細菌的生化反應(yīng)

1、細菌生化反應(yīng)1目的了解生化反應(yīng)的意義及常見的生化反應(yīng)2概念：用生化的方法來檢測細菌對各種基質(zhì)的代謝作用及代謝產(chǎn)物，借以鑒別細菌種類，這種生化試驗稱為細菌的生化反應(yīng)試驗。意義：是鑒別細菌的重要依據(jù)。細菌的生化反應(yīng)3生化反應(yīng)碳水化合物代謝試驗各種酶類試驗抑菌試驗糖發(fā)酵試驗甲基紅試驗V-P試驗蛋白質(zhì)和氨基酸代謝試驗硫化氫試驗吲哚試驗碳源和氮源利用試驗枸櫞酸鹽利用試驗IMViC試驗4一 糖發(fā)酵試驗原理 根據(jù)細菌分解利用糖能力的差異表現(xiàn)出是否產(chǎn)酸產(chǎn)氣作為鑒定菌種的依據(jù)。是否產(chǎn)酸，可在糖發(fā)酵培養(yǎng)基中加入指示劑溴甲酚紫（即B.C.P指示劑，其pH在5.2以下呈黃色，pH在6.8以上呈紫色），經(jīng)培養(yǎng)后根據(jù)指示

2、劑的顏色變化來判斷。是否產(chǎn)氣，可在發(fā)酵培養(yǎng)基中放入倒置杜氏小管觀察。51、確定細菌是否生長2、產(chǎn)酸，則培養(yǎng)基指示劑（溴甲酚紫）變?yōu)辄S色，以“+”表示。3、產(chǎn)酸又產(chǎn)氣，則培養(yǎng)基除變黃外，在倒置的小管中有氣泡，用“”表示。4、不發(fā)酵糖類，培養(yǎng)基仍為紫色，小管內(nèi)無氣泡，以“-”表示。 結(jié)果方法 取糖發(fā)酵管培養(yǎng)基，此時培養(yǎng)基應(yīng)呈澄清、紫色，倒立小管內(nèi)無氣泡，接種細菌后置37溫箱培養(yǎng)1824小時，觀察結(jié)果。 67二 IMViC試驗是一組試驗靛基質(zhì)試驗或稱吲哚試驗（I）、甲基紅試驗（M）、VP試驗（V）和枸櫞酸鹽利用試驗（C）可縮寫為IMViC試驗，i是為了發(fā)音的需要加入的。常用于革蘭陰性的腸道細菌檢測中

3、，可區(qū)分產(chǎn)氣桿菌屬和大腸桿菌屬大腸桿菌的結(jié)果是，產(chǎn)氣腸桿菌的結(jié)果是。81、靛基質(zhì)試驗（吲哚試驗） 原理 色氨酸幾乎存在于所有的蛋白質(zhì)中，某些細菌含色氨酸酶，能將分解蛋白胨中的色氨酸而生成靛基質(zhì)（吲哚）。后者與寇氏試劑中對二甲基氨基苯甲醛作用，形成紅色。方法 將大腸桿菌、產(chǎn)氣桿菌分別接種在蛋白胨水培養(yǎng)基中，37培養(yǎng)2448小時取出，在上述細菌的培養(yǎng)液內(nèi)各加入寇氏試劑數(shù)滴，略加振搖，靜止半分鐘后觀察結(jié)果。9大腸桿菌為陽性傷寒桿菌為陰性結(jié)果玫瑰紅色102、甲基紅試驗大腸桿菌分解葡萄糖產(chǎn)生丙酮酸后進行混合酸發(fā)酵，產(chǎn)生乳酸、甲酸、乙酸、琥珀酸等多種有機酸，使培養(yǎng)液pH小于4.5，甲基紅指示劑呈紅色，為甲

