本確認(rèn)：質(zhì)量及是否足量等。實驗步驟:組織脫蠟：1.5 ml 離心管管蓋，用移液槍加入 1ml 5-8 片 10 m（織樣品表面輕輕刮去不含組織的石蠟表層，再刮取 5-10um若是蠟卷，則直接用干.z.-凈的槍頭挑取適量樣本）輕輕刮入 1

37、.5 ml 離心管，密蓋，振蕩器振蕩 30s；于離心機(jī)內(nèi)12000 rpm 離心 2 min，棄上清至專用廢液缸。注意不要棄掉沉淀。再加入 1 ml 無水乙醇，密蓋，再用振蕩器充分振蕩混勻；于離心機(jī)內(nèi) 12000 rpm 離心 2 min，棄上清專用廢液缸。打開管蓋，于室溫或 37干燥 10-15 min，至酒精完全揮發(fā)，備用。過程使用槍頭為一次性耗用物，不得反復(fù)使用。消化：200 l 裂解液TL，30 l 蛋白酶K，64水浴鍋水浴 或直至樣品完全溶解水浴鍋水浴 30min，短暫離心，試管壁上的溶液收集到管底。200 l 結(jié)合液CB100l暫離心，試管壁上的溶液收集到管底。轉(zhuǎn)移溶液：（不要沉淀

38、都轉(zhuǎn)移到一個吸附柱中，12000 rpm 離心倒去收集管中廢液。重新將吸附柱放回收集管中。洗滌：500 l 抑制物去除劑 IR，棄槍頭，12000 rpm 離心 30s掉收集管中廢液。700 l 漂洗液 WB，12000 rpm，離心 30s，倒掉收集管中廢液，加500l 漂洗液 WB，12000 rpm，離心 30s，倒掉收集管中廢液。晾干吸附柱：12000 rpm 2min，1.5 ml2 min 或以上以徹底晾干吸附材料中殘余的酒精。洗脫：65l 的洗脫緩沖液 預(yù)熱），2-3 12000 rpm 離心 1min，離心管中的液體即為抽提的基因組 DNA。5.8. 濃度測量：用分光光度計測量

39、DNA 濃度。質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)：DNA20ng/l，OD260/OD280 約為 1.6-2.0 則認(rèn)為 DNAPCRDNA 暫時不用，可置于-20保存?zhèn)溆谩?z.-關(guān)機(jī)及實驗臺整理：實驗完成后，關(guān)閉水浴鍋，所有用過的移液器調(diào)至最大量程， 擺放整齊，所有用過的東西歸回原位。最后用 75%酒精噴灑實驗臺面，2 min凈。注意事項：試劑盒在第一次使用前請按試劑瓶標(biāo)簽說明在漂洗液WB醇，并做好標(biāo)記；溶液使用后，應(yīng)避免長期暴露于空氣中，用后應(yīng)及時蓋緊蓋子。剩余石蠟標(biāo)本在下次接收樣本時返還客服部，并由客服簽字確認(rèn)。參考文獻(xiàn)： 細(xì)胞、組織基因組DNA 提取試劑盒說明書。（百泰克）.z.-石蠟包埋組織樣本RNA 提

40、取標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程題目：石蠟包埋組織樣本 RNA 提取標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程起草：審核：日期：日期：編號：JS-LJ-SOP0002-000批準(zhǔn)：日期：頒發(fā)部門：技術(shù)部生效日期：分發(fā)部門：技術(shù)部目的：柱提法從石蠟包埋組織樣本中提取高質(zhì)量的RNA。適用范圍：本程序適用于所有石蠟包埋組織樣品的RNA 提取。方法原理：/酚一步法裂解細(xì)胞和滅活 RNA，然后總RNA 在高離序鹽狀態(tài)下選擇性吸附于離心柱內(nèi)硅基質(zhì)膜，再通過一系列快速的漂洗離心的步驟， 漂洗液將細(xì)胞代謝物、蛋白等雜質(zhì)去除，最后低鹽的RNase free water 將純凈RNA基膜上洗脫。實驗準(zhǔn)備：儀器和試劑：通風(fēng)櫥，小型高速冷凍離心機(jī)；固定組織基因組R

