線性范圍試驗

1、實驗5線性范圍試驗在光譜分析中，測定該實驗條件下被測物質符合Beer定律的濃度范圍（線性范圍），是 評價分析方法準確性和實用性的重要工作。通過線性范圍測定，選擇線性段作為該方法的分 析范圍，直線上任何一點的待測物濃度與吸光度的比值均為一常數(shù)，其斜率tan。都相等， 即tan 9 =此處的值稱為校正常數(shù)，可用于計算測定結果。這樣，可使具有臨床意義的標本測定值都限定在此范圍內，以保證測定結果的可靠。線性誤差表現(xiàn)為溶液的濃度與吸光度不成線性關系，出現(xiàn)正偏離或負偏離的現(xiàn)象。這 種偏離，按Beer定律現(xiàn)象來自兩個方面：一是溶液本身不符合Beer定律，這種現(xiàn)象叫做化 學偏離；二是儀器本身各種因素的影響，使

2、吸光度與濃度之間不成線性，這種現(xiàn)象叫儀器偏 離，如雜光、有限帶寬、檢測器噪聲、環(huán)境條件的變化、波長的變動、比色杯的誤差、輻射 光的非平行性、檢測器本身的非線性等。因此，在做方法學線性范圍評價實驗時，良好的儀 器性能是必須的。【原理】 使用不同濃度的葡萄糖標準溶液，用GOD-POD法試劑測定各自的吸光度， 以標準濃度為橫坐標，以其對應的吸光度為縱坐標，在方格紙上作圖，即可繪制出一條直線， 即劑量反應曲線(dose-respones curve)。一般測定方法的線性范圍要求能覆蓋臨床上的參考值 和常見疾病的醫(yī)學決定水平，以減少標本稀釋重測的機會?！驹噭?0mmol/L葡萄糖標準溶液稱取已干燥恒重

3、的無水葡萄糖0.7208g，溶于12mmol/L苯甲酸溶液約70ml中，以12mmol/L苯甲酸溶液定容至100ml。2h后方可應用。其它試劑 同GOD-POD法試劑。【操作步驟】按表2-1操作表2-1血糖與GOD-POD試劑劑量反應曲線的制作加入物標準管012345葡萄糖標準液()0246810蒸餾水 l)1086420GOD-POD 試劑(ml)1.51.51.51.51.51.5下同GOD-POD法，讀取各管吸光度。以葡萄糖濃度(mmol/L)為橫坐標，以對應的吸光度為縱坐標，將其交點在方格紙上標出， 即可獲得血糖與GOD-POD試劑的劑量反應曲線。【注意事項】葡葡糖標準液的加量必須十分

4、準確，應用計量性能準確度很高的微量進樣器加樣。標準管系列中每管平行作3管取平均值。本方法的線性可達22.24mmol/L，造成線性變窄的原因為試劑配制中組分投料不足； 試劑配制后組分穩(wěn)定性差；因運輸、貯存不當?shù)葘е略噭┙M分的含量發(fā)生變化。有的測定特別是酶法測定，當酶量相對不足時，用標準液所作的線性范圍可以達到 指定的高限，但在測定同樣高值樣品時，結果卻明顯偏低，這往往是樣品中的介質效應引起 的，值得注意?！揪€性范圍的確定及其評價】測定上限測定上限應使95%的臨床標本不經(jīng)稀釋即可進行測定，具體數(shù)值必須通 過線性范圍試驗加以確定，因為檢測上限是不可超越的界限，當測定值高于上限臨界值時， 應減少標本

5、用量或將標本稀釋后重新測定。測定下限測定下限實測多少就報告多少，如未經(jīng)驗證，隨意延長測定下限的做法 是不正確的。對測定范圍線性的評價通過制作劑量反應曲線的實驗可以確定某種測定方法的吸 光度一濃度線性范圍，就能為制作實際工作中使用的校正曲線打下堅實的基礎。隨后要對其 線性擬合的良好程度和實用性進行實際檢查與評價。對線性范圍內的濃度與對應吸光度值作直線回歸分析，求出此直線的截距a和斜率 b，建立直線回歸方程y=a+bx；并作相關分析，求出相關系數(shù)(r)。值得強調的是校正曲線是 一條直線，回歸一相關分析只是一種數(shù)據(jù)評價手段，不能代替在基本操作上下功夫。線性回歸方程擬合程度的檢驗：所繪制的回歸直線能否代表原資料各觀測點的趨 勢，即各觀測點與回歸直線的差異是否只是來自隨機抽樣誤差而無真正的差別，通過線性回 歸方程擬合度檢驗，即可作出判斷。方法仍然是用變異分析，看剩余平方和的大小，如剩余)的比值越小，說明Y的實際觀測值與Y的估計值（）越接近，曲線擬合越好。這種擬合度，可用相關指數(shù)（）來表示。越接近于1.0，表明擬合度越高。這里要注意的是必須由配得