4、基紅試驗陽性。產(chǎn)氣桿菌分解葡萄糖產(chǎn)生丙酮酸，經(jīng)脫羧后生成中性乙酰甲基甲醇，培養(yǎng)液的pH大于5.4，甲基紅指示劑呈橘黃色，為甲基紅試驗陰性。原理11葡萄糖丙酮酸大量混合酸pH降至4.4以下甲基紅試劑培養(yǎng)基變紅甲基紅試驗乙酰甲基甲醇（中性）pH5.4 甲基紅試劑培養(yǎng)基橘黃色12方法滴加甲基紅指示劑數(shù)滴，立即觀察結(jié)果結(jié)果紅色為陽性，+不出現(xiàn)紅色為陰性，-133、VP試驗產(chǎn)氣桿菌利用葡萄糖時產(chǎn)生中性物質(zhì)之一就是乙酰甲基甲醇，它在堿性溶液中被空氣中的分子氧氧化生成二乙酰，二乙酰與培養(yǎng)基中的含胍基的化合物反應(yīng)，生成紅色化合物，是VP試驗陽性；而大腸桿菌不能產(chǎn)生乙酰甲基甲醇，為陰性。原理14葡萄糖丙酮酸乙酰

5、甲基甲醇二乙酰V-P試劑培養(yǎng)基變紅VP試驗與蛋白胨培養(yǎng)基精氨酸中的胍基反應(yīng)生成紅色化合物15方法取出試管培養(yǎng)物，加入等量的李氏試劑，搖勻后不加塞，靜置30分鐘觀察結(jié)果。結(jié)果紅色為陽性，+無紅色為陰性，-16葡萄糖發(fā)酵形成丙酮酸后的不同代謝途徑葡萄糖丙酮酸大量混合酸pH降至4.4以下甲基紅試劑培養(yǎng)基變紅乙酰甲基甲醇二乙酰V-P試劑培養(yǎng)基變紅脫酸VP試驗甲基紅試驗174、枸櫞酸鹽利用試驗 某些細菌能力利用培養(yǎng)基中的枸櫞酸鹽作為唯一的碳源，也能利用其中的銨鹽作為唯一氮源，細菌生長過程中分解枸櫞酸鹽產(chǎn)生碳酸鹽和分解銨鹽生成的氨，使培養(yǎng)基變堿性，使指示劑呈堿性反應(yīng)，指示劑由綠色變?yōu)樯钏{色是枸櫞酸鹽利用試

6、驗陽性（產(chǎn)氣桿菌），反之培養(yǎng)基不變色是為陰性（大腸桿菌）。原理18枸櫞酸鹽銨鹽碳酸鹽氨培養(yǎng)基pH下降溴麝香草酚藍 呈堿性變色培養(yǎng)基變藍培養(yǎng)基 枸櫞酸鹽利用試驗原理19結(jié)果深藍色為陽性+ 綠色為陰性-20三、硫化氫產(chǎn)生試驗 原理 某些細菌能分解蛋白質(zhì)中的含硫氨基酸，如半胱氨酸、甲硫氨酸，而生成硫化氫。硫化氫遇培養(yǎng)基中的鉛鹽或亞鐵鹽，形成黑色的硫化鉛或硫化亞鐵沉淀物。方法 分別穿刺接種大腸桿菌、變形桿菌至兩管醋酸鉛培養(yǎng)基中。37孵育24小時后觀察結(jié)果。21結(jié)果 沿穿刺線部位呈黑褐色，表明有硫化氫產(chǎn)生，為陽性以“+”表示， 不變色者為陰性，以“-”表示。 大腸桿菌：- 變形桿菌：+22微生物自動鑒定

7、分析系統(tǒng) 細菌分析儀是一種操作方便、快捷、自動化、標準化程度高的微生物自動分析系統(tǒng)，用于臨床上測定各種感染的病原體種類及其對各類抗生素的敏感性。 232000型自動微生物藥敏分析系統(tǒng)根據(jù)細菌生理學特點利用物化學方法鑒定細菌的類別，主要采用的試驗包括：糖（醇）發(fā)酵試驗、伏普（V-P）試驗、甲基紅試驗、七葉苷水解試驗、石蕊牛乳試驗、靛基質(zhì)（吲哚）試驗、硫化氫試驗、明膠液化試驗等。并通過抑菌試驗測定抗菌藥物體外抑制細菌生長的效力，根據(jù)測定藥物常用劑量給藥時在體內(nèi)能達到的血藥濃度而將細菌敏感性標準分為三級：敏感、 中敏和耐藥，并定出細菌的最低抑菌濃度（MIC），從而為臨床上用藥提供依據(jù)。24細菌的鑒定依據(jù)而由于細菌的結(jié)構(gòu)和形態(tài)較為簡單，僅僅依靠形態(tài)學特征無法