41、NA（離心柱）PTL，蛋白酶 K，裂解液 MRLRE，漂洗液 RW，RNase-free H2O,70%乙醇，RNase-free 吸附柱，氯仿，收集管，移液器及槍頭。注意：所有接觸樣品的試劑、耗材均需保證無 RNA 酶，無菌，若發(fā)現(xiàn)可能存在污染， 要立即更換。實驗前預(yù)備： 10min次性乳膠手套及口罩。樣本確認(rèn)：質(zhì)量及是否足量等。實驗步驟：組織脫蠟：1 ml5-10 片 10 m（蠟塊組織處理：在石蠟包埋組織樣品表面輕輕刮去不含組織的石蠟表層，再刮取 5-10um.z.-嚴(yán)禁使用扣取，粉碎，切除等操作破壞組織樣本；若是蠟卷，則直接用干凈的槍頭挑取適量樣本）樣品輕輕刮入 1.5 ml 離心管，

42、棄切片至一次性垃圾桶。用振蕩器振蕩30sec；離心 12000 rpm，2min，4。棄上清至專用液體垃圾桶。加入 1 ml棄槍頭；用振蕩器充分振蕩混勻，離心 12000 rpm，2min，4。棄上清至專用液體垃圾桶，室溫干燥 10-15 min，至殘留的酒精完全揮發(fā)。組織破碎：加入240l 溶液PTL和10l蛋白酶K55孵育15min， 8015min。加入 750l 裂解液 MRL，漩渦混勻，室溫放置 2 min。分層：加入200l15 sec，室溫下孵育3 min。離心rpm，10min，4。取上清：更換手套，用鑷子夾取新 1.5 ml 離心管，用移液器小心吸取上清(大概600l)放入新

43、離心管內(nèi)，加入等體積 70% 乙醇，顛倒混勻。將可能得到的溶液一起轉(zhuǎn)入吸附柱 RA 中（溶液過多可分次過柱）。離心 12000 rpm，45sec，4，棄廢液。 RNA 樣品被蛋白或基因組 DNA 污染。沉淀：加入 500lRE, 離心 12000 rpm， 45sec，棄掉廢液。洗滌：700lRW, 離心 12000 rpm，60sec500l液 RW 12000 rpm 離心 60sec12000 rpm，2min，4。干燥：2min。溶解：加入 30lRNase-free2min。離心 12000rpm，1min，4。濃度測量：用分光光度計測量RNA5.10.保存：保存于-20或者更低。

44、質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)：RNA100ng/l，OD260/OD2801.8-2.2 則認(rèn)為RNART-PCR 實驗,否則需重新抽提。若抽提好的RNA 暫時不用，可置于-80保存?zhèn)溆谩?z.-關(guān)機(jī)及實驗臺清理：大量程并擺放整齊；將所有用過的物品歸回原位。最后用 75%酒精噴灑實驗臺面，2 min 后擦拭干凈。注意事項：RNARNA 酶污染，如果發(fā)現(xiàn)試劑有可能被污染，要立即更換；提取不要求量，更多的要求質(zhì)。參考文獻(xiàn)：百泰克石蠟包埋組織RNA 快速提取試劑盒（離心柱型）說明書。.z.-血液DNA題目：血液 DNA 提取標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程起草：審核：日期：日期：編號：JS-LJ-SOP0003-001批準(zhǔn)：日期：頒發(fā)部門

45、：技術(shù)部生效日期：分發(fā)部門：技術(shù)部目的：/DNADNA 。以從血液樣本中提取高質(zhì)量的基因組 DNA。適用范圍：適用于所有新鮮及冷凍保存血液樣品的基因組DNA方法原理：利用細(xì)胞裂解液裂解細(xì)胞核釋放基因組DNA，組 DNA，經(jīng)蛋白酶消化、漂洗液清洗除去蛋白質(zhì)、脂質(zhì)以及多糖等雜質(zhì)后，用純化液DNA。實驗準(zhǔn)備：儀器和試劑：/離心柱）取試劑盒（百泰克）。4.2 . 實驗前準(zhǔn)備： 實驗前10 min 打開水浴鍋，升溫至70；本實驗操作過程在抽提專用實驗臺進(jìn)行，穿實驗服，戴一次性乳膠手套及口罩。試劑盒中 GD、PW 緩沖液使用前確認(rèn)加入無水乙醇，并用記號筆在瓶上標(biāo)記。實驗步驟：消化：2.0 ml 離心管，在

46、離心管中加入 200 l 的抗凝血（不足 200l 用GA 補(bǔ)足），棄槍頭，并加入 20 l 蛋白酶 K 溶液，棄槍頭，混勻。加入 200 l 結(jié)合液CB，棄槍頭，充分顛倒混勻（15 次），70水浴放置 10 min，溶液應(yīng)該變清（備）。.z.-加異丙醇：100 l 的異丙醇，棄槍頭，充分震蕩 30 sec短離心去除管蓋內(nèi)壁水珠。轉(zhuǎn)移溶液：將所有的溶液和沉淀都加入一個吸附柱中，12000rpm 離心30s集管中廢液。洗滌：500 l 抑制物去除劑 IR，棄槍頭，12000 rpm 離心 30s掉收集管中廢液。700 l 漂洗液 WB，12000 rpm，離心 30s，倒掉收集管中廢液，加500

47、l 漂洗液 WB，12000 rpm，離心 30s，倒掉收集管中廢液。晾干吸附柱：12000 rpm 2min，1.5 ml2 min 或以上以徹底晾干吸附材料中殘余的酒精。洗脫：65l 的洗脫緩沖液 預(yù)熱），2-3 12000 rpm 離心 1min，離心管中的液體即為抽提的基因組 DNA。濃度測量：用分光光度計測量DNA質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)：DNA5ng/l，OD260/OD2801.6-2.0 則認(rèn)為DNAPCR保存：若抽提好的DNA-20保存?zhèn)溆?。實驗臺整理：75%酒精噴灑實驗臺，2 min 后擦拭干凈。注意事項：試劑盒在第一次使用前請按試劑瓶標(biāo)簽說明在WB 漂洗液加入無水乙保存。參考文獻(xiàn)：細(xì)胞/

48、組織基因組DNA（離心柱型（百泰克。.z.-口腔拭子/唾液樣本DNA 提取標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程題目：口腔拭子/唾液樣本DNA 提取標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程起草：審核：日期：日期：編號：JS-LJ-SOP0004-001批準(zhǔn)：日期：頒發(fā)部門：技術(shù)部生效日期：分發(fā)部門：技術(shù)部目的：DNA 制備膜選擇性地吸附DNA，以從口腔拭子/DNA。適用范圍：/唾液樣品的基因組 DNA 提取方法原理：利用細(xì)胞裂解液裂解細(xì)胞核釋放基因組DNA，組 DNA，經(jīng)蛋白酶消化、漂洗液清洗除去蛋白質(zhì)、脂質(zhì)以及多糖等雜質(zhì)后，用純化液DNA。實驗準(zhǔn)備：儀器和試劑：/離心柱）取試劑盒（百泰克）。. 實驗前準(zhǔn)備：實驗前 10 min70；本實驗操作過

49、程在抽提專用實驗臺進(jìn)行，穿實驗服，戴一次性乳膠手套及口罩。試劑盒中 WB乙醇，并用記號筆在瓶上標(biāo)記。對唾液樣本，實驗前取 1ml 于 1.5 離心管中，4000rpm，離心 5min集細(xì)胞沉淀備用。實驗步驟：消化：對拭子：2.0mlTL，200ul，充分震蕩混勻（2min）；對唾液細(xì)胞：加入裂解液 TL， 200ul20 l 蛋白酶K.z.-200 l 結(jié)合液 CB（上下顛倒 15 次置 10 min，（收集管中為后續(xù)步驟做準(zhǔn)備）。加異丙醇：100 l 的異丙醇，棄槍頭，充分震蕩 30 sec短離心去除管蓋內(nèi)壁水珠。轉(zhuǎn)移溶液：將所有的溶液和沉淀都加入一個吸附柱中，12000rpm 離心30s集

50、管中廢液。洗滌：500 l 抑制物去除劑 IR，棄槍頭，12000 rpm 離心 30s掉收集管中廢液。700 l 漂洗液 WB，12000 rpm，離心 30s，倒掉收集管中廢液，加500l 漂洗液 WB，12000 rpm，離心 30s，倒掉收集管中廢液。晾干吸附柱：12000 rpm 2min，1.5 ml2 min 或以上以徹底晾干吸附材料中殘余的酒精。洗脫：65l 的洗脫緩沖液 預(yù)熱），2-3 12000 rpm 離心 1min，離心管中的液體即為抽提的基因組 DNA。濃度測量：用分光光度計測量DNA質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)：DNA5ng/l，OD260/OD2801.6-2.0 則認(rèn)為DNAPCR

51、保存：若抽提好的DNA-20保存?zhèn)溆?。實驗臺整理：75%酒精噴灑實驗臺，2 min 后擦拭干凈。注意事項：試劑盒在第一次使用前請按試劑瓶標(biāo)簽說明在WB 漂洗液加入無水乙保存。參考文獻(xiàn)：細(xì)胞/組織基因組DNA（離心柱型（百泰克。.z.-組織DNA題目：組織 DNA 提取標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程起草：審核：日期：日期：編號：JS-LJ-SOP0005-000批準(zhǔn)：日期：頒發(fā)部門：技術(shù)部生效日期：分發(fā)部門：技術(shù)部目的：/DNADNA 。以從組織樣本中提取高質(zhì)量的基因組 DNA。適用范圍：本程序適用于所有新鮮及冷凍保存組織基因組DNA方法原理：利用細(xì)胞裂解液裂解細(xì)胞核釋放基因組DNA，組 DNA，經(jīng)蛋白酶消化、漂

52、洗液清洗除去蛋白質(zhì)、脂質(zhì)以及多糖等雜質(zhì)后，用純化液DNA。實驗準(zhǔn)備：儀器和試劑：/離心柱）取試劑盒（百泰克）。預(yù)備： 10 min56臺進(jìn)行，穿實驗服，戴乳膠手套及口罩。GDPW 漂洗液使用前確認(rèn)加入無水乙醇，用記號筆在瓶上標(biāo)記。實驗步驟：消化：將組織樣本樣本置于冰上，用酒精棉球擦拭手術(shù)刀及其鑷子，晾干。剪取1.5 m1 離心管，并用手術(shù)刀盡可能的剪碎。加入 200 l 裂解液TL20 l 蛋白酶 K 溶液，混勻。置于 56水浴鍋水浴 2 小時以上，直至組織溶解， 簡短離心以去除管蓋內(nèi)壁的水珠。同時將手術(shù)刀及鑷子用酒精棉球擦拭干凈，晾干， 收藏起來。在消化完成的組織樣本中加入 200 l 結(jié)合

53、液 CB，棄槍頭，充分顛倒混勻， 7010 min，（管放入收集管中為后續(xù)步驟做準(zhǔn)備）。.z.-加異丙醇：100 l 的異丙醇，棄槍頭，充分震蕩 30 sec短離心去除管蓋內(nèi)壁水珠。轉(zhuǎn)移溶液：將所有的溶液和沉淀都加入一個吸附柱中，12000rpm 離心30s集管中廢液。洗滌：500 l 抑制物去除劑 IR，棄槍頭，12000 rpm 離心 30s掉收集管中廢液。700 l 漂洗液 WB，12000 rpm，離心 30s，倒掉收集管中廢液，加500l 漂洗液 WB，12000 rpm，離心 30s，倒掉收集管中廢液。晾干吸附柱：12000 rpm 2min，1.5 ml2 min 或以上以徹底晾

54、干吸附材料中殘余的酒精。洗脫：65l 的洗脫緩沖液 預(yù)熱），2-3 12000 rpm 離心 1min，離心管中的液體即為抽提的基因組 DNA。濃度測量：用分光光度計測量DNA質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)：DNA5ng/l，OD260/OD2801.6-2.0 則認(rèn)為DNAPCR保存：若抽提好的DNA-20保存?zhèn)溆?。實驗臺整理：75%酒精噴灑實驗臺面，2 min 后擦拭干凈。注意事項：組織應(yīng)盡量破碎；試劑盒在第一次使用前請按試劑瓶標(biāo)簽說明在漂洗液WB緊蓋子。.z.-組織RNA題目：組織 RNA 提取標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程起草：審核：日期：日期：編號：JS-LJ-SOP0006-000批準(zhǔn)：日期：頒發(fā)部門：技術(shù)部生效日期：分

55、發(fā)部門：技術(shù)部目的：裂解細(xì)胞并通過酚氯仿分離法以從組織樣本中提取高質(zhì)量的RNA。適用范圍：本程序適用于新鮮或冷凍保存組織樣品的RNA 提取。方法原理：異硫氰酸胍可裂解細(xì)胞，促使核蛋白體的解離，使RNARNA 釋放到溶液中。當(dāng)加入氯仿時，它可抽提酸性的苯酚，而酸性苯酚可促使RNARNA和 DNA 分離開。實驗準(zhǔn)備：儀器和試劑：75%乙醇，DEPC 水。注意：所有接觸樣品的試劑、耗材均需保證無 RNA 酶，無菌，若發(fā)現(xiàn)可能存在污染， 要立即更換。預(yù)備：10 min罩。實驗步驟：組織破碎：1 ml RNAiso剪刀剪取綠豆大小組織樣本放入研磨器中.冰上用力研磨粉碎樣本。用鑷子夾取 1.5 ml 離心

56、管，將研磨后的液體轉(zhuǎn)入離心管，室溫靜置 5 min。分層：按 RNAiso 1/515 sec置 5 min。離心 12000 rpm，15 min，4。.z.-取上清：1.5 ml心管內(nèi)。吸取上清時一定要小心，不要吸到中間層的蛋白，一定要少吸，不要貪多， RNA 提取不要求量，更多的要求質(zhì)。沉淀：10 min。離心，12000 rpm，10 min，4。洗滌：棄上清，用 75%乙醇洗滌沉淀。離心 12000 rpm，5 min，4。干燥：25 min。溶解沉淀：30 lDEPC 水溶解沉淀。濃度測量：用分光光度計測量RNA 濃度。質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)：RNA100ng/l，OD260/OD2801.8-

57、2.2 則認(rèn)為RNART-PCR 實驗,否則需重新抽提。保存：若抽提好的RNA-80保存?zhèn)溆谩嶒炁_整理：75%酒精噴灑實驗臺面，2 min 后擦拭干凈。注意事項：使用組織提取RNA 時組織必須新鮮，否則RNA 便容易被內(nèi)源性的RNA 酶降解；所有的試劑、耗材均無 RNA更換；吸取上清時一定要小心，不要吸到中間層的蛋白，一定要少吸，不要貪多，以RNA 樣品被蛋白或基因組DNA 污染。.z.-反轉(zhuǎn)錄標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程題目：反轉(zhuǎn)錄標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程起草：審核：日期：日期：編號：JS-LJ-SOP0007-000批準(zhǔn)：日期：頒發(fā)部門：技術(shù)部生效日期：分發(fā)部門：技術(shù)部目的：將抽提好的 mRNAcDNA，作為Rea

58、l-time PCR基因的表達(dá)情況。適用范圍：無降解，分光光度計檢測濃度大于 100ng/l，OD260/OD2801.80-2.0 的 RNA 模板。方法原理：以RNADNA切作用除去內(nèi)含子的成熟 mRNA 為模板，合成RNA/DNA 雜化雙鏈，然后水解RNA DNA 單鏈為模板合成 DNA 雙鏈。實驗準(zhǔn)備：冰塊，保溫盒，水浴鍋試劑：RT-Mi*,RT-引物；DEPC 水。注：逆轉(zhuǎn)錄所需試劑使用前需從冰箱中取出置于冰上融化，混勻后備用。設(shè)備：八連管、10l 和 200l（RNA PCR（ABI 10l、20l 和 100l 移液槍。樣本確認(rèn)：Total RNA100ng/l，OD260/OD

59、280 值約為 1.80-2.0。實驗步驟：試劑準(zhǔn)備：將樣品，RT-Mi*,RT65 度。將 RNA200ng/l 的用 DEPC200ng/l。樣品標(biāo)記：用記號筆在八連管上標(biāo)記好每管反轉(zhuǎn)錄的樣本編號。加樣：按以下體系加樣.z.以上樣品水 浴 5 min 上放置。再管中，加入-總 RNART-引物H2O總 RNART-引物H2O100-2000ng1lup to 11l以上樣品輕輕混勻后，短暫離心使液體都集中于管底，整理實驗臺：試劑用完后，應(yīng)立即放回冰箱凍存，RNA-80防止降解。上機(jī)反應(yīng)：把加完樣的PCR反應(yīng)程序為：25427545 min60min 10min質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)：對擴(kuò)增產(chǎn)物取5ul1

60、ulloading buffer一25427545 min60min 10min注意事項：整。所有操作均于冰上進(jìn)行。RNA freecDNA20保存。.z.-基因mRNA題目：基因mRNA 表達(dá)檢測標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程起草：審核：日期：日期：編號：JS-LJ-SOP0008-000批準(zhǔn)：日期：頒發(fā)部門：技術(shù)部生效日期：分發(fā)部門：技術(shù)部目的：*種基因的 mRNA適用范圍：本程序適用于對各種生物體的cDNA 樣本進(jìn)行 mRNA實驗原理：real time PCR，即實時監(jiān)測 PCR 反應(yīng)體系中加入熒光物質(zhì)，并通過real time PCR 檢測系統(tǒng)對 PCR光信號強(qiáng)度進(jìn)行實時監(jiān)測，最后對未知模板進(jìn)行定量分